高分 土壤微生物主要类群的分离、记数及形态特征比较
土壤微生物的分离及群体特性检验
土壤微生物的分离及群体特性检验土壤是一个极为复杂的生态系统，不仅有各种植物，还有各种动物和微生物。
土壤微生物是构成土壤生态系统的重要组成部分，它们在土壤中发挥着重要的生态功能。
因此，对土壤微生物的了解和研究至关重要。
本文将探讨土壤微生物的分离及群体特性检验。
一、土壤微生物的分离土壤微生物是由各种微生物组成的群体，包括细菌、真菌等。
因此，对于不同的微生物，采用不同的分离方法。
本文以细菌的分离为例。
细菌的分离是通过培养细菌在富含营养物的培养基上进行的。
主要步骤如下：1. 取样：选择要研究的土壤样品，取样时要注意保持样品的原样。
2. 稀释：将土壤与生理盐水混合，并进行稀释。
主要目的是使细菌分子变得比较稀薄，容易单独分离。
3. 接种：将稀释后的土壤与营养物混合，并加入培养皿中。
通过搅拌和均匀分布，将细菌样品分散在培养基上。
4. 培养：将含有细菌样品的培养皿放置于合适的环境中进行培养。
通常情况下会控制培养温度、氧气含量、肥料浓度和pH值等因素。
5. 鉴定：在培养过程中出现的细菌形态和生长特征可用于鉴定细菌种类。
二、土壤微生物的群体特性检验了解土壤微生物群落特性，有助于我们更好的理解土壤微生物的功能和生态环境。
下面，我们将介绍一些土壤微生物群体特性的检验方法。
1. 土壤微生物多样性检测：通过检测土壤中DNA序列的变异来分析土壤微生物多样性。
这种方法可以帮助我们了解土壤微生物在不同环境下的变化。
2. 光合作用检测：光合作用是生态系统中微生物的重要功能，通过检测土壤中光合作用的速率可以了解微生物在土壤环境中的生态功能。
3. 周期性生长检测：周期性生长是指微生物在经过一定的生长周期后，其群体大小会发生周期性变化。
通过检测这种变化，可以了解微生物在土壤环境中的群体特性。
4. 植物-微生物情况检测：土壤中的植物和微生物之间具有密切的相互作用。
通过检测植物和微生物之间的相互作用，可以更好的理解土壤微生物在生态系统中的生态作用。
不同季节农田土壤微生物多样性及数量差异分析
不同季节农田土壤微生物多样性及数量差异分析随着人口增长和城市化的加速，农业土地的利用和保护越来越成为人们关注的焦点。
而土壤是农田的重要组成部分，微生物是土壤养分循环和有机物分解的关键，因此，研究不同季节农田土壤微生物多样性及数量差异，对于实现可持续农业和生态平衡意义重大。
一、不同季节土壤微生物多样性差异农田土壤微生物是多种多样的，随着季节变化，它们的组成也会发生变化。
研究表明，春季和夏季为土壤微生物丰富的时期，而秋季和冬季则为相对贫瘠的时期。
其中，春季为微生物的繁殖期，土壤中细菌数量和种类会有所增加。
夏季气温较高，特别是在降雨量较大的情况下，土壤中的真菌和放线菌数量会相对较高。
而秋季和冬季则是由于环境因素的变化，如气温下降和缺水等，导致微生物的数量和种类减少。
此外，不同植物也会影响土壤微生物的多样性。
不同季节的植物种类及其生长状态差异，也会导致土壤微生物的种类和数量不同。
例如，春季的农田种植的大部分是早熟作物，夏季则以果树和长势强的蔬菜为主，秋季则以种植茬为主。
这些不同的植物需要的土壤营养元素有所不同，会影响到不同季节土壤微生物的多样性。
二、不同季节土壤微生物数量差异相对于微生物多样性，季节因素对微生物数量的影响更加明显。
本体研究表明，春季的土壤中细菌和放线菌数量最多，可达到7.90×10⁶ CFU/g；夏季则以真菌为主，数量达到了4.38×10⁵CFU/g；而秋季和冬季，土壤中微生物数量均比较小，分别为2.02×10⁵ CFU/g和1.38×10⁵ CFU/g。
这与前文提到的环境因素变化密切相关。
除了季节因素外，土壤pH值、有机质含量、土壤类型等也是影响微生物数量的主要因素。
例如，pH值过高或过低都会导致微生物数量降低，土壤有机质含量过高则会导致微生物数量过多，从而影响微生物之间的平衡。
三、不同季节土壤微生物差异对农业的影响研究不同季节土壤微生物差异，对于农业的可持续发展具有重要意义。
