猪异种器官移植的人源化修饰 Genetic Modification of Porcine Organs for Human in Xenotranspla
开展异种器官移植临床试验的几个关键伦理问题
开展异种器官移植临床试验的几个关键伦理问题王 华,吴卫星,栾 尧 (军事医学科学院输血医学研究所,北京 100850)〔摘 要〕目前,异种器官移植由于动物道德权、医疗资源分配及危害大众健康等问题而受到广泛地关注与争论,本文提出了四个关键伦理问题,即利弊界限、供研究患者的知情同意、第三方组织的知情同意及临床试验的监督和批准,作为开展异种器官移植临床试验的先决条件。
〔关键词〕异种器官移植;伦理〔中图分类号〕R617 〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1001-8565(2002)06-0043-02Critical ethical issues for initiation of clinical trials of xenotransplatationWANG Hua,WU Weixing,LUAN Yao(Institute o f Transf usion Medicine,Academy o f Military Medical Sciences,Beijing,100850,China) Abstract:There are s ome widely discussed issues on xenotransplatation,such as animals’m oral rights,allocation of medical res ources and endangering public health,etc.The article raises four critical ethical issues,e.g.harm-benefit thresholds,in formed consent from research patients,in formed consent from third-party groups and oversight and approv2 al of clinical trials as the prerequisites to initiation of clinical trials of xenotransplatation.K ey Words:Xenotransplantation;Ethics 由于同种器官移植飞速发展,如今几乎所有的人体主要器官的成功移植都已不存在重大障碍,器官移植已成为恢复患者衰竭器官功能的一种新的医疗方式。
猪异种器官移植的人源化修饰
猪异种器官移植的人源化修饰
俞远京
【期刊名称】《遗传》
【年(卷),期】2003(25)5
【摘要】利用猪的器官来解决当前人源器官严重短缺,为解决移植器官短缺的可行的途径.用定向基因转移(gene targeting)手段,直接并准确地对α-1,3半乳糖苷转移酶(α-1,3GT)基因进行同源重组,使α-1,3GT失活,再结合猪体细胞克隆技术,对其进行人源化改造,减弱或消除排异反应.除对2-1.3GT进行基因定向修饰外,阻断由异种器官移植而激活的人类补体的串联反应是猪异种器官人源化修饰的另一途径.然而,猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus,PERV)造成的公共卫生问题,给异种器官移植的前景投下了阴影.因此,即要剔除导致人类排异反应的猪细胞表面的α-1,3GT及其相关的分子, 又要确保猪器官异种移植的安全性, 是尚待研究的重大课题.
【总页数】5页(P596-600)
【作者】俞远京
【作者单位】中南大学湘雅医学院实验动物学部,长沙,410078
【正文语种】中文
【中图分类】Q342+.4;R392.2
【相关文献】
1.外源蛋白在酵母中表达的糖化修饰及人源化改造 [J], 黎刚;潘卫;王应雄
2.基因修饰猪在异种器官移植中的研究进展 [J], 陈鹏飞;聂惠蓉;戴一凡;蔡志明;牟丽莎
3.异种移植相关功能蛋白人源化基因修饰猪模型的建立 [J], 刘琪帅;李小平;王可品;葛维凯;赖良学
4.挽救生命的“天使”——谈基因编辑猪与异种器官移植研究路径 [J], 胡正; 方铭慧
5.利用基因编辑技术进行猪异种器官移植及人类疾病模型研究的进展 [J], 陆新章;张梅;娄颜坤;马育芳;李大力
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
国际首例6-基因编辑猪-猴肝肾联合移植围术期治疗研究
国际首例6-基因编辑猪-猴肝肾联合移植围术期治疗研究韩士超;马帅军;戚若晨;王国辉;张小燕;刘克普;范效铮;魏迪;张玄;杨晓剑;陶开山;秦卫军;窦科峰【期刊名称】《空军军医大学学报》【年(卷),期】2024(45)1【摘要】目的探讨国际首例6基因编辑猪猴肝肾联合移植模型的构建,探究异种肝脏移植对异种肾脏移植的影响。
方法将人源化6基因编辑猪的肝脏、肾脏移植给恒河猴受体,肝脏移植采用腹腔异位移植,肾脏移植采用原位移植,保留对侧肾脏,观察血流灌注恢复后,移植肝、肾的情况及受体存活情况;定期进行移植物超声及功能检查;监测受体猴生化指标及生理指标变化;受体猴生命终点取移植肾、移植肝进行病理检查。
结果手术历时14 h结束,术后受体猴各项生理指标基本正常,移植物开放血流后可见移植肝灌注良好,即刻可见胆汁流出;移植肾灌注良好,即刻可见尿液流出,未见明显超急性排斥反应发生;术后移植肾功能良好,术后5 d移植肾尿量减少,考虑排斥反应发生,术后受体猴最终存活14 d。
结论多基因编辑猪猴异种肝肾联合移植模型构建成功,术后移植肾未见明显超急性排斥反应发生,异种肝移植可减轻异种肾脏移植急性排斥反应发生。
