微波提取灵芝中三萜类化合物的研究
论灵芝三萜类化合物的提取工艺发展
论灵芝三萜类化合物的提取工艺发展发布时间：2022-07-26T03:36:11.270Z 来源：《科学与技术》2022年第30卷第3月第5期作者：潘淇，胡明华，江忠远，谭奇奇[导读] 灵芝是一种十分昂贵且珍贵的药材，在我国已经有十分悠久的药用历史。
其中三萜酸就是灵芝体内的次生代潘淇，胡明华，江忠远，谭奇奇（遵义师范学院化学化工学院贵州遵义 563002）摘要：灵芝是一种十分昂贵且珍贵的药材，在我国已经有十分悠久的药用历史。
其中三萜酸就是灵芝体内的次生代谢产物，也是灵芝体内的活性成分之一，拥有特别显著了药理活性。
超临界CO2提取、大孔树脂分离和高速逆流色谱都是近年来灵芝三萜提取方法的高新技术。
关键词：灵芝三萜；提取分离；影响因素；研究现状[作者简介：潘淇(1980．10一)，男，(侗)，贵州遵义人，硕士研究生，副教授，遵义师范学院教师。
基金来源：主持贵州省级教学内容与课程体系改革项目《化学师范生校地实践教学合作指导模式的研究——以遵义师范学院为例》]灵芝是食药兼备的一种真菌，具有补中益气、扶正固本、祛病延年、滋阴涵阳等功效。
现代药理医学表明，灵芝三萜类化合物拥有保脾肝、抗病毒、抗癌、抗艾滋病及艾滋病蛋白酶活性、调节免疫力、控制血管紧张素转化酶、抗氧化性等功效。
现在许多国内外的研究学者都已经开始深入研究灵芝化学成分，并且取得了不错的成效。
因此，研究三萜化合物的提取分离有着很大的理论和实际意义。
1灵芝三萜类化合物的提取1.1溶剂提取法灵芝三萜化合物性质并不稳定，因此在提取分离和纯化之上难度比较大。
一般情况下则常用CH3OH、CH3CH2OH、石油醚、氯仿、丙酮或乙酸乙酯等有机溶剂在常温或高温下回流提取。
每一种溶剂来提取效果都不一。
Iksoo Lee等用CH3CH2OH回流分离提取灵芝三萜类化合物，CH3OH浸膏用水溶解经正己烷和氯仿反复萃取，得到三萜类粗提取物为2%。
侯敏娜等用正交试验设计方法来研究灵芝三萜的最优提取方法，得到最优的提取工艺为：用5倍的95%CH3CH2OH回流提取分离3次，每次的时间为1.5h，经过紫外分光光度法，得到灵芝三萜化合物的总含量为9.07%。
树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究
树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺研究林倩倩;赵淑杰;朱鹤【摘要】[Objective] To study the extraction technology of triteipenoids from Ganoderma applanatum (Pers. ) Pat. [ Method ] Microwave-assisted'extraetion (MAE) , ordinary extraction, ultrasonic extraction and reflux extraction were used to study on triterpenoids from G. applanatum. By single factor experiment and orthogonal test, the extraction technology of triterpenoids was optimized. In addition, the effects of different methods on the extraction efficiency of triterpenoidB were compared. [ Result] The optimal extraction technology of triterpenoids was as follows;G. applanatum were extracted with 75% ethanol at the solid-liquid ratio of 1: 20 g/ml for 15 min at 75 ℃. Under these conditions, the average extraction rate of triterpenoids was 0.748%. It showed that the extraction efficiency of ordinary extraction, reflux extraction and ultrasonic extraction were respectively 74% , 80% , and 83% of microwave extraction by comparing the different methods. [ Conclusion] MAE is a better extraction method for the content determination of triterpenoids in G. applanatum that has the advantages of fewer solvent, shorter time and higher extraction efficiency.