用血球计数板计数酵母菌个数的计算方法
血球样板计数实验报告
一、实验目的1. 掌握血球样板计数法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用血球样板计数法对微生物进行计数。
3. 提高对微生物计数结果的分析能力。
二、实验原理血球样板计数法是一种利用显微镜直接计数微生物数量的方法。
该方法适用于各种微生物的计数，如细菌、酵母、真菌等。
计数原理是将一定稀释度的微生物悬液滴加到血球样板计数室中，在显微镜下直接观察并计数。
血球样板计数室由一块特殊的载玻片构成，其上有四条槽构成三个平台，中间较宽的平台被一短横槽隔成两半。
每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格。
每个大方格分为16个中方格，每个中方格又分为25个小方格。
每个大方格中的小方格总数为400个，每个大方格的边长为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm³。
计数时，通常只计数四个四周大方格内的细胞数。
然后求出每个大方格的平均值，即可得出一个大方格中的平均细胞数。
再根据菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。
三、实验材料1. 血球样板计数室2. 显微镜3. 试管4. 吸管5. 微量移液管6. 细胞悬浮液7. 稀释液8. 滤纸四、实验步骤1. 准备工作：将血球样板计数室及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2. 制备细胞悬液：将细胞悬浮液吸取少许，注入试管中，加入适量的稀释液，搅拌均匀。
3. 稀释：根据细胞悬液的浓度，将细胞悬液进行适当的稀释，以便在计数时细胞数适中。
4. 计数：将稀释后的细胞悬液吸取少许，滴加到血球样板计数室的盖片边缘，使培养液自然渗透填满计数室。
等待一段时间，让细胞全部沉降到计数室底部。
5. 观察：将计数板放在显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在的位置，然后转换到高倍镜观察。
计数四个四周大方格内的细胞数，记录下来。
6. 计算结果：根据计数结果和菌液稀释倍数，计算出1ml菌液中的总细胞数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过血球样板计数法，得到酵母菌的计数结果为N个细胞/ml。
血球计数板使用及相关计算
总结：2mm×2mm方格的计数
2mm×2mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。 由于计数室厚度为0.1mm，所以计数区的总体积为0.4mm3。 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，另一种是 25×16型。
1．16×25型的计ຫໍສະໝຸດ 公式为：推导：1mm×1mm方格的计数
1mm×1mm表示计数室的边长，即一个大方格的边长。由于 计数室厚度为0.1mm，所以计数室的总体积为0.1mm3。
1．16×25型的计数公式： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/ 100
×400×10000×稀释倍数
2．25×16型的计数公式： 酵母细胞个数／1mL＝80个小方格细胞总数/ 80
血球计数板 使用及相关计算
计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平 台，中央平台又由一短槽隔成两半其上各刻有一小方格网， 每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为 计数室。
16格×25格
*
*
*
*
25格x16格
#
#
#
#
#
血球计数板的使用方法步骤
1．镜检。在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物， 则需清洗，吹干后才能进行计数； 2．加样。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专用的盖玻 片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻片边缘，让培 养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防止产生气泡，多余 培养液可用滤纸吸去； 3．计数。稍待片刻（约5min），待酵母菌细胞全部沉降到计 数室底部后，将计数板放在载物台的中央，先在低倍镜下找到 计数室所在位置后，再转换高倍镜观察、计数并记录。 4．清洁。血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷， 洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、 丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残 留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为 止。