【总页数】6页(P9-14)【作者】韩士超;马帅军;戚若晨;王国辉;张小燕;刘克普;范效铮;魏迪;张玄;杨晓剑;陶开山;秦卫军;窦科峰【作者单位】空军军医大学西京医院泌尿外科;空军军医大学西京医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R-332;R617【相关文献】1.肝肾联合移植患者的围术期护理研究2.多基因编辑猪-猴心脏、肝脏、肾脏移植临床前研究初步报道3.西京医院成功实施多基因编辑猪-恒河猴异种肝心肾器官移植4.猴猪非协调性异种胰肾联合移植的实验研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪-人异种移植相关基因CMAH的克隆、表达及功能生物信息学分析
猪-人异种移植相关基因CMAH的克隆、表达及功能生物信息学分析张霞;秦彩艳;霍海龙;王淑燕;王配;潘伟荣;张永云;陈园园;霍金龙【期刊名称】《四川农业大学学报》【年(卷),期】2018(036)004【摘要】[目的]研究版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)CMA H 基因特性,探索该基因在猪-人异种器官移植免疫排斥中的作用.[方法]采用实时荧光定量PCR技术检测BMI 27个重要组织的CMA H mRNA表达水平,采用Western blot检测BMI在9个组织中的CMAH蛋白表达特征,并对CMA H编码的氨基酸进行生物信息学预测,分析CMAH蛋白质的功能.[结果]扩增得到BMI CMA H编码区序列长1734 bp,编码577个氨基酸,序列已提交GenBank,基因登录号KM098147,对应的氨基酸登录号AIS36193.多组织相对荧光定量表达分析表明CMA H基因在颌下腺、脾及舌下腺中呈相对高表达水平,在其他组织中呈相对中、低表达水平.Western Blot分析表明CMAH蛋白在除脊髓和大脑外的其他组织都有表达.功能生物信息学分析表明CMAH蛋白质包含Rieske和UlaG保守结构域,二级结构以α螺旋为主,N末端亲水,C末端疏水,有6类功能活性位点.[结论]明确了CMA H基因的结构以及在多种组织中差异化表达情况,为深入研究其在异种器官移植方面的功能积累了基础资料.【总页数】7页(P507-513)【作者】张霞;秦彩艳;霍海龙;王淑燕;王配;潘伟荣;张永云;陈园园;霍金龙【作者单位】云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201;云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201;云南农业职业技术学院教务处,昆明 650031;云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201;云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201;云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201;云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心,昆明 650201;云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明 650201;云南农业大学云南省版纳微型猪近交系重点实验室,昆明 650201;云南农业大学动物科学技术学院,昆明650201【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.版纳微型猪近交系RNF4基因克隆、多组织qPCR表达及功能生物信息学分析[J], 张霞;曾日彬;霍金龙;王配;陈园园;王淑燕2.版纳微型猪近交系FANK1基因CDS克隆、qPCR表达及功能生物信息学分析[J], 霍晋华;张霞;王配3.版纳微型猪近交系SLA-DOA基因克隆、mRNA表达及蛋白质功能生物信息学分析 [J], 王配;王淑燕;霍金龙;李罗刚;张永云;李卫真;朱宏涛;姚茂东4.版纳微型猪近交系免疫排斥相关基因B4 GALNT2的克隆、表达及功能生物信息学分析 [J], 宋雪; 王淑燕; 陈园园; 王配; 霍海龙; 张霞; 霍金龙5.猪睾丸表达序列37(TEX37)克隆、mRNA表达及蛋白质功能生物信息学分析 [J], 霍海龙;张霞;范俐;赵筱;王世雄;王荣琼;刘丽仙;霍金龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
用于器官移植的基因修饰猪的研究进展
品， 发 展 动 物 来 源 的 器 官 就 成 为 解 决 器 官 短 缺 问 题 的主 要 方
的治疗 。随着免疫学 的发展 和新 型抑制剂 的出现 ， 同种异体 器 官移植 的排斥 问题逐步得 到解决 ， 可通过器官移植治疗 的
疾 病 种 类 不 断增 多 。迄 今 为止 ， 全球有近百万患者通过器官
移植而获得新生＿ ２ Ｊ 。 我 国是器官移植大国 ， 每年约有 １ ５ ０万人
因终末期器官 衰竭需要移植 ， 但仅 １ 万人能 够得到移植 ， 供
ｒ ｅ ｐ ｅ ａ ｔ ｓ ， Ｃ Ｒ Ｉ Ｓ Ｐ Ｒ） 技术 ， 构建 ａ Ｇａ ｌ Ｋ Ｏ ／ ［ ３ Ｇ ａ ｌ Ｎ Ｔ ２ ． ＫＯ ／ ｈ Ｃ Ｄ ４ ６ ／
向。虽然猴 、 狒狒等灵长类动物在系统发育方面更接近 于人 类， 但是并不适合作为临床异种移植 的器官来源 。 首先 ， 由于 体 型差异 ， 灵长类 动物的器官在体 积 、 生理功 能上 与人类器 官相差甚远 ， 不能满足要求 ； 其次， 由于灵长类动物在进化上 与人 类 比较接 近 ， 存 在种间交叉感 染 的可 能 ， 有严 重的安全 性风 险； 此外 ， 由于繁殖量 少 、 珍稀动物保护 以及伦理学等 问 题， 并不适合作为供体动物 。目前大部分研究者都认为猪更 适合作为器官移植的供体 。猪的器官体积和生理指标与人类 接近、 繁殖迅 速 、 易于基 因改 造和修饰 、 安全性 好 ， 是理想 的
猪到人肝异种移植的研究
