阿维菌素高效液相色谱测定方法
高效液相色谱紫外检测法测定猪肉中阿维菌素药物残留
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阿维 菌素 是 当 今 最受 关 注 的 生 物 杀虫 、 螨 剂 杀
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之一， 由阿佛 曼 链 霉 素 经 液 体 发 酵 加 工 而成 的 抗 生 素类 生物农 、 药 ， 兽 它在我 国害虫 防治 体 系 中 占有较 重要 地位 ¨ 。阿维菌 素类 药物 由于其 优 异 的驱 虫 活 Ｊ 性 和较 高的安全 性 ， 被认 为是 目前最 优 良、 用 最广 应 泛、 销量最 大 的一类 新型 、 谱 、 广 高效 、 安全 和 用 量小 的兽用 抗 内 、 寄 生 虫 药 ， 外 已广 泛 应 用 于 兽 医 临 床 ，
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高效液相色谱荧光法测定胡椒中的阿维菌素
高效液相色谱荧光法测定胡椒中的阿维菌素摘要：建立以高效液相色谱荧光（HPLC-FLD）法测定胡椒（Piper nigrum L.）中阿维菌素含量的方法。
样品用乙腈提取，经氨基柱净化，衍生后，以HPLC-FLD 法分析。
结果表明，该法在添加回收浓度为0.005，0.010和0.050 mg/kg 3个不同添加水平的回收率为95%～103%，其检出限为0.005 mg/kg。
关键词：高效液相色谱荧光法；阿维菌素；残留；胡椒（Piper nigrum L.）阿维菌素（Abamectin，A VM）是由链霉菌发酵产生的大环内酯类抗生素，属昆虫神经毒剂，主要干扰神经生理活动，刺激释放γ-氨基丁酸，而γ-氨基丁酸对节肢动物的神经传导有抑制作用，害虫与药剂接触后即出现麻痹中毒而死，无内吸性[1]。
由于具有杀虫性强以及杀虫谱广等特点，被广泛用于蔬菜、果树、棉花和花卉等作物上[2]。
Malanikova等曾使用TLC法检测阿维菌素，在硅胶薄层板上涂上荧光指示剂，用于样品检测。
但TLC与高效液相色谱（HPLC）法相比较，灵敏度低，一般只作定性分析，很少用于残留检测[3]。
根据阿维菌素类药物的共轭二烯结构在240～250 nm处有强烈的紫外吸收，常采用液相色谱-紫外检测分析方法[4，5]。
但另一方面，阿维菌素类药物在体内最小有效浓度低于紫外检测器对其最低检测限（1～2 ng/mL）[6]。
与紫外检测器相比，荧光检测器（Fluorescence detector，FLD）的灵敏度约高100倍，对痕量分析特别适用。
而且只有具有对称共轭和非强离子化的化合物才能发射荧光，因此HPLC-FLD法的基质干扰较少。
由于A VM本身没有对称共轭结构，不能直接用荧光检测器检测，而只有经衍生后生成具有对称共轭的苯环结构才能发射荧光，其在血浆中的A VMs检测限可达0.02 ng/mL[7]。
由于胡椒（Piper nigrum L.）基质复杂，含有大量的挥发油、胡椒碱、粗脂肪、粗蛋白，对液相色谱柱及检测结果产生影响，因此，本试验将围绕建立胡椒中阿维菌素的检测方法展开。
高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量
高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量一、绪论阿维菌素是一种广谱抗生素，属于咪唑酰胺类抗生素，具有较好的抗菌活性，主要用于动物饲料中的抗菌剂。
阿维菌素在草食动物尤其是豆类作物中的残留问题引起了人们的关注。
菜豆是一种常见的豆类作物，广泛种植于各地，而且菜豆在生长期间容易受到外界环境和病虫害的影响，这些因素会导致菜豆中可能存在阿维菌素残留。