%[目的]研究树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺条件.[方法]采用微波萃取法、浸提法、回流法和超声法研究了树舌灵芝中三萜类化合物的提取工艺条件,然后通过单因素试验和中心组合试验对提取工艺条件进行了优化,并比较了不同提取方法对三萜化合物的提取效率的影响.[结果]微波萃取法的最佳提取条件为:乙醇浓度75％,提取时间15 min,提取温度75℃,料液比1∶20(g/ml)；在此条件下三萜类化合物的平均提取率为0.748％；浸提法、回流法和超声法中三萜类化合物的提取率分别是微波萃取法的74％、80％和83％.[结论]微波萃取法具有试剂用量少、时间短和提取效率高的优点,是树舌灵芝中三萜类化合物的最佳提取方法.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)018【总页数】4页(P9669-9671,9804)【关键词】树舌灵芝(Ganoderma applanatum(Pers.)Pat.);微波萃取;三萜类化合物;工艺优化【作者】林倩倩;赵淑杰;朱鹤【作者单位】吉林农业大学资源与环境学院,吉林长春130118;吉林农业大学资源与环境学院,吉林长春130118;吉林农业大学资源与环境学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S567树舌灵芝(扁木灵芝)(Ganoderma applanatum(Pers.)Pat.)隶属于担子菌纲(Basidiomycota)灵芝属(Ganoderma Karst.)，是一种药用真菌，具有较高的药用价值［1］。
灵芝三萜类化合物的研究进展_李晔
1 灵芝三萜类化合物的提取 1. 1 溶剂提取法 灵芝三萜化合物结构相似，难溶于水、易 溶于有机溶剂、性质不稳定，因此分离和纯化的难度比较大。 一般常用甲醇、乙醇、氯仿或乙酸乙酯等有机溶剂在常温或 高温下回流提取。溶 剂 不 同 提 取 效 果 差 异 明 显。侯 敏 娜 等［15］采用正交试验方法研究了灵芝三萜的最佳提取方法，得 出最佳的提取工艺为 5 倍量 95% 乙醇回流提取 3 次，每次 1. 5 h，再用硅胶色谱柱分离，紫外分光光度法测定了灵芝中总三 萜化合物的含量为 9. 07% 。Iksoo Lee 等［16］用甲醇回流提取 灵芝三萜类，甲醇浸膏用水溶解，经正己烷和氯仿反复萃取得 到三萜类粗提物，提取率 2% 。Wang X M 等［17］将灵芝子实体 经 95% 乙醇回流提取，所得浸膏经碱提酸化后用二氯甲烷萃 取出 来，浓 缩 得 三 萜 酸 浸 膏，提 取 率 1. 13% 。Sri Fatmawati 等［18］将灵芝子实体在室温下用氯仿提取 3 次，24 h，所得浸膏 经碱提酸化后再由氯仿萃取得到三萜酸浸膏，提取率 1. 99% 。 1. 2 超声提取法 从灵芝子实体或孢子粉中提取三萜类物 质时，溶剂回流 提 取 法 因 受 其 结 构 影 响，花 费 时 间 较 长。 而 采用超声波处理能破坏灵芝的致密结构，使提取时间相比溶 剂提取 缩 短 一 半 以 上［19-23］，目 前 已 得 到 广 泛 应 用。张 亮 等［20］用超声波辅助 法，通 过 正 交 试 验 研 究 了 灵 芝 三 萜 的 提 取，得到最优的灵芝三萜提取工艺为乙醇用量 30 倍，提取温 度 60 ℃ ，提取时间 60 min，用碱醇( 无水乙醇加碱) 调 pH 8. 5，可以明显提高乙醇提取灵芝三萜的能力。弓晓峰等［21］ 通过对黑灵芝的溶剂提取法和超声提取法对比研究，得出在 相同的提取时间内，溶剂回流的提取率( 0. 929 4% ) 低于超 声 的 提 取 率 ( 1. 43% ) 。Somayeh Keypour 等［22］ 和 Liu Y L 等［23］采用超声波辅助提取，以氯仿为提取溶剂，提取液过滤 后浓缩得三萜类浸膏，其提取率在 1% ～ 1. 5% 。 1. 3 微波辅助提取法 微波提取技术是近年来发展起来的 新型提取技术，具有选择性高、耗时少、能耗低、排污量少等
灵芝多糖和三萜的提取工艺研究_徐雪峰
Study on Extraction Process of Polysaccharide and Triterpenoid from Ganoderma lucidum
