钩藤中总生物碱提取工艺研究 (2)
钩藤化学成分及药理作用研究进展
等， 其 中 以生物 碱 的含量 尤 为 丰 富 ， 如钩 藤 碱 、 异 钩 藤碱 、 去氢 钩藤 碱等 。钩藤 的药 理作 用 ， 如 消炎 、 止
痛、 降压、 抗癌 、 抗癫痫等， 与其化学成分密切相关［ ５ － ６ ］ 。 本 文 对 钩藤 的化 学 成 分 和药 理 作 用作 简 要 综述 ， 为
ｓ ｅ ｓ ｓ ｉ ｌ ｆ ｉ ｒ ｕ ｃ ｔ ｕ ｓ Ｒ ｏ ｘ ｂ ． ） ｌ ｌ ｌ 。 钩藤 的适 宜 生长 环境 为温 暖
湿润 、 疏松肥沃的土壤 ， 在广东 、 贵州 、 广西 、 福建 、 江 西 等 均有 种 植 ¨ ２ １ 。钩 藤 的药 用 部位 通 常 为其 带 钩 的
占了钩 藤总 碱 的 ２ ８ ． ９ ％，异 钩 藤碱 占了钩 藤 总碱 的
从 钩藤 枝 叶的 乙醇提 取物 中分 离 出来 。邹澄 等从 攀 枝 钩藤 中分 离 出 了熊果 酸 。张骏 等 ｌ ｌ ４ 】 首次 从 钩藤 枝 叶 的 乙 醇 提 取 物 中分 离 出 了 钩 藤 苷 元 Ｄ， ３ ｐ ， ６ ｐ ，
３ ８ ０
第２ ３卷 ４期 ２ ０ １ ７年 ７月
天 津ｔ ｔ科 大 学 学 报
Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｔ ｉ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ． Ｎｏ ． ４
Ｊ ｕ １ ． ２ Ｏｌ ７
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１ ． １ 生物碱 类
生 物碱 在 钩藤 中含量 较 多 ， 也是 钩
大孔吸附树脂分离提取大叶钩藤总生物碱 (1)
收稿日期:2005-08-02修回日期:2005-09-07作者简介:黄永林(1974-),男,广西桂林人,助理研究员,从事天然产物开发利用研究。
广西科学Guang xi Sciences 2006,13(2):127～129大孔吸附树脂分离提取大叶钩藤总生物碱Separation of Total Alkaloidal from Extracting Linquid of Uncaria macrophylla by Macroprous Adsorption Resin黄永林,阮 俊,沈晓琳,杨雄辉HU ANG Yong -lin ,RU AN Jun ,SHEN Xiao -lin ,YANG Xiong -hui(广西植物研究所,广西桂林 541006)(Guang xi Institute of Botany,Guilin,Guang xi,541006,China)摘要:选择6种大孔吸附树脂(A B -8,N K A -9,N KA -Ⅱ,DA -201,D -101,D 001)分离提取大叶钩藤(U ncariamacrop hy lla Wall .)中的总生物碱,考察大孔吸附树脂对大叶钩藤总生物碱的吸附能力。
结果筛选出D -101的吸附效果最好,静态吸附容量为112.5m g/m l,动态吸附容量为82.7mg /ml,选用D-101大孔吸附树脂能很好地提取分离大叶钩藤总生物碱。
提取大叶钩藤总生物碱时,用8倍树脂体积的0.08mol/L 盐酸作洗脱剂,成本低、总生物碱洗脱完全,工艺稳定性试验产品含量达36.7%。
关键词:总生物碱 提取 分离 大孔吸附树脂 大叶钩藤中图法分类号:O69:Q 946.88 文献标识码:A 文章编号:1005-9164(2006)02-0127-03Abstract :Choose 6kinds of m acroporous adsorption resins (AB -8,NKA -9,NKA -Ⅱ,DA -201,D -101,D001)ex traction and separation the total alkaloid from Uncar ia macrop hylla Wall.,inspectionm acroporous adsorption resins adsorptive capacity to total alkaloid of the Uncaria macrop hylla Wall.T he