钩藤总生物碱有效部位质量控制
钩藤不同部位生物碱类成分的含量测定及其质量评价
第49卷第8期2021年4月广州化工Guangzhou Chemical IndustryVol.49No.8Apr.2021钩藤不同部位生物碱类成分的含量测定及其质量评价刘小芬I,蔡洪鲍打王琼I,胡嘉璇打聂海澜I,蒋范任2(1益阳医学高等专科学校，湖南益阳413000；2益阳市食品药品检验所，湖南益阳413000)摘要：采用反相高效液相色谱法，对钩藤不同部位异钩藤碱、钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱4种生物碱类成分进行含量测定。
采用Gemini NX C18(250mmX4.6mm,5|im)色谱柱，以1%醋酸钱(A)-乙睛(B)为流动相进行梯度洗脱，流速l.OmL-min-1；检测波长为245nm；柱温25t；进样量10jl L o本方法简便可靠，专属性强，重现性好，适用于钩藤中生物碱的含量测定；钩藤不同部位生物碱类成分含量差异显著。
关键词：钩藤；异钩藤碱；钩藤碱；去氢钩藤碱；异去氢钩藤碱；反相高效液相色谱法；不同部位中图分类号：0657.72；R284.1文献标志码：B文章编号：1001-9677(2021)08-0153-03 Determination and Quality Evaluation of Alkaloids in Different Parts of Uncaria*LIU Xiao-fen,CAI Hong-kun1,WANG Qiong1,HU Jia-xuan,NIE Hai-lan,JIANG Fan-ren'(1Yiyang Medical College,Hunan Yiyang413000；2Yiyang Institute for Food and Drug Control,Hunan Yiyang413000,China)Abstract:The contents of isorhynchophylline；rhynchophylline,corynoxeine and isocorynoxeine in different parts of Uncaria were determined by RP-HPLG.The method was performed on a Gemini NX C18chromatographic column(250mmx 4.6mm,5|JLm),with1%ammonium acetate(A)-acetonitrile(B)as the mobile phase with gradient elution,the flow rate was1.0mL•min-1,the detect wavelength was245nm,the column temperature was25T,and the injection volume was10p,L.The method was simple,reliable,specific and reproducible.It was suitable for the determination of alkaloids in Uncaria.The contents of alkaloids in different parts of Uncariawere significantly different.Key words:uncaria;isorhynchophylline；rhynchophylline；corynoxeine；isocorynoxeine；RP-HPLC；different parts钩藤是《中国药典》収载品种，为茜草科植物钩藤干燥带钩茎枝，秋冬两季采收。
钩藤总生物碱提取工艺研究
钩藤总生物碱提取工艺研究窦月1，周洪雷1，蔡梅超1，查慧敏2（1.山东中医药大学，山东济南250355；2.山东省警官培训学院，山东济南250014）摘要：目的：优选钩藤总生物碱的提取工艺。
方法：以钩藤总碱含量和提取液干膏率为综合评价指标，对乙醇用量、浓度、提取时间及次数四因素进行正交考察。
结果：钩藤总碱的最佳提取工艺为10倍量75%乙醇提取3次，提取时间2h 。
结论：提取工艺可稳定可行。