XU Xue-feng，ZHANG Yu，YAN Hao，ZHANG Xu-yuan （ College of Biological and Chemical，Hainan Institute of Science ＆ Technology，Haikou 571126，China）
指标提取率 /%
1． 02 1． 46 1． 51 1． 43 1． 47 1． 44 1． 08 1． 22 1． 62
7
表 9 微波提取多糖正交试验结果分析
项目
因素
A
B
C
指标提取率 /%
1
1
1
1
1． 18
2
1
2
2
1． 56
3
1
3
3
1． 40
4
2
1
2
1． 23
5
2
2
3
1． 21
6
2
3
1
1． 20
1 试验材料与仪器
材料为海南赤芝子实体，购自于药材市场，经 鉴定，干燥、切片、粉碎过 60 目筛。齐墩果酸为标 准品，其他各种试剂均为分析纯。
CX － 100 型万能高速粉碎机（ 上海晟喜制药 机械有限公司） ； 电子天平（ 赛多利斯科学仪器有 限公司） ； HH － 2 型恒温水浴锅（ 江苏金坛环宇科 学仪器厂） ； 超声波清洗机（ 宁波海曙五方超声设 备有限公司） ； CW － 2005 型超声 － 微波组合反应 器（ 上海仙象仪器仪表有限公司） ； UV － 1800PC － DS 型紫外分光光度计（ 上海美普达仪器有限公 司） ； TDL － 80 － 2B 型低速台式离心机（ 上海安亭 科学仪器厂） 。
灵芝中三萜类化合物的研究进展_周晓
Hale Waihona Puke Tschugaeff 反应
冰 醋 酸、乙 酰 氯、氯化锌
显色结果 氯仿层呈绿色荧光，硫酸 层呈红色或蓝色
黄 － 红 － 紫 － 蓝 － 褪色
滤纸点样，喷显色剂干燥 后 60 ～ 70 ℃ 加 热，显 蓝 色，灰蓝色，灰紫色 滤纸点样，喷显色剂干燥 后 100 ℃ 加热，猩红色逐 渐变为紫色
加热呈紫红色、淡红色
合物的含量为 10． 02% 。通过研究发现，传统有机 11% 。总之，微波提取可以极大的减少提取时间，节
溶剂浸提灵芝三萜类化合物的含量偏低，且耗时较 约溶剂用量，且在微波辐射下不易引起反应产物的
长。
改变，对环境的污染少。
第4 期
周 晓，等： 灵芝中三萜类化合物的研究进展
49
2． 4 超临界流体萃取法 目前，由于灵芝三萜结构的复杂性，其提取仍然
近年来，微波辅助提取技术作为一种新兴的天 然产物提取技术，具有耗时少、能耗低、高选择性、排 污量少等优点而被广泛采用。微波是波长介于远红 外与超短波之间的高频电磁波，高频电磁波能穿透
于水、易溶于有机溶剂的特点。一般常选用乙醇、甲 醇、氯仿等有机溶剂在常温或高温下进行浸提或回
灵芝致密的外层结构而迅速到达内部，选择性加热 萃取体系中的某些组分，使其内部的温度和压力迅
第 28 卷 第 4 期 2014 年 12 月
齐鲁工业大学学报 JOUＲNAL OF QILU UNIVEＲSITY OF TECHNOLOGY
文章编号： 1004 － 4280（ 2014） 04 － 0047 － 04
Vol． 28 No． 4 Dec． 2014
灵芝中三萜类化合物的研究进展
周 晓，王成忠* ，李 双，唐晓璇，王晓华
灵芝中三萜类化合物的提取及质量控制研究
灵芝中三萜类化合物的提取及质量控制研究作者：杨丽丽马爱群来源：《西部论丛》2017年第04期摘要：灵芝是一种具有悠久历史的传统珍贵药材，具有极高的药用价值。
其中，三萜类化合物作为灵芝主要活性物质之一，在抗HIV、抗炎、保肝、抗肿瘤等方面发挥着独特的生物活性。
同时，灵芝三萜类物质也是确定灵芝相关商品质量和品质的重要指标和保证，应用前景十分可观。
灵芝三萜类化合物的提取一直是人们研究的重点，其提取过程比较复杂，质量控制难度大，近年来提取技术不断提高，如何有效控制三萜类化合物质量依然是一个难题。
为此，本文对灵芝中三萜类化合物提取方法进行分析，并探讨质量控制方法，为灵芝中三萜类化合物提取能够提供参考信息。
关键词：灵芝三萜类化合物提取质量控制1.前言灵芝是名贵的药材，其化学成分主要为三萜化合物、多糖、生物碱类、核苷类等，化学成分十分复杂，为此，要提取当中三萜化合物难度比较大。
三萜化合物属于次生代谢的产物，药理活性较强，具有良好的抗炎、抗肿瘤等作用，近年来，人们对灵芝中三萜类化合物的要求不断增多，但是对其提取方法及其质量控制的研究比较少，为此，本文对此进行研究。
2.三萜类化合物结构分析及药理作用三萜类化合物的基本核由30个碳原子组成，其结构由六个异戊二烯单位聚合而成。
三萜类化合物多为四环三萜和五环三萜，少数为链状、单环、双环和三环三萜。
四环三萜常见的结构类型有达玛烷型、羊毛脂烷型、葫芦烷型、甘遂烷型、环阿屯烷型；五环三萜主要包括齐墩果烷型、乌苏烷型、何伯烷型、羽扇豆烷型和木栓烷型。
目前，灵芝中发现三萜类化合物近135种，灵芝三萜类化合物属于高度氧化的羊毛甾烷衍生物，它们具有高脂溶解度，存在于灵芝的中性和酸性组分中。