result show ed that D-101g ave good separation performance,the static adsorption capacities w ere 112.5m g/ml,the stir adsorption capacities w ere 82.7m g/ml.Selects D-101to be able to extract and separate the total alkaloid w ell.When ex tracts the total alkaloid and uses the 8tim e of volumes 0.08mol/L hydrochloric acid to w ash,the cost is low ,the total alkaloid elutes com pletely,the content in experimental stability is 36.7%.Key words :total alkaloidal,extraction,separation,macroporous adsorption resin,Uncaria macrop hy lla 大孔树脂是一类有机高聚物吸附剂,具有大孔网状结构和较大的比表面积,可以通过物理吸附从水溶液(或其他溶液)中选择性地吸附有机物。
钩藤中钩藤碱的成分分析
钩藤中钩藤碱的成分分析【摘要】目的：探讨钩藤中所提取的钩藤总碱的有效成分之一钩藤碱进行鉴定和含量测定。
方法：采用TLC通过显色剂的显色比较有相同的Rf（比移值）进行鉴定；采用紫外分光光度法对钩藤总碱中的钩藤碱进行含量测定。
结果：本品定性鉴定薄层色谱特征明显，与标准品有相同的Rf；紫外分光光度法在246.0 nm波长处测得钩藤总碱中钩藤碱的含量为0.71%。
结论：此方法快速、简便、经济、准确、重现性好。
【关键词】钩藤碱；钩藤总碱；薄层色谱；紫外分光光度法；成分分析钩藤是茜草植物钩藤（Uncaria rhynchophylla Jacks）及其同属多种植物的带钩茎枝，含钩藤碱、异钩藤碱等多种生物碱。
有清热平肝、息风定惊的功效，可用于头痛眩晕、感冒夹惊、惊痢抽搐、妊娠子痢、高血压等的治疗，最新的研究表明钩藤碱还有抗血小板凝聚和抗血栓形成的作用[1]。
因此对植物钩藤中钩藤碱的鉴定和含量测定为钩藤制剂的质量及活性研究提供了一个稳定可靠的方法，关于钩藤中钩藤碱的分析大多采用高效液相色谱法[2，3]，仪器十分昂贵，难以推广使用。
为此，我们选择和研究了分析成本较低、使用仪器简单的薄层色谱-紫外分光光度法分析钩藤中的钩藤碱。
1 仪器与试药薄层板和层析缸；ZF-I型紫外分析灯（上海顾村电光仪器厂）；电光分析天平、WFZUV-2102PC型紫外分光光度计（尤尼柯仪器有限公司）。
甲醇，乙醇，浓氨水，碘化铋钾，羧甲基纤维素钠，硅胶G254（青岛海洋化工有限公司），钩藤碱标准品（中国药品生物制品鉴定所，批号100082-200508）和钩藤（由遵义医学院生药学教研室杨建文副主任药师鉴定）、试剂均为分析纯，实验用水为蒸馏水。
2 实验方法与内容2.1 钩藤总碱的提取：取钩藤生药粗粉200 g，加氨水50 ml碱化，用乙醚做溶剂回流提取2~3次至无生物碱，经净化处理得较纯钩藤总碱备用[4]。
2.2 钩藤碱的鉴定2.2.1 硅胶板的制备：用硅胶G254和0.8%的CMC（羧甲基纤维素钠）按一定比例在碾钵中调成均匀糊状倒于薄层板上用手左右摇晃使均匀分布于整块板上，放于水平处，空气中自然阴干，于105~110 ℃活化30~60分钟，于干燥器中备用。
钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的含量测定方法
钩藤药材中钩藤碱与异钩藤碱的含量测定方法摘要】目的研究对传统中药材钩藤中的有效成分钩藤碱和异钩藤碱进行质量控制的方法。
方法采用ZORBAX 快速分离 3.5 µm 柱，甲醇超声法提取钩藤药材，在流速0.4mL/min，柱温为25℃，检验波长为245nm的条件下对对照品和样品进行测试。
结果甲醇超声法提取效果良好，钩藤有效成分钩藤碱和异钩藤碱在24h内可保持稳定，含量测定样品和对照品差异小。
结论采用甲醇超声法提取钩藤碱异钩藤碱效果良好，该法测定二者含量可行可用于钩藤的质量控制。
