实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验
红细胞渗透脆性实验报告
红细胞渗透脆性实验报告
实验目的，通过实验，观察红细胞在不同渗透压下的脆性变化，了解红细胞的渗透脆性特点。
实验原理，红细胞在不同渗透压下会发生渗透作用，当渗透压较高时，红细胞会失去水分而收缩，导致脆性增加；而渗透压较低时，红细胞会吸收水分而膨胀，脆性减小。
实验材料与方法：
1. 材料，新鲜血液、生理盐水、离心管、显微镜、玻璃片、封片、渗透压计。
2. 方法：
a. 取新鲜血液离心，得到红细胞悬液。
b. 分别用生理盐水制备不同浓度的溶液，得到不同渗透压的溶液。
c. 取一定量的红细胞悬液，分别加入不同渗透压的溶液中，放置一段时间后制作干片。
d. 在显微镜下观察红细胞的形态变化，并记录观察结果。
实验结果：经过观察，我们得出以下实验结果：
1. 在高渗透压溶液中，红细胞明显收缩，形态不规则，脆性增加。
2. 在低渗透压溶液中，红细胞膨胀，形态圆润，脆性减小。
实验分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：
1. 红细胞在高渗透压下会失去水分而收缩，导致脆性增加。
2. 红细胞在低渗透压下会吸收水分而膨胀，脆性减小。
实验结论，红细胞的渗透脆性与渗透压密切相关，渗透压较高时，红细胞的脆性增加，渗透压较低时，红细胞的脆性减小。
实验意义，通过本实验，我们深入了解了红细胞的渗透脆性特点，为进一步研究红细胞的生理功能提供了重要的实验数据和理论基础。
结语，本实验通过观察红细胞在不同渗透压下的脆性变化，深入探讨了红细胞的渗透脆性特点，对于加深我们对红细胞生理特性的理解具有重要的意义。
希望本实验能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验解析
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多 重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
Hale Waihona Puke 实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
溶血 ％ = D1 D2 X 1.25 ×100 ％
【参考值（参考范围）】 溶血率％ >65％为正常溶血率；<55％为溶血率降低；（注 56-
64％为溶血率轻度降低）。
【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。 溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因 携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋
白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改
变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多
表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征） 4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
【检验原理】
贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。
测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起
的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
红细胞渗透脆性试验
红细胞渗透脆性试验红细胞渗透脆性试验介绍：本试验测定红细胞对各种浓度低渗溶液的抵抗力。
在低渗盐水中，水分透过细胞膜，使红细胞逐渐胀大破坏。
红细胞的渗透性主要取决于红细胞的表面积与体积之比。
表面积大而体积小者对渗盐溶液的抵抗力较大，反之则抵抗力较小(脆性增加)。
球形红细胞表面积/体积比值减少，对低渗溶液特别敏感，脆性显著增加。
红细胞渗透脆性试验正常值：桑福德法：初溶(开始溶血)：0.0042～0.0046 (0.42%～0.46%)氯化钠溶液。
完全溶血：0.0032～0.0034 (0.32%～0.34%)氯化钠溶液。
红细胞渗透脆性试验临床意义：异常现象：(1)增高：遗传性球形红细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血、先天性溶血性黄疸(家族性溶血性黄疸)等。
(2)降低：镰状红细胞性贫血、阻塞性黄疸、缺铁性贫血、地中海贫血、铅中毒、恶性贫血、脾切除术后、肝脏病。
需要检查人群：贫血,铅中毒,黄疸,肝脏异常的人群红细胞渗透脆性试验注意事项：检查时：(1)地中海贫血的渗透脆性降低，应进行低浓度NaCl溶液的检查。
(2)严重贫血者，要把RBC配成50%浓度，黄疸者要洗红细胞。
(3)血标本在冰箱中保存不得超过6h。
红细胞渗透脆性试验检查过程：1、制备不同浓度的NaCl溶液。
先配置1%浓度的低渗NaCl溶液100m l,然后去口径相同的干净试管12支，编号排列在试管架上，按下表分别向各试管内加入1%NaCl溶液和蒸馏水后混匀，配置12种0.68%~0.24%不同浓度的低渗NaCl溶液2、分别配置0.85%浓度的NaCl溶液、1.9%浓度的尿素溶液。
另取3支小试管，编号13~15，分别盛2.5ml 0.85%NaCl溶液。