关键词：钩藤；总生物碱；提取中图分类号：R284．2文献标识码：A 文章编号：1000－1719（2011）05－0944－02Study On Extraction Processes Of Total Alkaloids From Ramulus Uncariae Cum UncisDOU Yue 1，ZHOU Hong-lei 1，CAI Mei －chao 1，ZHA Hui-min 2（1.Shandong University of TCM ，Jinan 250355，Shandong ，China ；2.Shandong Training Police College ，Jinan 250014，Shandong ，China ）Abstract ：Objective ：Investigate the best extract artwork of expressed total alkaloids from Ramulus Uncariae Cum Uncis．Meth-ods ：The orthogonal design was adopted with extractive yield and the content of total alkaloids as indices．Four factors were studiedin this experiment ，including the alcohol consumption ，alcohol concentration ，time of extraction ，and times of extraction．Results ：The best extract process is extract 3times with 10times 75%alcohol ，each time for 2h．Conclusion ：This extract process is stable and feasible．Key words ：Ramulus Uncariae Cum Uncis ；total alkaloids ；extraction 收稿日期：2010－09－25基金项目：国家重点基础研究发展计划（973计划）资助项目（2007CB512601）；山东省科技发展计划项目（2008GG2NS02011）。
钩藤茎枝不同药用部位总生物碱的含量分析
钩藤茎枝不同药用部位总生物碱的含量分析
季晓娟;刘杰;赵泳波
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2018(11)7
【摘要】目的比较钩藤茎枝药典规定药用部位和超出部位总生物碱的含量差异。
方法以钩藤碱为对照品,采用紫外分光光度法在检测波长243 nm处测定10批钩藤中不同用药部位总生物碱的含量。
结果钩藤碱的浓度在2~12μg/ml(r=0.9996)范围内与吸光度呈良好的线性关系,加样回收率为103.30%,RSD为2.60%。
结论该方法简单,准确性、重复性良好,为钩藤药材的净选提供基础性研究。
【总页数】2页(P50-51)
【作者】季晓娟;刘杰;赵泳波
【作者单位】新疆医科大学第一附属医院药学部;新疆医科大学附属中医医院药学部
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.不同地区不同药用部位雷公藤和昆明山海棠的总生物碱含量测定
2.不同采收期和不同药用部位黔产千里光中总生物碱含量动态比较
3.宁夏道地药材苦豆子的不同药用部位中生物碱成分和含量的测定分析
4.钩吻不同部位11种生物碱含量的检测分析
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论钩藤的带钩率与质量控制
论钩藤的带钩率与质量控制黄惠莲【摘要】目的论钩藤的带钩率与质量的关系,建立钩藤的显微鉴定和异钩藤碱的高效液相含量测定.方法采用中药材粉末显微鉴定法,寻找钩藤药材在显微镜下的最常见的特征性细胞与带钩率的关系;用高效液相法测定不同带钩率的钩藤药材提取物的异钩藤碱含量.结果显微鉴定:特征性细胞与带钩率不同有关联;含量测定方法:操作简单,准确,异钩藤碱在1.0943～70.0350 μg之间呈良好的线性关系,异钩藤碱的回收率为 97.83%.结论本实验用定性、定量方法来检验不同带钩率的钩藤药材与提取物的质量,对药材的进一步开发利用提供了科学依据.并对传统用药习惯进行论证.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2012(006)003【总页数】3页(P1-3)【关键词】钩藤;异钩藤碱;显微鉴定;高效液相色谱法【作者】黄惠莲【作者单位】510450,广州王老吉药业股份有限公司【正文语种】中文钩藤为多源中药材，药典收载的品种有:茜草科植物钩藤 Uncariarhynch0phylla(Miq.)Jacks.、大叶钩藤 Uncariamacrophylla Wall.、毛钩藤Uncaria hirsuta Havil.、华钩藤 Uncaria sinensis(Oliv.)Havil.或无柄果钩藤Uncaria sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝。
