植物组织中硝态氮含量的测定
植物中硝态氮的测定方法
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
实验12 植物体内硝态氮含量的测定
实验12 植物体内硝态氮含量的测定植物对氮的吸收与利用，对于其生长发育和产量形成具有重要的影响。
氮素如果以亚硝酸盐或硝酸盐的形式被植物吸收，则称为植物体内的硝态氮(N-NO3-)含量。
在植物体内量测硝态氮含量，不仅可以为揭示植物氮素代谢的特点和生理机制提供数据，还可以指导植物耐受性研究和农业生产。
1 实验原理硝态氮是植物生长发育和产量形成的重要因素，在不同发育阶段的植物中，其含量也相应发生变化。
硝态氮含量可采用摄谱光度法和电化学法测定，其中电化学法的准确性更高且应用范围更广。
本实验是利用电化学法，根据硝酸与还原剂还原成亚硝酸或氨态氮时的电离电流大小的差异，测定植物体内的硝态氮含量。
2 实验步骤2.1 样品处理取适量新鲜样品，如茄子、番茄等，去皮、去籽并洗净。
将样品碾磨成泥状，加入特定的醋酸钾(KCH3COO)提取液(醋酸钾10 g/L)，摇匀，封口密封24 h在4℃下提取。
离心后，取上清，用玛瑙瓶收集。
将所需植物红单色隐花苣、矮生豌豆、楸树等的种子按5 g每袋加入15 mL的海绵培养体，在恒温箱中翻转培养6 d至10 d。
2.3 制备电极制备硝酸电极(NH4NO3-SCE单接)和参比电极，使用前需打磨至光亮。
取同样量的植物提取液和硝酸标准溶液，加入还原剂及缘草酸进行反应。
反应完毕后，测量1 min内的电流，计算硝态氮含量。
2.5 数据处理及统计按照硝态氮含量公式计算并汇总数据，进行ANOVA方差分析及t检验。
3 注意事项3.1 样品应尽量新鲜，提取液操作要快，以避免样品中硝态氮被还原。
3.2 试剂应准确、无杂质、无缺损，若出现异常，应立即更换。
3.3 电极应保持干燥、光洁，并调整标定。
3.4 电化学池应密封，避免气泡干扰或溢液现象。
4 结果分析实验结果如下表所示：在统计学分析中，各组数据的p值均小于0.05，表明差异极显著，比较表明楸树叶片硝态氮含量最高，其次是红单色隐花苣和矮生豌豆，而茄子和番茄中硝态氮含量最低。
实验8 植物硝态氮的比色测定
实验8 植物硝态氮的比色测定一、目的学会植物组织中硝态氮含量的测定方法，了解植物组织中硝态氮的含量。
二、材料用具及仪器药品花生植株、分光光度计、离心机、研钵、容量瓶、试管、移液管、亚硝酸钠20%醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。
混合粉剂配法：硫酸钡100g、a一萘胺2g、锌粉2g、对氨基苯磺酸4g、硫酸锰10g、柠檬酸75g。
上述各试剂分别研细，再分别用等分的硫酸钡和其他各试剂混合成无颗粒状灰白色的均匀体，粉剂宜在黑暗干燥条件中保贮，七天后方可使用。
三、原理硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸,a一萘胺结合，形成玫瑰红色的偶氮染料，其颜色深浅与氮含量在一定范围内成正比关系，主要化学反应式如下：四、方法步骤1.标准曲线绘测：取恒重亚硝酸钠（NaNO2）0.6071g溶于1升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液，随后稀释成2、4、8、10ug/ml。
分别吸取2ml转入50ml有塞试管中，加冰醋酸溶液18ml。
并作试剂对照，再加入0.4 g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，将试管中悬浊液过量倾入离心管中，使部分流出管外，白色粉即可去除，离心5分钟（4000rpm）。
取上清液在520nm波长下比色测定，绘制标准曲线，本方法适用范围在20ug ml以内。
2.组织液的提取称取花生功能叶柄0.5克，剪成1—2mm的碎片，充分混匀置于干燥的三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1—3分钟，放置澄清后，取上清液2 ml，再按标准曲线制作方法测定，叶柄中硝态氮含量根据下述公式计算：植物组织中硝态氮含量（ug/g=c.v）式中C为标准曲线上查得的组织提取液所含硝态氮ug/ml).V为1g植物组织所制备的提取液的总体积（ml），如本法为40ml。
五、实验报告计算植物组织中硝态氮的含量。
六、思考题硝酸盐还原成亚硝酸盐的过程需要哪一种酶催化？。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
植物体内硝态氮含量的测定
