病理制片技1
病理制片技术——常用试剂及染液的配制
病理制片技术——常用试剂及染液的配制一、Harris氏苏木精染色液的配制1．试剂准备：苏木精10 g，硫酸铝钾80 g，无水乙醇200 ml，蒸馏水2000 rnl，氧化汞3 g，冰乙酸40ml。
2．配制步骤(1)将2000 ml蒸馏水注入一只3000 的大号三角烧瓶内，加入80 g硫酸铝钾后置电炉或电磁炉上加热硫酸铝钾完全溶解。
(2)将200 ml无水乙醇注入一只300 ml的三角烧瓶内，加入10 g苏木精摇动使之完全溶解。
(3)将已完全溶解于无水乙醇的苏木色精液体缓缓注入已完全溶解的2000 ml硫酸铝钾液体中，继续加热至液体沸腾关闭电源。
此时液体应呈透明的玫瑰红色。
(4)将3 g氧化汞溶于20ml蒸馏水中搅匀后缓缓(一定要缓慢)方入未被氧化的苏木精液体中，边加氧化汞边搅拌。
此时苏木精被氧化，液体的颜色会迅速地变成深蓝紫色。
(5)氧化汞加完后用玻棒充分的搅拌液体并继续加热至液体再度沸腾关闭电源。
(6)用湿毛巾保护，将装有停止沸腾的热苏木精的三角烧瓶转移至冷水中迅速降温至室温。
(7)密封瓶口室温避光直射储存备用，临用前每100 ml苏木精液加入2～3 ml冰乙酸混匀。
二、伊红染色液的配制l. 试剂准备；伊红Y 20 g，蒸馏水1500 ml，95％乙醇500 ml，冰乙酸lml。
2．配制步骤(1)先将20 g伊红Y溶于500 m1蒸馏水中，用玻棒搅拌至其完全溶解后再加入1000 ml 蒸馏水并搅匀，液体呈深红色。
(2)加入500 ml 95％乙醇并搅匀，此时液体由深红色转变为荧光绿色。
(3)加入lml冰乙酸并搅匀，密封瓶口室温储存备用。
三、HE染色分化液的配制0.5％盐酸乙醇液：蒸馏水300 ml与95％乙醇700 ml混合后加入浓盐酸5 ml混匀。
四、HE染色返蓝液的配制0.5％氢氧化氨液：在1000毫拜蒸馏水中溶入5毫升浓氢氧化氨混匀。
病理制片技术实验报告
4．实验步骤
制作切片步骤
需用仪器及设备
需用试剂及化学药品
1．取材
取材台，案板，取材刀，一次性包埋盒
甲醛固定液，自来水流水冲洗
2．固定
自动脱水机，脱水篮
甲醛液4%
3．脱水
自动脱水Байду номын сангаас，脱水篮
不同浓度梯度的酒精液
4．透明
自动脱水机，脱水篮
两道二甲苯
5．浸蜡
自动脱水机，脱水篮
三道石蜡
6．包埋
包埋盒或包埋框，自动包埋机，包埋镊，
冷冻台，纱布，电烙铁。
石蜡
7．切片、摊片、漂片
冷冻台、切片机、眼科镊子，摊片烤片机，切片刀，载玻片，染色架，铅笔，清理污物用报纸，冷冻冰块
42度温水
8．烤片
恒温箱，定时钟，铜制染色架。
9．染色
染色缸或自动染色机，染色架
自来水，不同浓度梯度的乙醇，二甲苯，苏木素染色液，伊红染色液。
10．封片
自动封片机，盖玻片，吸管，托盘
二甲苯、中性树胶。
5.实验结果与分析讨论
在制片过程中所用到的相关设备及仪器较多，以上仅介绍我院病理科在工作中实际常用到的一些设备、试剂、药品及工具，具体可根据各自制作过程中的不同而选取。比如染色时是手工染色还是自动染色机染色，封片时是手工封片还是自动盖片机封片等。
病理制片技术实验报告
课程名称：病理检验技术实验项目名称：病理切片制作设备参观
1．实验目的：
参观认识在病理组织切片制作过程中所用到的仪器和设备。
了解各种设备在制作切片过程中的用途及操作方法。
2．实验原理：
参观见习性质，初步了解制作切片的过程和步骤，实物讲解各有关仪器设备的操作方法。
病理常规制片技术各环节注意事项
另外 ， 固定的时间应适 当， 小标 本如肠黏膜等 ２ 小时即可 ， ４ 大
标本 固定时间一 般不少于 ２ 小时 ， ４ 但也不能过久 ， 以免影 响抗
原性。
３ 固定 液 的 配 制
病 理常规制 片技术是临床医学最常用、 最基 础的病理诊断 技术 。切片质量是指导医生作 出准确诊断和治疗 的重要保证 。 切 片质量 的好 坏取决 于取材 、 固定 、 固定 液 的配制、 脱水 及透
病理标本离体后 ，由于环境变化可能发生 自溶或腐败 ， 导 致结构破坏 ，及时 固定可使病 理标本尽量保 持其离体前 的状 态， 故标本离 体后应尽快 固定 ， 对体积 较大 的标本必要 时可剖 开固定 。固定液与标本 的体积 比不得小于 ５１ 有特殊要求时应 ：，
大多数抗原来说有更好 的保存作用 ， 为首选 固定液 。（）Ｆ ４Ａ 液。
通过重组医用电子学实验课题优化实验项目强化技能训练同时细化实验考核项目特别是开展学生自选实验课题等改革措施构筑了学生的技术基础为其今后的学习工作奠定了强有力的基础