猪到人肝异种移植的研究英文回答：Pig-to-human liver xenotransplantation is a field of research that explores the possibility of transplanting pig livers into humans. This area of study is driven by the shortage of human organs available for transplantation, particularly livers. In many countries, the demand forliver transplants exceeds the supply, leading to long waiting lists and high mortality rates among patients in need of a transplant. Xenotransplantation offers apotential solution to this problem by utilizing pig livers as an alternative source.One of the main challenges in pig-to-human liver xenotransplantation is the issue of immunological compatibility. The human immune system recognizes pig cells as foreign and mounts a vigorous immune response, leading to organ rejection. To overcome this barrier, researchers are exploring various strategies to modify the pig organsand make them less immunogenic. For example, genetic engineering techniques can be used to knock out certain genes in the pig genome that are responsible for producing antigens recognized by the human immune system. By doing so, the pig organs can be "humanized" to a certain extent, reducing the likelihood of rejection.Another challenge in pig-to-human liver xenotransplantation is the risk of transmission of porcine endogenous retroviruses (PERVs) from the pig organ to the human recipient. PERVs are integrated into the pig genome and can potentially infect human cells. Although studies have shown that PERVs are not capable of infecting human cells efficiently, there is still a concern about the possibility of PERV transmission and its long-term effects. Researchers are actively working on developing methods to eliminate or inactivate PERVs in pig organs to ensure the safety of xenotransplantation.In addition to immunological compatibility and PERV transmission, there are also practical considerations inpig-to-human liver xenotransplantation. The size mismatchbetween pig and human organs poses a challenge in surgical procedures. Pig livers are smaller than human livers, and transplanting a smaller organ into a larger recipient may result in inadequate function. Researchers are exploring techniques such as liver regeneration and tissue engineering to address this issue and enhance the functionality of pig livers in human recipients.Overall, pig-to-human liver xenotransplantation holds promise as a potential solution to the shortage of human organs for transplantation. However, there are still many scientific and ethical considerations that need to be addressed before this procedure can be widely used in clinical practice. It requires extensive research, collaboration between scientists and clinicians, and careful evaluation of the risks and benefits. With continued advancements in genetic engineering and immunosuppression techniques, pig-to-human liver xenotransplantation may become a viable option in the future.中文回答：猪到人肝异种移植是一项研究领域，探索将猪肝移植到人体的可能性。