原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在 碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸 收峰的波长为量呈正比，可直接比 色测定。
材料、仪器与试剂
植物材料：菠菜 仪器：分光光度计；天平（感量0.1 mg）； 试管；刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各1支；50 ml容量瓶；小漏斗（ø 5cm）3个； 玻棒；洗耳球；水浴锅；封口膜；7 cm 定量 滤纸若干；
• 在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含 量。 V NO3 -N含量= (C× 1000 )/W • 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计 算得NO3- —N浓度； • V—提取样品液总量； • W—样品鲜重。
注意事项：
1、一定不要将5%水杨酸-硫酸溶液溅到桌面、
实验步骤 1. 标准曲线的制作
（1）吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入50 ml 容 量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、 40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1 ml，分别放入烘干的 试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再 分别放入0.4 ml 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室 温下放置20 min后，再加入8% NaOH 溶液9.5 ml， 摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm 波长 下测定吸光度。以吸光度为横坐标，硝态氮浓度 为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2.样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备： 取一定量的植物材料，剪碎混匀， 用天平精确称取材料2 g 左右，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。到 时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容 量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 (2)样品液的测定： 吸取样品液0.1 ml放入烘干的试管 中，然后加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室 温下20 min，再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液，待冷 却至室温后，以空白作参比，在410 nm 波长下测其吸 光度。
植物体内硝态氮含量的测定
植物体内硝态氮含量的测定
测定植物体内硝态氮含量的方法可以通过以下步骤进行：
1. 样品准备：选择一定数量的植物组织或器官作为样品，如根、茎、叶等。
将样品收集并保持新鲜。
2. 样品处理：将样品在离子交换树脂柱中进行前处理，使用硝化态氮还原剂将硝态氮还原为氨。
3. 反应体系：将还原后的样品与含有硫酚酸、过硫酸铵等试剂的反应体系混合，形成可测定的化合物。
4. 反应媒介：选择合适的反应媒介来测定反应产生的化合物，如使用紫外光谱法、分光光度法、电化学法等。
5. 检测与测量：使用相应的仪器或设备进行测量和记录，根据每种方法的特点和原理，选择合适的测量方式。
值得注意的是，硝态氮含量的测定方法可能因不同的植物物种和研究目的而有所差异，因此建议在实施前进行相关的文献调研和方法优化。
试验八植物体内硝态氮含量的测定-安徽建筑大学
《环境生物学实验》实验指导书洪桂云鲍立宁王莉编写适用专业：环境生态工程安徽建筑大学环境与能源工程学院2017 年6 月前言《环境生物学实验》是环境生态工程专业的必修课。
本课程是培养学生基本技能、训练实践技能的一个重要教学环节，通过实验使学生对环境生态工程中的生物学原理有一个深入的认识，从而更深刻地理解和掌握专业基本理论和基本知识，并且为日后深入研究污水监测、修复技术提供一种实践技能。
