土壤无机N---铵态氮硝态氮测量方法
土壤无机N---铵态氮硝态氮测量方法
土壤无机N---铵态氮硝态氮测量方法铵态氮和硝态氮测定方法铵态氮测量方法（2mol ?L -1KCl 浸提—靛酚蓝比色法）1）方法原理2mol ?L -1KCl 溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。
土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。
在含氮0.05～0.5mol ?L -1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。
2）试剂（1）2mol ?L -1KCl 溶液称取149.1g KCl ，化学纯）溶于水中，稀释至1L 。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH ，化学纯）10g 和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO 2H 2O]100mg稀释至1L 。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g 、磷酸氢二钠（Na 2HPO 4?7H 2O ，化学纯）7.06g 、磷酸钠（Na 3PO 4?12H 2O ，化学纯）31.8g 和52.5g ?L -1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL 溶于水中，稀释至1L ，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g ?L -1的酒石酸钾钠（KNaC 4H 4O 6?4H 2O ，化学纯）与100g ?L -1的EDTA 二钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加入10 mol?L -1氢氧化钠0.5mL 。
（5）2.5μg ?mL –1铵态氮（NH4+—N; 100ppm）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO 4，分析纯0.4717g 溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L ，制备成含铵态氮（N ）100μg ?mL –1的贮存溶液；使用前将其加水稀释20倍，即配制成含铵态氮（N ）2.5μg ?mL –1的标准溶液备用。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
土壤中氮含量的测定分析(精)
土壤中氮含量的测定分析核心提示：摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。
关键词：土壤；全氮；测定方法土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态...摘要：概述了土壤中氮元素的存在形式、土壤全氮、无机氮(包括铵态氮、硝态氮)水解氮、酰胺态氮的测定方法。
关键词：土壤；全氮；测定方法土壤是作物氮素营养的主要来源，土壤中的氮素包括无机态氮和有机态氮两大类，其中95%以上为有机态氮，主要包括腐殖质、蛋白质、氨基酸等。
小分子的氨基酸可直接被植物吸收，有机态氮必须经过矿化作用转化为铵，才能被作物吸收，属于缓效氮。
土壤全氮中无机态氮含量不到 5%，主要是铵和硝酸盐，亚硝酸盐、氨、氮气和氮氧化物等很少。
大部分铵态氮和硝态氮容易被作物直接吸收利用，属于速效氮。
无机态氮包括存在于土壤溶液中的硝酸根和吸附在土壤颗粒上的铵离子，作物都能直接吸收。
土壤对硝酸根的吸附很弱，所以硝酸根非常容易随水流失。
在还原条件下，硝酸根在微生物的作用下可以还原为气态氮而逸出土壤，即反硝化脱氮。
部分铵离子可以被粘土矿物固定而难以被作物吸收，而在碱性土壤中非常容易以氨的形式挥发掉。
土壤腐殖质的合成过程中，也会利用大量无机氮素，由于腐殖质分解很慢，这些氮素的有效性很低。
土壤中的氮素主要来自施肥、生物固氮、雨水和灌溉水，后二者对土壤氮贡献很小，施肥是耕作土壤氮素的主要来源，而自然土壤的氮素主要来自生物固氮。
土壤含氮量受植被、温度、耕作、施肥等影响，一般耕地表层含氮量为0.05%～0.30%，少数肥沃的耕地、草原、林地的表层土壤含氮量在 0.50%～0.60%以上。
我国土壤的含氮量，从东向西、从北向南逐渐减少。
进入土壤中的各种形态的氮素，无论是化学肥料，还是有机肥料，都可以在物理、化学和生物因素的作用下进行相互转化。
1 土壤全氮的测定1.1 开氏法近百年来，许多科学工作者对全氮的测定方法不断改进，提出了许多新方法，主要有重铬酸钾-硫酸消化法、高氯酸-硫酸消化法、硒粉-硫酸铜-硫酸消化法。
土壤可溶性有机氮,硝态氮,铵态氮和微生物量氮测定
土壤可溶性有机氮、硝态氮、铵态氮、微生物量氮最方便最简单的测定方法1.母液制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。
取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。
干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。
按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（未熏蒸为空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。
其中熏蒸后的土壤过滤液为A母液，未熏蒸的土壤过滤液为B母液。
母液要是不及时测定，需立即在-15℃以下保存2.测定可溶性有机氮=可溶性全氮-（铵态氮+硝态氮）要是有流动分析仪器还有TOC的话可以利用A母液测得碳氮减去B母液的碳氮含量根据公式计算得出微生物碳氮，可以用B母液测的铵态氮、硝态氮和可溶性全氮，是很方便的。
