小白鼠骨髓细胞染色体制备
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实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
内容与方法
1、动物预处理：取材前 3~4小时，腹腔注射 0.01%的秋水仙素。
2、取材：处死小白鼠，剥取股 骨，暴露骨髓腔，用4~5ml KCl 冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，定容 至6ml。
4、预固定：加1mlCarnoy 固定液混匀，配平，离心 1000rpm/8分钟。
3、低渗：37度恒温水浴30分钟 ➢在酒精灯火焰过火2~3次， ➢做记号，凉干，染色
作业与思考题
1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞 染色体中期分裂相。
2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液 各起什么作用？
3、简述实验中应注意那些关键问题？
目的与要求
1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的 方法；
2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。
实验原理
➢ 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞 数量较多。
➢ 秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于 增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以 收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。
5、固定：弃上清，再加 Carnoy 固定液至6ml刻度， 悬浮，静置20分钟，离心 同上。
6、制片：去上清液,加少量固定液， 混匀，滴片，
7、染色：Giemsa染色10分钟
取材：椎脱臼处死小白鼠，剥取股骨。
小白鼠骨骼标本
收集细胞：
➢ 暴露骨髓腔，
➢ 反复冲洗骨髓腔获得 骨髓细胞，
➢ 收集到离心管中,
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作和观察-医学资料
可见中西医学，一个是以“功能人” 为概念 的独特 的哲学 医学理 论体系 ，一个 是以“ 解剖人 、肉体 人”为 概念的 新兴的 现代医 学科学 理论体 系，二 者都不 是以完 整人为 研究对 象的科 学，从 理论讲 二者都 不是科 学的， 势必影 响各自 发展。 事实也 证明这 一切， 中医长 期停滞 不前、 疗效也 不确实 。西医 尽管发 展到目 前的基 因分子 层次， 但疾病 发病率 居高不 下，对 绝大部 分疾病 发病原 因认识 不清、 发病机 理弄不 明白， 治疗受 到制约 ，在小 小SAR S、禽 流感面 前竟束 手无策 ，在糖 尿病、 癌症、 心脑血 管疾病 、尿毒 症等相 当多疾 病面前 更是不 得不求 助或借 助中医 治疗。 一个是 疗效不 确实， 一个是 有些甚 至相当 多疾病 无法治 疗，这 就是中 西医学 结合的 缘由。 然而， 由于二 者是两 套理论 、两股 道上跑 的车， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。故 出现西 医对治 疗不了 的疾病 只好求 助中医 ，而中 医则往 往采用 西医诊 断中医 治疗， 以及中 西治疗 法一块 用的局 面。
遗传学实验
小鼠骨髓细胞染色体标本 制作与观察
实验目的 实验原理 实验用品 实验步骤 绘图 思考题
实验目的
掌握动物骨髓染色体标本制备基 本程，了解操作步骤的原理
实验原理
小鼠骨髓细胞中的造血干细胞是 生成各种血细胞和原始细胞，具有高 度的分裂能力，本实验采用这一材料， 通过前处理，低渗，固定，制片，染 色等步骤制得染色体标本，可观察到 许多处于分裂中期的染色体，可以进 行染色体组型分析。
实验用品
1．材料：小白鼠 2．器具：注射器（1ml,5ml） 剪刀 镊子
小白鼠染色体标本的制作染色与观察
小白鼠染色体标本的制作染色与观察染色体是生物体内的遗传物质DNA和蛋白质的组合体，通过对染色体的观察可以了解生物种群的遗传信息和进化变化。
染色体观察在遗传学、病理学等领域具有重要的应用价值。
本文将介绍小白鼠染色体标本的制作方法以及染色和观察的步骤。