秋、冬二季采收，去叶，切段，晒干［1，2］。
钩藤药材是我公司产品小儿七星茶颗粒的主要原料，它具有清热平肝，息风定惊的作用;主要用于头晕目眩、风热头痛、小儿烦热惊厥等症。
是中医的儿科要药。
药用部分是钩藤植物花序柄变成的钩状物以及相连的一小部分枝条。
茎枝呈圆柱形或类方柱形，长2～3 cm，直径0.2～0.5 cm。
表面红棕色至紫红色者具细纵纹，光滑无毛，黄绿色至灰褐色者有时可见白色点状皮孔，被黄褐色柔毛。
多数枝节上对生两个向下弯曲的钩(不育花序梗)，或仅一侧有钩，另一侧为凸起的疤痕;钩略扁或稍圆，先端细尖，基部较阔;钩基部的枝上可见叶柄脱落后的窝点状痕迹和环状的托叶痕。
钩藤碱的降压及舒张血管作用 (2)
592West China Medical Journal , Vol.29, No.3 Mar. 2014 华西医学 2014, 29（3）钩藤生物碱类化学成分研究进展雷冰坚1，马健雄2【摘要】 钩藤因其具有良好的降压、解痉等作用，收录于《广西壮药质量标准》。
随着近年来对钩藤在化学成分和药理活性方面的深入研究，发现其所含的生物碱类成分为主要有效成分，不仅对心血管系统疾病有特效，对血液系统及神经系统疾病均有较好治疗效果，具有较高的开发价值。
【关键词】 钩藤；化学成分；生物碱；综述【文献标志码】 A DOI: 10.7507/1002-0179.20140177综 述【基金项目】 广西壮族自治区科学研究与技术开发计划（09321005）【作者单位】 1 南宁市邕宁区人民医院药剂科（南宁，530200）；2广西金海堂药业有限责任公司新药研发中心【作者简介】 雷冰坚（1967－），女，广西南宁人，主管药师，大专，E-mail ：1409030201@【通讯作者】 马健雄，E-mail ：majianxiong66@ 【网络出版时间】 2014-03-14 15:55【网络出版地址】 /kcms/doi/10.7507/1002-0179.20140177.html钩藤，系茜草科植物钩藤或华钩藤，及其同属多种植物的带钩茎枝，为广西民间医生治病常用药，具有清热平肝、息风定惊等功效[1]。
我院临床治疗常用于惊痢抽搐、高血压等病症。
钩藤的主要活性成分为生物碱。
本文就钩藤生物碱及其药理作用机制作一综述，为该药的进一步开发利用及质量标准的修订提高提供参考。
1 钩藤中主要生物碱类物质钩藤生物碱主要为吲哚类和氧化吲哚类生物碱，以钩藤碱和异钩藤碱含量最高，二者占钩藤总碱的40%以上。
钩藤的生物碱含量受品种、环境及采收季节等因素影响而存在很大差别，即使是同一株植物，不同部位的生物碱含量也存在差异，以带钩茎枝含量最高。
时至今日，钩藤中已分离鉴定了近百个生物碱成分，除上述钩藤碱和异钩藤碱外，钩藤中还含有卡达宾碱、柯诺辛、去氢钩藤碱、安枯斯特定碱、柯楠因碱、二氢柯楠因碱、异去氢钩藤碱、安枯斯特林碱、异长春花甙内酰胺、柯诺辛B 、阿枯米精、长春花甙内酰胺、台钩藤碱A 和B 等 [2-7]。
钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的含量测定方法
钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的含量测定方法摘要】目的研究对传统中药材钩藤中的有效成分钩藤碱和异钩藤碱进行质量控制的方法。
方法采用ZORBAX 快速分离 3.5 µm 柱，甲醇超声法提取钩藤药材，在流速0.4mL/min，柱温为25℃，检验波长为245nm的条件下对对照品和样品进行测试。
结果甲醇超声法提取效果良好，钩藤有效成分钩藤碱和异钩藤碱在24h内可保持稳定，含量测定样品和对照品差异小。
结论采用甲醇超声法提取钩藤碱异钩藤碱效果良好，该法测定二者含量可行可用于钩藤的质量控制。
【关键词】钩藤碱异钩藤碱甲醇超声法质量控制【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）23-0348-02钩藤为常见中药材，来源于茜草科植物大叶钩藤Uncariama crophylla Wall、毛钩藤Uncaria hirsute Havil、华钩藤Uncaria sinensis、无柄果钩藤Uncaria sessilifmctus Roxb的干燥带钩茎枝[1-3]。