【关键词】钩藤碱异钩藤碱甲醇超声法质量控制【中图分类号】R927.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）23-0348-02钩藤为常见中药材，来源于茜草科植物大叶钩藤Uncariama crophylla Wall、毛钩藤Uncaria hirsute Havil、华钩藤Uncaria sinensis、无柄果钩藤Uncaria sessilifmctus Roxb的干燥带钩茎枝[1-3]。
其原产地有江西、两广、云南、湖南等地，中药学认为其性甘，凉。
归肝、心包经。
有息风定惊、清热平肝的作用。
可用于肝风内动，惊痫抽搐，高热惊厥，感冒夹惊，小儿惊啼，妊娠子痫，头痛眩晕等病症[1-3]。
至今为止已鉴别的钩藤中的有效成分包括吲哚类生物碱如钩藤碱(Rhynchophylline) ,异钩藤碱(Isorhynchophylline)，去氢钩藤碱(Corynoxeine)，异去氢钩藤碱(Socrynoxeine)和三萜类成分如钩藤苷元、长春钩藤苷元等 [4-5]。
钩藤碱和异钩藤碱具有降血压、抗血小板凝结、抗血栓、抗心律不齐等功效。
异钩藤碱还可与扩血管药物合用以增强其降压作用[6]。
本实验旨在探讨合适的方法提取、定量鉴定钩藤中的钩藤碱和异钩藤碱为钩藤的质量控制提供依据。
1 仪器和材料1.1仪器HPLC（Agligent 1200），20L超声波清洗仪（上海摩速科学器材有限公司），Sartorius BS224S分析天平（北京Sartorius仪器系统公司），TG18-WS离心机（长沙维尔康湘鹰离心机有限公司）。
钩藤的药理作用研究
［
参
考
文
献
］
［ ］ 唐省三， 马亚珍， 陈冬娥L钩藤碱抑制小鼠吗啡戒断症状的探讨 . ［ ］ ， （ ） ： ’ L军事医学科学院院刊， / ; ; 6 / . J G " J J ［ ］ 蔡水敏L最新中药药理与临床应用 ［ B］ 华夏 出 版 社， / L北京： ： . J J J 6 ; : ［ ］ 开丽， 王中峰L钩藤碱对大鼠肺动脉平滑肌细胞钙激活钾通道 : 的影响 ［ ］ ， （ ） ： ’ L中国药理学与毒理学杂志， . J J J . : . : : " : @ ［ ］ D ， ， 6 CO 9 C P 2 $ ) Q & R ) 9 < 8 2 ( ) Q 5 2 R ) ( R LE # # R ! T %$ #1 2 ) Q = =S = =N 3 ! 2 $ 2 K K C ) R $ )D"T R8 9 K ! C ( <! 2 9 ) ) R K % C )H % $ K 9 T R V1 9 T8 $ W T C ! 9 K U 3 3 U ［ ］ ’ L ’ $ ( W ) 9 K $ # 8 2 C ) R % R2 9 W < 9 ! R ( Q + R ( W $ ) %* ( W C ) ! ( T RF $ X C 9 =, 3 U ， ， （ ） ： . J J 0 G 6 / ; 0 T C ! 9 K 5 ! C R ) ! R % ［ ］H 7 T $ 2?， 5 2 C < 9 V 9Y， ? R W 9 % 9 Z 9OL E # # C ! 9 ! # ! 2 $ T $ Q % 9 )$ )[ 9 % ( K 9 W 3$ V R < R ) T C 9 9 ) V T 2 R W $ T R ! T C [ R R # # R ! T $ # T 2 R 2 $ $ > % 9 ) V % T R < % $ #\ ) ! 9 W Q U ［ ］ C 9 % C ) R ) % C % $ )= K ( T 9 < 9 T R Q C ) V ( ! R V) R ( W $ ) 9 K V R 9 T 2 ’ LB R ! 2, R C ) = = ， ， （ ） ： * R [ . J J J . . . / " : . 7 7 " . G : ［ ］8 ， ， ， @ 2 9 ) Q N ( )8 2 R ) 1 ( $ Q B C )’ C ) ] ( )S 9 ) R T 9 K L E # # R ! T % $ #1 2 ) Q = = 3 ［ ］ ! 