通过本课程学习使学生掌握微生物和植物学实验的基本原理、基本知识和基本实验技能；掌握显微镜的使用、保养，水质生物学检测，微生物的基本形态认识及微生物的培养、分离、染色、计数等基本技能，培养学生独立操作能力；树立理论联系实际的基本思想，养成良好的动手能力，增强创新能力。
本课程共设10个实验，其中显微镜的使用及放线菌、真菌、藻类等微生物形态的观察，水中浮游动物的观察和数量的测定，培养基的制备及灭菌，植物叶绿素提取，植物体内硝态氮含量的测定为验证性试验；空气中微生物的计数，水中细菌总数的检测及水质量评价，植物种子发芽毒性检测，植物体内过氧化物酶对污染物的测定，有机物的微生物降解为综合性实验。
实验技术课的主旨和要求1.1实验技术的主旨任何科学知识和理论都来源于实际的观察和科学实验，这一点对于环境科学更是如此。
实验技术课程是大多数课程的重要组成部分，在实验课上培养起来的科研素质和实验技能，不仅对学生完成学业而且对从事创新性课题研究都具有重要而深远的意义。
实验技能的培养包括：①设计实验，在了解实验原理和目的基础上，逐渐学会自己设计实验；②观察与测量，这是实验过程的主要内容；③实验记录，真实准确地记录实验中每一个数据、每一个细节并且及时进行整理；④分析和解释数据，是处理实验数据的基本功；⑤写作实验报告，是对实验技术过程和实验结果的总结，同时也是提升综合科研素质和实验能力的重要一环。
1.2实验技术课的基本要求1.2.1课前充分准备课前务必做到如下准备①预先仔细阅读实验讲义内容，明确实验目的和实验技术。
植株硝态氮的速测方法
植株硝态氮的速测方法（硝酸试粉比色法）一、试剂配制1、硝粉试剂：称取硫酸钡50克，分成数份，分别与硫酸锰（MnSO4*H2O）5克，锌粉1克，对氨基苯磺酸2克,α-萘胺1克，在研钵中研细混匀，最后与37.5克柠檬酸一起研磨均匀,贮于暗色瓶中,防潮避光.此试粉呈灰白色,若变为粉红色,则不能使用.2、pH5.0柠檬酸缓冲液：称取化学纯柠檬酸4.31克,柠檬酸钠6.86克,溶于500ml水中.(新鲜配制)3、硝态氮标准溶液：称取7.22克分析纯硝酸钾,加水,定容至1000ml,即为1000 ppm(NO2--N)二、标准色阶的配制.1、50ppm硝酸钾溶液配制：取10ml1000ppm硝酸钾,定容至200ml2、加数三、清晨在待测田块中，选取有代表性的植株10-20株的敏感部位，用湿布擦净，剪碎，榨汁备用。
于15ml刻度试管中，加入5 ml柠檬酸，滴入1滴（水稻为2滴）组织液，加入5ml水，摇匀后加入0.2克硝酸试粉,塞紧，纵向摇匀1分钟（200次），静置15分，比色。
（可用硝态氮标准色阶溶液进行同样显色，目测出硝态氮ppm数）四、结果计算。
植株组织液硝态氮含量（ppm）=标准色阶硝态氮ppm*V1\V2（200）V1—显色溶液的ml数V2—所取汁液的ml数1滴=2002滴=100植株中的有效磷速测法(磷钼蓝比色法)一、试剂配制1、1.5%钼酸铵—盐酸溶液：称取钼酸铵1.5克溶于约30ml温水中,冷却后,缓缓加入浓盐酸30ml边加边搅拌,用水稀释至100ml,贮于棕色瓶中.2、2.5%氯化亚锡—甘油溶液:称取氯化亚锡2.5克加浓盐酸10ml,加热促进溶解(如混浊,应过滤)再加甘油90ml.混匀,贮于棕色瓶中,存放暗处,可存半年3、标准磷溶液:称取0.2194克磷酸二氢钾,溶于400ml水中,加入7N硫酸2.5ml(将4.9ml浓硫酸缓缓加入20ml水中)混匀,定容至1000ml,即为50ppm标准磷溶液,制备标准色阶,稀释成5ppm的磷标准溶液即可二、标准色阶配制水三、测定方法于15ml刻度试管中,加入4ml水,滴入1滴组织液,摇匀;加入1ml钼酸铵,摇匀,再加入氯化亚锡甘油1滴,再次摇匀后5-15分后比色.四、结果计算植株磷含量ppm=测得的ppm数*(V1\V2)（100）（1滴=100）植株中钾的测定方法一、试剂配制1.钾试剂母液:称取1克亚硝酸钴钠和6克化学纯亚硝酸钠,溶于14ml水中,加入5ml冰醋酸(乙酸),再用水稀释至20ml,盛于棕色瓶开口放置两天,让有毒气体逸出后备用.放入冰箱可保存2-3周.2.钾试剂稀释液:测定前吸母液5ml,加入溶有15克亚硝酸钠的100ml水中.二、操作步骤于15ml试管中，加入2.5ml钾试剂稀释液,滴入1滴组织液,摇匀后加入1ml异丙醇再摇匀,15分钟后目测,在小试管后衬一张印有5号印刷体的报刊,透过溶液看字迹.若字迹清楚放大表示缺钾(5-10ppm),若字迹模糊尚能看出字迹适中(10-15ppm),看不出字迹表示钾含量充足(20ppm以上)三、结果计算植株汁液钾含量ppm=测出的ppm*(V1\V2)50四、取样部位棉花：定苗前取茎叶混合组织蕾期取主茎顶部下已展开的第三叶片或叶柄花铃期打顶后取主茎下第一叶片或叶柄吐絮期取主茎顶下经一叶片或叶柄水稻：取心叶下第3-5叶鞘或茎节（小麦同）玉米：取下部老叶鞘。