其原产地有江西、两广、云南、湖南等地，中药学认为其性甘，凉。
归肝、心包经。
有息风定惊、清热平肝的作用。
可用于肝风内动，惊痫抽搐，高热惊厥，感冒夹惊，小儿惊啼，妊娠子痫，头痛眩晕等病症[1-3]。
至今为止已鉴别的钩藤中的有效成分包括吲哚类生物碱如钩藤碱(Rhynchophylline) ,异钩藤碱(Isorhynchophylline)，去氢钩藤碱(Corynoxeine)，异去氢钩藤碱(Socrynoxeine)和三萜类成分如钩藤苷元、长春钩藤苷元等 [4-5]。
钩藤碱和异钩藤碱具有降血压、抗血小板凝结、抗血栓、抗心律不齐等功效。
异钩藤碱还可与扩血管药物合用以增强其降压作用[6]。
本实验旨在探讨合适的方法提取、定量鉴定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱为钩藤的质量控制提供依据。
1 仪器和材料1.1仪器HPLC（Agligent 1200），20L超声波清洗仪（上海摩速科学器材有限公司），Sartorius BS224S分析天平（北京Sartorius仪器系统公司），TG18-WS离心机（长沙维尔康湘鹰离心机有限公司）。
贵州不同产地钩藤的总生物碱含量测定
贵州不同产地钩藤的总生物碱含量测定张华;李姗【摘要】To provide references for determination of total alkaloids inU.rhynchophylla and quality standard formulation in Guizhou.Taking rhynchophylline as the standard reference,the total alkaloids were tested at 413 nm with acid dye colorimetry in potassium acid phthalate-hydrochloric acid buffer solution(pH 3.6).Results:The rhynchophylline content(x) was in good linearity with absorbance(y) over the range of 0.022 4～0.358 4 mg.The regression equation was y=0.500 1x-0.043 4,R2=0.999,and the average recovery rate was 97.11％,with RSD 1.93(n=6).The method is of high sensitivity and accuracy,and excellent reproducibility.The average content of total alkaloids in U.rhynchophylla from different producing areas in Guizhou were different,following the sequence of Uncaria sessili fructus from Liping (2.218 3 mg/g)＞U.rhynchophylla from Kaiyang(1.834 9 mg/g)＞U.sessili fructus from Jianhe (1.456 9 mg/g)＞U.rhynchophylla from Liping(1.0895 mg/g).%为贵州钩藤总生物碱含量的测定及质量标准制定提供参考,以钩藤碱为对照品,采用酸性染料比色法在pH3.6的邻苯二甲酸氢钾-盐酸缓冲液条件下,于波长413 nm处测定总生物碱的含量.结果表明:钩藤碱含量(x)在0.022 4～0.358 4 mg与吸光度(y)有良好的线性关系,其回归方程y=0.500 1x-0.043 4,R2 =0.99 9;平均回收率为97.11％,RSD为1.93％,该方法灵敏度高,准确度好,重现性好.贵州不同来源钩藤的总生物碱平均含量存在差异,即贵州黎平无柄果钩藤(2.218 3 mg/g)＞贵州开阳钩藤(1.834 9 mg/g)＞贵州剑河无柄果钩藤(1.456 9mg/g)＞贵州黎平钩藤(1.089 5mg/g).