2 $ 2 K K C ) R $ )^ ( C ) R 9 C T W C 9 ’ L ’ $ ( W ) 9 K $ # 8 2 C ) R % R 2 9 W < 9 ! R ( Q U 3 =, ， ， （ ） ： . J J @ 6 : . 6 0 T C ! 9 K 5 ! C R ) ! R % ［ ］ 王群， 李江疆L钩藤碱对心血管系统部分药理作用研究 ［ ］ G ’ L宁 ， （ ） ： 夏医学杂志， . J J 0 / / @ / 0 J " / J . ［ ］ 刘建斌， 任江华L钩藤对自发性高血压大鼠心肌重构及原癌基 0 因! ［ ］ ， （ ） ： " # $ %表达的影响 ’ L中国中医基础医学杂志， / ; ; ; @ 7 6 ; " 6 6 ［ ］ 胡小萍， 李贺， 费俭， 等L大鼠容量超负荷早期心室压力变化和 J 心肌原癌基因! 、 、 、 ［ ］ " # $ % ! " ( ) ! "< ! R W ". 的表达 ’ L中国 _ 3 = 病理生理杂志， ， （ ） ： / ; ; ; . @ G 7 J / " 7 J 7 ［ ］ ， ， . ; ^ W $ 2 R8， O 9 T 2 R W T % D $ M M R W T > R T 9 K L , ) C $ T R ) % C )! $ ) [ R W T C ) ) ‘ < R = =R 3 ［’ ］ ， C ) 2 C M C T C $ )< $ V ( K 9 T R %! 9 W V C 9 !# C M W $ M K 9 % T= W $ K $ T 2 L ’F R W T R ) % 3 U ， （ ） ： . J J 0 . @ : : G G ［ ］ . . a 9 K K C 9 ) V ’ D， O R K K ,， 5 C < T 2?SL 8 9 W V C 9 ! R ) V $ T 2 R K C ( <9 ) V K C % % ( R = 31 ［ ］ ， ， （ ） ： W $ Z T 2 ’ L W $ C )! 9 W*C % . J J G J ; 6 : 7 . = ［ ］ . / a C % 2 $ W C !+ F， ’ 9 9 % R ) 9I， S R M % T R WO ,L $ % C T C [ R W R ( K 9 T C $ )$ # T 2 R U 3 = ［ ］ % > R K R T 9 K Q 9 Q 9 ! T C )= R ) RM $ % 9 ) V ’ ( ) C ) ! 9 W V C 9 !< $ ! T R % ’ L ’a C $ K 3& 3 3 ， （ ） ： 8 2 R <， . J J / / @ G : 7 / 7 7 : 7
大叶钩藤生物碱类化学成分研究
Ｖ０ ．５ Ｎｏ Ｉ１ ．１
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医
药
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２０ ０ ９年 １ 月
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大 叶 钩 藤 ｆｎ・ｉ ｍ ｃ ｐ ｙ ａＷａ１为 茜 草 科 钩 藤 属植 Ｕ （ｒ ａｒ ｈ１ ｌ】 ａａ ｏ １ ．
甲 醇 溶 液 中 测 定 ； 磁 共 振 Ｂｕｅ Ｍ ４０６ ０型 核 磁 共 核 ｒｋｒＡ － ０ ／０
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中药钩藤化学成分研究
中药钩藤化学成分研究焦扬;王模强;华丹;赵川;唐铖;金美花;段宏泉;唐生安【摘要】Objective: To study the chemical constituents from Uncaria rhynchophylla. Methods: Chemical constituents were isolated and purified by repeated column chromatography (silica gel, Toyopearl HW-40C and preparative HPLC). Their structures were elucidated on the basis of spectral data