【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数
【高中生物】高中生物知识点：土壤中微生物的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：1.分离菌株的想法(1)自然界中目的菌株的筛选① 依据：根据其对生活环境的要求，在相应的环境中寻找。
②实例：pcr技术过程中用到的耐高温的taqdna聚合酶，就是从热泉中筛选出来的taq细菌中提取出来的。
（2）实验室筛选目标菌株①原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度.ph等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
培养基中分解尿素微生物的选择原则：培养基的氮源为尿素。
只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，尿素被用作氮源。
缺乏脲酶的微生物不能分解尿素，并且由于缺乏氮源而不能生长、发育和繁殖。
因此，可以用这种培养基选择分解尿素的微生物②方法：能合成脲酶的细菌才能分解尿素。
配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌。
2.菌落数的计算方法(1)稀释涂布平板法（间接）① 当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的菌落来自样品稀释液中的活细菌。
②通过统计平板上的菌落数来推测样品中大约含有的活菌数。
（2）显微镜直接计数3．分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
4.实验过程土壤取样→样品的稀释→将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上→挑选能生长的菌落→鉴定知识发展：1、taq细菌是耐高温的微生物。
2.培养基对微生物有选择性作用。
在配置培养基时，根据某一种或某一种微生物的特殊营养要求，添加一些物质或排出一些营养物质，以保持其他微生物的生长，或根据某些微生物对某些物理和化学因素的抗性，向培养基中添加化学物质，以筛选未确定的微生物。
这种培养基称为选择性培养基。
3、测定微生物数量的方法：① 直接计数法：常用显微镜直接技术，一般适用于纯培养悬浮液中各种单细胞细菌的计数。
②间接计数法：常用稀释平板计数法，平板培养基上长出一个菌落就代表原待测样品中一个微生物个体。
土壤微生物数量测定方法
土壤微生物的分离鉴定及数量测定（一）培养基的制备Ⅰ测定微生物总量培养基：1. 细菌培养基（牛肉膏蛋白胨琼脂培养基）牛肉膏Beefextract5.0g蛋白胨Peptone10.0gNaCI5.0g蒸馏水H201000m1琼脂15～20gPH7.2~7.4制备步骤：⑴在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，加50 mL蒸馏水，置电炉搅拌加热至牛肉膏，蛋白胨完全溶解.⑵向小铝锅中加入500 mL蒸馏水，将溶解的牛肉膏，蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次.加入5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌.⑶加入洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL.⑷用NaOH或HC1调至pH7.0. 用酸度计或用玻棒沾少许液体用精密pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH 调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
⑸根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。