1.9%尿素溶液和蒸馏水3、碘酒、酒精消毒皮肤后用灭菌干燥的、肝素湿润的注入器从肘正中静脉取2ml，利己混匀，将其中1ml加入试管，余血一次向15支试管内各加入1滴，轻轻混匀。
4、观察13、14、15管的变化，其余12管在室温下静置1小时，然后观察混合液的颜色和透明度。
红细胞脆性实验报告
一、实验目的1. 掌握红细胞渗透脆性试验的原理和操作方法。
2. 通过实验了解红细胞对不同浓度低渗溶液的渗透抵抗力。
3. 分析实验结果，了解红细胞渗透脆性与临床疾病的关系。
二、实验原理红细胞渗透脆性试验是一种检测红细胞膜稳定性的方法。
正常红细胞在低渗溶液中具有一定的抵抗力，当溶液浓度逐渐降低时，红细胞开始膨胀、破裂，直至完全溶血。
红细胞对低渗溶液的抵抗力称为渗透脆性。
渗透脆性高表示红细胞膜稳定性差，易发生溶血；渗透脆性低表示红细胞膜稳定性好，不易发生溶血。
三、实验材料与仪器1. 材料：抗凝血液、生理盐水、5%葡萄糖溶液、1.9%尿素溶液、不同浓度的NaCl溶液、试管、移液管、滴管等。
2. 仪器：离心机、显微镜、天平等。
四、实验步骤1. 准备实验溶液：配制不同浓度的NaCl溶液，分别标记为1号、2号、3号、4号、5号溶液。
2. 标准操作：取抗凝血液1ml，加入试管中，用移液管吸取1ml生理盐水，加入试管中，混匀后用滴管滴加1ml 5%葡萄糖溶液，再次混匀。
3. 溶血观察：将上述混合液分别滴加到不同浓度的NaCl溶液中，观察红细胞溶血情况。
4. 记录结果：记录开始出现溶血的NaCl溶液浓度和完全溶血的NaCl溶液浓度。
5. 数据分析：计算红细胞渗透脆性值，并与正常值进行比较。
五、实验结果与分析1. 实验结果：- 开始出现溶血的NaCl溶液浓度：3.0g/L- 完全溶血的NaCl溶液浓度：2.0g/L2. 结果分析：本实验中，开始出现溶血的NaCl溶液浓度为3.0g/L，完全溶血的NaCl溶液浓度为2.0g/L。
与正常红细胞渗透脆性值（开始出现溶血的NaCl溶液浓度约为2.9g/L，完全溶血的NaCl溶液浓度约为2.3g/L）相比，本实验中红细胞渗透脆性值略高，表明实验者红细胞膜稳定性较差。
六、实验结论1. 本实验通过测定红细胞对不同浓度低渗溶液的渗透抵抗力，成功掌握了红细胞渗透脆性试验的原理和操作方法。
地中海贫血
β地贫产前诊断
产前诊断结果为重型β地贫胎儿的家系，其遗传
咨询原则同重型α地贫。 对于中间型β地贫的遗传咨询，也基本与HbH病 的咨询原则相同，但因中间型β地贫的临床异质 性更为复杂，在该病的遗传咨询过程中，更需 要慎重和严格的知情同意。
谢谢！
分类及发病机制
根据珠蛋白肽链缺ห้องสมุดไป่ตู้不同，地贫可分为α、 β、δ、δβ和γδβ等不同类型，而α和β地贫是最常 见的地贫类型。
α地贫
α珠蛋白基因位于第16号染色体短臂末端的珠 蛋白基因簇中，已知α地贫基因突变类型至少 有77种之多，其中44种点突变，余下的33种为 缺失型突变，虽然点突变多，但临床上以缺失 型突变更为多见，就一个单倍体而言， α地贫 可分为3类缺陷： 1、 α地贫2（ α+地贫），缺失一个α基因（ α/）； 2、 α地贫1 （ α0地贫），两个α基因都缺失（-/）； 3、非缺失型， α基因发生点突变或小的缺失 （ αT α / α αT ）
4、分子筛查：上述血液学表型分析不能工巧 匠00%检出地贫基因携带者，尤其对静止型和 复合型地贫患者，有相当的漏诊率，因此基因 诊断进行确诊才是最为有效的地贫筛查手段， 尤其对于夫妇中一方已确诊为地贫携带者的情 况，另一方除需同时接受上述地贫血液学表型 筛查程序外，分子筛查也是必不可少的，目前 绝大部分的地贫突变均可通基于PCR技术的分 子诊断进行鉴定，分子筛查的灵敏度和特异性 均显著高于血液学表型分析，如双方同时携带 同型地贫基因，则应在医生指导下做好产前诊 断，以避免重型患儿的出生。
产前筛查
血液学筛查：
1、全血细胞计数：地贫的典型特征之一是小红
细胞和低色素，因此地贫筛查最重要的血液学 指征为MCV和MCH，若MCV＜82fl， MCH＜ 27pg则筛查阳性，需要做进一步检查，但这两 项指标在静止型α地贫和αβ复合型地贫的检测中 可能完全正常。
实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验
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地中海贫血的病理生理
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α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征）
4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。精选Fra bibliotekpt11
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重度β-地中海贫血
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重度β-地中海贫血
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地中海贫血初筛检查
• MCV < 80fl 和/ 或MCH <27pg ,则高度怀疑 为地贫;
• 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test ,ROFT ;< 0.60 ): 即可 怀疑为地贫;
• HbA2 < 2. 5 % ,则高度怀疑为α地贫基因携 带者;ξ阳性为标准α地贫.