在灵芝中三萜类化合物的结构中，它们通常含有羟基，在紫外光谱中具有多种波长的特征吸收。
灵芝酸是灵芝中三萜类化合物中的一种重要活性成分。
根据官能团和侧链的不同，又可分为灵芝酸、灵芝内酯、灵芝醇、赤芝酸等基本骨架。
微波提取灵芝中三萜类化合物的研究
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
Vol． 10 No． 2 Apr． 2 0 1 0
微波提取灵芝中三萜类化合物的研究
蒉霄云 何晋浙 王 静 孙培龙 * （浙江工业大学生物与环境工程学院食品系 杭州 310014）
超声
室温 95%乙醇
35
30 min
回流
78℃ 95%乙醇
50
2h
浸提
室温 95%乙醇
50
24 h
2.4 齐墩果酸标准曲线的建立 准确称取 0.0097 g 齐墩果酸标准品， 溶解于
50 mL 无水乙醇中， 配成 0.194 mg/mL 标准溶液。 分别取 0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 于具塞试管 中，水浴挥干。 加入 5%香草醛-冰乙酸 0.2 mL、高 氯酸 1.2 mL，70 ℃水浴加热 15 min。 流水冷却至室 温， 加入乙酸乙酯定容至 5 mL， 振荡后静置 15 min，在 550 nm 处测吸光度值[9]。
氯酸 1.2 mL，70 ℃水浴加热 15 min。流水冷却至室 温， 加入乙酸乙酯定容至 5 mL， 振荡后静置 15 min，在 550 nm 处测吸光度值。 根据标准曲线及所 得吸光度值计算灵芝三萜含量。 计算公式：
-6
Y= A+0.0029 × 100 × 10 ×100% 0.007 V 5
保肝抗肿瘤降血hivl蛋白酶活性抑制组胺释抑制血管紧张素转化酶和抑制胆固醇合成等作用虽然灵芝三萜的药理作用极强但其含量较低且灵芝子实体结构坚硬致密使用传统的提取条件如回流浸提等提取时间长溶剂量大三萜提取率较低近年来随着超声与超临界萃取技术的发展灵芝三萜的提取研究有了新的进展新型微波技术在灵芝三萜提取中的应用目前鲜有报道35微波提取技术是近年来发展起来的新型提取技术具有选择性高耗时少能耗低排污量少等优点是目前天然产物提取的创新技术技术是利用产生的高频电磁波穿透组织外层结构而迅速到达组织内部由于吸收微波能使组织内部温度和压力迅速上升导致细胞破裂有效成分自由流出所以能够迅速有效地提取植物类的有效成分68本文将微波技术应用于灵芝中三萜类化合物的提取做响应面分析responsesurfacemethod及提取条件优化试验并与传统的提取方法超声法回流法和浸提法进行了比较研究
灵芝孢子粉中三萜类化合物的研究进展
study[J]. Toxicol Res, 2015, 4(4): 948-955.[8] Dunning S, ur Rehman A, Tiebosch MH, et al. Glutathione andantioxidant enzymes serve complementary roles in protecting activated hepatic stellate cells against hydrogen peroxide-induced cell death[J]. Biochim Et Biophys Acta BBA - Mol Basis Dis, 2013, 1832(12): 2027-2034.[9] Jiang LL, Jiang Y, Zhao DS, et al. CYP 3A activation andglutathione depletion aggravate emodin-induced liver injury [J]. Chem Res Toxicol,2018,31(10):1052-1060.[10] Liu XY, Liu YQ, Cheng MC, et al. Metabolomic responses ofhuman hepatocytes to emodin, aristolochic acid, and triptolide: chemicals purified from traditional Chinese medicines[J]. J Biochem Mol Toxicol, 2015, 29(11): 533-543.[11] Wu L, Han W, Chen Y, et al. Gender differences in thehepatotoxicity and toxicokinetics of emodin: the Potential Mechanisms Mediated by UGT2B7 and MRP2[J]. Mol Pharm, 2018, 15(9): 3931-3945．