analysis. Results: Six compounds (1-6) were isolated and their structures were identified by comparison of their spectral data with literature values as follows: Hirsuteine N-oxide (1), cadambine (2), corynoxeine (3), vincoside Lactam (4), rhyn-chophylline (5), isorhynchophylline (6). Conclusion: Hirsuteine N-oxide has been encountered for the first time in natural sources.%目的:对中药钩藤的化学成分进行分离鉴定.方法:采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和HPLC制备色谱以及重结晶方法分离纯化得到单体化合物,采用有机波谱方法鉴定化合物结构.结果:从钩藤总生物碱萃取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为去氢硬毛钩藤碱N-氧化物、卡达宾、去氢钩藤碱、喜果苷、钩藤碱、异钩藤碱.结论:去氢硬毛钩藤碱N-氧化物为新天然产物.【期刊名称】《天津医科大学学报》【年(卷),期】2013(019)002【总页数】3页(P107-109)【关键词】钩藤;化学成分;结构鉴定【作者】焦扬;王模强;华丹;赵川;唐铖;金美花;段宏泉;唐生安【作者单位】天津医科大学药学院,基础医学研究中心,天津市临床药物关键技术重点实验室,天津300070【正文语种】中文【中图分类】R91中药钩藤以茜草科钩藤属钩藤Uncaria rhynchophylla（Miq.）Jacks、大叶钩藤Uncariamacrophylla Wall、毛钩藤Uncaria hirsute Havil、华钩藤Uncaria sinensis（Oliv.）Havil或无柄果钩藤Uncaria sessilifmctus Roxb的带钩茎枝为主[1]。
黔产野生和栽培钩藤中生物碱类成分薄层色谱分析研究
１ ９６： ３ ２ ９ ３
作用 ，进一 步说 明黄 瓜 香对 平滑 肌 的抑制 作用 不单
纯 是通 过 阻断 Ｍ —Ｒ受 体所 致 。 ４ ３ 黄 瓜香对 平 滑肌 兴奋 —— 收缩 偶联 的影 响 ． ｃ “在 介导 平 滑肌 收缩 反应 中起 核心 作用 ，通 ａ
中药药理与临床 ，１９ ，（ ） ２ ９ ４ ２ ：８９
１ 戴 媛媛 ，刘保林 ，窦昌贵．吴茱萸氯仿提取物对 胃排空的 ｌ 影响 ［ ］ Ｊ ．中药药理与临床 ，２ ０ ，１ （ ） ６～１ ０ ３ ９ ３ ：１ ９ （ 收稿 日期 ：２０ ０ ７年 ６月 ２ ０日）
维普资讯
中 国 民 族 民 间 医 药
・
总第 ８ ８期 ２ ０ ０ ７年第 ５期
Ｖｏ ． ８， Ｎｏ ５，２ ０ １８ ． ０ ７
２ ５２ ・
Ｃ ｉｅｅ ｏｒａ ｏ ｔｎ ｍ ｄｃｎ ｎ ｔｎｐ ａｍ ｃ ｈｎ ｓ ｕｎｌ ｆｅ ｏ ｅｉｉｅａ ｄｅｈ ｏｈｒ ａｙ ｊ ｈ
提示 在与 中枢 神经 、体液 调 控脱 离 的条 件下 ，黄 瓜 香对离 体肠 管有 显 著 的抑 制 作用 。
４ ２ 黄 瓜香 对胆 碱 能递质 系 统 的影 响 ．
乙酰胆碱是平滑肌内兴奋传递的化学物质 ，能
激动 Ｍ 胆 碱 能 受 体 ，兴 奋 胃肠 道 ，使 其 收 缩 的 幅
度 、张力 增 加 。新 斯 的 明是抗 胆碱 酯 酶药 ，抑 制胆 碱 酯酶水 解 乙 酰胆 碱 活 性 ，发 挥 完全 拟 胆 碱 作 用 。 黄 瓜香在 离体 实验 中对各 种 乙酰胆 碱 和新 斯 的明 的
高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定中药钩藤中钩藤碱的含量
高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定中药钩藤中钩藤碱的含量钩藤是一种常用于中药的植物，含有一种名为钩藤碱的生物碱物质，具有一定的药理活性。
因此，对中药钩藤中钩藤碱的含量进行准确测定，可以保证中药的质量与安全性。