解惑血球计数板
解惑血球计数板“培养液中酵母菌种群数量的变化”是新课程标准增设的一个探究活动，旨在培养学生建构种群增长的数学模型，并用数学模型解释种群数量变化的能力，具有多方面的意义和价值。
但这项探究历时长，涉及的技术多而复杂，教科书通常仅作简要的提示，因此具体实施过程中需要教师提供或师生共同查阅相关资料，如血球计数板的使用就是学生学习中不容回避的障碍之一。
但不同版本的教科书、大学教材、网络资源及某些中学教辅书籍说法不一，甚至还不乏谬误，易给师生的教与学造成混乱，甚至误导。
笔者通过多方求证和实践，力图就血球计数板使用过程中经常遇到的一些困惑逐一探讨，以期达成共识并解除诸多疑惑。
1 规格之惑关于探究活动中血球计数板的选用，人教版、浙科版教材推荐使用2mm×2mm方格，苏教版推荐使用1mm×1mm方格。
后者在市场上较为常见，多数大学教材也多以此规格为例。
以上数据是指计数板计数平台上大方格的规格，也即计数室的边长。
由于方格网距盖玻片0.1mm，因此，这两种计数室的容积分别为0.4mm3(4×10-4mL)、0.1mm3(1×10-4mL)。
当镜检所选中格并计数完毕后，推算出整个计数室细胞总数，除以计数室容积就可获得所测培养液中酵母菌的种群密度。
2 公式之惑(以1mm×1mm规格计数板为例)每种规格的血球计数板的计数室通常与又有两种规格，一种是25×16型，即大方格中含25个中格，每个中格又分为16个小方格，因此每个大方格(计数室)中含有25×16个小方格；另一种为16×25型，即大方格中含16个中方格，每个中方格又分为25个小方格(2004年版河北少儿版教科书第82页示意图在表示方格划分方面存在失误)，每个大方格(计数室)中含的小方格数为16×25。
显然，尽管规格不同，但两类计数室均含有400个小方格(25×16或16×25)。
21酵母菌的计数
为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学
进行了如下操作。其中操作不正确的是： C
A.吸出培养液进行计数之前将试管轻轻震荡几次 B.用滤纸吸去血球计数板边缘多余的培养液 C.在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 D.待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台 中央，在显微镜下观察
1. 了解血球计数板的构造和使用方法 2. 学会酵母菌的计数方法
一、酵母的应用和危害
偏酸性含 糖环境
利用最早 兼性厌氧
用途广
酵母的应用
酵母菌是人类应用比较早的微生物。 在食品方面——酿酒、制作面包、生产调味品等。 在医药方面——生产酵母片、核糖核酸、核黄素、细胞 色素C、B族维生素、乳糖酶、脂肪酶、氨基酸等。 在化工方面——使石油脱腊、以石油为原料生产柠檬酸 等。 在农业方面——生产饲料（例如单细胞蛋白SCP）。 在生物工程方面——作为基因工程的受体菌。
酵母菌的危害
腐生性酵母菌能使食物、纺织品和其他原料腐败变质； 少数耐高渗的酵母菌和鲁氏酵母、蜂蜜酵母可使蜂蜜和 果酱等败坏； 有的酵母菌是发酵工业的污染菌，影响发酵的产量和质 量； 某些酵母菌会引起人和植物的病害，例如白假丝酵母可 引起皮肤、粘膜、呼吸道、消化道等多种疾病.
二 检测原理
血球计数板是由一块比普通载玻片厚的 特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽， 构成三个平台。中间的平台较宽,其中间又 被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一 个方格网。方格网上刻有9个大方格,其中 只有中间的一个大方格为计数室，供微生 物计数用。这一大方格的长和宽各为1mm， 深度为0.1mm，其体积为0.1mm。
三 操作步骤
4. 计数时，规格为25格×16格的计数板，除 了取其4个对角方位外，还需再数一个中格 (即80个小方格)的酵母菌数。
利用血球计数板对酵母菌计数的
• 4．活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时， 即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个 酵母细胞。
酵母菌的血球计数板 计数技术
1 实验目的 利用血球计数板对酵母菌数量进行液、吕氏碱性美蓝（亚甲蓝） 染液） 2.2 器材和仪器：显微镜、血球计数板、镊子、厚盖玻 片（血盖片）、移液枪、吸水纸、擦镜纸4
• 3 实验原理及方法
• 血球计数板计数是一种常用的细胞计数法
血球计数板的使用注意事项
结果记录：
• 微生物名称
总菌数
个/ml
第一个 第二个 第三个 第四个 第五个
第一次 测定 第二次 测定
平均
中格
中格
中格
中格