[12] Lin NH, Yang H W, Su Y J, et al. Herb induced liver injuryafter using herbal medicine: A systemic review and case-control study[J]. Medicine, 2019, 98(13): e14992.[13] 朱春雾, 王海南, 张亚蕾, 等.140例中药肝损伤病例的临床特征分析[J]. 肝脏, 2019, 24(4): 362-364.[14] Wang JB, Kong WJ, Wang HJ, et al. Toxic effects caused byrhubarb (Rheum palmatum L.) are reversed on immature and aged rats[J]. J Ethnopharmacol, 2011, 134(2): 216-220.[15] 张莉. 生大黄粉敷脐治疗老年长期卧床便秘患者的临床观察[J]. 内蒙古中医药, 2016, 35(12): 83.[16] 唐廷猷. 清代徐大椿《制药论》译评[J]. 中国现代中药, 2017,19(9): 1315．[17] 姬春好. 大黄炮制及临床应用[J]. 甘肃中医学院学报, 2008,25(1): 41-43．[18] 王伽伯, 马永刚, 金城, 等. 对应分析在大黄炮制减毒“量-毒”规律研究中的应用[J]. 中国中药杂志, 2009, 34(19): 76-80.[19] 史黎萍, 赵志国. 中药大黄不同炮制方法对其毒性减毒效果的研究[J]. 中医临床究, 2019, 11(23): 133-135.[20] 孟菲, 王娇, 马彦江, 等. 基于2015版《临床用药须知》成方制剂中大黄炮制品选择的探讨[J]. 中医研究, 2019, 32(8): 78-81.[21] 李建民, 谢晨. 论中药配伍减毒与增效[J]. 中华肾病研究电子杂志, 2018, 7(4): 20-22.[22] 陈艳琰, 曹玉洁, 唐于平, 等. 甘草调和大黄“泻下攻积”作用的量-毒-效关系研究[J].中国中药杂志, 2019, 44(10): 2131-2138.[23] 柴宝娟, 李祥, 陈建伟. 大黄配伍前后对大鼠肝肾的影响[J].中药药理与临床, 2012, 28(3): 66-69.[24] 毕超然, 张鹏, 朴春丽. 大黄临床应用及其用量[J]. 吉林中医药, 2019, 39(1): 34-37.[25] 张锡纯. 医学衷中参西录[M]. 太原: 山西科学技术出版社,2009.[26] 朱良春. 朱良春用药经验集[M]. 长沙: 湖南科学技术出版社,2007.[27] 张赏, 任双杰, 秦竞开. 李炳茂教授重用大黄治疗疑难病验案举隅[J]. 河北中医, 2015, 37(10): 16-19.[28] 葛晨, 吴国忠, 陆春雷, 等. 不同剂量生大黄对胃肠肿瘤病人术后胃肠道功能的影响[J].肠外与肠内营养, 2015, 22(2): 85-87, 91.[29] 张骏, 徐益文, 周新宇, 等. 大黄在重症急性胰腺炎治疗中的剂量探讨[J]. 河南外科学杂志, 2016, 22(3): 31-32.[30] 杜莉, 朱晓彤. 他汀类药物肝毒性临床分析[J]. 中国现代药物应用, 2016, 10(7): 5-6.[31] 赵红, 王琦, 谢雯. 药物性肝损伤: 老话题, 新热点[J]. 现代医药卫生, 2018, 34(13): 1940-1943.[32] Yu YC, Mao YM, Chen CW, et al. CSH guidelines for thediagnosis and treatment of drug-induced liver injury[J]. Hepatol Int, 2017, 11(3): 221-241.[33] Philips CA, Augustine P, Rajesh S, et al. Complementary andAlternative Medicine-related Drug-induced Liver Injury in Asia[J]. J Clin Transl Hepatol, 2019,7(3):263-274.（收稿：2020-03-23 修回：2020-12-10）文献综述基金项目：天津市中医药管理局中医中西医结合基金资助项目（2017034）天津市南开医院药学部（天津 300100）通信作者：阎 姝，E-mail ：133****************灵芝孢子粉中三萜类化合物的研究进展夏亚飞，阎 姝摘要：灵芝是担子菌纲、多孔菌科、灵芝属真菌的总称，为我国具有较高药用价值的传统珍贵中药材。
灵芝三萜类化合物药理作用研究进展
灵芝三萜类化合物药理作用研究进展【摘要】灵芝（Ganoderma）为层菌纲目灵芝菌科，灵芝属真菌的总称。