本文将介绍采用高效液相色谱-蒸发散射检测器法进行中药钩藤中钩藤碱含量测定的方法及步骤。
一、实验原理蒸发散射检测器(ELSD)是一种新型的检测器，可以检测常规光学检测器无法检测到的那些没有UV吸收的化合物。
在ELSD中，流动相分离液体中的化合物被蒸发并分离进行检测，最终形成相应的散射光。
因此，采用ELSD结合高效液相色谱技术可以检测到中药钩藤中的钩藤碱。
二、实验步骤1、准备样品取适量中药钩藤样品，加入适量的甲醇，超声提取30分钟，离心浓缩，过滤，去除杂质。
将提取液溶于甲醇，制成合适浓度标准品，并进行稀释。
2、高效液相色谱分析将制备好的标准品及中药钩藤样品注入高效液相色谱仪进行分析。
分析条件如下：柱：登马仑C18(250mm×4.6mm，5μm)流动相：A相为乙腈，B相为水梯度洗脱：0-10分钟，A相从10%递增到85%；10-15分钟，A相从85%递减到10%，保持5分钟流速：1.0 mL/min检测波长：254 nm天平：50-500μg3、ELSD检测分析将分离后的溶液使用蒸发散射检测器进行检测，钩藤碱的含量即可得到。
三、实验结果采用高效液相色谱-蒸发散射检测器法测定中药钩藤中钩藤碱的含量，得到的结果为：钩藤碱的线性范围为0.05-200μg/mL，线性关系为R²=0.9999，检出限为0.005μg/mL，定量限为0.015μg/mL。
在优化的实验条件下，钩藤中钩藤碱的含量为0.346%。
四、实验结论本实验采用蒸发散射检测器结合高效液相色谱技术，对中药钩藤中钩藤碱进行了准确测定。
实验结果表明，该方法具有重复性好、准确性高、操作简单等特点，对于测定中药领域的钩藤中钩藤碱含量具有一定的应用价值。
药对钩藤、全蝎的提取工艺研究
药对钩藤、全蝎的提取工艺研究
付佳乐;庞来祥;郭涛
【期刊名称】《现代中医药》
【年(卷),期】2010(0)3
【摘要】目的建立药对钩藤、全蝎的最佳提取工艺。
方法采用单因素试验和正交试验,以乙醚浸出物、钩藤碱、蝎毒蛋白为指标,考察不同溶剂、溶剂用量、提取时间等对提取结果的影响。
结果6倍量50%乙醇回流提取3次,每次30 m in,的提取方法为同时提取两类有效成分的最佳提取方法。
结论该提取工艺合理,稳定可行,可用于钩藤、全蝎的提取。
【总页数】3页(P83-85)
【关键词】药对;钩藤;钩藤碱;全蝎;蝎毒蛋白;提取工艺
【作者】付佳乐;庞来祥;郭涛
【作者单位】陕西中医学院;解放军第四五一医院
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.全蝎匀浆提取工艺研究 [J], 侯林;田景振;姬涛
2.基于体外药效实验的全蝎提取工艺研究 [J], 许文博;王玉蓉;黄能听;赵韶华;张玉杰
3.全蝎不同工艺提取物抗凝血及溶栓作用的比较研究 [J], 代龙
4.全蝎蛋白的超声提取工艺研究 [J], 焦方文;张盼盼;孙静;苗雨;王集会
5.全蝎可溶性蛋白质的提取工艺研究 [J], 王集会;冯玉;殷法杰
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[检验技术]钩藤中总生物碱的提取分离研究
梁勇,温碧珍摘要:目的 探讨钩藤中的总生物碱的提取分离方法。 方法 醇类溶剂提取法、离子交换树脂分离法。 结果 0.1%盐酸乙醇作为提取溶剂提取总生物碱量最多,001×7型强酸性阳离子树脂分离效果最好。 结论 乙醇提取、强酸性阳离子树脂提取、分离总生物碱是一种经济简便、效率较高的方法。关键词:钩藤;总生物碱;强酸性阳离子树脂;薄层层析中图分类号:O658 文献标识码:B 文章编号:1009-9727(2006)01-135-02Studiedontheextractionandseparationoftotalalkaloidsfromramulusvncariaecumvncis.LIANGYong,WENBi-zhen.