建立一种快速、准确、灵敏的检测菜豆中阿维菌素残留的方法具有重要的意义。
目前，国内外针对阿维菌素残留的检测方法主要包括高效液相色谱法、气相色谱法、免疫测定法、质谱法等。
这些方法各有优缺点，高效液相色谱法是目前应用较为广泛的一种方法，具有灵敏度高、准确度高、分离效果好等优点。
本研究将采用高效液相色谱法来检测菜豆中阿维菌素的残留量。
二、实验方法1.仪器与试剂（1）仪器：采用高效液相色谱仪进行检测。
（2）试剂：阿维菌素标准品、乙腈、甲醇、氯化钠、氢氧化钠等。
2.样品的处理（1）取适量的菜豆样品进行样品粉碎和过筛处理，将样品粉末置于干燥器中干燥。
（2）称取适量的粉末样品，加入适量的甲醇和氢氧化钠，振荡混合，再加入适量的乙腈，振荡混合，离心沉淀，取上层液体进行处理。
3.色谱条件色谱柱：C18色谱柱流动相：甲醇-水溶液流速：1.0mL/min检测波长：245nm色谱柱温度：25℃进样量：20μL4.标准曲线的建立取不同浓度的阿维菌素标准品溶液，分别进行色谱检测，得到峰面积与浓度的关系，建立标准曲线。
5.样品的检测取样品处理后的上层液体，进行高效液相色谱检测，根据标准曲线计算样品中阿维菌素的残留量。
三、结果与分析通过上述方法进行菜豆中阿维菌素的残留检测，得到了一批样品的测试结果。
结果显示，菜豆中多数样品中都存在不同程度的阿维菌素残留，残留量不一。
根据标准曲线的计算，得出了不同样品中阿维菌素的残留量。
通过对结果的分析和比较，可以得出菜豆中阿维菌素残留的含量较为普遍，需要引起人们的重视。
阿维菌素的液相色谱分析
%。
4. 色谱操作条件定质量范围内,按照浓度递增的顺序配制
数个已知样,按上述操作条件进行分析。以阿维菌 素标样质量为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲 线。此标准曲线通过原点。计算得回归方程为 Y=2.52×108X+4.69×103,线性相关系数r =0.9999。试验证明当阿维菌素浓度在0.004 g/100 mL~0.2 g/100 mL之间(进样体积5μL) 与其相应的峰面积呈现良好的线性关系。
流动相:甲醇+乙腈+水=38+38+24,膜过 滤,并进行脱气;
流量:1.0 mL/min; 柱温:室温(温差变化应不大于2℃); 检测波长:245 nm; 进样体积:5μL; 保留时间:B1a15.6 min, B1b11.3 min。
典型阿维菌素乳油高效液相色谱图见图
5.溶液的配制
7.计算
试按样式(中1阿)计维算菌素(B1a+B1b)的质量分数X1(%)
式中: A积1和—的—平—均两值针;标样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 A积2和—的—平—均两值针;试样溶液,阿维菌素B1a与B1b峰面 m1———标样的质量,g; m2———试样的质量,g; p———标样中阿维菌素(B1a+B1b)的质量分 数,%。
8.4 最佳操作条件的选择
8.4.1 检测波长的确定 由阿维菌素的紫外光谱图可以看出,
高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量
高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量菜豆是一种常见的蔬菜，也是人们日常饮食中经常食用的一种食材。
而在农业生产中，为了保护作物不受病虫害侵害，农民常常会使用农药来进行预防和治疗。
农药的使用过量或不当使用往往会导致农产品中农药残留的问题，给人们的身体健康带来潜在的风险。
对农产品中农药残留的检测成为了十分重要的任务。