习惯所称灵芝是灵芝属中赤芝[ Ganoderma lucidum (Lwyss.ex Fr) Karst ]的子实体部分，其主要成分之一是三萜类化合物。
该类化合物有较高的脂溶性，分子量一般为400-600，化学结构复杂由于化学结构的多样性，使三萜类化合物有较广泛的药理活性。
【关键词】：三萜类；素芝；药理作用对灵芝三萜类化合物的深入研究，有利于灵芝有效成分的寻找和进一步阐明其药理作用机制。
现对近年有关灵芝三萜类的化学结构，药理作用及作用机制综述如下：（一）灵芝属三萜类新化合物对灵芝脂溶性成分的研究在20世纪80年代达到了高潮，1982年Kubota等首次分离到灵芝酸A和灵芝酸B。
1988年从灵芝属中先后又分离到19个三萜类新化合物，用波谱技术对其化学结构进行了鉴定。
（二）药理作用1 保肝作用王明宇等从赤芝子实体中得到粗组分GT，进一步经硅胶柱色谱得5个组分（GT-GT）,JI 经HPLC检测证实该GT和GT2主要含灵芝酸A和赤芝酸A，实验表明GT和GT2对四氯化碳，氨基半乳糖苷和卡介苗，脂多糖所致的3种肝损伤模型小鼠有较好的保肝作用，可明显降低模型动物的血清ALT和肝脏TG含量，并不同程度减轻动物肝损伤。
2 抗肿瘤作用作者从赤芝菌丝体中提取得到6个有细胞毒活性的三萜类化合物灵芝酸U V W X Y 和Z。
体外实验能明显抑制小鼠肝肉瘤细胞的增殖。
Lin等从赤芝子实体中分离到2个三萜类化合物灵芝酸A和双氢灵芝醛A，体外实验表明两者有较强的抑瘤活性，对人肝肉瘤细胞和KB细胞ED50 值均在1-11μg/ml。
以灵芝醛A作用最强。
3 抗HIV-1`及HIV-1蛋白酶活性Min等从赤芝孢子粉中分离得到灵芝酸β，灵芝酸B,多糖，和灵芝酸A.体外试验表明对HIV-1蛋白酶活性有明显抑制作用，其IC50分别是20.50.90.70和70μmol.L-1,此外灵芝酸A,灵芝酸B,灵芝酸C1亦有中度的抑制作用，其IC50为140-430μmol/L-1 。
灵芝有效成分的提取方法
灵芝有效成分的提取方法灵芝（Ganoderma lucidum）是一种珍贵的药用真菌，被广泛应用于中医药和保健品领域。
灵芝含有多种生物活性成分，如多糖、三萜类化合物、脂肪酸、黄酮类化合物等。
提取灵芝有效成分的方法主要包括水提、乙醇提取、超声波辅助提取、微波与酶解提取等。
下面将详细阐述这几种提取方法。
1.水提取法：水提取法是使用水作为溶剂将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
一般可以分为温水提取和高压水提取两种方法。
温水提取是将灵芝研磨成粉末，加入一定量的水，在适宜温度下进行浸泡或加热搅拌一段时间，然后通过滤液、离心等操作获得提取物。
高压水提取是将灵芝粉末置于高压水解油罐中，在一定温度和压力下进行水解、分离。
2.乙醇提取法：乙醇提取法是利用乙醇作为溶剂将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
一般可分为冷提法和热提法两种方法。
冷提法是将灵芝研磨成粉末，加入适量的乙醇，在低温条件下进行浸泡或搅拌一段时间，然后通过滤液、离心等操作获得提取物。
热提法是将灵芝粉末加入乙醇，在高温条件下进行浸泡或加热搅拌一段时间，然后通过滤液、离心等操作获得提取物。
任何提取方法都应注意乙醇的浓度和提取时间的选择，以提高提取物的纯度和收率。
3.超声波辅助提取法：超声波辅助提取法是利用超声波的作用将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
超声波可以产生剧烈的物理和化学效应，如空化、微压和涡流等，从而促进药物的传质和转化。
通过将灵芝粉末与溶剂一起置于超声波浴中进行超声波辅助提取，可以显著缩短提取时间和提高提取效果。
4.微波与酶解提取法：微波与酶解提取法是利用微波辐射和酶解作用将灵芝中的有效成分提取出来的方法。
微波辐射可以使溶剂分子振动，从而加快颗粒表面和内部的物质传递速率；酶解则是利用灵芝内部酶的活性将有效成分释放出来。
将灵芝粉末与溶剂和酶一起置于微波炉中，进行微波与酶解提取，可以使提取更加高效且提取物质的活性更好。
以上就是几种常见的灵芝有效成分提取方法，每种方法都有其适用的范围和条件。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
A=0.007m-0.0029 （R2=0.9996） 式中，m— ——齐墩果酸质量 （μg）；A— ——吸光 度。 2.5 灵芝三萜含量的计算 根据所得标准曲线， 在 19.4~135.8 μg 范围， 吸光度与三萜含量线性相关。 将不同提取方法制 得的灵芝三萜粗品以甲醇定容至 100 mL，取适量 溶液水浴挥干，加入 5%香草醛-冰乙酸 0.2 mL、高