中格
二、血球计数板的使用方法步骤
• 1．镜检计数室。在加样前，先对计数板的计数室进行镜 检。若有污物，则需清洗，吹干后才能进行计数；
• 2．加样品。将清洁干燥的血球计数板的计数室上加盖专 用的盖玻片，用吸管吸取稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻 片边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防 止产生气泡，充入细胞悬液的量以不超过计数室台面与盖 玻片之间的矩形边缘为宜。多余培养液可用滤纸吸去；
• 1．16×25型的计数板 将计数室放大，可见它含16中格， 一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格） 计数 。 zxxk细胞个数／1mL＝100个小方格细胞总数/ 100 ×400×10000×稀释倍数
关于酵母菌的计数若干问题解析
关于酵母菌的计数若干问题解析关于酵母菌的计数若干问题解析酵母菌的计数是近几次高频考点，血细胞计数板的规格和计数方式始终是个难点，需要进行总结。
有的学生担心教材中提到的计数计算，其实，需要搞清楚血细胞计数板的原理。
利用血细胞计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数法，计得的是活菌体和死菌体的总和。
计数的操作步骤关于计数室每个计数室分为九个大方格，每个大方格有2mm×2mm×0.1mm 或1mm×1mm×0.1mm，浙科版默认第一种，共有400小格。
中央的大方格用于酵母菌的计数。
两种规格的血细胞计数板大方格、中方格和小方格典例解析试题1：将获得的肿瘤细胞培养液稀释100倍后，用血细胞计数板（规格为2mm×2mm×0.1mm）计数，观察到的计数室中细胞分布如图。
问题：培养液中肿瘤细胞的密度是个/mL。
答案：3.6×107解析：通过统计四个角上的总肿瘤细胞数为9+9+10+8＝36个（统计按照教材上的要求），计算出大方格的总数为36×4＝144个，144/0.4mm3×103mL×100倍＝3.6×107个。
（个人认为，此题的肿瘤细胞数目偏少，值得商榷）例题2：酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3，由400个小方格组成。
现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先后再计数。
若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有个。
答案：稀释 2×108（5×400/0.1mm3×103×10mL）计数的操作1．稀释：将酵母菌培养液进行适当的稀释；若菌液不浓，可不必稀释。
2．镜检计数室：在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。
若有污物，则需清洗后才能进行计数。
3．加样品：在清洁干燥的血细胞计数板盖上盖玻片，再用无菌细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴入一小滴（将计数室充满即可），让菌液沿缝隙自行渗入计数室。
广工酵母菌血球计数板计数实验报告
如果存在气泡，会使盖玻片下有部分空间没有充满菌液，使待计数的菌液体积减少，结果偏小。应重新制片。
6.4 酵母菌的增殖是否会对实验造成影响？
如图 6.1，如果计数时间在酵母菌增殖的稳定期Ⅲ，即当酵母细胞的繁殖速度达到最高峰时，其细胞总数不会 再增加，这是由于之前的调整期Ⅰ和对数期Ⅱ的糖类营养物质的消耗，代谢产物(特别是次级代谢产物)的积累以及 培养基中 pH 的改变，对细胞产生了较大的抑制性。此时计数，酵母菌的增殖对计数量影响最小。
6.1 在取样计数前，为什么要将酵母菌培养液进行振荡摇匀？
这样可使酵母菌分布均匀，防止酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，减小培养液中的酵母菌数量误差。
6.2 如果先滴加菌液，再加盖玻片，容易出现什么误差？怎么处理？
如果先滴加菌液，再加盖玻片（压滴法），容易使菌液沾到计数平台两侧的支持柱表面，在支持柱表面形成一 层水膜而使盖片不能完全落在支持柱上。盖玻片由于液滴的表面张力作用而未能严密地盖到计数板表面上，使计数 室内的体积增大，计数结果将偏高。应将血球计数板和盖玻片洗净、烘干重做。
稀释方法：用 1 支干净的试管取 9mL 无菌水，然后立即将 1mL 培养液移入试管里充分混匀，此时原培养液被 稀释 10 倍。
4.4 样品计数
在边线上的细胞，按“计上不计下，计左不计右”原则进行计数，即可计左边上边及其顶角； 注意辩清不同深度和焦距的酵母菌细胞； 活酵母有出芽生殖现象，对于带芽体的酵母，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为 2 个菌体计数，若芽
4 实验步骤及注意事项
4.1 实验检查