注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞部分包好. 标签表明培养基的名称、配制日期等。
⑹高压蒸汽灭菌，用0.1Mpa（15lb/in2）121℃灭菌（15-20）30min.2.放线菌培养基（改良高氏1号琼脂培养基）可溶性淀粉20gKNO3 1gK2HPO40.5gMgSO4• 7H2O 0.5gNaCl 0.5g原0.05gFeSO4• 7H2O 0.01gpH 7.2-7.4制备步骤：（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称量各种成分。
（3）溶化配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入少许沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调PH（可不调）。
土壤里的生物
土壤中的微生物数量与分布土壤中微生物的类群、数量与分布，由于土壤质地发育母质、发育历史、肥力、季节、作物种植状况、土壤深度和层次等等不同而有很大差异。
l g 肥沃土壤，如菜园土中常可含有108 个甚至更多的微生物，而在贫瘠土壤如生荒土中仅有103 ～107 个微生物，甚至更低。
土壤微生物中细菌最多，作用强度和影响最大，放线菌和真菌类次之，藻类和原生动物等数(1) 、细菌土壤中细菌可占土壤微生物总量的70 ％~90% ，其生物量可占土壤重量的1/10 000 左右。
但它们数量大、个体小，与土壤接触的表面积特别大，是土壤中最大的生命活动面，也是土壤中最活跃的生物因素，推动着土壤中的各种物质循环。
细菌占土壤有机质的1% 左右。
土壤中的细菌大多为异养型细菌，少数为自养型细菌。
土壤细菌有许多不同的生理类群，如固氮细菌、氨化细菌，纤维分解细菌、硝化细菌、反硝化细菌、硫酸盐还原细菌、产甲烷细菌等在土壤中都有存在。
细菌在土壤中的分布一般粘附于土壤团粒表面，形成菌落或菌团，也有一部分散于土壤溶液中。
且大多处于代谢活动活跃的营养体状态。
但由于它们本身的特点和土壤状况不一样，其分布也很不一样。
细菌积极参与有机物的分解、腐殖质的合成和各种矿质元素的转化。
（2 ）、放线菌土壤中放线菌的数量仅次于细菌，它们以分枝丝状营养体缠绕于有机物或土粒表面，并伸展于土壤孔隙中。
1g 土壤中的放线菌孢子可达10 7 ~10 8 个，占土壤微生物总数的 5 ％~30% ，在有机物含量丰富和偏碱性土壤中这个比例更高。
由于单个放线菌菌丝体的生物量较单个细菌大得多，因此尽管其数量上少些，但放线菌总生物量与细菌的总生物量相当。
土壤中放线菌的种类十分繁多，其中主要是链霉菌( Streptomyces ) 。
目前已知的放线菌种大多是分离自土壤。
放线菌主要分布于耕作层中，随土壤深度增加而数量、种类减少。
(3) 、真菌真菌是土壤中第三大类微生物，广泛分布于土壤耕作层，1g 土壤中可含10 4 ~10 5 个真菌。
土壤微生物
土壤微生物土壤微生物是生活在土壤中的微小的生物体，包括细菌、真菌、原生动物、线虫等不同类型的微生物。
与土壤中的其他生物体相比，土壤微生物在生态系统中的作用非常重要。
它们参与土壤生产力、养分循环、有机物分解、土壤结构构建以及调控地球生态系统中各种生物体的数量和品种等方面，具有重要的生态学意义。
一、土壤微生物的分类和特征根据其遗传特征和形态特征，土壤微生物可以根据其细胞结构、生存方式和代谢模式等差异进行分类。
目前已知的土壤微生物主要包括细菌、真菌和原生动物三类。
（一）细菌细菌是一类单细胞生物体，其大小很小，约为0.5~5μm。
它们的特征在于无明显的细胞器官，但其表面具有独特的细胞壁和可能存在的纤毛、鞭毛、荚膜等器结构。
细菌是土壤微生物中数量最多的群体，同时也具有非常多样的代谢方式和生存策略，主要分为光合细菌、化学合成者、异养细菌、厌氧菌、益生菌、致病菌等几类。
（二）真菌真菌是一类多细胞生物体，分成极丰富的菌门、属、种等不同的分类。
一般而言，土壤中的真菌主要分为接合菌门（包括原生菌、示核菌等）和子囊菌门（包括担子菌、伞菌等）。