3.2 灵芝三萜微波提取工艺优化 3.2.1 响应面法试验优化 根据 Box-Benhnken 模 型，采用 design-expert 7.0 软件分析，以微波提取 灵 芝 三 萜 的 时 间 、 功 率 、 温 度 、 液 料 比 为 变 量 ，75%
乙醇为溶剂，以灵芝三萜提取率为响应值，优化微 波提取灵芝三萜工艺， 进行方差分析及建立响应 面 模 型[12-14]，并 用 此 模 型 对 微 波 提 取 灵 芝 三 萜 进 行 分 析 和 预 测 [15-17]。
氯酸 1.2 mL，70 ℃水浴加热 15 min。流水冷却至室 温， 加入乙酸乙酯定容至 5 mL， 振荡后静置 15 min，在 550 nm 处测吸光度值。 根据标准曲线及所 得吸光度值计算灵芝三萜含量。 计算公式：
-6
Y= A+0.0029 × 100 × 10 ×100% 0.007 V 5
模型 残差 总回归
表 4 回归方程方差分析 Table 4 Analysis of variance （ANOVA） for regression equation
自由度 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 14 14 28
复 相 关 系 数 平 方 （R2） 0.9745
平方和 SS 0.032000 0.012000 0.003468 0.011000 0.000951 0.000040 0.004549 0.000696 0.000289 0.000036 0.000072 0.000506 0.000342 0.000056 0.066000 0.001772 0.067000
分自由流出，所以能够迅速、有效地提取植物类的 有效成分[6-8]。 本文将微波技术应用于灵芝中三萜 类化合物的提取， 做响应面分析 （Response Surface Method）及提取条件优化试验，并与传统的提 取方法— ——超声法、 回流法和浸提法进行了比较 研究。
1 试验材料
1.1 菌株 赤灵芝，购自浙江龙泉。
0.894
22
0
1
0
-1
0.950
23
0
-1
0
1
0.927
24
0
1
0
1
1.021
25
0
0
0
0
0.964
26
0
0
0
0
0.971
27
0
0
0
0
0.967
28
0
0
0
0
0.962
29
0
0
0
0
0.970
第 10 卷 第 2 期
微波提取灵芝中三萜类化合物的研究
93
变异来源 X1 X2 X3 X4 X1X1 X2X2 X3X3 X4X4 X1X2 X1X3 X1X4 X2X3 X2X4 X3X4
表 1 其它提取灵芝三萜方法
Table 1 Other extraction methods of triterpenoid
saponins from Ganaderma lucidum
方法
温度
液料比/ 溶液类型
mL·g-1
时间
水浴加热
75℃ 75%乙醇
33
17 min
超声
75℃ 95%乙醇
33
17 min
均方 MS 0.032000 0.012000 0.003468 0.011000 0.000951 0.000040 0.004549 0.000696 0.000289 0.000036 0.000072 0.000506 0.000342 0.000056 0.004697 0.000123
摘要 利用微波技术研究灵芝三萜类化合物的提取工艺条件。 以乙醇浓度、提取时间、功率、液料比、温度为工 艺参数，通过单因素及 Box-Benhnken 模型，做四因素三水平响应面优化提取条件试验；通过响应面模型的回归 分析，获得最佳提取工艺条件：乙醇体积分数 75%、提取温度 75 ℃、功率 870W、液料比 33 mL/g、时间 17 min。 在 此条件下灵芝三萜的平均提取率为 1.043%，一次提取率可达 93%。 与未经微波处理的超声法、回流法、浸提法 相比，微波处理可使三萜提取率提高 150%。 超声法、回流法和浸提法的三萜提取率分别为微波提取法的 72%、 86%和 63%，且提取时间长，溶剂耗量大。 采用微波技术提取灵芝三萜类的工艺，稳定性好，提取率高。
虽然灵芝三萜的药理作用极强， 但其含量较 低，且灵芝子实体结构坚硬、致密，使用传统的提 取条件，如回流、浸提等提取时间长，溶剂量大，三 萜提取率较低。 近年来，随着超声与超临界萃取技 术的发展，灵芝三萜的提取研究有了新的进展。 而 新型微波技术在灵芝三萜提取中的应用， 目前鲜 有报道[3-5]。 微波提取技术是近年来发展起来的新 型提取技术，具有选择性高、耗时少、能耗低、排污 量少等优点，是目前天然产物提取的创新技术。 该 技术是利用产生的高频电磁波， 穿透组织外层结 构而迅速到达组织内部。 由于吸收微波能使组织 内部温度和压力迅速上升，导致细胞破裂，有效成
编号
X1（ 温 度 /℃）
X2（ 功 率 （ 时 间 /min）