国内外异种器官移植的现状及进展
· 综述·国内外异种器官移植的现状及进展张小燕 王国辉 韩士超 戚若晨 刘克普 魏迪 杨晓剑 马帅军 窦科峰 秦卫军【摘要】 器官短缺已成为阻碍器官移植发展的主要难题，异种移植是解决全球器官匮乏最有价值的方法之一。
近年来，基因工程技术的发展和新型免疫抑制药的研发为异种移植提供了新的理论基础。
国外陆续开展基因修饰猪-非人灵长类动物或脑死亡受者的相关异种移植研究，并取得一些实质性的进展，但大部分的研究仍处于临床前阶段，距离投入临床跨越巨大。
因此，本文结合目前国内外最新的临床前实验研究进展，对异种移植的历史、基因修饰技术发展、异种移植排斥反应及免疫抑制方案等问题进行综述，以期为异种移植的进一步研究提供参考，促进异种移植临床应用，造福更多终末期疾病患者。
【关键词】 异种移植；基因修饰猪；免疫抑制药；非人灵长类动物；排斥反应；炎症反应；凝血功能障碍；感染【中图分类号】 R617,Q78 【文献标志码】 A 【文章编号】 1674-7445（2024）02-0017-06Present situation and progress of xenotransplantation at home and abroad Zhang Xiaoyan, Wang Guohui, Han Shichao,Qi Ruochen, Liu Kepu, Wei Di, Yang Xiaojian, Ma Shuaijun, Dou Kefeng, Qin Weijun. Department of Urology , Xijing Hospital of Air Force Medical University , Xi’an 710032, ChinaCorrespondingauthors:DouKefeng,Email:***************.cnQinWeijun,Email:**************.cn【Abstract 】 Organ shortage has become one of the major challenges hindering the development of organ transplantation. Xenotransplantation is one of the most valuable methods to resolve global organ shortage. In recent years,the development of genetic engineering technique and research and development of new immunosuppressant have provided novel theoretical basis for xenotransplantation. International scholars have successively carried out researches on xenotransplantation in genetically modified pigs to non-human primates or brain death recipients, making certain substantial progresses. However, most of the researches are still in the preclinical stage, far from clinical application.Therefore, according to the latest preclinical experimental research progress at home and abroad, the history of xenotransplantation, the development of gene modification technology, xenotransplantation rejection and immunosuppression regimens were reviewed, aiming to provide reference for subsequent research of xenotransplantation,promote clinical application of xenotransplantation and bring benefits to more patients with end-stage diseases.【Key words 】 Xenotransplantation; Genetically modified pig; Immunosuppressant; Non-human primate; Rejection;Inflammation; Coagulation disorder; InfectionDOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2023193基金项目：国家自然科学基金（82101322、82200845）作者单位： 710032 西安，空军军医大学西京医院泌尿外科作者简介：张小燕（ORCID 0000-0002-1199-988X ），硕士，住院医师，研究方向为肾移植与肾纤维化，Email ：156****6095@通信作者：窦科峰（ORCID 0000-0003-1708-8048），主任医师，中国科学院院士，研究方向为异种移植与肝胆疾病，Email:***************.cn ；秦卫军（ORCID 0000-0001-5202-642X ），博士，主任医师，研究方向为肾移植与泌尿系肿瘤，Email:**************.cn第 15 卷 第 2 期器官移植Vol. 15 No.2 2024 年 3 月Organ Transplantation Mar. 2024 我国慢性肾病的发病率高达10.8%[1]。
