超氧化物歧化酶(SOD)提取液
SOD超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶（SOD ）试剂盒组成：
1. 试剂一：储备液10ml×1瓶。
试剂一应用液的配制：用时每瓶加蒸馏水稀 释至100ml ，4 ℃保存一年。
2. 试剂二：液体10ml×1瓶，4 ℃-10℃保存一年。
3. 试剂三：液体10ml×1瓶，4 ℃-10℃保存一年。
4. 试剂四：液体350微升×2支，4 ℃保存不可冷冻；4号稀释液10ml×1瓶， 4 ℃保存6个月。
用时两者按1:14稀释，需要多少配多少。
配好 后的试剂4℃保存，不可冷冻。
注:所用吸嘴为一次性吸嘴。
5.试剂五：粉剂×1瓶，用时加70℃-80℃热蒸馏水75ml 溶解后备用，若加 热过程中水分蒸发减少，此时必须用蒸馏水补充至75ml ，配好 后的试剂避光4℃冷藏保存1年。
6.试剂六：粉剂×1瓶，用时加蒸馏水75ml ，配好后的试剂避光4℃冷藏保 存6个月。
显色剂的配制:按试剂五::：试剂六:冰醋酸=3:3:2 体积比配显色 剂，4℃避光冷藏3个月.
7.液体30ml×1瓶，4 ℃冷藏保存6个月。
）（待测样本蛋白浓度）取样量（反应液总体积对照管吸光度吸光度对照管吸光度－测定管活力
ml mgprot ml mgprot U SOD /%50)/(÷⨯÷=。
超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书
Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0175规格：100T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体5 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体100 μL×1支2-8℃保存试剂三液体4 mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体0.25mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：使用前先离心再吹打混匀。
根据样本量将试剂二用蒸馏水稀释10倍后使用，当天用完。
2、试剂四：根据样本量将试剂四用蒸馏水稀释5倍后使用，当天用完。
产品说明：SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成H2O2和O2。
SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm 处有吸收；SOD可清除O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、细胞超声破碎仪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1.细胞、细菌样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次）。
SOD酶的提取及测定
三．材料器具
2. 仪器：高速组织捣碎机；高速冷冻离心机；层析柱 （1×40cm）；自动部分收集器；恒流泵；进样器 和微量进样器；可见/紫外分光光度计。 3. 试 剂 ： （ 1 ） pH7.8, 5mmol/L磷 酸缓 冲 液 （ 内 含 1mmol/L EDTA）；（2）考马斯亮蓝溶液：称取 100mg考马斯亮蓝G―250于50ml 95%乙醇中，摇 动，待溶解后，加入100ml 85%磷酸，反复震动后 加 蒸 馏 水 定 容 至 1000ml, 过 滤 待 用 ； （ 3 ） pH8.2, 50mmol/L Tris-HCl缓冲液；（4）50mmol/L 邻苯 三酚溶液；（5）10mmol/L HCl溶液
邻苯三酚自氧化法原理：
邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出 O2 - （超氧阴离子自由基），生成带色的中间产物 （红桔酚），反应开始后反应液先变成黄棕色，几分 钟后转绿，几小时后又转变成黄色，这是因为生成的 中间物不断氧化的结果。本实验中测定的是邻苯三酚 自氧化过程中的初始阶段，中间物的积累在滞留30～ 45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在 4min的范围内，中间物在325nm波长出有强烈光吸收。 当有SOD存在时，由于它能催化O2 -与H+结合生成O2 和H2O2，从而阻止了中间有色产物的积累，导致吸光 值下降因此，通过测定它们在特定波长下得光吸收变 化速率计算出SOD的酶活性 。
四.实验操作
(一) SOD的提取
1. 取当年大豆适量,冷水浸泡24h,沥干，加冰 冻的pH7.8, 5mmol/L磷酸缓冲液适量，用 高速组织捣碎机捣碎。 2. 用高速冷冻离心机以8000rpm离心除去固型 物（需4—5次，每次15min）,上清液即SOD 酶液。