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
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实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
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【检验原理】 贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。 测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起 的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产 前诊断。
3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。
4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊 断，但推荐羊膜腔穿刺。
5.无创性产前诊断是未来发展的方向。
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红细胞渗透脆性实验
；’. 红细胞渗透脆性实验一.原理：本实验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力，这种抵抗力与红细胞表面积和体积的比值有密切关系，表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）；反之，则抵抗力较小（脆性增加）.球形细胞表面积/体积比值减少,脆性显著增加.二.试剂:171mmol/LNaCl溶液(10g/L):取经100度烘干的分析纯氯化钠1.000g置100ml容量瓶中,加少量双蒸溜水溶解后,再加双蒸溜水至刻度三.操作:1.分别取10g/LNaCl液和蒸溜水,按表加入小试管中试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 10g/LNaCl(ml)1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6蒸溜水(ml)0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9NaCl(g/L)6.8 6.4 6.0 5.6 5.2 4.8 4.4 4.0 3.6 3.2 2.8 2.4NaCl(mmol/L)116.3 109.4 102.6 95.8 88.9 82.1 75.2 68.4 61.6 54.7 47.9 41.02.将试管架带至病人面前,用配备6号针头的干燥灭菌注射器取静脉血1~1.5ml,立即滴于各管中,每管1滴(贫血病人可加2滴),轻轻摇匀,室温静置.3.每次试验均应同时作正常对照.结果判断静置室温2小时,观察结果,从高浓度管开始观察,上层溶液开始出现透明红色且管底有红细胞者为开始溶血管;溶液透明红色,管底完全无红细胞者为完全溶血管.。
红细胞渗透脆性检测仪测试报告
红细胞渗透脆性检测仪测试报告1 背景资料人体红细胞约占血液总体积的40%，红细胞内含量最多的水分和血红蛋白分别占红细胞的65%和32%。
红细胞在低渗盐溶液中，水分透过细胞膜进入细胞内，使红细胞逐渐胀大破裂，细胞内血红蛋白溢出即称为低渗性溶血。
红细胞对低渗液溶血作用的抵抗能力称为红细胞的渗透脆性。
地中海贫血、缺铁性贫血患者红细胞内血红蛋白生成减少，细胞体积较小，渗透脆性比正常人明显减小，因此红细胞渗透脆性在临床上常用于地中海贫血、缺铁性贫血等小细胞性贫血的辅助诊断指标。
2 试验原理将血液样品与特定渗透压的低渗液混合，将未溶血红细胞作为构成该混合液浊度的主要颗粒，选用一种未溶红细胞对其有较高的吸光度，从红细胞溶出的游离血红蛋白等可溶性有色物质对其有较弱吸光度的特定波长光源作为测定光源，利用不透光法对混合液进行比浊分析，得出AD 值（AD 值与吸光度成反比），通过对AD 值与“金标准”结果的综合分析后确定临界区间。
对于诊断系统的准确性评价，首先应知道受试者的真实情况，即哪些是对照组，哪些是病例组，划分它们的标准就是“金标准”。
尽管“金标准”不需要十全十美，但是它们应比评价的诊断系统更可靠，且与评价的诊断系统无关。
因此在本项目测试方案中，诊断系统为红细胞渗透脆性检测，“金标准”选用基因检测（即常说的PCR）。
3 试验设计及拟采用的方法（1）预试验：先利用旧的血样做测试，以检测样机的各项性能是否符合测试要求。
（2）利用样机对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行测试（每个血样重复≥3 次）。
（3）将测得的AD 值综合“金标准”的结果进行分析并确定临界区间。
（允许有可接受限度的假阳性存在）临界区间的确定：在确定的实验条件（测试步骤、温度、时间、试剂配制方法、试剂配制参数等）下，用我们规范的操作方法，对“金标准”确诊的地贫血样与正常血样进行大量检测和统计学分析，观察样机做出的AD 值分布规律是否符合“金标准”确诊的结果；正常血AD 值分布在一个特定区间，而地贫血AD 值分布在另一个特定区间，理论上可能存在个别离散点，但不影响判断，这两个区间的交界处即为临界区间。
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Thalassemia
中国南方不同高发地 区人群携带率 3~ 24%
地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一
全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）
地贫的发病率、地域分布及危害
• 地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；
• 广西发病率为20%；
• 重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担
溶血 ％ = D1 D2 X 1.25 ×100 ％
【参考值（参考范围）】 溶血率％ >65％为正常溶血率；<55％为溶血率降低；（注 56-
64％为溶血率轻度降低）。
【检验结果的解释】 正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。 溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因 携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。
地中海贫血确诊试验