猪到人肝异种移植的研究方法
猪到人肝异种移植的研究方法As the demand for organ transplants continues to rise, researchers have been exploring alternative sources of organs, such as xenotransplantation, which involves transplanting organs from one species to another. One area of interest in the field of xenotransplantation is the use of pig livers for human liver transplants. This research has the potential to greatly expand the pool of available organs for transplant patients and could help to address the shortage of human organs for transplantation.随着器官移植需求持续增加，研究人员一直在探索器官的替代来源，例如异种移植，即将一种物种的器官移植到另一种物种。
在异种移植领域，一个备受关注的领域是将猪肝用于人类肝脏移植。
这项研究有望极大地扩大可用于移植患者的器官库，并有助于解决人类器官移植短缺的问题。
However, there are significant challenges to overcome before pig-to-human liver transplants can become a reality. One of the major hurdles is the risk of organ rejection due to incompatibilities between pig and human immune systems. Research in this area isongoing, with efforts focused on developing techniques to prevent or mitigate organ rejection in xenotransplantation.然而，在猪到人类肝脏移植成为现实之前，需要克服重大挑战。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
!"#$%
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
/0123456789%:
!"#
! " 8$97:;<7=%&’(7> $ ?@ * ) % % + (
;!<! ABCDEFGHIJKLMEFNOPQ $ RHIST E F P Q D U V D W X % B Y 6 + Z [ S ! . , " \] $ ^_‘abcd " +ZjVkMOl$ pqrC m" / 0 1 / 2 . 3 )$ 3 )$ & 4 5" 3 )$ & 4 5 no$ & efgh[Si ! " , , stuvwxy $ dzjVLM{|} $ ~ % d ! E 3 )6 & 4 5 jV+ZY6 $ FSToDLsD C E F L M { D W X % $ CM[! 8 1 9 2 . 7 $ }D ¡¢£ ¤ $ ¥ E F S T D K ¦ § ¨ © ª «%Z ¬$ ®¯°±L . : 8 . 8 ; <1 / 1 8 = 2 1 ; < > ? @ A" , DCtu²³D " 3 )$ & 4 5 ´zµ¶D·¸ $¹®bºCEFSTD»¼ $½¾23DO9¿ ¤% =>? ! Y6+Z[S &EFS C" 3 )$ & 4 5& @ABCD ! D!!! B & * !C 6 *& @ & # !6 !!!! EFGHI ! ! " EJKD ! % ! " &’# + + ! ! % % & % "’% " # $’% "
¿ U À Á @ CEF²³ P tu Z ëÀÞ MN¶¼½¾ $ EFz Âà D hi¼q $ £ èC ’ 7 ?’( Ä Õ 8 ý Å è’ST ] $ °±èE F  à %$ ï ¶¼½¾ÆÇ n $ È hÉ $ mEF Ê Ë Q Ì % V H @ ;îèC P t u 8 Í Î Ï Ð · ¸ A W DX ! = 0 < 9 ; I 0 19 I I0 : L < 2 8 . " " $ mA D+Zë Ñ ! ; K 8 I 9 ; I 0 1 3 1 ; I 0 / 2 8 . W DX u ¢Á Ò $ 7 , °± Ó $ xÔÕ òótu Ö³ ST( % =6 =! /23789RS6[\ CDþ ² ÷ $ 9èîCtu²³D 4 ¶ ·«BC $ ®mCDEFSTÇ $ ×Ø v Ù TD @% À Ád 4 ¶· D ÚÛ 2 3 $ Ü R 4 ¶ · D 9 è$ Ý®" 3 )$ & D A Br % efgh[Si ! 