（二）SOD的凝胶层析分离纯化
玉米超氧化物歧化酶(SOD)的提取及活性测定
- · O2 -· O 2 + + 2H + H 2O 2 + O 2 SOD 玉米超氧化物歧化酶（SOD ）的提取及活性测定一、目的1．通过对玉米超氧化物歧化酶（SOD ）的提取及活性测定，掌握硫酸铵盐析沉淀蛋白质和超滤浓缩的方法和原理。
2．掌握测定超氧化物歧化酶（SOD ）的活力和比活力的方法。
3．掌握分级盐析沉淀的方法和原理，以及透析的方法和原理。
二、原理超氧化物歧化酶（superoxide dismutase ，简称SOD ），它广泛存在于各类生物体内，按其所含金属离子的不同，可分为3种：Cu,Zn-SOD ，Mn-SOD ，Fe-SOD 。
SOD 催化如下反应：在生物体内，它是一种重要的自由基清除剂，能治疗人类多种病症，如炎症、脑外伤、放射病、自身免疫性疾病和抗衰老等，对生物体有保护作用。
在玉米中，SOD 主要存在于胚芽中，当将萌发的玉米籽粒打浆破碎后，以中性盐沉降其蛋白质部分，SOD 就存在于沉淀中，但其中有许多杂蛋白，因此在盐析时先用40%（NH 4）2SO 4去除杂蛋白部分，再用90%（NH 4）2SO 4饱和上清液，经过一定时间后，再将盐析液离心，取其沉淀进行透析，一定时间后，则其中的SOD 成分即被浓缩分离。
超滤也是一种蛋白质浓缩方法，其工作原理是运用液压迫使溶质透过膜，并按溶质分子量、形状、大小的差异，把大溶质分子阻留在膜的一侧，而小分子溶质则随溶剂透过膜到另一侧，使大小溶质分子得到分离。
利用此原理只要选择适当的超滤膜即可将玉米浆中SOD 与其它小分子杂蛋白、可溶性糖等分离，并去除水份，得到SOD 浓缩液。
SOD 活性的测定：采用NBT 光还原法。
其原理为核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O 2-，当加入NBT 后，在光照条件下，与超氧自由基反应生成单甲月替（黄色），既而还原成二甲月替（呈兰色）。
该产物在560nm 下有最大吸收峰。
当加入SOD 时，可以使超氧自由基与H +结合生成H 2O 2+O 2，从而抑制了NBT 光还原的进行，使兰色二甲月替 生成速度减慢。
动物血中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的提取
动物血中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)的提取[原理]l969年，McCord和Fridovich第一次从牛血中提纯到超氧化物岐化酶。
自然界中SOD分布极广，其含量随生物体的不同而不同，即使同一种生物的不同组织或同一组织的不同部位，其SOD的种类和含量也有很大差别。
迄今为止人们已从细菌，真菌、原生动物。
藻类、昆虫、鱼类、植物和动物等各种生物体内分离得到SOD。
为拓宽提取SOD的原料，筛选或基因过程开发产SOD量较高的菌株。
目前，研究开发最多的资源还是从动物血液、动物组织中制备提纯SOD。
从动物血液材料中制备Cu Zn-SOD纯化工艺分为三个主要步骤：（1）原材料的预处理；（2）粗酶液的制备；（3）离子交换柱层析精制。
国内多采用Mccord和 Fridovich法，其主要工艺过程为：第一步，乙醇-氯仿除去血红蛋白；第二步，有机溶剂和硫酸铵分级沉淀；第三步，离子交换柱层析精制。
[试剂和器材]1、试剂（1）3.8%（质量分数）柠檬酸三钠（2）0.9%（质量分数）氯化钠（3）95%（体积分数）乙醇（4）氯仿（5）丙酮（6）pH7.6、 2.5mmol/L K2HPO4-KH2PO4缓冲液（7）DEAE-Sephadex A-502、器材（1）猪血（2）恒温水浴（3）离心机（4）布氏漏斗、抽滤瓶（5）烧杯、量筒、搅棒（6）透析袋[方法和步骤]1、从猪血中提取SOD（1）分离血球取新鲜猪血，加入到3.8%柠檬酸三钠抗凝液中，新鲜猪血与抗凝液的比例为3：1，轻轻搅拌均匀，4 000r/min离心20min，收集红血球。
（2）除血红蛋白红血球用3倍体积生理盐水洗涤，4 000r/min离心20min，重复三次，然后向洗净的红血球加入1～1.1倍体积去离子水，搅拌溶血30min，再向溶血液中分别缓慢加入0.25倍体积的预冷95%乙醇和0.15倍体积的预冷氯仿，剧烈搅拌15min左右，静置1h，然后 4 000r/min离心20min除去变性血红蛋白沉淀，取清液，过滤，收集滤液（记录体积，测酶活性和蛋白浓度）。
超氧化物歧化酶生产方法