【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2017(045)001【总页数】3页(P119-121)【关键词】酸性染料比色法;钩藤;总生物碱【作者】张华;李姗【作者单位】黔南州食品药品检验所,贵州都匀 558000;黔南州中医医院,贵州都匀 558000【正文语种】中文【中图分类】R927.2钩藤为茜草科植物钩藤〔Uncaria rhynchophylla(Miq.)Jacks〕、大叶钩藤(Uncaria macrophylla wall)、毛钩藤(Uncaria hirsuta Havil)、华钩藤〔Uncaria sinensis(Oliv.) Havil〕或无柄果钩藤(Uncaria sessili fructus Roxb)的干燥带钩茎枝[1]，为常用中药。
RP_HPLC测定市售钩藤中钩藤碱的含量_杜昊忱
以峰面积为纵坐标, 对照品浓度为横坐标, 做标准曲线。 回归方程为 y = 48684x - 131 86。 r = 019997。结果表明
钩藤碱在 01244~ 11 22Lg之间线性关系良好。
21 4 精密度试验 取钩藤碱对照品溶液, 在上述色谱 条件下, 重复进样 5次测定峰面积, R SD 为 01 65% , 表
图 1 钩藤碱对照品
图 2 供试品色谱图
21 2 样品及对照品制备 钩藤药材粉碎, 过 20目筛, 精密称定约 2g粉末, 置 100m L圆底烧瓶中, 加 2mL 浓
氨水湿润, 用 50mL 氯仿加热回流 提取 6h, 提 取液过
滤, 滤液水浴蒸干, 残渣用甲醇溶解, 转入 10mL 量瓶, 甲醇定容, 微孔滤膜滤过, 得样品溶液 [ 3] 。精密称取钩
Abstrac t: O bjective: T o estab lish a HPLC m ethod for the quantitative dete rm ina tion of rhynchophy lline in U ncaria rhynhcophy lla. M ethod s: T he determ ination w as carr ied outw ith K rom osilTM C18 co lum n, using M eOH-H2O ( 0101m ol/L tr iethylam ine) ( 70 B30) as m ob ile phase, at a flow rate o f 11 0 mL# m in- 1 and detected at the wave leng th 254nm, co lumn temperatu re 30e . R esults: T he linear ranges o f rhynchophy lline w ere 01 244~ 1122L g( r = 019997), w ith the average recoveries of 100113% . The content of
钩枝藤碱 化学成分
·综述·钩藤碱化学分析研究进展苏青1,黄瑞松1,张鹏2,覃冬杰3(1.广西壮族自治区民族医药研究院,广西 南宁 530001；2.广西大学农学院,广西 南宁 530004；3.广西医科大学,广西 南宁 530021)关键词：钩藤碱；化学性质；质量控制；提取分离；综述DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2011.12.047中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2011)12-0097-04钩藤碱(rhynchophylline)为传统中药钩藤属植物有效成分的主要成分之一,对人体心血管系统、中枢神经系统以及血液系统等具有明确的生物活性作用[1-4],是治疗高血压方剂的常用药源。
随着现代分析技术的不断发展,钩藤碱的研究取得了很多新进展。
为了加快钩藤属中药材的深入开发应用研究,笔者就近十几年来钩藤碱化学分析的研究进展作一综述。
1 化学性质钩藤碱是钩藤生物碱(Rhynchophylla total alkaloids)的主要成分[1]。
钩藤生物碱化学研究始于19世纪早期,1928年首次报道从钩藤(Uncaria rhynchophylla)分离发现钩藤碱以来[5],已从钩藤生物碱中分离鉴定了钩藤碱(rhynchophyline)、异钩藤碱(isorhychophyline)、去氢钩藤碱(corynoxeine)、异去氢钩藤碱(isocorynoxeine)、毛钩藤碱(hirsutine)、去氢毛钩藤碱(hirsuteine)、柯楠因碱(corynantheine)、二氢柯楠因碱(dihydrocorynantheine)、柯诺辛(corynoxine)、柯诺辛B(corynoxine B)、台钩藤碱A和B、滇钩藤碱等40多个化合物[6-9],其中钩藤碱和异钩藤碱含量最高,分别占钩藤总生物碱的28.9%和14.7%[10-11]。