真菌体租有非常细微的菌丝，其菌落的形成具有很强的营养竞争力。
同时，真菌还能够在土壤中通过菌丝的特殊构造与其他微生物形成一定的联合生态系统。
（三）原生动物原生动物是一个广泛、复杂的群体，主要分为原生动物门和隐眼虫门两大类。
其体形较小，多为单细胞或从属于低等多细胞的微生物。
其生活方式一般而言主要分化为摄食者与厌氧发酵者等两类。
在土壤微生物中，原生动物多选择以真菌或细菌为食进行摄食，可有效地协同维持土壤生态，并对提升土壤生产力起到了积极的作用。
二、土壤微生物的生命周期和作用机制（一）氮循环机制土壤中的氮循环机制是由微生物协同发挥作用的，主要包括氮固定、氨化、硝化和脱氮四个不同的阶段性过程。
细菌和蓝藻类的光合细菌对花生、青豆等均有氮的固定作用；而硝化作用是由多种细菌和放线菌共同完成的过程，其中的硝氧化酶等酶类的表达和活性直接关系到硝化作用的效率和速度。
土壤学——土壤生物
能发挥重要作用。
第一节 土壤生物种类及其多样性
（4）土壤杆菌属（Agrobacterium） （5）产碱杆菌属（Alcaligenes）
反硝化产碱杆菌(Al.denitrificans)，在硝酸盐存 在的厌氧条件下，靠氧化有机质取得能源，并以硝酸盐中 的氧作为电子受体而产生氮气。
（6）黄杆菌属（Flavobacterium）
温度（℃）界限 最 适
0 以下 0 上下 0 上下 30 30
15 以 下 2030 2540 4560 8090
20 以 下 35 50 70 100 以 上
极端嗜热
第一节 土壤生物种类及其多样性
二、水分及其有效性 只有少数微生物能在较高渗透压溶液中生长 发育，这些微生物称为嗜渗菌（Osmophiles）或 嗜 盐 菌 (halophiles) ， 极 端 嗜 盐 菌 (extreme halophiles)甚至能在15%～30%盐浓度时生活。 一般在土壤含水量为田间持水量的50-80%之 间较好。
化能异养菌，培养时需要某些氮素物质和复合维生 素，因而分离后的培养物难以保存和培养。能用于净化污 水。
第一节 土壤生物种类及其多样性
土壤中重要的各种细菌生理群：
• • • • • • 纤维分解细菌 固氮细菌 硝化细菌 亚硝化细菌 硫化细菌 氨化细菌
在土壤碳、氮、磷、硫循环中担当重要 的角色。
第一节 土壤生物种类及其多样性
3、地衣（Lichens）
地衣是真菌和藻类形成的不
可分离的共生体。
地衣在土壤发生的早期起重 要作用。
第一节 土壤生物种类及其多样性
（三）非细胞型生物即分子生物—病毒 病毒是一类超显微的非细胞生物，每一种
病毒只有一种核酸。
土壤微生物主要类群的分离、记数及形态特征比较
土壤微生物主要类群的分离、记数及形态特征比较生命科学与技术学院专业食品科学与工程学号2011314003 姓名陈莹指导教师徐军韩炎摘要：本实验是微生物学综合性实验项目，包含了微生物学实验中的微生物的分离和纯化、微生物的选择性培养、平板菌落计数（即活菌计数）、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物主要类群的培养特征和形态特征、制片染色技术等。
[1]本文记录了对采自校园附近农田的土样中微生物主要类群的分离和纯化等试验操作方法和结果。
所采每克土样中几种不同类群微生物的含量分别为：细菌/个、放线菌/个、霉菌/个、自生固氮菌/个，说明土壤中微生物种类的繁多和数量的庞大。
培养基的种类和组分的不同可用于分离或富集不同的微生物。
关键词：分离纯化平板菌落计数微生物的形态1.前言：（1）、微生物在自然界及其在土壤中的分布简况；微生物种类繁多，繁殖迅速，适应环境能力强，因此广泛分布于自然界中，无论是陆地、水体、空气、动植物以及人体的外表面和内部的某些器官，甚至在一些极端环境中都有微生物的存在。
土壤中微生物的数量和种类都很多，包含细菌、放线菌、真菌、藻类和原生动物等类群。
其中细菌最多，约占土壤微生物总量的70 ％—90 ％，放线菌、真菌次之，藻类和原生动物等较少。
土壤微生物通过其代谢活动可改变土壤的理化性质，进行物质转化，因此，土壤微生物是构成土壤肥力的重要因素。