阿维菌素是一种常用的杀虫剂，也被广泛应用于菜豆的生产过程中。
阿维菌素残留过量会对人体健康产生危害，因此对菜豆中阿维菌素残留量的检测就显得尤为重要。
本文将介绍一种高效液相色谱法来检测菜豆中阿维菌素残留量的方法。
一、高效液相色谱法的原理高效液相色谱法（HPLC）是一种在液相中进行分离分析的方法。
其原理是将待测物质溶解在流动相（常为水或有机溶剂）中，通过一定压力将其推动流过填充了吸附剂的色谱柱，不同成分因为在吸附剂上停留时间的长短不同而被分离开来，最终通过检测器对各个成分进行检测，从而获得待测物质的浓度或含量。
二、检测方法1. 样品的制备需要准备待检测的菜豆样品。
取适量的菜豆样品，研磨成细粉状，再将细粉样品加入适量的提取溶剂中，如甲醇或乙腈，与其充分混合，制备成样品的提取液。
将样品的提取液通过滤膜进行过滤，除去其中的固体残留物，得到清澈的提取液。
3. 色谱条件将提取液注入高效液相色谱仪，设置好相应的分离条件。
在此实验中，我们选择了一根C18反相色谱柱，流动相为乙腈和水的混合溶液，并采用梯度洗脱的方法分离目标化合物。
样品通过色谱柱分离后，利用紫外检测器对洗脱后的化合物进行监测。
阿维菌素的最大吸收波长为240nm，因此可以选择在该波长下进行检测。
5. 数据处理通过色谱仪采集得到的数据，根据标准曲线对样品进行定量分析，得到目标化合物的含量。
三、实验结果与讨论通过上述的实验方法，我们成功地对菜豆样品中的阿维菌素进行了检测。
在我们的实验结果中，我们发现样品中阿维菌素的含量为0.032mg/kg，未超出国家规定的最大残留限量。
农药阿维菌素的有效成分检测方法
阿维菌素有效成分常用的分析方法：液相色谱法1.方法介绍试样用甲醇溶解，以甲醇+水为流动相，使用以μ-Bondapak C18为填充物的不锈钢柱和246nm紫外检测器，对试样中的阿维菌素进行高效液相色谱分离和测定。
2.试剂甲醇：色谱纯二次蒸馏水阿维菌素标样：已知质量分数，≥98%3.仪器高效液相色谱仪：具有246nm紫外检测器色谱数据处理机色谱柱：250mm×4.6mm（id）不锈钢色谱柱，内装μ-Bondapak C18填充物（10μm）过滤器：滤膜孔径约0.45μm微量进样器：50μL定量进样阀：20μL4.操作条件柱温：25℃流速：1.5mL/min检测波长：246nm进样体积：20μL流动相：甲醇+水=85+15（φ）保留时间：阿维菌素B1a约17.0min，阿维菌素B1b月12.0min5.测定步骤5.1.标样溶液的制备称取阿维菌素标样100㎎（精确至0.2㎎），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。
5.2.试样溶液的制备称取约含阿维菌素100㎎（精确至0.2㎎）的待测试样，置于100mL 容量瓶中，用甲醇溶解稀释并定容至刻度，摇匀。
用0.45μm孔径的滤膜过滤。
5.3.测定在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针阿维菌素对响应值变化小于 1.0%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。
6.计算将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积分别进行平均。
试样中阿维菌素质量分数X（%），按公式计算：X=r2·m1·p r1·m2式中：r1——标样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积的平均值r2——试样溶液中阿维菌素（B1a+B1b）峰面积的平均值m1——标样的质量（g）m2——试样的质量（g）P——标样中阿维菌素（B1a+B1b）的质量分数（%）7.本法使用范围阿维菌素TC/EC/WP等单制剂的分析。