钩藤碱为吲哚型生物碱,异钩藤碱为其同映像异构体,在受热或极性溶剂等条件下可相互转换。
基于化学成分稳定性的钩藤药学研究进展
基于化学成分稳定性的钩藤药学研究进展钩藤为临床常用中药，也是天麻钩藤饮、羚角钩藤汤等一些著名中药复方的主药。
历代本草文献有钩藤入煎剂需“后下”的记载，现代药学研究表明钩藤的生物碱类成分具有不稳定性。
钩藤生物碱的不稳定，为钩藤的研究与应用带来诸多问题，如历版《中国药典》均未收载钩藤含量测定的标准，严重影响了钩藤药材的质量控制及其应用。
作者围绕钩藤化学成分的稳定性，系统整理了历代本草文献及《中国药典》关于钩藤“后下”的记载，并通过查阅、分析近几十年国内外关于钩藤的化学成分及其稳定性、药理作用、提取工艺、质量分析等研究概况，为钩藤的进一步研究、开发提供参考依据。
标签：钩藤;化学稳定性;后下;研究进展钩藤为临床常用中药，原名吊藤，微寒、无毒，入肝经以凉血祛风，味甘寒而除邪定搐，主治头痛眩晕、感冒夹惊、十二惊痫[2-4]，同时具有降血压[5]、抗心律失常[6]、抗癫痫[7]及对脑缺血保护[8]和对中枢神经系统有镇静[9]等作用。
钩藤含有吲哚类生物碱、三萜类成分、黄酮类成分等化学成分，其中生物碱类是钩藤中含量较多的成分，也是重要的活性成分。
许多本草文献记载钩藤入煎剂需“后下”，现代文献研究表明钩藤生物碱不稳定。
钩藤生物碱的不稳定，为钩藤的研究与应用带来诸多问题，如《中国药典》2010年版尚未收载钩藤含量测定的标准，只有TLC色谱鉴别，严重影响了钩藤药材的质量控制及其应用。
关于钩藤的药学研究文献报道较多，但尚未有从化学成分稳定性的角度对其药学研究进行全面的综述。
作者系统整理了历代本草文献关于钩藤“后下”的记载，并通过查阅、分析近几十年国内外关于钩藤的化学成分及其稳定性、药理作用、提取工艺、质量分析的研究概况，为钩藤的进一步研究、开发提供参考依据。
1 钩藤“后下”的文献研究1.1 本草文献对钩藤“后下”的收载钩藤始载于汉末著作《名医别录》，但文中未提及入煎剂须“后下”，之后历代本草文献多有收录，但是否“后下”未有定论。
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2012年9月第36卷第5期钩藤为茜草科植物钩藤Uncaria rhynchop Hylla （Miq．）Jacks．，大叶钩藤U．macrop Hylla Wall．，毛钩藤U．hirsuta Havil．，华钩藤U．sinensis （Oliv．）Havil 或无柄果钩藤U．sessilifructus Roxb．的干燥带钩茎枝。
钩藤性微寒味甘，归肝、心包经，具有清热平肝、熄风定惊的功效［1］。
钩藤中总生物碱是其发挥降血压临床治疗作用的主要药效物质［2－3］。
本研究通过纯化精制钩藤总生物碱，确定钩藤总生物碱有效部位，并对有效部位的总碱含量、钩藤碱含量及指纹图谱进行系统、全面的研究，建立控制中药有效部位质量的方法。
1仪器与试药1200高效液相色谱仪，二极管阵列检测器（美国安捷伦科技有限公司）；QC225超声波清洗器（上海超声波仪器厂），ES －J120电子天平，旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；电热干燥箱（重庆实验设备厂），低速离心机LD4－2A （北京医用离心机厂）。
钩藤总生物碱有效部位（自制），甲醇、乙腈（色谱纯，天津科密欧试剂公司），水为哇哈哈纯净水，其余试剂为分析纯。
钩藤碱对照品（自制，纯度＞98％）。
钩藤药材购买于济南建联中药店，经山东中医药大学中药鉴定教研室李峰教授鉴定为茜草科植物钩藤Uncaria rhynchop Hylla （Miq．）Jacks．，药材样品保存于本实验室。
2方法与结果2．1钩藤总碱的测定2．1．1酸碱滴定法钩藤药材乙醇提取，提取液回收至无醇味，加氨水调pH 值为10左右，转入分液漏斗中，氯仿萃取（50mL ×6），合并氯仿液，20mL 蒸馏水水洗，得氯仿液，常压回收氯仿至干，转移至蒸发皿，水浴锅上蒸干，残渣用无水乙醇溶解，再蒸干，残渣加4mL 氯仿溶解，精密加0．01mol ·L －1硫酸液30mL ，置水浴上除去氯仿，放冷至室温，加3滴甲基红－亚甲蓝指示剂，用0．02mol ·L －1氢氧化钠溶液滴定至溶液由橙红色转变为浅黄绿色。