在土壤的不同深度微生物的分布也不相同。
其主要原因是由于土壤不同层次中的水分、养料、．通气、温度等环境因子的差异，及微生物的特性不同。
表面土的微生物数量少，因为这里缺水，受紫外线照射微生物易死亡；在5~ 20cm 土壤层中微生物数量最多，若是植物根系附近，微生物数量更多。
自20cm 以下，微生物数量随土层深度增加而减少，至lm 深处减少约20 倍，至2m 深处，因缺乏营养和氧气每克土中仅有几个。
土壤中微生物数量的季节变化是温度、水分、有机残体综合影响的表现。
一般，冬季气温低，有些地区土壤几个月呈冰冻状态，微生物数量明显减少。
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土壤微生物主要类群的分离、记数及形态特征比较生命科学学院专业:生物科学学号：姓名：指导教师徐军韩炎摘要：本实验是微生物学综合性实验项目，包含了微生物学实验中的微生物的分离和纯化、微生物的选择性培养、平板菌落计数（即活菌计数）、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物主要类群的培养特征和形态特征、制片染色技术等。
本文记录了对采自校园附近农田的土样中微生物主要类群的分离和纯化等试验操作方法和结果。
所采每克土样中几种不同类群微生物的含量分别为：细菌9.0×106个、放线菌5.04×105个、霉菌1.44×105个，说明土壤中微生物种类的繁多和数量的庞大。
培养基的种类和组分的不同可用于分离或富集不同的微生物。
关键词：分离纯化平板菌落计数微生物的形态1前言：（1）、微生物在自然界及其在土壤中的分布简况；微生物在自然界中的分布微生物种类繁多，繁殖迅速，适应环境能力强，因此广泛分布于自然界中，无论是陆地、水体、空气、动植物以及人体的外表面和内部的某些器官，甚至在一些极端环境中都有微生物的存在。
土壤中的微生物自然界中，土壤是微生物生活最适宜的环境，它具有微生物所需要的一切营养物质和微生物进行生长和繁殖及生命活动的各种条件。
大多数微生物不能进行光合作用，需要靠有机物来生活，进入土壤中的有机物为微生物提供了良好的碳源、氮源和能源；土壤中的矿质元素的含量浓度也很适于微生物的生长；土壤中的水分虽然变化较大，但基本上可以满足微生物的需要；土壤的酸碱度接近中性，缓冲性较强，适合大多数微生物生长；土壤的渗透压大都不超过微生物的渗透压；土壤空隙中充满着空气和水分，为好氧和厌氧微生物的生长提供了良好的环境。
此外，土壤的保温性能好，与空气相比，昼夜温差和季节温差的变化不大。
在表土几毫米以下，微生物便可免于被阳光直射致死。
这些都为微生物生长繁殖提供了有利的条件。
所以土壤有“微生物天然培养基”之称，这里的微生物数量最大，类型最多，是人类最丰富的“菌种资源库”。
土壤中的微生物分布，土壤中微生物的数量和种类都很多，包含细菌、放线菌、真菌、藻类和原生动物等类群。
其中细菌最多，约占土壤微生物总量的 70 ％一 90 ％，放线菌、真菌次之，藻类和原生动物等较少。
土壤微生物通过其代谢活动可改变土壤的理化性质，进行物质转化，因此，土壤微生物是构成土壤肥力的重要因素。
土壤的营养状况、温度和 pH 等对微生物的分布影响较大。
在有机质含量丰富的黑土、草甸土、磷质石灰土和植被茂盛的暗棕壤中，微生物的数量较多；而在西北干旱地区的棕钙土，华中、华南地区的红壤和砖红壤，以及沿海地区的滨海盐土中，微生物的数量最少。
在土壤的不同深度微生物的分布也不相同。
其主要原因是由于土壤不同层次中的水分、养料、通气、温度等环境因子的差异，及微生物的特性不同。
表面土的微生物数量少，因为这里缺水，受紫外线照射微生物易死亡；在 5~ 20cm 土壤层中微生物数量最多，若是植物根系附近，微生物数量更多。
自 20cm 以下，微生物数量随土层深度增加而减少，至 lm 深处减少约 20 倍，至 2m 深处，因缺乏营养和氧气每克土中仅有几个。
土壤中微生物数量的季节变化是温度、水分、有机残体综合影响的表现。
一般，冬季气温低，有些地区土壤几个月呈冰冻状态，微生物数量明显减少。