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植物组织中硝态氮含量的测定
目的意义根系吸收的无机态氮，有铵态氮和硝态氯。
植物体内硝态氮合量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。
叶菜类和根菜类中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害人体健康。
测定植物组织硝态氮含量对研究植物氮素营养和农产品安全性均有重要作用。
一、实验原理
本实验采用硝基水杨酸比色法测硝态氮，其原理是在有浓硫酸的条件下NO3-与水杨酸生成硝基水杨酸。
产物硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色，在410 nm处有最大吸收峰，在范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。
二、材料、设备和试剂
1.材料玉米、接骨木、瓜类、葡萄等植株幼苗。
2.设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、滤纸等。
3.试剂
（1）100mg/L硝态氮标准溶液精确称取烘干至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水（无离子水）中，定容至1000ml。
（2）5%水杨酸-硫酸溶液称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中（密度为1.84），搅拌溶解后，贮存于棕色瓶中，置冰箱保存1周有效。
（3）8%氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。
三、操作方法
1．标准曲线的制作
(1)吸取100 mg/L硝态氯标准溶液1m1、2ml、4m1、6m1、8ml、10ml、12m1分别放入10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，使之成为10、20、40、60、80、100、120µg /m1硝态氮的系列标准液。
(2)取8支试管，分别编号为0-7，以0号管加入0.1ml蒸馏水作空白，1-7号管分别吸取上述系列标准溶液0.1ml。
再分别加入0.4ml 5％水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8％NaOH溶液9.5ml，摇勾冷却至室温，以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度，以硝态氯含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
见下表。
2．样品制备称新鲜植物组织l-2g研成匀浆，(或称经70℃烘干磨碎过60目即孔径0.25mm筛的干样100mg)装入20m1具塞刻度试管，加无离子水10-20ml，盖紧塞子，置于45℃恒温水浴浸提1h，其间不断摇动，然后过滤或离心(如含色素需脱色)，滤液备用。
若样品是伤流液，则可直接测定。
3．硝态氮的漓定
吸取样品液0.1m1放入故人编号为8的试管中，其他操作同标准曲线，在标准曲线上可查得硝态氮含量。
表1 水杨酸比色法测硝态氮反应体系
项目管号
0 1 2 3 4 5 6 7 8
硝态氮系列浓度（µg/ml）0 10 20 40 60 80 100 120 样品
各浓度硝态氮用量（ml）水0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 每管含硝态氮（µg）0 1 2 4 6 8 10 12 x 5%水杨酸-硫酸（ml）0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 8%NaOH(ml) 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 9.5 吸光度值（A410）
四、实验结果
样品中硝态氮含量（µg/g）=m x×V/V1×W m x:标准曲线查出测定液中硝态氮含量（µg）
V:样品提取液总体积（ml）
V1:用于测定的样品液（ml）
W:样品鲜重或干重（g）。