1.小白鼠染色体标本的制作方法制作小白鼠染色体标本的过程主要包括取材、处理和固定等步骤。
（1）取材选择健康的小白鼠，尤其是发育期的小白鼠，取得其骨髓或肝脏等组织。
取材时要注意卫生和无菌操作，以保证样品的质量。
（2）处理将取得的骨髓或肝脏等组织放入离心管中，加入等体积的生理盐水悬浮液，并在其中加入适量的KCl溶液进行渗透，使细胞膜变得脆弱，易于裂解释放染色体。
（3）固定将处理后的细胞悬浮液滴到已经消毒的玻璃片上，然后迅速将玻璃片倾斜，让细胞悬浮液自然扩散开来。
待其固定后，用甲醛进行固定处理，固定时间一般为5-10分钟。
2.小白鼠染色体染色的步骤（1）裂解将固定的标本玻璃片在室温下迅速加热至约60℃的热板上，使染色体细胞裂解释放出染色体。
裂解时间一般为5-10分钟。
（2）染色将裂解后的细胞标本浸泡在浓度适当的染色液中，常用的染色液有乔治染色液、甲酸-吡啶染色液和乙酸酒精染色液等。
对于小白鼠染色体标本的染色，乔治染色液是较为常用的选择。
（3）洗涤染色后的标本需要进行洗涤步骤以去除多余的染色液和固定剂。
使用生理盐水或磷酸缓冲液进行反复洗涤，直到洗涤液清澈。
3.小白鼠染色体观察的步骤在染色体标本制作和染色之后，我们可以通过显微镜进行小白鼠染色体的观察，并对染色体进行测量和特征描述。
（1）显微镜观察将染色后的标本玻璃片固定在显微镜载玻片上，使用显微镜进行观察。
观察过程中可以选择不同倍数的镜头以获得更详细的图像。
（2）测量和特征描述通过观察染色体在显微镜下的形态和结构，我们可以测量染色体的长度、形状等参数，并对染色体的特征进行描述，如染色体数量、着丝点的位置等。
总结：小白鼠染色体标本的制作染色与观察是一项重要的生物实验技术，可以帮助我们了解生物的遗传特征和疾病的发生机制。
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片
实验一 小白鼠骨髓细胞染色体制片（直接法）
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
一、原理
• 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分 裂的组织和细胞悬液中得到。最常用的途径是 从骨髓细胞、血淋巴细胞和组织培养的细胞中 制备染色体。在骨髓细胞中，有丝分裂的指数 是相当高的，因此可以直接得到中期细胞而不 必象血淋巴细胞或其它组织那样要经过体外培 养，主要的中期相来自于细胞系统，也来自于 各种骨髓细胞。以骨髓为材料进行染色体研究 的优点是不需要培养，细胞数目越多，分裂数 目高，并能真实反映体内真实情况。
四、实验步骤与方法
四、实验步骤与方法
5.固定：沿管壁加５毫升新鲜卡尔诺固定液，马 上散细胞团，使其在固定液中悬浊均匀。 1000rmp离心５分，去上清液，即第一次固定。 同样方法固定三次，留沉淀。 6.滴片： • (1)在离心管底细胞团中再加少量（0.5ml）新 鲜固定液，搅匀制成细胞悬浊液。 • (2)将预先泡在75%酒精的广口瓶里的载玻片取 出，火焰烤干后，置于4℃冰箱中冷藏备用。 取出时轻甩玻片上的水，立即滴悬浊液2~3滴， 空气干燥。
四、实验步骤与方法
7.姬姆萨染色 • (1)配制染液：用缓冲液PBS（1升蒸馏水 加磷酸二氢钾9.08克、磷酸氢二钠 9.50 克 PH=6.8）配成2%姬姆萨染色液。 • (2)待玻片干燥后，迅速移到盛有染液的 染色缸中放置10分，然后水洗。
四、实验步骤与方法
8.镜检：先用低倍镜（×200-×400）找出比较 清晰而分裂相较好的染色体，然后用高倍油 浸镜下详细观察染色体的数目、形态等。拍 照，洗相。 9.核型分析：按同源染色体的相对长度、着丝 点位置等特征依次排常染色体，最后排是直接从骨髓中取出细胞，经压 片法或空气干燥法制片。为了提高有丝分裂的 指数，在动物实验时，可在取材前经腹胚注射 有丝分裂的抑制剂，一般常用秋水仙素。
试验六 小白鼠骨髓细胞染色体制备及观察
6．加Giemsa染液染色8－10min，流水冲去 染液（注意水流不可急，细流冲去即可）， 干燥（晾干），观察，可见分散良好的染 色体。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
小白鼠的保定和注射
五．结果与讨论
1．结果： （1）．选取分散良好的染色体绘实物图，上 传图片1幅）。 （2）．染色体计数（2n=40）。 2．讨论： （1）．实验前注射秋水仙素的作用？不作此 步会怎样？ （2）．为何要用冷冻片？烘烤片的作用？
小鼠骨髓细胞染色体
试验六 小白鼠骨髓细胞染色 体制备及观察
一．实验目的：
1．学习小鼠骨髓细胞染色体制备方法。