当春季到来，气温回升，随着植物的生长，根系分泌物增加，微生物的数量迅速上升。
有的地区，夏季炎热干旱，微生物数量也随之下降，至秋天雨水来临，加上秋收后大量植物残体进入土壤，微生物数量又急剧上升。
这样，在一年里土壤中会出现两个微生物数量高峰。
（2）土壤中各种类群的微生物的含量的大致情况：尽管土壤中各种微生物含量的变动很大，但每克土壤的含菌量大体上有一个十倍系列的递减规律：细菌（～108）＞放线菌（～107）＞霉菌（～106）＞酵母菌（～105）＞藻类（～104）＞原生动物（～103）。
由此可见，土壤中所含的微生物数量很大，尤其以细菌居多。
据估计，在每亩耕作层土壤中，约有霉菌150㎏，细菌75㎏，原生动物15㎏，藻类7.5㎏，酵母菌7.5㎏。
（3）土壤中的微生物的作用；土壤微生物大部分对作物生长发育是有益的，它们对土壤的形成发育、物质循环和肥力演变等均有重大影响。
对作物来讲是影响其生长发育的重要环境条件之一，其具体作用是：①形成土壤结构，作为土壤的活跃组成分,土壤微生物的区系组成、生物量及其生命活动对土壤的形成和发育有密切关系。
有活性的土壤是由固态的土壤、液态的水和气态的空气共同组成的，单纯的土壤颗粒和化肥所构成的并不是真正意义上的土壤。
土壤微生物通过代谢活动的氧气和二氧化碳的交换，以及分泌的有机酸等有助于土壤粒子形成大的团粒结构，最终形成真正意义上的土壤。
②分解有机质，作物的残根败叶和施入土壤中的有机肥料，只有经过土壤微生物的作用，才能腐烂分解，释放出营养元素，供作物利用，并形成腐殖质，改善土壤的结构和耕性。
③分解矿物质，土壤微生物的代谢产物能促进土壤中难溶性物质的溶解。
例如磷细菌能分解出磷矿石中的磷，钾细菌能分解出钾矿石中的钾，以利作物吸收利用，提高土壤肥力。
另外，尿素的分解利用也离不开土壤微生物。
④固氮作用，氮气占空气组成的4/5，但植物不能直接利用，某些微生物可借助其固氮作用将空气中的氮气转化为植物能够利用的固定态氮化物。
⑤调节植物生长，土壤微生物与植物根部营养有密切关系。
植物根际微生物以及与植物共生的微生物如根瘤菌、菌根和真菌等能为植物直接提供氮素、磷素和其他矿质元素的营养以及有机酸、氨基酸、维生素、生长素等各种有机营养，促进植物的生长。
⑥防治土传病害，土壤中存在一些抗生性微生物，他们能够分泌抗生素，抑制病原菌的繁殖，防治土传病原菌对作物的危害。
⑦降解土壤中残留的有机农药、城市污物和工厂废弃物等，降低残毒为害。
⑧某些微生物可用于沼气发酵，提供生物能源、发酵液和残渣有机肥料（4）本实验的主要过程和实验结果。
本实验通过采样、选择性培养、平板菌落计数(即活菌计数)、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、等方法，对土壤中的微生物进行分离计数，并通过革兰氏染色等实验观察方法对微生物个体形态等进行培养与观察，以及制片染色技术等。
结果发现土壤中微生物的含量极为丰富，含有霉菌，细菌，放线菌菌种。
通过比较对微生物形态等有所进一步的了解与认识。
2 材料与方法2.1材料2.1.1土样：以无菌方式采于学校内小园林，置于无菌容器中，待检。
2.1.2培养基2.1.2.1营养琼脂（牛肉膏蛋白胨固体培养基）[1]：牛肉膏3g；蛋白胨10g；NaCl 5g；琼脂15-20g；水1000ml；PH 7.0-7.2。
灭菌条件：121℃灭菌20min。
2.1.2.2高氏一号固体培养基[1]：可溶性淀粉20g；KNO3 1g；NaCl 0.5g；K2HPO40.5g； MgSO40.5g;FeSO40.01g; 琼脂 20g; 水 1000ml; PH 7.2-7.4。
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000ml。
121℃灭菌20min。
灭菌后，在100ml培养基中加入10%酚溶液5滴（作为抑制剂，以抑制细菌的生长），制备平板备用。
2.1.2.3查氏固体培养基[1]：NaNO32g；K2HPO41g；KCl 0.5g；MgSO40.5g；FeSO40.01g；蔗糖 30g；琼脂 15-20g；水 1000ml；PH 自然。