以下的是用传统的方法测定以上指标，经过852个土壤样品试验结果还是很好的。
土壤可溶性全氮测定氧化剂:将6g NaOH 和30g K2S2O8溶于蒸馏水中并定容至1L(K2S2O8 比较难溶，在低于60℃得瑟水浴中溶解，高于60℃配置的溶液至其氧化性失效，NaOH制成溶液，致其温度达到常温后与K2S2O8溶液混合定容至1L)测定：移取A母液10ml至消化试管，加入10ml氧化剂，水浴中加热，温度升高到120℃后保持90min，使用紫外分光光度计测定A220和A275，空白需加入1ml氧化剂并同时作水浴处理。
（Tips：农化上母液与氧化剂各取25ml，此处取其比例为1:1。
）标准曲线：0.7218g硝酸钾溶于水中，转入1000ml容量瓶中定容摇匀，制得浓度为100mg/L的氮标准贮存液。
土壤硝态氮和铵态氮的测定方法
一、原理：过滤后的样品经过一个开放的镀铜镉还原器通道后，硝酸根被还原成亚硝酸根，亚硝酸根通过磺胺处理后，与N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐偶联，形成深红色的偶氮染料，然后在550nm或者520nm比色分析。
二、样品处理土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。
过筛后的土样，取出5g土样放入离心管，加入25ml 氯化钾提取液（2moL/L），震荡2小时后进行离心（8000 g ，15min），静置后过滤，取上清液测定。
若不能及时测定，放入4℃冰箱保存。
三、试剂配制：试剂用水：蒸馏水或去离子水。
（1）显色试剂：（棕色玻璃瓶，避光保存）150ml水，加入25ml浓磷酸▲，冷却至室温后，加入10g磺胺，再加入0.5g N-(1-萘基)-乙二胺二盐酸盐溶解。
用水定容至250ml。
加入浓缩探针清洗液（表面活性剂）。
（2）氯化铵-EDTA缓冲液（ammonium chloride-EDTA）：把85g氯化铵和0.1g 乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-Na2）溶解于水，定容至1L。
用浓氨水▲调节PH至。
（3）硝化组件缓冲液：{用来清洗OTCR(镀铜镉还原器通道)}取100ml的氯化铵-EDTA缓冲液，稀释至1L。
调节PH至。
（4）2%硫酸铜：10g 五水硫酸铜（）溶于水，定容至500ml。
（5）5mol/L盐酸：小心慢慢加入浓盐酸▲于水中，冷却后定容至100ml。
（6）硝酸盐存储溶液(1g/L)：（溶液6个月内有效）7.218g硝酸钾溶于水，定容至1L，加入1ml氯仿▲（防腐剂）。
（7）比色管清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存,两个月内有效）取50ml比色管清洗液，加水定容至1L。
（8）进样针清洗液：（定容时缓慢，防止出现泡沫，室温保存，两个月内有效。
）取进样针清洗液，加水定容至1L。
四、测定方法：土壤硝态氮测定采用SmartChem全自动间断化学分析仪。
一、样品处理土壤鲜样采取四分法处理，根据实验用量进行过筛（比目大小视样品含水量而定）。
土壤硝态氮铵态氮的测定
（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。
C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。
酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。
2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。
3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL 纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。
使用时须注意其强烈的腐蚀性。
如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。
试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。
（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。
（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。
（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。
4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4•2H2O 0.5g（注2）[凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清]和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。
试验步骤--土壤氮的测定
试验步骤目录1、土壤pH 值的测定 (2)2、土壤温湿度的测定 (3)3、土壤有机质的测定 (3)4、全氮的测定 (3)5、无机氮（铵态氮、硝态氮）的测定 (4)6、可溶性有机氮 (4)7、微生物生物量氮的测定 (4)8、土壤酶活性的测定 (5)【1】土壤脲酶测定 (5)【2】蛋白酶活性的测定 (7)【3】硝酸还原酶 (8)【4】亚硝酸还原酶 (9)【5】羟胺还原酶 (10)1、土壤pH值的测定用电位法测定土壤 pH值，水与土之比为 2.5：1。
测定步骤如下：1.待测液的制备：称取通过2mm筛孔的风干土样10g于50m1高型烧杯中，加入25ml无二氧化碳的水或 1.0mol/L氯化钾溶液（酸性土壤测定用）或 0.01mol/L氯化钙溶液（中性、石灰性或碱性土测定用）。