超氧化物歧化酶生产方法(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--紫草种籽超氧化物歧化酶提取方法：属于生物工程领域，涉及一种紫草种籽ＳＯＤ及其用提取紫草种籽油后的残渣为原料，用生物工程装置提取紫草种籽ＳＯＤ的方法，迄今为止紫草种籽是植物中ＳＯＤ含量最高、质量最好、最有提取价值的唯一原料，含量为２０万Ｕ／公斤种籽，是用任何动物血提取的ＳＯＤ所不能比拟的，创下了国内外唯一的用植物提取ＳＯＤ的记录，不仅填补了国内外空白，在科学研究上也是一个重大突破，它将在人类的延年益寿、防衰抗皱、抗紫外线辐射、清除人体内氧自由基保证身体健康上做出巨大的贡献。
超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法：该方法是在提取的固体粉末状超氧化物歧化酶中加入２—８％固体状保护剂，该方法是将它们按上述比例混匀后再进行冻干处理。
该技术保证了添加超氧化物歧化酶的产品，如化妆品、口服液、啤酒、牛奶等等中的超氧化物歧化酶酶活力的稳定性，并扩充了产品开发和应用范围，相对保证了含超氧化物歧化酶的产品在高温工艺中及常温储存下不易变质。
从鸡雏胴体中提取超氧化物歧化酶的方法：取雏鸡胴体将其绞碎、浸泡、过滤、离心，将上清液在一定时间和温度控制下，加入丙酮提取超氧化物歧化酶，本发明用鸡场孵化鸡雏淘汰的蛋用公雏鸡胴体为原料，变废为宝产生高附加值，雏鸡与人无共患病，避免造成如牛、羊、猪血来源的污染，其工艺简单、产率高、活性好、利润高，并可提取一系列副产物，如表皮生长因子、精细蛋白、氨基酸等，为大批量生产超氧化物歧化酶开辟了广阔的前景。
重组人源锰超氧化物歧化酶的制备工艺：属于生物工程技术领域，其特点是先进行工程菌扩增，收集菌体，然后将菌体裂解，加热处理后离心取可溶部分，经离子交换柱层析纯化。
本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ半衰期长、质量稳定、单位成本低等特点，产品不仅可用于化妆品、保健品等民用领域，更适用于医疗领域。
植物组织中SOD活性MDA含量的测定方法
植物组织中SOD活性MDA含量的测定方法超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量是评价植物细胞的氧化应激程度和损伤程度的重要指标。
下面将介绍常用的测定植物组织中SOD活性和MDA含量的方法。
一、SOD活性测定方法：1. 混合植物组织提取液：将适量的植物组织（如叶片、根部等）加入冰冻磨碎器中，加入适量的冰冷提取液（Tris-HCl缓冲液，pH 7.8或其他适宜缓冲液），按比例加入少量酒石酸、酚酸、DTT等，然后将混合物离心10分钟。
2.处理提取物：将上述所得的植物组织提取液加入活性溶液，如NBT、PIP等，混匀后放置在37°C水浴中反应一定时间。
3. 停止反应：将反应液加入组织破壁液（甘油、NaCl、Tween-20等混合物），混匀后放置一段时间，离心10-15分钟。
4.测定光密度：取上清液用比色计测定光密度（OD）值，以反映SOD的活性，活性越高，OD值越低。
二、MDA含量测定方法：1.组织提取：将适量的植物组织加入冰冷提取液（如磷酸盐缓冲液，pH7.4），用冷磨具磨碎并移至离心管中，离心5分钟收集上清液。
2.加入TBA液：取上清液与TBA液（三硝基苞球菌素溶液）按比例混合，混匀后在水浴中加热（100°C，10分钟），然后迅速冷却至室温。
3.离心沉淀：将样品离心10分钟，取上清液。
4.测定光密度：分别取上清液测定OD值，OD值越高，MDA含量越高。
三、优化与改进：1.提取液的选择：根据不同植物组织的特点选择合适的提取液，以提高SOD活性和MDA含量的测定效果。
2.比色反应的时间和温度的调整：根据植物组织中SOD活性的变化调整反应时间和温度，以保证测定结果的准确性。
3.重复测量：为了提高实验结果的可靠性，可以重复测量同一样本，并取平均值作为最终结果。
4.与对照的比较：将测定样本与对照组进行比较，以评估SOD活性和MDA含量的变化，进一步分析植物组织的氧化应激程度和损伤程度。
玉米超氧化物歧化酶(SOD)提取及纯化技术的研究
该研究通过对NaCl胁迫下黄化玉米根叶中游离氨基酸含量的分析,发现盐胁迫可引起黄化玉米幼苗根和叶中GABA和脯氨酸含量升高,推测盐胁迫条件下黄化玉米幼苗中积累GABA的过程中有钙及钙调素的参与.GABA及其类似物对黄化玉米幼苗生成影响的实验表明:GABA可对无盐胁迫及盐胁迫条件下黄化玉米幼苗胚芽鞘的生长起促进作用,而GABA的类似物则对其稍有抑制作用.用动物GABA受体的激活剂或抑制剂处理,发现GABA受体的激活剂处理可促进无盐胁迫下GABA促生长的作用,而GABA受体的抑制剂处理则可抑制GABA促进黄化玉米胚芽鞘生长的作用,从而为植物体中可能存在GABA受体提供了一些生理证据.盐胁迫可引起黄化玉米幼苗中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(POD)和过氧化物酶(CAT)活性的提高.以不同浓度外源GABA处理发现GABA可促进盐胁迫条件及无盐胁迫条件下SOD、POD和CAT活性的提高,从而推测盐胁迫条件下积累的GABA可通过提高保护酶系统活性而缓解盐胁迫的伤害作用.
