临床检验中的发光免疫分析讲解
临床检验中的发光免疫分析讲解课件
对甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3
但FT3 、 FT4灵敏度要求高，且易受干扰 发光法提高了灵敏度，使得其临床应用普遍性超过TT4和TT3
第一代（放免）
第二代
第三代
两步法 操作时间长
灵敏度差 准确性差
类似物法 操作时间短 灵敏度较好 准确性较好
反向竞争法 （标记抗体） 操作时间短 灵敏度更好 准确性更好
发光强度（X）
单光子计数式发光检测仪
单光子计数器
样品运动/定位装置 原位注射泵
计数/贮存器 打 印 机
程控高压
计
算
控制器
机
程控自动门锁及检测装置 发光仪执行模块
发光仪控制模块
光生物学技术的应用范围
军事侦测 公安稽查 卫生检疫 药物筛查 医学诊断 环境检测 航天遥感 生命科学
……
第三代 TSH检测试剂盒
第四代 TSH检测试剂盒
以TSH(促甲状腺素)为例
目前商品化发光免疫分析产品的几个特点
大多采用全自动工作方式，部分采用微孔板半自动方式 多采用磁性或非磁性微粒包被，以增加表面积，使反应时间缩短 使用内建标准曲线加校正的办法产生工作曲线 部分产品采用流动池测定方式(适合于闪光型发光或电化学发光)
发光时间在数十分钟以上，如： HRP-Luminol系统 AP-AMPPD系统 黄嘌呤氧化酶系统
无须原位进样、 以速率法测量。
闪光与辉光及其测量方式的差别
闪光尖峰 发光信号
积分法测量
辉光坪区
原位进样
速率法测量
时间
商业化产品中常见的化学发光系统（一）
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统
O
H2O2+
化学发光分析和生物发光分析在医学检验中的应用
化学发光分析和生物发光分析在医学检验中的应用化学发光分析是一种利用化学反应产生发光的分析方法。
它与其他分析方法相比具有高灵敏度、宽线性范围和较低检测限等优点。
在医学检验中，化学发光分析主要应用于药物浓度检测、肿瘤标志物检测、生化指标检测等方面。
首先，化学发光分析在药物浓度监测中发挥着关键的作用。
根据化学发光分析原理，通过测定药物产生的发光信号强度，可以准确测定药物在体内的浓度。
这对于临床医生调整药物剂量、监测药物疗效和副作用等具有重要意义。
例如，青霉素药物浓度检测是常见的应用之一，药物在血液样品中与含有发光底物的系统发生反应，并发出可测定的发光信号，进而确定药物浓度。
其次，化学发光分析在肿瘤标志物检测中具有广泛应用。
肿瘤标志物是指一些特定蛋白质、多肽或糖类，其在肿瘤形成和发展过程中会发生相应的变化。
通过检测肿瘤标志物的浓度变化，可以对肿瘤的诊断和疾病进展进行评估。
化学发光分析可以通过特定反应体系，使样品中的肿瘤标志物与发光底物结合，从而测定其浓度。
这种方法具有灵敏度高、准确性强的优势。
例如，CA125标志物检测在卵巢癌的诊断中被广泛应用，通过化学发光分析可以对CA125标志物进行测定，帮助医生判断病情。
最后，生物发光分析是利用生物体内发光反应产生的发光信号进行分析的方法。
生物发光分析主要通过测定生物发光反应的光强来确定需要分析的物质的浓度和活性。
在医学检验中，生物发光分析常用于病原体检测、DNA检测和免疫分析等方面。
生物发光分析在病原体检测中发挥重要作用。
通过使用特定的生物发光分析试剂盒，可以对多种常见的致病菌如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等进行快速检测。
这种检测方法不仅具有高灵敏度、快速和准确性，还可以提供特定病原体的定量结果。
此外，生物发光分析还可应用于基因检测和免疫分析。
例如，在基因检测中，可以使用荧光标记的探针进行基因突变的检测，通过测定发光信号的强度来确定是否存在基因异常。
在免疫分析中，可以通过测定免疫反应的特定生物发光信号来定量分析免疫指标的含量。
化学发光免疫分析技术及其在临床检验中的应用
化学发光免疫分析技术及其在临床检验中的应用化学发光免疫分析技术，实质上就是将免疫分析方法与化学发光有机结合在一起的一项技术，也是现阶段最为先进的一项标记免疫分析技术，具备免疫分析的高选择性与化学发光的高灵敏度，在药物分析与临床监测中的应用范围非常广泛，尤其是在临床检验中的应用。
本文主要针对化学发光免疫分析技术进行深入分析，探究化学发光免疫分析技术在临床检验中的应用方法与效果。