枯枝落叶层或泥炭层样品称5g，加水或盐溶液50ml。
用玻璃棒剧烈搅动1-2min，静止30min，此时应避免空气中氨或挥发性酸的影响。
2.仪器校正：（以雷磁25型酸度计为例）①接通电源，按仪器要求预热。
量程开关层指向7-10或7-14档。
②装上已在蒸馏水中浸泡24h的指示电极——玻璃电极及参比电极——甘汞电极。
③校正。
a．将选择开关置于“pH”档位置。
b．将两电极插入装有标准缓冲液（如待测液为近中性，用pH6.86标准缓冲液；待测液为碱性，用 pH9.18标准缓冲液；待测液为酸性，用 pH4.01标准缓冲液）烧杯中。
c．温度补偿器尖头旋钮应指于待测液的温度位置。
d．将量程开关置于“7-0”档，或“7-14”档。
e．调零点调节器，使指针在pH 7位置。
f．按下读数开关，调节定位调节器，使指针指在标准缓冲液pH值位置。
g．放开读数开关，指针应在7处，如有变动，则调节零点调节器至7处，用蒸馏水冲洗电极。
3.测定①用滤纸将附于电极上的剩余溶液吸干。
②将甘汞电极插在上部清液中，玻璃电极插入土壤悬液中，检查零位。
③按下读数开关，指针所指即为溶液的pH值。
土壤铵氮、硝氮、TOC的测定
药品的准备1M kcl溶液：称取74.6g kcl，稀释至1L。
苯酚溶液：称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g﹒L-1次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液10mL 溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
1M HCL:43ML HCL溶于水，稀释至1L0.8%氨基磺酸：称取氨基磺酸8g溶于水，稀释至1L铵态氮储存溶液：准确称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4,分析纯]0.4717g溶于水中，定容至1L。
即配制成含铵态氮（N）100μg.mL-1的贮存溶液；硝态氮储存溶液：准确称取硝酸钾0.7221溶于水，定容至1L，即100μg.mL-1 的储存溶液。
TOC的测定1.取样品土壤10g装入5Oml离心管，加入20ml蒸馏水提取，摇床摇1h。
2.取出离心（配平！）,8000r,5min。
3.离心后用0.45um微孔膜抽滤上清液，滤液用pvc小管装好，储存。
4.1到2个月内样品上toc测定。
铵态氮和硝态氮的测定1.样品土壤取5g，用25ml 1mol/l kcl 提取，摇床摇1h2.用折好的滤纸过滤大概10ml滤液3.标曲的配置：铵态氮：用移液管取储存液2.5ml,定容至100ml，配成2.5ug/ml的标准液。
分别用移液管取0,1,2,3,4,5,6,7,8ml装入25ml比色管硝态氮：用移液管取储存液4ml,定容至100ml，配成4ug/ml的标准液。
分别用移液管取0,0.5,1,1.5,2,2.5,3,4,5ml装入10ml 比色管4.取样品，加入显色剂：（提前半小时打开分光光度计！！！）铵态氮：取2.5ml滤液，加入2.5ml苯酚溶液，2.5ml碱性次氯酸钠，摇匀定容。
土壤可溶性有机氮,硝态氮,铵态氮和微生物量氮测定
土壤可溶性有机氮、硝态氮、铵态氮、微生物量氮最方便最简单的测定方法1.母液制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。
取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。
干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。
按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（未熏蒸为空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。
其中熏蒸后的土壤过滤液为A母液，未熏蒸的土壤过滤液为B母液。
母液要是不及时测定，需立即在-15℃以下保存2.测定可溶性有机氮=可溶性全氮-（铵态氮+硝态氮）要是有流动分析仪器还有TOC的话可以利用A母液测得碳氮减去B母液的碳氮含量根据公式计算得出微生物碳氮，可以用B母液测的铵态氮、硝态氮和可溶性全氮，是很方便的。
以下的是用传统的方法测定以上指标，经过852个土壤样品试验结果还是很好的。
土壤可溶性全氮测定氧化剂:将6g NaOH 和30g K2S2O8溶于蒸馏水中并定容至1L(K2S2O8 比较难溶，在低于60℃得瑟水浴中溶解，高于60℃配置的溶液至其氧化性失效，NaOH制成溶液，致其温度达到常温后与K2S2O8溶液混合定容至1L)测定：移取A母液10ml至消化试管，加入10ml氧化剂，水浴中加热，温度升高到120℃后保持90min，使用紫外分光光度计测定A220和A275，空白需加入1ml氧化剂并同时作水浴处理。
（Tips：农化上母液与氧化剂各取25ml，此处取其比例为1:1。
）标准曲线：0.7218g硝酸钾溶于水中，转入1000ml容量瓶中定容摇匀，制得浓度为100mg/L的氮标准贮存液。
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铵态氮和硝态氮测定方法
铵态氮测量方法（2mol •L -1KCl 浸提—靛酚蓝比色法）
1）方法原理
2mol •L -1KCl 溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。
土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。
在含氮0.05～0.5mol •L -1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。
2）试剂
（1）2mol •L -1KCl 溶液称取149.1g KCl ，化学纯）溶于水中，稀释至1L 。