本文链接:/Thesis_Y1199041.aspx
授权使用:吉林农业大学发展学院(jlnydxfzxy),授权号:26962f00-fae3-44a0-98b3-9e1d00ec3a99
下载时间:2010年10月28日
2.会议论文赵华.陶静玉米超氧化物歧化酶提取对酒精发酵的影响
本文用磷酸缓冲液浸泡玉米,考察利用玉米和玉米胚芽提取超氧化物歧化酶(SOD)对酒精发酵的影响.实验结果显示,100g玉米提取SOD总酶活为38078.0U,比活力168.3U/mg蛋白,活力回收率为55.7%;100g玉米的胚芽提取SOD总酶活为22549.0U,比活力达到334.6U/mg蛋白,活力回收率74.9%.用玉米和玉米胚芽提取SOD后的残渣分别进行酒精发酵,其淀粉出酒率分别为53.51%和53.50%,但原料出酒率分别为33.82%和35.19%.
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超氧化物歧化酶(SOD)提取液
简介：
超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase, SOD)是含金属辅基的酶，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢(H 2O 2)和氧气(O 2)，是生物体内一种重要的抗氧化酶。
由于超氧自由基是不稳定的的自由基，寿命极短，SOD 活性一般用间接方法测定，并利用各种呈色反应来测定SOD 活力，其中显色剂有NBT(四氮唑蓝)、WST-1、WST-8等。
Leagene 超氧化物歧化酶(SOD)提取液主要用于裂解组织样本、细胞样本，提取样品中的过氧化物酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 离心管或试管
3、 匀浆器或研钵
4、 低温离心机
操作步骤(仅供参考)：
1、植物组织样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：超氧化物歧化酶(SOD)提取液=的比例，加入预冷的超氧化物歧化酶(SOD)提取液，冰浴情况下充分捣碎或研磨，用超氧化物歧化酶(SOD)提取液冲洗研钵或匀浆器，合并冲洗液至该离心管，补加超氧化物歧化酶(SOD)提取液至10ml ，离心10min ，取上清液(SOD 粗提液)用于酶活性的测定。
2、动物组织样品：动物用含有20U/ml Heparin 的生理盐水(0.9% NaCl containing 20U/ml Heparin)灌流清除血液后获取组织样品。
按照每100mg 组织加入500μl SOD 检测缓冲液的比例，用玻璃匀浆器在4℃或冰浴匀浆，离心10min ，取上清液(SOD 粗提液)用于酶活性的测定。
3、血浆或含红细胞的样品：从待测样品中分理出的血清或血浆不应有溶血，如果含有应去除红细胞后检测，如超过检测范围，用超氧化物歧化酶(SOD)提取液稀释后检测。
血清去除红细胞的简易方法如下：用抗凝管收集血液，颠倒混匀，取至少500μl 全血，4℃ 3000g 编号 名称 CS0395 Storage 超氧化物歧化酶(SOD)提取液 500ml RT 使用说明书 1份
离心5min，转移上清至另一新的1ml离心管中，适量生理盐水稀释后待测。
亦可采用红细胞裂解液去除红细胞，如Leagene ACK红细胞裂解液等。
4、细胞样品：对于贴壁细胞，由于后续用于酶活性的测定，避免使用胰酶消化细胞。
可以使用细胞刮或EDTA处理细胞并收集细胞，细胞用无菌的PBS或生理盐水洗涤1次，按照每106细胞加入超氧化物歧化酶(SOD)提取液的比例，用玻璃匀浆器在4℃或冰浴匀浆，离心10min，取上清液(SOD粗提液)用于酶活性的测定。
5、上述样品准备完毕后可以BCA蛋白定量检测试剂盒测定蛋白浓度，通常10-20μg蛋白的细胞或组织匀浆液样品其中的SOD平均活力约1个活力单位左右(不同细胞和组织的差异会比较大，该活力范围仅作为初步的参考)。
每种样品准备20-100μg蛋白量通常已经足够用于后续检测。
根据蛋白浓度和预计的蛋白使用量，用超氧化物歧化酶(SOD)提取液适当稀释样品。
例如小鼠肝脏组织10%匀浆液(组织和匀浆液的重量比为10%)上清，通常需要稀释10-100倍，准备好的样品如果当天测定，可以冰浴保存；如果当天不能完成测定，可以-20℃冻存，但建议尽量当天完成测定。
计算：
组织或植物粗酶液获得率(%)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
2、所测样本的值高于标准曲线的上限，用超氧化物歧化酶(SOD)提取液稀释样品后重新测
定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
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