每钩藤总生物碱有效部位质量控制研究蒋海强1，窦月2，周洪雷1（1．山东中医药大学，山东济南250355；2．广东省中山市食品药品检验所，广东中山528437）［摘要］目的：建立钩藤总生物碱有效部位质量控制方法。
方法：采用酸性染料染色法测定钩藤总生物碱的含量，采用高效液相色谱法测定有效部位中钩藤碱的含量，采用高效液相色谱法建立钩藤总生物碱有效部位的指纹图谱。
结果：钩藤总生物碱的含量均在50％以上，钩藤碱在5．75～92μg /mL 之间线性关系良好，平均回收率为98．82％，通过指纹图谱相似度评价，不同批次的钩藤总生物碱有效部位的化学成分存在差异。
结论：本研究建立的质量控制方法可有效控制钩藤总生物碱有效部位的质量。
［关键词］钩藤总生物碱；钩藤碱；指纹图谱［中图分类号］R284．1［文献标识码］A［文章编号］1007－659X （2012）05－0445－04Study on quality control of total alkaloids in Ramulus Uncariae Cum Uncis JIANG Hai －qiang ，DOU Yue ，ZHOU Hong －lei （1．Shandong University of Traditional Chinese Medicine ，Jinan ，250355，China ；2．Zhong shan institude for food and drug control ，Zhong shan ，528473，China ）［Abstract ］Objective ：To establish the method for quality control of total alkaloids in Ramulus Uncariae Cum Uncis ．Methods ：The contents of total alkaloids were determined by acid dye colorimetry ，HPLC was used to measure the contents of rhynchophylline and fingerprint of total alkaloids in Ramulus Uncariae Cum Uncis ．Results ：The contents of total alkaloids were higher than 50％，the linear range of rhynchopHylline was 5．75～92μg /mL ，the average re-covery was 98．82％．The chemical composition of different batches total alkaloids in Ramulus Uncariae Cum Uncis was difference by fingerprint similarity evaluation．Conclution ：The method can be used for quality control of totalalkaloids in Ramulus Uncariae Cum Uncis ．［Key words ］total alkaloids in Ramulus Uncariae Cum Uncis ；rhynchophylline ；fingerprint［收稿日期］2012－03－08［基金项目］山东省科技发展计划项目（编号：2008GG2NS02011）；国家科技重大专项重大新药创制、山东省重大新药创制中心建设（编号：2009ZX09301－013）；山东省自然科学基金项目（编号：ZR2010HM017）；山东省教育厅科技计划项目（编号：J105LL05）；国家自然科学基金项目（编号：810727941H2708）。
［通讯作者］周洪雷（1967－），男，教授，主要从事中药及天然药物有效成分及质量控制研究。
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第36卷第5期山东中医药大学学报Vol．36，No．52012年9月JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY OF TCMSep .20124452012年9月山东中医药大学学报第36卷第5期1mL 的0．01mol /L 硫酸液相当于7．68mg 的钩藤碱（C 22H 28O 4N 2）。