2．观察骨髓细胞染色体，计数染色体。
二．原理：
活跃增值的组织细胞内染色体可用于制片分 析，秋水仙素（或以对二氯苯代之）可使 细胞分裂停滞于分裂中期，经染色处理， 可得到清晰的中期染色体标本。
三．材料试剂
1．材料：小白鼠；ห้องสมุดไป่ตู้
2．试剂：Giemsa染色液，0.4％KCl，2％柠 檬酸钠，固定液（甲醇：冰乙酸＝3：1）。
四．操作步骤
1．实验前4－8h小鼠腹腔注射秋水仙素1ml （0.14mg/ml）,(据小鼠体重用量调整)或1ml饱和 对二氯苯。 • 2．脱臼处死小鼠，取后肢胫骨和股骨，去两端。 用细针头注射器吸取2％柠檬酸钠1ml，反复冲洗 骨髓腔5次，将冲洗液（离心管中）加入0.4%KCl 低渗10min（8ml,37℃）。
• 3．离心（1000rpm，8min）,去上清液，加固定 液5ml（注意缓慢加入）。充分吹打，使沉淀块 分散，静置10min，再离心10min，弃上清液， 重复一次。
4．用约2ml固定液悬浮骨髓细胞成悬液（依 沉淀量定）。
5．取冷冻载片，距载片15cm高度滴下悬液 （取悬液前吸打均匀），单向吹气展开， 酒精灯上文火烘干。
实验十四小鼠骨髓细胞染色体制片
实验十四
小鼠骨髓细胞染色体 制片
实验目的
• 掌握制作动物骨髓细胞染色体标本的方 法，练习染色体制片技术。
• 了解小鼠染色体的形态和数目。
实验原理
• 染色体（chromosome）在间期细胞中见 不到，它只在分裂细胞中出现。因此从 理论上讲，任何处于分裂状态的细胞都 可以作为染色体标本制备的材料。染色 体在分裂中期是最典型的。用适量的秋 水仙素溶液注入动物体内，可抑制分裂 细胞纺锤体的形成，使分裂终止在中期， 积累大量的中期细胞，再通过常规的制 片方法，可获得动物染色体标本。
• 收集细胞：将股骨放入培养皿中（加入生理盐 水）用止血钳夹碎，吸取上清夜，移入离心管， 1500rpm离心8分钟，留沉淀。
• 低渗处理：用预热氯化钾溶液6毫升，轻轻混 匀，37°C保温20分钟，加入新鲜固定液1毫升， 预固定。
实验方法
• 沉淀加5毫升固定液1500rpm离心8分钟，留沉 淀。（反复2次）
实验结果
实验报告与思考题
• 根据实验过程分析实验结果，分析原因， 总结经验。
• 制备染色体标本时，为什么用秋水仙素， 作用是什么？
• 制片过程中，为什么要进行固定？
实验材料与试剂
• 材料：小白鼠 • 试剂：秋水仙素，氯化钠低渗液，甲醇-
冰乙酸（固定液）生理盐水，姬姆萨染 色液。
实验方法
• 选择体重18-20克的健康小白鼠，在实验前3-4 小时注射秋水仙素（2ug/g体重）。
• 用颈椎脱臼法处死小白鼠，从背部剪开肢体皮 肤和肌肉，取出完整的股骨，用生理盐水洗净。
• 制备细胞悬液：沉淀加入0.5毫升新鲜固定液， 混匀制成细胞悬液。
• 滴片：用吸管吸取少量悬液，在离载玻片30cm 高度滴2滴于载玻片上，沿斜面吹散，再酒精 灯上微烤，晾干。
小鼠骨髓细胞染色体 制片
实验目的
• 掌握制作动物骨髓细胞染色体标本的方 法，练习染色体制片技术。
• 了解小鼠染色体的形态和数目。
实验原理
• 染色体（chromosome）在间期细胞中见 不到，它只在分裂细胞中出现。因此从 理论上讲，任何处于分裂状态的细胞都 可以作为染色体标本制备的材料。染色 体在分裂中期是最典型的。用适量的秋 水仙素溶液注入动物体内，可抑制分裂 细胞纺锤体的形成，使分裂终止在中期， 积累大量的中期细胞，再通过常规的制 片方法，可获得动物染色体标本。
• 收集细胞：将股骨放入培养皿中（加入生理盐 水）用止血钳夹碎，吸取上清夜，移入离心管， 1500rpm离心8分钟，留沉淀。
• 低渗处理：用预热氯化钾溶液6毫升，轻轻混 匀，37°C保温20分钟，加入新鲜固定液1毫升， 预固定。
实验方法
• 沉淀加5毫升固定液1500rpm离心8分钟，留沉 淀。（反复2次）
实验结果
实验报告与思考题
• 根据实验过程分析实验结果，分析原因， 总结经验。
• 制备染色体标本时，为什么用秋水仙素， 作用是什么？
• 制片过程中，为什么要进行固定？
实验材料与试剂
• 材料：小白鼠 • 试剂：秋水仙素，氯化钠低渗液，甲醇-
冰乙酸（固定液）生理盐水，姬姆萨染 色液。
实验方法
• 选择体重18-20克的健康小白鼠，在实验前3-4 小时注射秋水仙素（2ug/g体重）。
• 用颈椎脱臼法处死小白鼠，从背部剪开肢体皮 肤和肌肉，取出完整的股骨，用生理盐水洗净。
• 制备细胞悬液：沉淀加入0.5毫升新鲜固定液， 混匀制成细胞悬液。
• 滴片：用吸管吸取少量悬液，在离载玻片30cm 高度滴2滴于载玻片上，沿斜面吹散，再酒精 灯上微烤，晾干。
小鼠骨髓染色体标本的制备.