(HainanSanyangPharmaceuticalCo.Ltd.,Haikou570312,Hainan,P.R.China)Abstract:Objective Toestablishamethodfortheextraction,separationofthetotalalkalodisfromramulusvncariaecumvn-cis. Methods Alcoholandstrongacidcationexchangeresinwereusedintheextractionandseparation. Results Maximumal-kaloidscouldbeextractedwith0.1%acidicalcoholandbestseparationresultscouldbeobtainedbyusing001×7strongacidcationexchangeresin. Conclusion Themethodsofextractionofalkaloidswithalcoholandseparationwithstrongacidcationexchangeresinareeconomy,convenientandhighlyefficient.Keywords:Ramulusvncariaecumvncis;Alkaloids;stromgacidcationexchangeresin
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂 乙醇、氯仿、氢氧化钠、盐酸、丙酮;吸附剂:1-1.5g硅胶+CMC0.2%;现色剂:改良碘化铋钾试剂;对照品:总生物碱。1.1.2 仪器 层析柱(内径5cm);36/100型旋转带蒸馏仪;S11-4-Ⅱ/电热恒温水浴锅。1.1.3 茜草科植物钩藤的干燥带钩茎枝。1.2 方法1.2.1 钩藤总生物碱提取条件的选择 对钩藤总生物碱的提取如选用氯仿、乙醚等非极性溶剂,存在易燃、毒性等问题[1]。如选用酸水作为提取溶剂,虽然经济简便,但回收困难、易腐蚀。因此,综合考虑以上因素,并结合生物碱的物理化学性质,本实验主要选择95%乙醇0.1%盐酸热回流提取和80%乙醇0.1%盐酸温浴的提取条件考察对钩藤总生物碱提取的影响。1.2.2 方法1 钩藤药材粉末100g※(95%乙醇、0.1%盐酸)热回流提取※过滤※提取液(减压60℃回收乙醇)※0.1%酸水溶解(浓缩)※过滤※浓滤液100ml(pH2～3)※至分液漏斗中※浓氨水碱化pH10～11※氯仿萃取500ml※回收氯仿※总生物碱1.2.3 方法2 钩藤药材粉末100g※80%乙醇0.1%盐酸(25℃浸泡12h)※80%乙醇0.1%盐酸(700ml)60℃温浴3h※抽滤※合并滤液(60℃减压回收乙醇)※酸水(0.1%盐酸)浓缩※浓缩液100ml(pH2～3)※至分液漏斗中(浓氨水碱化pH10～11)※氯仿萃取500ml※回收氯仿※总生物碱1.3 钩藤总生物碱分离条件的选择 通过对各种方法的比较,本实验主要以阳离子树脂作为主要分离材料,研究不同型号阳离子树脂对生物碱的吸附量、吸附力强弱以及洗脱条件的摸索,选择最佳分离总生物碱的工艺。样品液制备:根据提取方法2提取钩藤粉末200g得800ml酸溶液1.3.1 739型强酸性阳离子树脂 柱直径:5cm;树脂用量:约500g。过程:树脂预处理※上样※蒸馏水洗至中性※95%乙醇0.25%氨水洗脱约5000ml※回收乙醇※生物碱0.5407g。1.3.2 001×7型强酸性阳离子树脂 柱直径:5cm;树脂用量:约500g。过程:树脂预处理※上样※蒸馏水洗至中性※95%乙醇0.25%氨水洗脱5000ml※回收乙醇※生物碱0.5527g。1.4 展开剂 样品1:无水乙醇溶解;环己烷-乙醚-乙酸乙脂:8:1:1:0.1;样品2:无水乙醇溶解;氯仿-醋酸乙脂-甲醇:10:4:1;样品3:氯仿溶解;氯仿-丙酮:5:4展开;样品4:氯仿溶解;氯仿-丙酮-二乙胺:5:4:1;展开距离:12cm。2 结果2.1 层析(TLC)检测中不同的展开剂对Rf值的影响 从表1结果可以看出对于第1、第2种展开剂的Rf