钩藤总生物碱的量以C 22H 28O 4N 2计，测定钩藤上样液中总生物碱含量。
2．1．2钩藤总生物碱溶液的配制精密称取钩藤总生物碱粉末0．05g ，置50mL 的三角瓶中，加入蒸馏水40mL ，超声20min ，即得。
同法制备12批，备用。
2．1．3钩藤总碱含量的测定按照2．1．1项下方法测定钩藤总生物碱含量。
12批钩藤总生物碱的含量依次为：50．14％、50．02％、50．16％、46．08％、50．05％、49．38％、46．20％、50．26％、50．10％、53．13％、55．35％、58．78％。
2．2钩藤碱的含量测定2．2．1色谱条件Agilent 3000Extend －C 18色谱柱（5μm ，250mm ×4．6mm ，美国安捷伦科技有限公司）；检测波长：245nm ；柱温：25℃；流速：1mL ·min －1；流动相：甲醇∶0．25％氨水为65∶35；进样量：20μL 。
色谱图见图1～2。
2．2．2对照品溶液的制备精密称取钩藤碱对照品11．5mg ，加甲醇定容至50mL ，作为储备液，取1mL 钩藤碱储备液，加甲醇定容至10mL ，即得钩藤碱为23μg /mL 的对照品溶液。
2．2．3供试品溶液的制备称取钩藤药材1kg ，10倍量75％乙醇回流提取3h ，过滤，得滤液，滤渣重复操作2次，合并3份滤液，减压回收乙醇至2L ，加入1％盐酸20％乙醇溶液1L ，以1mL /min 的流速通过732型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂柱，8BV 水洗至中性，80％乙醇6BV 除杂，10BV 1％氨水80％乙醇洗脱，该洗脱剂回收溶剂，干燥，即得钩藤总生物碱，同法制备12批钩藤药材的钩藤总生物碱。
分别精密称取钩藤总生物碱10mg ，加甲醇定容至25mL 容量瓶中，0．45μm 的微孔滤膜滤过，即得钩藤总生物碱供试品溶液。
2．2．4线性关系考察精密吸取23μg /mL 钩藤碱对照品溶液50，100，200，400，600，800μL ，分置于2mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取20μL进样，记录色谱图。
以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，做标准曲线。
回归方程为Y ＝47．963X ＋46．133，r ＝0．9995。
结果表明钩藤碱在5．75～92μg /mL之间线性关系良好。
2．2．5精密度试验取钩藤碱对照品溶液，在2．2．1项色谱条件下，重复进样6次，测定峰面积，RSD 为1．69％，表明精密度良好。
2．2．6重复性试验取同一批钩藤样品6份，按供试品溶液的制备方法制备并测定，计算钩藤碱含量及相对标准偏差，RSD 为3．93％。
表明该方法重复性较好。
2．2．7稳定性试验取样品含量测定溶液，于0，1，2，4，6，12h 取样，测定含量，计算其相对标准偏差，RSD 为2．00％，表明稳定性良好。
2．2．8回收率试验取已测钩藤碱含量的钩藤总生物碱样品溶液，精密移取800μL ，分别加入钩藤碱对照品储备液360μL ，置5mL 容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，平行做6份，按2．2．1项下色谱条件进样，测定其平均回收率为98．821％，RSD 为1．868％。
见表1。
表1回收率试验结果样品含量（m /μg ）加入量（m /μg ）测得量（m /μg ）回收率（％）平均回收率（％）RSD （％）116.51616.11032.12396.87898.8211.868216.51516.11032.42198.734316.51716.12032.910101.694416.51416.13032.31597.960516.15216.13032.21897.371616.51616.15032.713100.291图2钩藤碱对照品色谱图mAU 3503002502001501005000246810t /min图1钩藤总生物碱色谱图1201008060402002468101214t /minmAU 2．2．9样品中钩藤碱的测定依2．2．2项下样品溶液按2．2．1项下色谱条件进样，测定钩藤总生物碱中钩藤碱含量依次为：5．745％、5．057％、5．835％、4．507％、5．127％、5．048％、4．420％、5．086％、6．008％、9．508％、13．341％、13．885％。