7、再固定：再加入固定液2－3滴，打匀。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
8、制片：用滴管吸细胞悬液，从20－30cm高度滴在冰水预浸泡 的洁净载玻片上，立即用口吹散，在酒精灯上过几次或吹风 机吹干。
9、染色：Giemsa染液染色7 min、细水冲洗、晾干。
10、镜检：低倍镜下找到分散良好的分裂相后，换高倍镜、油 镜、认真观察。
四、作业 1 为什么要低渗处理？ 2 观察2-3个小鼠骨髓细胞染色体的分裂
小鼠骨髓染色体标本的制备
实验五、小鼠骨髓染色体标本的制备
一、实验目的： 掌握小鼠骨髓染色体标本的制备方法。
观察小鼠染色体的形态和数目。 二、实验原/L-1KCI进行低渗后，经 固定、染色，可见到分散的染色体。
三、实验步骤：
1、取材：以颈椎脱臼法处死小鼠，取两腿股骨，剔净肌肉，擦 去附着在上面的血污，剪取两端股骨头，暴露骨髓腔，用注 射器吸取KCL(0.075mol/L)溶液，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液。
相，数一数有几条。
2、低渗处理：加KCL至2/3管，用吸管打匀使细胞悬浮于低渗液 中，放入37℃恒温水浴锅中，静置25min。（吹打不宜过猛）
3．预固定：加入固定液5滴吹打混匀。
4．离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
5、固定：沿离心管壁加入固定液5ml打匀，室温下固定10min。
6、再离心：2000转/分，离心5min，弃上清液，留下沉淀物。
实验九小鼠骨髓细胞染色体标本制备
固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、 Giemsa染液、0.01M磷酸缓冲液 (PH6.8)，0.85%生理盐水。
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
四、实验步骤
1、预处理：实验 。作用：
2、处死动物：断颈处死小白鼠， 解剖小鼠内生殖器官，鉴别雌雄性别
3、取股骨：剥取股骨，剔去肌肉 组织，剪去两端的股骨头。
11、滴片：用吸管吸取细胞悬液， 滴在预冷的载玻片上，在酒精灯火焰 上微微加热，室温晾干。预冷载玻片 的作用：
12、染色：10% Giemsa染液染色30分 钟。
13、镜检：低倍———高倍 。
五、作业
1、选择染色体清晰，分散好的 中期分裂相，计数染色体，显微摄影、 并打印出照片。
2、分析成功或失败的原因。
4、取骨髓：注射器吸取0.6ml生 理盐水, 针头插入股骨一端,反复冲 洗骨髓到10ml的离心管中。
5、低渗：加入4.4ml的 0.075MKCl溶液,在37oC水浴中低渗40 分钟，中间（约20分钟时）用吸轻轻 管吹打，使细胞充分低渗。低渗作用
6、离心：离心之前加1ml固定液 并用吸管轻轻吹匀，进行预固定；
同时秋水仙素作用能使染色体缩短、 变粗。
三、实验材料、器具和药品：
1、材料： 小白鼠 2、器具：
注射器（1ml,5ml）、5号针头、 解剖盘、解剖剪、镊子、玻璃吸管、 10ml刻度的离心管、离心机、载玻片 盖玻片、显微镜、滤纸、擦镜纸、棉 花、量筒、天平、恒温水浴锅等。
3、药品： 0.01%秋水仙素、0.075MKCl、
一、实验目的
1、掌握哺乳动物（小白鼠）骨 髓细胞染色体制片技术。
2、并对动物染色体进行观察。
二、实验原理
1、小鼠四肢骨内骨髓细胞中的造 血干细胞是生成各种血细胞的原始 细胞，具有高度的分裂增殖能力。
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腹腔注射0．01％ 秋水仙素0．3--0．4ml。注意不要伤及内脏。 2、取股骨 取股骨：用一只手的拇指和食指按住小鼠 取股骨 的头部，另一只手 拉住它的尾巴，用 力向后拉断其颈椎。处死后立即用剪 刀剪开后腿上的皮毛，取出小鼠的股 骨，剔除上面的肌肉，洗净。
3、取骨髓细胞 取骨髓细胞：断股骨两端,用注射器吸取 取骨髓细胞 2%的柠檬酸钠冲洗细胞入 离心管中,反复至股骨泛白, 定容4 ml。
4、低渗处理 低渗处理：离心(3000转／分转4分钟),弃上清液, 低渗处理 加0.075MKCL至5 ml,充分混匀, 39℃水浴25分钟. 5、固 固 定：离心, 弃上清液,加3:1固定液(甲醇: 冰醋酸)至5 ml, 充分混匀, 39℃水浴 10分钟,离心,弃上清,重复用1:1固定 液(甲醇:冰醋酸)再固定一次,水浴10 ( : ) , 10 分钟. 6、滴 滴 片：离心, 弃上清液, 加1:1固定液2-3滴, 混匀,滴1-2滴于冰冻玻片上. 7、染 染 色：干燥后用Giemsa染液扣染10分钟, 冲洗后烤干.