维普资讯
ｖ０．６ ｏ Ｎｏ１ １ ２ ０８ ２ ．
病 理 常规 制 片技 术 各环 节注 意 事项
组织等 ， 可适 当切厚一点 ； 而致 密或试剂不易渗透 的组织 ， 如脂 肪组织、 肺组织、 纤维性肿瘤等 ， 可切薄一些。其次 ， 在切除淋 巴 结时应 修掉两侧球冠 ， 并尽量剔 除周围 的脂肪组 织 ； 碰到不 若 可避免 的钙化组织 ， 应进行脱钙处理 。最后 ， 还应避免取材刀来 回拖拉而影响取材质量。
中， 操作项 目 按实验内容再次划分成若干子项目。每个项目给
定标准分值 。实验成绩 为百分制 ， 目分值 为 ： 各项 操作（０ ） ４分 、 实验报告（０ ） ４分 、 平时成绩（０ ） 实验课程设计题 目 ２分 。 要加上 自 行设计的分值 ， 即设计 （０ ） ２ 分 、 （０ ）报告 （０ ） 操作 ３ 分 、 ３分 、 实
组织制片技术-病理检验技术PPT
1.常用固定液
➢ 浓度10%福尔马林（浓度4%甲醛） 配制：取40%的甲醛1份加水9份混合即成。 优点：渗透力强，组织收缩小，固定均匀； 固定后组织硬度适当 ； 可增加组织韧性 ； 成本较低，可用于固定和保存大标本。
1.常用固定液
➢ 浓度10%中性缓冲福尔马林（7.2-7.4）
定效果。 注意：因乙醇的渗透力弱，固定速度慢，细胞核
着色不太理想，所以用其固定的标本取材 要薄。
1.常用固定 ➢ 乙液醇-甲醛固定液（A-F固定液）
配制：95%乙醇或无水乙醇9份，加40%甲醛1份混 合而成。
特点：此液同时兼有固定与脱水作用，尤其适用于 皮下组织中肥大细胞的固定。
➢ 乙醇-醋酸-甲醛混合固定液（AAF固定液）
（二）固定的方法
➢ 浸泡固定法：最常用。用于浸泡固定液的体积不 得少于标本体积的5倍。
➢ 注射或灌注法：多用于整个器官或尸体的固定。 ➢ 微波固定法：主要用于少量或小块组织快速制片
时的固定。 ➢ 蒸汽固定法：主要用于可溶性物质、血液或细胞
涂片及某些薄膜组织等小而薄标本的固定。
（三）固定的注意事项
病理检验技术
组织制片技术
学习内容
➢ 组织块的处理 取材 固定及固定液选择 洗涤、脱水、透明 浸蜡、包埋
➢ 组织切片 切片机原理 切片技术
学习目标
取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、脱水
掌
剂等概念
握 脱水、透明、浸蜡、包埋、切片等技术操作
熟 悉
组织切片制作的基本程序
了 常用固定液的配制和应用 解
配制：浓度40%甲醛10ml、冰醋酸5ml加入95%乙 醇85ml混 合而成。
病理组织切片制作技术
病理组织切片制作技术病理组织切片制作技术病理组织切片常用的制作方法有三种。
即石蜡切片法，冰冻切片法和火棉胶切片法。
以石蜡切片法为代表，切片的基本制作过程是：组织取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→组织包埋→组织切片→展片附贴→切片脱蜡→染色→脱水→染片透明→封固。
以上基本过程是互相联系的，任何一环节出现问题，都将使整个切片制作归于失败。
因此应细致、耐心、认真负责，并事先做好计划安排。
一、取材采取病料，要刀剪锐利，剪切时不可挤压，扯拉病料，以防人为损伤。
切取的工具要清洁。
采取病料越新鲜越好，一般不超过死后24小时。
应选择病变部与可疑病变部切取，切取时要由表及里，有浅入深并包括周围正常组织一部分。
特殊病料应根据器官的结构特点切取。
管状，囊状和皮肤组织应注意垂直切取（横切）。
带有薄膜的组织，要防止切时薄膜分离和脱落。
切取组织块大小，以1.5×1.5×0.3厘米为宜，最厚不宜超过0.5厘米。
组织块病变一面应平整光滑，另一面可不平整，以便包埋时辨认。
切取后，放入事先准备好的装有固定液的磨口玻璃广口瓶中，并做好标记。
二、固定固定的目的是迅速将组织细胞杀死，使细胞中的蛋白质，糖，脂肪等凝固，从而保持与活组织相似的结构状态。
材料取下后，应迅速固定。
固定液数量应为病理组织块的5到20倍。
由于一般把组织块浸入固定液后数小时，固定液渗入组织液的深度只达2到3厘米。
因此，可以放置冰箱内固定，使组织内酶失去作用，细菌也能停止滋生。
最常用的固定液是10%的福尔马林溶液：使用时，用40%的甲醛饱和水溶液10毫升，加水90毫升配成。
三、冲洗固定后的组织块，应将固定液洗去。
一般均用流水（自来水）冲洗12到24小时左右。
及时冲洗尚有停止固定的作用，防止固定过度，有利于制片染色。