3 )$ & 4 5" " ès Þ ß 3 J C s t u å $ AB+ZY6[S ! " xy $ ^_‘abcd " . / 0 1 / 2 . 3 )$ & 4 5 +ZjVk , , , m" M Ol $ ¸] ðB’(stu à STvw 3 )$ &4 5 no $ xy $ ïvwC¦UÃvÙ ¢u L ¥ N " 3 )$ & 4 5 D C$ á ÚCEFDLM{|} % TD @$ C E 2 J 0 .V 0 2( Bî C t u L M { | } D s t u å ! âã ä å t u " ¿D·R Y N * $ Z D ) 3 ) %$ > W ? [ * 3 !$ > zçDRè > W [ [ * 3 &$ > W [ [ * 3 $$ W [ [ * 3 $R æ t u $ t u % C t u Y 6 + Z [ S B D é s R 7 > Z $ " *Ñ ìÛÞDí6é > Z $ " +% z+ZY6 [ S ê ) « ë # 7 " $ s! kMOlè " N . 8 9 N 8 ; /= 9 / 8 1 3 )$ & 4 5 +Z8Dî¸ Ol ] m ï r N í 6 é s D C s t u ( Ú î ¸ # Ìæ $ kMO å$ MNð0ñò \ 8 * * ! Y ‘ÈjV > W @ ó& $ lô õ Ð ã D " 4 5 ? ( YÑ " 4 5 ? # D !öOUjV?÷à ó &$ > W @! Z @ 3 > W @" Z @ 3 > W @ È ó & +6 * N M" 3 )$ & 4 5 +Z øñ$ > W @ ó & ö O ê ù ú « ë $Õ > W @ B(R # # \ 8 * * ! Y " 3 W D 5 W 4 W W 5 5 W 5 D 5 W 4 W W 5 5 W 5 5 3 && 4 5 ? ( Y " " 3 D 4 D4 4 5 W 4 5 4 D W W D 5 DD W W D 4 DD 5 3 && 4 5 ? # D !# " 3 " D4 W W W D 5 W 4 5 4 W 5 4 DD W D 5 W DD 4 5 W 3 &% Y 8 ; / L 1 . ûüýþÿ ] ê ë !" « ë $ ÈjV Y 8 ; / L 1 .# $ ý þ$
CEFSTDLM{ !" n !!!!!!!!!!!!!!!! -./ #
)+ $ 3 L 4 Rµß * 5 z E F 9 6 3 L µ ß$ "37
" # +
) &+ $ % # ï ÷ L D 5 t u » ° D * / 2 8 . V H @"
! " # " $ % &’ ( ) % * % & + $ % ( #( *, ( & % # ". + # 0 * ( -1 2 3 + # % #4 " # ( $ + # 0 6 + # $ + $ % ( # / 5
EF E ; 0 . 3 G 2 . ,
! / + 0 02 * 3 + 4 0 56 7 5 5 * 6 * 8 9 0 5 ( 7 : 8 ;< + = * 9 > + 8 6 ; 0 > ; 0* ) % % + ($ 6 ; + 0" *$ .1 . ?$ .
!"#$ ! %&#$ ! ! % % !’% (’! $" ! % % &’% $’) & " ’()* ! #$%&’()*+, ! ! % % !’) ! !’% * $ 0$ +,-. ! -./ ! 1234 $ 2356 # %&’(7 % ) # " #’ "
ST % èL<7éêë $ jVEFSTì®íîk + ZST $ ïEFS T ® ð B å ñ ò ó 7 Ê Ë ô õ $ ~öLDksSTD÷ $ øRO®D k sDEFGM $ NO ç ù $ úK¼ûü_ÒEFSTDL " # $ % &$ ýþÁ $ îSTEFGMNOP %ÿ!$ Q$ ’ ÿLè ( ¾ E F D Á ) 8 * + $ ,-BîSTL D’(EF $ ýRHIï . ¤D /01 % CD¢ ( 7 2
# 7 8 0 $ + & $ H . 8 / 1 0 . < I 0 . / 0 / 2 8 .! H >" J 1 8 K7 2 2 . / 8L ; K 0 .L 0 <M .9 8 . < 2 : 1 :0 <K 0 . < / 88 = 1 9 8 K / L -, 1 0 / I 0 9 N8 J 7 , $ : 8 . 8 18 1 0 .0 = 0 2 I 0 M I 2 ./ 1 0 . < I 0 . / 0 / 2 8 .< ; 1 1 6 P .8 1 : 1 / 8Q 0 N .1 9 / 2 8 .M / Q .L ; K 0 .0 . :7 1 8 0 9 L <8 J 2 0 , 7 , O R , 7 7 ( 6 1 9 / 2 8 ., . 3 )$ & 4 5J 1 8 K7 8 1 9 2 . -9 I I <: 2 1 9 / I . :0 9 9 ; 1 0 / I . / 0 1 / 2 . 0 = -M .7 1 8 8 < :/ 8I 2 K 2 . 0 / -’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tuEFST $ ÃÄÅÆnÇÈD l  ) t !! ÀÁl ) uEFÉÄ< 7 Ê Ë D O ® \ ] Ì % Í Î Ï Ð Ñ Ò " $ ÐDlr $ ÓS T · R Ô Õ% Ö s S T ! 0 ; / 8 1 0 J / , ×ÓGÖSTÒÐØÙDlÂSTÚÒÐ & kk+ Z S T " $ ! ×!"qÛܼµkÝÞµß D à s ! ká 1 0 J / < . O , ⢸ ã ä å ’ ( " Ì æ D S T& k+ZST! 0 I 3 " " $ × k ’ ( ! !"qÛçkàsÌ < I 8 1 0 J / 9 2 < , 7 " æDST & ST ! ×çk’( àsÌæD U . 8 1 0 J / ,