Abstract：Chemiluminescence immunoassay technology，essentially immune analysis method in combination with chemical luminescence of a technology，is also a mark immune analysis at present the most advanced technology，with high selectivity and chemiluminescence immune analysis of high sensitivity，and its application in pharmaceutical analysis and clinical monitoring scope is very broad，especially the application in the clinical laboratory.This paper focuses on analyzing the chemiluminescence immunoassay technology，explore the chemiluminescence immunoassay technology application in the clinical test methods and results.Key words：Chemiluminescence immunoassay technology；Clinical trial；Application临床检验过程中，经常需要检测与分析一系列表征性物质，以此对疾病进行判断[1]。
发光免疫分析技术
小结
发光指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态跃 迁到激发态，然后再回到基态，并释放光子的过程。
化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化学能 使分子激发而发光。
化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相结 合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分析技 术，分为直接化学发光免疫分析，化学发光酶免疫 分析和电化学发光免疫分析。
态时发光，这种过程叫间接化学发光。
反应过程表示如下：
A十B
C*
C*十D
C十D*
D*
D十h·γ
化学发光剂和标记技术
一、化学发光剂
在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式 释放能量的化合物，称为化学发光剂或发光底物。
化学发光剂的基本条件
发光的量子产率高； 它的物理-化学特性要与被标记或测定的
物质相匹配； 能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物； 其化学发光常是氧化反应的结果； 在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性
（一）直接化学发光剂
直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化 作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生 发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。
一. 代表物质：吖啶酯，在碱性条件下被H2O2氧化时,发出 波长470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲 基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
鲁米诺及其衍生物amppd二酶促化学发光剂鲁米诺增强发光反应原理amppd32螺旋金刚烷4甲氧基43磷酰氧基苯12二氧杂环丁烷用吖啶酯直接标记抗体抗原与待测标本中相应的抗原抗体发生免疫反应后形成固相包被抗体待测抗原吖啶酯标记抗体复合物这时只需加入氧化剂h和naoh使成碱性环境吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解发光由集光器和光电倍增管接收记录单位时间内所产生的光子能这部分光的积分与待测抗原的量成正比可从标准曲线上计算出待测抗原的含量