冲洗时如不方便用流水冲洗，也可用较大容器盛装水浸洗，每隔相当时间换水一次。
整个浸洗时间比流水冲洗应稍长一些。
酒精固定的组织材料不需冲洗。
简述病理组织制片的基本技术流程
英文回答：Pathological tissue production is an extremely important technique in clinical pathology and is carried out for in—depth research into the morphology and immunisation of tissue specimens。
The technical processes include specimen collection， tissue fixation， dehydration， transparency，immersion of waxes， wrapping， slices， de waxes， dyes and seals。
The first is sample collection， which is usually taken from surgery or piercing， followed by fixed liquid tissues and cell proteins。
Post—fixed tissues require dehydration to gradually replace moisture in tissues by gradual leaching in increased concentrations of ethanol or isopropanol。
This is followed by transparent treatment， leaching the dehydrated tissue into the transparency agent， removing the dehydration agent and gradually making it transparent。
病理组织制片技术基本流程
病理组织制片技术基本流程病理组织制片技术是病理学中的一项重要技术，它通过将病理标本切片、染色和覆盖玻片，使得细胞和组织的形态结构能够被显微镜观察和分析。
这项技术在医学诊断、研究和教学中起到了关键作用。
下面将介绍病理组织制片技术的基本流程。
1. 标本采集与固定病理组织制片的第一步是标本采集与固定。
医生根据患者的病情，选择合适的组织或细胞标本进行采集。
常见的标本包括切除标本、活检标本等。
采集后，标本需要立即进行固定，以保持组织的形态结构和化学成分的稳定。
最常用的固定剂是10%的中性缓冲福尔马林溶液。
2. 组织处理与包埋固定后的标本需要进行组织处理与包埋。
首先，将固定的标本进行去除固定剂的处理，然后用乙醇逐渐脱水，最后用苯麻油进行透明处理。
透明处理后，标本需要被包埋在石蜡中，以便后续的切片操作。
3. 切片与染色石蜡包埋的标本需要进行切片与染色。
首先，使用组织切片机将石蜡块切割成薄片，通常厚度为4-6微米。
切片后，将切片浸泡在水中，使其展开。
然后，将切片依次浸泡在染色剂中，进行组织染色。
不同的染色剂可以突显不同的细胞和组织结构，例如血液常规染色、免疫组化染色等。
4. 脱脂与覆盖玻片染色后的切片需要进行脱脂与覆盖玻片。
首先，将染色后的切片依次浸泡在醇中，去除多余的染色剂。
然后，使用透明剂将切片与玻片粘结在一起，使其固定。
最后，将覆盖玻片放在切片上，使用压力将其压平，使切片与玻片紧密结合。
5. 干燥与封装覆盖玻片后的切片需要进行干燥与封装。
将覆盖玻片的切片放置在干燥箱中，通过温度和时间控制，将其彻底干燥。
干燥后，将切片放置在干燥剂中，以防止切片吸湿。
最后，将切片放入切片盒中，进行封装，以便长期保存和使用。
病理组织制片技术的基本流程包括标本采集与固定、组织处理与包埋、切片与染色、脱脂与覆盖玻片以及干燥与封装。
这一流程确保了病理标本的形态结构得以保留，并使其能够被显微镜观察和分析。
病理组织制片技术的应用广泛，对于疾病的诊断和治疗具有重要意义，同时也为病理学研究和教学提供了有力支撑。
标准病理组织制片和染色技术
02
１、石蜡：
切片蜡___软蜡50℃以下，酶，保存抗原活性 (纯度高密度好) 硬蜡50℃以上-62∽64℃ 工业石蜡___质地较差，价格便宜 纯度低，熔点不准确
2、根据组织的不同选用：