Y（ 三 萜 含 量 /%）
1
-1
-1
0
0
0.884
2
1
-1
0
0
0.960
3
-1
1
0
0
0.930
4
1
1
0
0
1.040
5
0
0
-1
-1
0.880
6
0
0
1
-1
0.920
7
0
0
-1
1
0.935
8
0
0
1
1
0.990
关键词 微波提取； 灵芝三萜； 响应面法 文章编号 1009-7848（2010）02-0089-08
灵芝作为一类大型药食兼用真菌， 因具有滋 补强体、 延年益寿等显著功效而越来越受到人们 的重视[1]。 在其众多的活性物质中，灵芝三萜是灵 芝中一种重要的基础药效成分， 药理试验证实其 具有多种药理作用，主要包括：保肝、抗肿瘤、降血 糖 、抗 HIV-1 及 HIV-l 蛋 白 酶 活 性 、抑 制 组 胺 释 放、 抑制血管紧张素转化酶和抑制胆固醇合成等 作 用 [2]。
第 10 卷 第 2 期 2010 年4月
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
Vol． 10 No． 2 Apr． 2 0 1 0
微波提取灵芝中三萜类化合物的研究
蒉霄云 何晋浙 王 静 孙培龙 * （浙江工业大学生物与环境工程学院食品系 杭州 310014）
92
中国食品学报
2010 年第 2 期
表 2 提取试验的因素与水平 Table 2 Factors and levels in extraction experiment
水 平 （Xi） -1
x1（ 温 度 /℃） 65
因素
x2（ 功 率 /W）
x3（ 液 料 比 /mL·g-1）
700
25
0
70
超声
室温 95%乙醇
35
30 min
回流
78℃ 95%乙醇
50
2h
浸提
室温 95%乙醇
50
24 h
2.4 齐墩果酸标准曲线的建立 准确称取 0.0097 g 齐墩果酸标准品， 溶解于
50 mL 无水乙醇中， 配成 0.194 mg/mL 标准溶液。 分别取 0、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 于具塞试管 中，水浴挥干。 加入 5%香草醛-冰乙酸 0.2 mL、高 氯酸 1.2 mL，70 ℃水浴加热 15 min。 流水冷却至室 温， 加入乙酸乙酯定容至 5 mL， 振荡后静置 15 min，在 550 nm 处测吸光度值[9]。
1.2 试剂 齐墩果酸标准品，中国药品生物制品检定所；
其它试剂均为国产分析纯级。 1.3 主要仪器及设备
752 型紫外-可见光分光光度计，上海光学仪 器有限公司；MAS-Ⅱ微波提取装置， 上海市新仪 微 波 化 学 科 技 有 限 公 司 ；KQ-100B 超 声 波 清 洗 器， 昆山市超声仪器有限公司；RE-52AA 旋转蒸 发器， 上海亚荣生化仪器厂；HH-2 恒温水浴锅， 金坛市江南仪器厂。
式中，A— ——吸光度；Y— ——三萜提取率 （%）； V— ——测吸光度时所取溶液体积（mL）。
3 试验结果
3.1 微波提取灵芝三萜单因素试验 以乙醇浓度、时间、功率、温度、液料比 5 种工
艺参数做微波提取试验， 确定其响应面优化试验 的因素及水平，结果如图 1 所示。 3.1.1 乙醇浓度对灵芝三萜提取率的影响 乙醇 是常用的灵芝三萜提取溶剂 ， [10-11] 其它提取条件为 液 料 比 25 mL/g，微 波 提 取 功 率 800 W，提 取 时 间 10 min，提取温度 60 ℃。 试验结果如图 1a 所示。 通 过乙醇浓度的单因素试验， 确定最佳乙醇体积分 数为 75%， 乙醇体积分数过高或过低都会影响提 取率。 3.1.2 提取时间对灵芝三萜提取率的影响 乙醇 体积分数 75%，其它提取条件同 3.1.1 节。 如图 1b 所 示 ，提 取 时 间 超 过 20 min 后 ，随 着 提 取 时 间 的 增加，灵芝三萜提取率增加不明显，故选择 20 min 为最佳提取时间。 3.1.3 微波功率对灵芝三萜提取率的影响 提取 时间 20 min，其它提取条件同 3.1.2 节。 由图 1c 可 知，三萜提取率随着微波功率的增加而增加，但当 功率在 800~1 000 W 时，其提取率变化不大。 结合 能 源 因 素 考 虑 ， 选 择 800 W 为 最 佳 微 波 提 取 功 率。 3.1.4 提取温度对灵芝三萜提取率的影响 提取 条件同 3.1.3 节。 由图 1 d 可知，温度对灵芝三萜 提取率的影响很大。 当温度 75 ℃时三萜提取率最 高，故 75 ℃为最佳提取温度。 此时溶液在微波的 作用下呈微沸状态，通过冷凝回流，提取效果好。 在微波作用下 75%乙醇的沸点为 78 ℃，而此温度 下得到的灵芝三萜提取率不高， 可能是由于反应 过于剧烈，导致一定损失。 3.1.5 液料比对灵芝三萜提取率的影响 提取温