• 地贫诊断基因芯片(Thalachip); • 地贫基因诊断条膜(反向点杂交)/一管法多 重PCR • ASO寡核苷酸探针点杂交 • DNA测序
鉴别诊断(Differential diagnosis)
• 缺铁性贫血 • 遗传性球形红细胞增多症 • 传染性肝炎或肝硬化
实验：红细胞渗透脆性检验 (试剂盒一管法)
溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑
贫血症之间。
【检验原理】
贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。
测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率， 可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起
的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）
【主要组成成分】 组成： 由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）； SG-B母液（终止红细胞溶血液）； SG-C母液（红细胞溶血液）组成； 成分： SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二 钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4） 制成； SG-B母液采用氯化钠制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。
αchain disappear
(HbBart’s hydrop fetalis)
单管多重PCR
PCR-ASO
诊断(Diagnosis)
• 临床特点＋实验室检查＋父母调查阳性＋ （基因分析）
地中海贫血初筛检查
• MCV < 80fl 和/ 或MCH <27pg ,则高度怀 疑为地贫; • 红细胞渗透脆性试验阳性(Red cell os motic fragility test ,ROFT ;< 0.60 ): 即可 怀疑为地贫; • HbA2 < 2. 5 % ,则高度怀疑为α地贫基因携 带者;ξ阳性为标准α地贫. • HbA2 >3. 5 % ,则为β地贫基因携带者
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
重度β-地中海贫血
结
论
1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基 因携带者，推荐配偶行基因检测。 2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产 前诊断。 3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出 生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。 4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊 断，但推荐羊膜腔穿刺。 5.无创性产前诊断是未来发展的方向。
【样品要求】 新鲜抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD）， 置2℃~8℃保存。已发生溶血或有血凝块的
标本为不合格样品。标本采集后，测试应在
三日内完成。
【实验操作】
1、取试管一只，加入A试验液1ml，放37℃，预热1-2分钟。 2、加入待测抗凝全血10μl，立刻混匀，继续放在37℃保温5分 钟。 3、5分钟后，加入B试验液1ml。混匀，3000转/分钟，离心5 分钟。 4、将上清液轻轻倒入1.0cm × 1.0cm的比色杯中（切勿搅动 试管底的红细胞），于530nm波长读取光密度D1（以纯化水 作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液） 5、向试管中加入C试验液0.5ml，混匀，待血液全部溶血（透 明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。 6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波长比色， 读取光密度D2。 7、按下列公式计算出溶血率百分比。
广 东
• 每10人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每250个家庭就有1个有重型地贫出生 风险 • 每850个胎儿就有1个重型地贫患儿
定义
• 地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障 碍性贫血）： 由于遗传性珠蛋白基因缺陷（突变、缺失 等）引起的一种或多种珠蛋白肽链生物合 成减少或完全不能合成，导致珠蛋白肽链 间的正常平衡不能维持，同时成人型Hb （HbA：α2β2）合成降低的一种遗传性血 红蛋白病。
• 其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋
白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少
或不能合成，导致血红蛋白的组成成分改
变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多
表现为慢性进行性溶血性贫血。
地中海贫血的病理生理
α-地中海贫血
重型α地贫 （HbBart’s胎儿水肿综合征） 4个α基因都缺失了(--/--) ， 在孕后期或出生后即死亡。
和难以估量的精神负担；
中国南方人群地贫基因携带率
地区
地贫
广西
17.6 8.5 12.7 9.8 4.2
携带率(%) β地贫
6.4 2.5 2.7 7.3 5.1
合计
24.0 11.0 15.4 17.1 9.3
广东
海南 云南 贵州
重庆Βιβλιοθήκη 5.22.07.2
高发区人群遗传负荷评估
广 西
• 每4人就有1个地贫缺陷基因携带者 • 每55个家庭就有1个有重型地贫出生风险 • 每230个胎儿就有1个重型地贫患儿
羊膜腔穿刺术
羊膜腔穿刺术
实验室检查
--靶型RBC
地贫患者
红细胞脆性实验 正常人 Erythrocyte fragility test
血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresis
肽链分析Peptide chain analyses
1 2 3 4 1 2 3 4
βchain disappear (β0-thal major)