高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量
高效液相色谱法检测菜豆中阿维菌素残留量菜豆是一种常见的蔬菜，具有营养丰富、口感鲜美等特点。
在生产过程中，防治病虫害是关键环节，其中药物是不可缺少的工具之一。
然而，药物残留会对人类健康产生威胁，因此食品中药物残留的检测十分必要。
阿维菌素是一种常用的杀菌剂，可用于防治菜豆等蔬菜上的真菌病和霉菌病。
但是，它在使用过程中容易残留在菜豆中，如果人们长期食用含有阿维菌素的菜豆，会产生影响健康的潜在风险。
因此，为了确保食品安全，需要对菜豆中的阿维菌素残留量进行检测。
目前，国内外对阿维菌素残留的检测方法主要有高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）等。
其中，HPLC方法是一种最常用的检测方法，具有灵敏、准确、简便等优点。
以下将介绍一种利用HPLC法检测菜豆中阿维菌素残留量的方法。
仪器和试剂：1.高效液相色谱仪（HPLC）2.反相色谱柱3.流动相（甲醇：乙腈=50:50）4.过滤器5.离心机6.标准品（阿维菌素）7.甲醇8.水9.橄榄油10.氯仿步骤：1.样品准备将菜豆样品粉碎，并将大量样品称入50ml锥形瓶中，加入10ml的甲醇、10ml的水、10ml的橄榄油混合液，盖紧瓶盖，超声水浴处理30分钟，离心10分钟。
将上清液取出，用氯仿萃取，离心分离，并用电子天平称取约1g，加入6ml的甲醇溶解。
再用1μm的过滤器过滤，用甲醇调整至容量为10ml。
将阿维菌素标准品0.10g溶于100ml的甲醇中，摇匀。
3.样品检测在反相色谱柱中，以甲醇：乙腈=50:50的流动相为移动相，进样量10μL，流速1.0ml/min，检测波长254nm，检测阿维菌素质量浓度范围为0.001~0.10μg/ml。
结果分析阿维菌素在反相色谱柱中的保留时间为13.6min，其峰面积与浓度呈线性相关关系，相关系数R2=0.998。
使用此方法对菜豆样品进行测定，阿维菌素质量浓度在范围内时，峰面积随阿维菌素浓度的增加而增加。
高效液相色谱法测定阿维菌素
德 国依卡 公 司 ） 过 滤器 （ 膜 孔 径 ０ ４ ｍ） 高 频 ； 滤 ．５ ；
５ Ｋ Ｚ台式超声波清洗器 （ Ｋ ２０ ９Ｈ Ｓ ５０ Ｈ型 ， 上海科导 超 声仪器 有 限公 司 ） 电子 分析 天平 （ Ｂ ０ ； Ａ ２４一Ｎ型 ， 上海梅 特 勒 一托 利 多 ）； 心 分 离 器 （ Ｏ Ｖ Ｌ 离 Ｓ Ｒ Ａ Ｌ— Ｒ ７型 ， 津市瑞 顺 达工 贸有 限公 司 ） 仪 表 恒 温水 Ｔ 天 ；
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Ｓｈ ｒｏｂＣ８ 高效液相 色谱分 离， ｐｅｉ ｒ 。 ｓ 柱 紫外检测 器测定。 阿维茵素标准曲线的线性 回归系数 ｒ ０ ９４ ， ＝ ．９ ８ 线性 范围
为 ００ ５ ｇ・ ～ 一 ．０ ｒ ｍＬ 样品 多次测定相对标准偏差 小于 １７ ； 均回收率为 ９ ． ％。本方 法 ． ２ ｍ ｍＬ ０ １０ ｇ・ ～； ａ ．％ 平 ９５ 简便 、 快速 ， 具有较 高的灵敏度和准确度。 关 键 词 ： 效 液 相 色谱 ； 定 ；阿 维 茵 素 高 测