检查 3.2 中列举器材和仪器是否齐全 检查显微镜 检查电源、机械转动部分、载物台等 调整反光镜（光源），调节聚光圈使镜内视野明亮，调节目镜和物镜，检查是否存在污物，若有污物，及时清理。 检查血球计数板 将盖玻片置于血球计数板上，放置在显微镜底下观察，检查血球计数板是否残留污物，若有，及时清理。
酵母计数实验报告
一、实验目的1. 掌握酵母菌计数的基本方法。
2. 了解血球计数板的使用原理和操作步骤。
3. 通过实验，观察酵母菌在不同条件下的生长情况，分析酵母菌的种群数量变化。
二、实验原理酵母菌是单细胞真核微生物，其生长繁殖过程中会形成菌落。
通过计数一定体积培养液中的酵母菌数量，可以了解酵母菌的种群密度。
血球计数板是一种常用的微生物计数工具，其原理是将计数区域划分为多个小方格，通过显微镜观察，计数每个小方格内的酵母菌数量，从而推算出整个计数区域的酵母菌数量。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母菌菌种、琼脂培养基、无菌水、血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等。
2. 实验试剂：无菌生理盐水、染色液（如龙胆紫）等。
四、实验步骤1. 菌种活化：将酵母菌菌种接种于琼脂培养基上，在适宜温度下培养24小时，得到活化菌种。
2. 制备酵母菌悬液：将活化菌种接种于无菌水中，振荡均匀，制成酵母菌悬液。
3. 酵母菌计数：将酵母菌悬液稀释至适当浓度，用血球计数板进行计数。
操作步骤如下：a. 将盖玻片放置于计数室上，用无菌滴管将酵母菌悬液滴于盖玻片边缘，让悬液自行渗入计数室。
b. 待悬液渗入计数室后，将盖玻片轻轻放置，避免产生气泡。
c. 将计数板置于显微镜载物台上，调整显微镜至适当倍数，观察计数室。
d. 计数每个小方格内的酵母菌数量，重复计数3次，求平均值。
4. 数据分析：根据计数结果，计算酵母菌的种群密度。
五、实验结果与分析1. 实验结果：在实验过程中，观察到酵母菌在适宜条件下生长良好，菌落呈白色，数量逐渐增多。
2. 数据分析：根据计数结果，计算出酵母菌的种群密度，并绘制酵母菌生长曲线。
六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了酵母菌计数的基本方法，了解了血球计数板的使用原理和操作步骤。
2. 实验结果表明，酵母菌在适宜条件下能够迅速繁殖，其种群数量随时间推移呈现增长趋势。
3. 本实验为后续研究酵母菌生长特性、发酵工艺等提供了基础数据。
七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
在计数时,通常数五个中方格得总菌数，然后求得每个中方格得平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中得总菌数，然后再换算成１ｍｌ菌液中得总菌数。
记数中方格得方法
对每个样品计数三次,取其平均值，按下列公式计算每1ml菌液中所含得酵母菌个数、
计算公式
（1）16格×２5格得血球计数板计算公式：
酵母细胞数／mｌ=100小格内酵母细胞个数/１00×40０×104×稀释倍数
(2)２5格x16格得血球计数板计算公式:
酵母细胞数/ｍl=８０小格内酵母细胞个数/80×400×1０4×稀释倍数
下面以一个大方格有2５个中方格得计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中得总菌数
因1ml=１cm3=1０0０ｍm3，
（即0、1立方毫米得总数=Ａ/5×２5×B）
1ｍl菌液中得总数=A／5×２５×B×10×1000=50000A×B（个）
同理，如果就是16个中方格得计数板,设五个中方格得总菌数为A'，则
注意事项
取出酵母菌得原液时一定要混匀！!
不同得移液管吸取不同浓度得菌液,不要混用!！！！
注意细节操作!！
［上一篇] ［下一篇］
（即0、１立方毫米得总数=A/5×16×B)
１ml菌液中得总数=A/5×16×B×10×１000＝500０0A×Ｂ(个）
记数小方格得方法
计数时,如果使用１6格×２5格规格得计数室，要按对角线位，取左上,右上,左下,右下4个中格（即１0０个小格）得酵母菌数、如果规格为２5格×16格得计数板,除了取其４个对角方位外，还需再数中央得一个中格(即80个小方格)得酵母菌数、
用血球计数板计数酵母菌个数得计算方法
血球计数板，通常就是一块特制得载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间得平台又被一短横槽隔成两半，每一边得平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间得大方格即为计数室，微生物得计数就在计数室中进行。
计数室得刻度一般有两种规格,一种就是一个大方格分成1６个中方格,而每个中方格又分成2５个小方格;另一种就是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论就是哪种规格得计数板，每一个大方格中得小方格数都就是相同得,即16×２5=40０小方格.