（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH ，化学纯）10g 和硝基铁氰化钠
[Na2Fe(CN)5NO 2H 2O]100mg稀释至1L 。
此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g 、磷酸氢二钠（Na 2HPO 4•7H 2O ，化学纯）7.06g 、磷酸钠（Na 3PO 4•12H 2O ，化学纯）31.8g 和52.5g •L -1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL 溶于水中，稀释至1L ，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。
（4）掩蔽剂将400g •L -1的酒石酸钾钠（KNaC 4H 4O 6•4H 2O ，化学纯）与100g •L -1的EDTA 二钠盐溶液等体积混合。
每100mL 混合液中加入10 mol•L -1氢氧化钠0.5mL 。
（5）2.5µg •mL –
1铵态氮（NH4+—N; 100ppm）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO 4，分析纯0.4717g 溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L ，制备成含铵态氮（N ）100µg •mL –
1的贮存溶液；使用前将其加水稀释20倍，即配制成含铵态氮（N ）2.5µg •mL –1的标准溶液备用。
3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。
4）分析步骤
（1）浸提称取相当于5.00g 干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g ，置于100mL 塑料瓶中，加入氯化钾溶液50mL ，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h 。
取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。
如果不能在24h 内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。
（2）比色吸取土壤浸出液50μL(含NH4+—N2µg ～25µg) 放入96孔板中，然后加入苯酚溶液50μL 和次氯酸钠碱性溶液50μL ，摇匀。
在20℃左右的室温下放置1h 后（注1），加掩蔽剂10μL加入140μL氯化钾溶液，此时孔中溶液体积为250μL。
将96孔板移至3F酶标仪室（用新的那台酶标仪）在625nm 波长处进行比色，读取吸光度。
（3）工作曲线分别吸取0.00、0.5、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N 标准液于50mL 容量瓶中，各加10mL 氯化钠溶液，各瓶标准液的浓度相应为0, 0.05, 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.00 mg/LNH4+-N。
同（2）步骤进行比色测定。
5）结果计算
土壤中NH4+—（N ）含量（mg •kg-1）=
式中：ρ——显色液铵态氮的质量浓度(µg •mL –1) ；V ——显色液的体积(mL)；ts ——分取倍数；
m ——样品质量（g ）。
6）注释
注1. 显色后在20℃左右放置1h ，再加入掩蔽剂. 过早加入会使显色反应很慢，蓝色偏弱；加入过晚，则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解.
硝态氮测定方法（双波长紫外分光光度法）实验原理：利用硝酸根离子在220 nm处有较强的紫外吸收这一特性，定量分析了土壤浸提液中的NO 3 -. 溶解的有机物在210 nm和275 nm处均有吸收，而NO 3 -在275 nm处没有吸收，因此在275 nm波长处做另一测量，以校正硝酸盐值. 最低检出浓度0.004 mg/ kg ，测定上限为4.000 mg/ kg ，适合高浓度土样浸提液的高倍稀释.
试剂：质量浓度为100μg/ mL的硝酸盐氮标准贮备液，稀释5倍使用质量浓度为25μg/ mL 的硝酸盐氮标准使用液。
实验方法
标准曲线的绘制：
分别取硝酸盐氮标准使用液0.0 ，0.5 ，1.0 ，2.0 ，3.0 ，4.0μg/ mL 置于50 mL 比色管中，各管中加入1.0 mL 1 mol的盐酸溶液，摇匀，用酶标仪在210 nm 和275 nm处，用1 cm石英比色皿测定吸光度. 以ΔA = A210-kA275的计算方法求得校正吸光度. （系数k 的确定方法分别准确移取10μg/ mL 硝酸盐氮使用液
2.00mL 、土壤浸提液2.00 mL 置于各自的50 mL 比色管中，用二次蒸馏水定容，摇匀，用1 cm 的石英比色皿，以二次蒸馏水作参比，在紫外- 可见分光光度计上测定吸光值。
土壤样品、硝酸盐氮在210 nm 处有最大吸收，在275 nm 处吸收较弱，选取210 nm、275 nm 为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮，根据A210 - KA275 =0 的公式进行计算，求得K 的平均值。
土壤样品测定：称取5.00 g新鲜土样，分别置于100 mL塑料瓶，在塑料瓶内50 mL 氯化钾溶液，于振荡器上振荡30 min 后，倾出上清液，用中速或慢速无氮定量滤纸过滤. 保存滤液于50.00 mL塑料中。
吸取200μL（用2M氯化钾溶液将待测滤液准确稀释至2-5倍）稀释液置于96孔板中，在210和275nm处测量吸光度.
结果计算:C = A210 – 2.2*A275。