小白鼠骨髓细胞染色体制备
【目的和要求】
1、掌握动物骨髓细胞染色体玻片标本的制备方 法。 2、观察染色体的形态特征，统计小白鼠体细胞 中染色体数目。
【基本原理】
骨髓细胞的制片技术基本的程序较为简便。并且骨髓 细胞中，有丝分裂的指数相当高. 秋水仙素可抑制微管聚集,纺锤丝不能形成,使染色体停 留于中期时像,具有最典型形态. 低渗液可以使细胞中的染色体充分散开,便于记数和观 察.
【材料和器材】
1、实验材料：两个月龄的健康小白鼠 2 2、器 具：解剖器具(剪刀、镊子等)、吸管、 ( ) 离心机、 水浴锅、显微镜、注射器 等。 品：秋水仙素、 甲醇、冰醋酸、 Giemsa染液、0.075MKCL、 2%柠檬酸钠等。
3、药
【实验方法和步骤】
1、预处理 预处理：实验前3---4小时，取健康小鼠，每只 预处理
8.观察 观察:高倍镜下观察,也可在油镜下观察.什么? 2、实验过程中的关键步骤有哪些?要如何把握 才能确保实验的成功？
3、取骨髓细胞 取骨髓细胞：断股骨两端,用注射器吸取 取骨髓细胞 2%的柠檬酸钠冲洗细胞入 离心管中,反复至股骨泛白, 定容4 ml。
4、低渗处理 低渗处理：离心(3000转／分转4分钟),弃上清液, 低渗处理 加0.075MKCL至5 ml,充分混匀, 39℃水浴25分钟. 5、固 固 定：离心, 弃上清液,加3:1固定液(甲醇: 冰醋酸)至5 ml, 充分混匀, 39℃水浴 10分钟,离心,弃上清,重复用1:1固定 液(甲醇:冰醋酸)再固定一次,水浴10 ( : ) , 10 分钟. 6、滴 滴 片：离心, 弃上清液, 加1:1固定液2-3滴, 混匀,滴1-2滴于冰冻玻片上. 7、染 染 色：干燥后用Giemsa染液扣染10分钟, 冲洗后烤干.
小白鼠骨髓细胞染色体制备
【目的和要求】
1、掌握动物骨髓细胞染色体玻片标本的制备方 法。 2、观察染色体的形态特征，统计小白鼠体细胞 中染色体数目。
【基本原理】
骨髓细胞的制片技术基本的程序较为简便。并且骨髓 细胞中，有丝分裂的指数相当高. 秋水仙素可抑制微管聚集,纺锤丝不能形成,使染色体停 留于中期时像,具有最典型形态. 低渗液可以使细胞中的染色体充分散开,便于记数和观 察.
【材料和器材】
1、实验材料：两个月龄的健康小白鼠 2 2、器 具：解剖器具(剪刀、镊子等)、吸管、 ( ) 离心机、 水浴锅、显微镜、注射器 等。 品：秋水仙素、 甲醇、冰醋酸、 Giemsa染液、0.075MKCL、 2%柠檬酸钠等。
3、药
【实验方法和步骤】
1、预处理 预处理：实验前3---4小时，取健康小鼠，每只 预处理
8.观察 观察:高倍镜下观察,也可在油镜下观察.什么? 2、实验过程中的关键步骤有哪些?要如何把握 才能确保实验的成功？