ａ ｅ ａ ｅ ｒ ｃ ｖ ｒ ｓ ｏ ｖ ｒ ｅｉ ｎ ｌ ｚ ｄ ｗａ ９． ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅ ｅ ｆａ ｅ ｍｅ ｔ ａ ａ ｙ ｅ ｓ９ ５％ ｗｉ ｅ ａｉ ｅ ｓａ ｄ ｒ ｅ ｉ ｔ ｎ ｌｓ ｈ ｎ １ ７ ． ｉ ｎ ｔ ｒ ｌ ｔ ｔ ｎ ａ ｄ ｄ ｖ ａ ｏ ｅ ｓｔ ａ ． ％ ｈ ｖ ｉ Ｋ ｅ ｒ ｓ： ｉｈ ｐ ｒ ｒ ａ ｃ ｉ ｕ ｄ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｐ ｙ；ｄ ｔ ｒ ｉ ａ ｉ ｎ；ａ ｅ ｍｅ ｔ ｙ ｗｏ ｄ ｈ ｇ ｅ ｏ ｆ ｍ ｎ ｅｌ ｉ ｈ ｏ ｔｇａ ｈ ｑ ｅｅ ｎ ｔ ｍ ｏ ｖ ｒ ｃｉ ｎ
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阿维菌素高效液相色谱测定方法
阿维菌素是一种新型生物发酵制得的杀虫剂，该产品效果好，用量低，安全系数高，被广泛应用于农林作物多种害虫的防治。
一、阿维菌素的理化性质：
化学名称：（10E，14E，16E，22Z）-（1R，4S，5’S，6S，6’R8R，8R；12S，13S，20R，21R，24）-6’-[（S）-仲丁基]-21.24-=羟基-5’11,13,22,-四甲基-2-氧代-3，7，19-三氧杂四环[15，6，1，10,20，24]-十五-10，14，16，22，-四烯-6-螺-2’-（5’.6’-二氢-2’H-吡喃）-12-基2，6-二脱氧-4-0-（2.6-二脱氧）-3-0-甲基- d-L-阿拉伯-已吡喃糖基-3-0-甲-d-l-阿拉伯-已吡喃糖苷。
实验式：Ｃ48Ｈ72Ｏ14；
相对分子质量：873.1（按1997年国际相对原子质量计）；
生物活性：杀螨；
熔点：(150~155)℃；
蒸汽压（20℃）：199.98mpa；
溶解度（g／L,21℃）：:水0.1×10-4、丙酮100、正丁醇10、氯仿25、环已烷6、乙醇20，异丙醇70、煤油0.5、甲醇19.5、甲苯350；
稳定性：在通常贮存条件下稳定，在pH5~9和25℃时，其水溶液不发生水解。
二、阿维菌素B1a含量的测定
1、方法提要
试样用流动相溶解，使用以C18为填料的不锈钢柱和具有紫外可变波长检测器，对试样中的阿维菌素B1a进行高效液相色谱法分离和外标法定量。
2、试剂和溶液
甲醇：HPLC；
水：新蒸二次蒸馏水或杭州产娃哈哈纯净水；
a含量≥91%
阿维菌素标样：已知B
1
3、仪器
高效液相色谱仪：具有可变紫外波长检测器；
色谱工作站；
色谱柱：C18ODS、５µｍ150mm×4.6mm；
定量管：20uL；
进样器：100uL；
4、液相色谱操作条件
流动相：甲醇+水=90+10（V/V ）；
溶剂：甲醇；
检测波长：250nm ；
流速：0.5mL/min 。
5、测定步骤
5.1标样溶液的配
称取阿维菌素标样0.02g(精确到期0.0002g)于25mL 容量瓶中，用甲醇定容，超声溶解，待用。
5.2样品溶液的配制
称取样品折百约0.02g （精确至0.0002g ）至25mL 容量瓶中，用甲醇定容，超声溶解，待用。
5.3 测定
在上述操作条件下，待仪器工作状态稳定后，先注入数针标样溶液，待相邻两针的相对响应值变化小于 1.5%，按标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进样分析。
6、计算
将测得的两针试样溶液及试样前后两针标样溶液中阿维菌素B 1a 的峰面积分
别进行平均，有效成份阿维菌素B 1a 质量百分含量X 1按式（1）计算：
式中：
A 1——试样溶液中阿维菌素
B 1a 峰面积的平均值；
A 2——标样溶液中阿维菌素
B 1a 峰面积的平均值；
M 1——试样的质量，g ；
M 2——阿维菌素标样的质量，g ；
P 2——阿维菌素标样B 1a 的纯度，%。
7、允许差
两次平行测定结果之差不大于0.1%。
X 1= A 1×M 2×P 2
×100% (1)
———————— A 2×M 1。