60∽62℃-----皮肤、骨组织、硬纤维瘤 58℃以下----作免疫组化酶
01
恒温箱温度一般高于石蜡熔点4∽5℃ 浸蜡可分三级 软蜡 54---56℃ 硬蜡 58---60℃ 硬蜡 60—62℃
单击此处添加小标题
02
涂片法－如：血液、精液、痰、胸腹水等
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03
磨片法－主要用有钙盐坚硬材料，牙齿、介壳、坚骨－手工磨
单击此处添加小标题
04
分离法a、压片法－动终板的制备b、撕碎法c压碎法
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二、取材（实验病理、临床病理、尸解诊断）
实验病理取材 动物的杀死：动物杀死方法很多，根据动物大小、种别、观察目的而定。
乙醇结构式 CH3 · CH3 · OH 水的结构式 H2O
···H---O ···H---O ···H---O ···H---O ···H---
H
R
H
R
乙醇的羟基（－OH）和水形成氢键， 水分子与乙醇分子逐步缔合在一起。
乙醇与水相混容的原理：
常用的脱水剂 强，使组织硬化，和二甲苯互溶。 缺点：使组织收缩，变脆。 强，收缩厉害。临床病理用于快速脱水 ，既脱水又透明使组织收缩小不硬化 既脱水又透明皮肤、骨 叔丁醇发松子醇 根据组织大小、类别、种属、分别安排
. 临床活检取材： 注意事项： 请单位姓名与标本一致，防止混乱差错。 查标本是否符合要求—干涸坏变，固定液 多少。 材时描写：大小，形态，色泽，硬度等。 麻或针帽大小组织——染伊红？：镜纸 包好 见肿瘤取材方法：略。
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病理制片技术——常用特殊染色
一、六胺银染色
1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项
(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色
1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．
4．注意事项
(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色
1．第一步准备工作
(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
(2)配制石碳酸水溶液：将石碳酸结晶放入热水浴溶解后取5 ml与事先预热的蒸馏水95ml 匀备用．(以上二种液体可单独保存)。
(3)石碳酸品红染液：取盐基性品红溶液10 ml与5％石碳酸水溶液90 ml混合，使用前过滤。
2．第二步染色方法
切片厚度为6 um，脱蜡至水，石碳酸品红染色30 min至1 h，(或用微波炉高档加热10~ 20 s)，水洗，用1％盐酸乙醇分化洗掉切片上多余染液，水洗，0.1％美蓝浅染，背景为淡蓝色、冲水、晾干、封固。
3．图示结果：抗酸杆菌呈亮红色，背景呈淡蓝色。
4．注意事项
(1)用微波染色时切片容易脱落．
(2)美蓝染色宜浅。
四、奥辛蓝一PAS染色
1．第一步准备工作
(1)配制奥辛蓝染液；将奥辛蓝1 g溶解于3％的醋酸溶液，调整液体PH值为2.5。
(2)配制PAS染液：将碱性品红1 g加人煮沸的蒸馏水内溶解，温度降至50℃时加入亚硫
酰氯1 ml(加亚硫酰氯时要在通风厨内进行)放入冰箱过夜。
加入活性碳2 g，摇动混合液1 min，静止10 min后，过滤于棕色瓶内，放置冰箱保存。
2．第二步染色方法
(1)奥辛蓝染色：切片脱蜡至水经3％醋酸溶液l10min，切片直接进入1％的奥辛蓝染色10
min，水洗，必要时用1％的中性红对比染色，水洗。
(2)PAS染色切片厚5um，脱蜡至水，用0.5％过碘酸氧化10min后流水冲洗1 min，用纸
吸干切片周围水分，用干燥的吸管吸取PAS染液，滴染10~20 min，流水冲洗1 min，用苏木精浅染1 min，水洗、分化、返蓝、然后进行脱水、透明、封固。
3．图示结果：PAS阳性物质呈玫瑰红色，胞核呈蓝色。
4．注意事项
(1)加亚硫酰氯时要在通风厨内进行。
(2)过碘酸恢复室温才能使用(20℃以内)。
(3)染色时要加对照片。
(4)氧化时间要限制在10 min内。
(5)PAS染液易挥发使染色反应迟缓或红色太浅，加入数滴亚硫酰氯即可。
(6)如果染奥辛蓝-PAS时，省略染苏木精步骤。