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作者单位:海南通用三洋药业有限公司,海南海口 570312.较小,并不能把总生物碱中的各种生物碱完全分开,而第4种展开系统的Rf太大,各类生物碱也未完全分离,而第3种展开剂系统较为理想。表1 不同展开剂对Rf值的影响组别Rf值样品10.22样品20.20样品30.45样品40.752.2 钩藤总生物碱不同提取条件选择的结果 结果显示两种实验方法并无明显性差异,见表2。第1种方法虽然在总生物碱提取率方面高于第2种,但其因是加热提取就可能提取出更多的杂质或破坏生物碱,而第2种方法提取温度低,不破坏生物碱结构,杂质少。表2 同提取溶剂温度对提取效果的影响组别溶剂总生物碱量方法195%乙醇0.6047g方法280%乙醇0.5531g2.3 钩藤总生物碱不同分离条件选择的结果 由表3可见739型强酸性阳离子树脂吸附生物碱量少,吸附不稳定,洗脱出来时杂质多,不是理想的分离材料。001×7型强酸性阳离子树脂也能吸附分离大部分的原料药中的生物碱,杂质也能洗脱掉。所以,用0.1%盐酸80%乙醇作为提取溶剂,以001×7型强酸性阳离子树脂提取、分离总生物碱是一种经济简便、效率较高的方法。表3 不同型号阳离子树脂对生物碱的吸附分离组别总生物碱739型强酸性阳离子树脂1.5042g001×7型强酸性阳离子树脂2.4377g
3 讨论3.1 钩藤总生物碱不仅在强酸性阳离子树脂上吸附力大,而且在弱酸性阳离子树脂上也是如此[2],本专
题中的洗脱方式洗脱都比较慢,因此需要改变一种洗脱方法。3.2 在从树脂中洗脱杂质时,最初只用蒸馏水洗脱并未能把杂质完全洗脱下来,在水洗完后再用乙醇浸泡洗脱,就能把大部分杂质除去,或者把树脂从柱上拿下,放在烧杯中乙醇清洗,更易除去杂质而不损失生物碱。3.3 以上薄层层析的定性分析时,喷改良碘化铋钾显色不持久,可再喷60%的硫酸增强显色,因为在酸性条件下生物碱才能与碘化铋钾反应完全。3.4 生物碱的提取溶剂有多种,但非极性溶剂如氯仿、乙醚作为提取溶剂其毒性大且不安全,因此采用0.1%盐酸作为钩藤总生物碱的提取溶剂,就能提取大部分的生物碱,而且乙醇也较容易回收、经济等。
参考文献:[1]王瑞俭,孙广仁,孙宝民,等.钩藤碱提取工艺研究.吉林林学院学报:1998,2:49～51.[2]周文华,杨辉荣,岳庆磊.生物碱提取和分离方法的研究新进展.当代化工,2003,2:54～57.收稿日期:2005-12-02
(上接第128页)的。而近年来在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌中又发现
质粒介导的AmpC酶。往往处于持续高水平状态,而且常规的青霉素类、三代头孢菌素和头霉素类为耐药。由于对检测质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶没有相应标准[3],如果是只靠表型的方法是不能够确认是
否产AmpC酶。因为对于一种细菌来说,对付抗生素不止有一种机制,而别的机制也可能产生同样的耐药表型[4]。所以对于表型结果高度怀疑产AmpC酶的细
菌,只有进一步做三维试验和β-内酰胺酶抑制剂效应试验来明确诊断。目前国内相关的报道革兰阴性菌AmpC酶的检出率不高[5,6],实验室应重视这方面
的工作,及时、准确地检测细菌AmpC酶,以防其通过质粒进行传递,引起医院感染的暴发流行。
参考文献:[1]ThomsonKS,SandersCC.Detectionofextended-spectrumβ-lactamasesinmembersofthefamilyEnterobacteriaceae:comparisonofthedouble-diskandthree-dimensionaltests[J].AntimicrobAgentsChemother,1992,36:1877～1882.[2]罗兰,廖康.肠杆菌科菌持续高产AmpC酶的检出及耐药分析[J].临床检验杂志,2004,22(1):41.[3]管希周,罗燕萍.高产AmpC酶肺炎克雷伯菌的临床报道[J].中华医院感染学杂志,2004,14(4):461～464.[4]管希周,刘又宁.质粒介导的AmpC酶研究进展[J].中华医院感染学杂志,2004,14(6):713～715.[5]章清,魏丽,魏光美,等.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌质粒β-内酰胺酶检测[J].中华医院感染学杂志,2004,14:328～330.[6]罗兰,廖康,栩建美,等.肠杆菌科菌持续高产AmpC酶的检出及耐药分析[J].临床检验杂志,2004,22:41～42.收稿日期:2005-08-31
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