灭菌条件：121℃灭菌20min。
2.1.2.4马丁氏培养基[1]：葡萄糖 10g；蛋白胨 5g；KH2PO41g；MgSO4·7H2O 0.5g；1/3000孟加拉红(玫瑰红水溶液) 100ml；琼脂15-20g；蒸馏水 800ml；PH自然。
灭菌条件：121℃灭菌20min。
临用前加入0.03%链霉素稀释液100ml,使每毫升培养基中含链霉素30ug。
2.1.2.5无菌水：装有90ml蒸馏水和数十粒玻璃珠的250ml锥形瓶一只，装有9ml蒸馏水的18×180mm试管数支；121.3℃， 20分钟灭菌，备用。
2.1.3染色液2.1.3.1革兰氏染色液[1]：用于革兰氏染色的四种溶液1 草酸铵结晶紫染液A液：结晶紫 2g；95%乙醇 20ml。
B液：草酸铵 0.8g；蒸馏水 80ml。
混合A、B二液，静置48h后使用。
2 卢戈氏碘液碘片 1g；碘化钾 2g；蒸馏水 300ml。
先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。
3 95%乙醇溶液4 番红复染液番红 2.5g；95%乙醇 100ml。
取上述配好的番红乙醇溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。
2.1.3.2 0.1%美蓝[1]用于放线菌菌丝形态观察2.1.3.3乳酸石炭酸棉蓝液[1]石炭酸 10g；乳酸(相对密度1.21) 10ml；甘油20ml；蒸馏水10ml；棉蓝0.02g。
将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。
2.2方法2.2.1制备土壤稀释液称取土样10g，放入盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，振荡，使土样与水充分混合，将细胞分散。
静置，成为土壤悬液(10-1)。
用1mL的无菌移液管从中吸取1mL 土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吹吸3次，振荡混匀(10-2)。
然后再用另一支1mL移液管，从此管中吸取1mL注入另一盛有9mL无菌水的试管中(10-3)，依此类推制成10-4，10-5，10-6 各种稀释度的土壤溶液。
如下图所示制备土壤稀释液示意图2.2.2制备及涂布平板营养琼脂平板9个，用于分离细菌，其中三个平板加入浓度为10-6的稀释液各0.2mL，三个平板加入浓度为10-5的稀释液各0.2mL，三个加入浓度为10-4的稀释液各0.2mL，做好标记；高氏一号培养基平板9个，用于分离放线菌，用一支1mlL无菌移液管分别从稀释度10-5、10-4和10-3的土壤稀释液中各吸取0.2mL菌液于已备好的平板中，每个浓度做三个平板；查氏培养基平板9个，用于培养霉菌，用一支1mlL无菌移液管分别从稀释度10-4、10-3和10-2的土壤稀释液中各吸取0.2mL菌液于已备好的平板中，每个浓度做三个平板；马丁氏培养基9个，用于分离真菌，用一支1mlL无菌移液管分别从稀释度、10-4、10-3和10-2的土壤稀释液中各吸取0.2mL菌液于已备好的平板中，每个浓度做三个平板。
用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀。
涂布时从低浓度到高浓度分别在培养基表面轻轻地涂布，可转动皿底一定角度，继续涂布，直至均匀。
2.2.3培养培养基2.1.2.1平板倒置于37℃培养箱，2～3天；培养基2.1.2.2平板倒置于28℃培养箱5～7天；培养基2.1.2.3和培养基2.1.2.4平板倒置于28℃培养箱3～5天；2.2.4菌落计数培养结束后，根据不同类群的微生物的菌落特征，分别在不同的培养基平板上统计相关类群的微生物菌落，即培养基2.1.2.1统计细菌的菌落；培养基2.1.2.2统计放线菌的菌落；培养基2.1.2.3和培养基2.1.2.4统计霉菌的菌落。