临床检验中化学发光免疫分析的应用研究
新粘结 ，使 用至今未脱落 。另一例失败病 例为根尖周 炎导致修复 体拆 除 ，重新根管治 疗后修复 至今未有异常 。粘结是纤 维桩 成功 的关键 ， 隔湿是粘结操作 中最基本 的要 求。只要适 应证选择合理 操作正确纤 维
桩在 临床中达到零失败是有可能 的。 参 考文 献 ［ １ 】 毛峻武， 王萍． 纤维 桩 系 统 的发展 历 史 与进 展 ［ Ｊ ］ ． 中国 临床 实 用 医学 ， ２ ０ １ ０ ， １ １ （ １ １ ） ： ２ ４ １ — ２ ４ ２ ． ［ ２ ］ 南桂 枝， 杨 孟云 ． 桩 核 冠对牙 体缺 损修 复 中的应用 及效 果评 价 ［ Ｊ ］ ＿
口腔 门诊部 ）接 受纤维桩修复 ，能 自愿配合 治疗 及 随诊 的患者８ ９ 名， 共使 用纤维 桩 １ ３ ６ 颗 。所 有患者 皆有本 人完成 。患者年 龄范 围１ ７ 岁至 ７ ５ 岁 ，所有 纤维桩 为瑞士康特威尔登特Ｐ ａ ｒ ａ Ｐ ｏ ｓ ｔ Ｔ ａ ｐ ｅ ｒ Ｌ ｕ ｘ ，粘结剂及 核采用瑞士康 特威 尔登特 Ｐ ａ ｒ ａ Ｃ ｏ ｒ ｅ 双 固化高强度复合树 脂。 １ ． ２ 纤维桩 修复操 作步骤 如下 ：①确定根 管大小 ：通过ｘ线检查 确定 要预备 根管 的长度和直径 。②桩 的选择 ：根 据ｘ 线检查 的根管直 径选 择 桩 的直径 。根 管壁要 保 留至少 ｌ ｍｍ厚度 ，根尖 部分保 留３ ～ ５ ｍｍ牙 胶 尖 。③根管预备 ：ａ ． 去 除牙胶尖 ：用 预成钻 或热牙胶充 填器去 除牙 胶 尖。ｂ ． 根管成型 ：用引导 钻作初步 预备 ，用橡 皮标 出所 要预备 的长
中国美容 医学 ， ２ ０ １ ２ ， ２ １ （ ６ ） ： １ ０ １ ５ — １ ０ １ ６ ．
化学发光免疫分析
3
在血循环中，约99.5%的T3与TBG结合，但T3与TBG的亲和力明显低于T4；T3不与TBPA结合
参考范围：0.58—1.62 ug/dL 临床意义： T3升高：⑴见于甲状腺功能亢进的病人，轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化较T4明显，适合轻型甲亢、早期甲亢和亚临床甲亢以及甲亢治疗后复发的诊断；T3型甲亢仅有T3和FT3升高； ⑵与T4一样，T3亦受TBG变化影响，但受影响程度不及T4。 T3降低： ⑴仅于较重甲状腺功能减退的病人，T3和T4均下降，轻型甲减T3不一定下降； ⑵重症全身性疾病状态或慢性病变可导致T3下降，多见于慢性肾功能不全、慢性心功能不全、糖尿病、心梗等疾病的患者。
参考范围：5.0—14.5ug/dl（CENTAUR） 临床意义： T4升高：⑴见于甲状腺功能亢进的病人，但轻型甲亢、早期甲亢、亚临床甲亢的变化未如T3明显； ⑵凡引起TBG升高的因素均可使T4升高，如妊娠、应用雌激素、葡萄胎、淋巴瘤、血卟啉病等；⑶药物如胺碘酮、含碘造影剂、β受体阻断剂、奋乃近、海洛因等 T4降低： ⑴见于甲状腺功能减退的病人，轻型甲减、亚临床甲减的变化较T3明显； ⑵缺碘性甲状腺肿可见T4降低或在正常低限，而T3正常； ⑶肾病综合征、肝功能衰竭、遗传性TBG缺陷症、肢端肥大症、重症全身性疾病状态等；⑷以及应用糖皮质激素、雄激素、生长激素、苯妥英钠等药物
血清FT3和FT4降低： ⑴甲减病人两者皆下降，但轻型甲减、甲减初期多以FT4下降为主；⑵低T3综合征仅有FT3下降； ⑶某些药物，如苯妥英钠、多巴胺、糖皮质激素也可使FT3和FT4降低。
临床意义：
T3、T4均升高：高TBG血症、甲亢、甲状腺激素不敏感综合征。 T4升高，T3正常或下降：家族性白蛋白异常性高T4血症；胰高血糖素瘤；药物普萘洛尔、胺碘酮、胆囊造影剂；全身性疾病、精神性疾病；苯丙胺成瘾；T4型甲亢、甲亢伴T4转换T3障碍。 T4正常，T3升高：T3型甲亢；甲减用T3或者其他甲状腺激素制剂替代治疗后 T4正常，T3下降：患有全身性疾病时；5’单脱碘酶活性下降；血皮质醇升高的各种情况；营养不良综合征。 T4下降、T3升高：医源性甲亢；甲状腺功能正常病人服用甲状腺激素制剂。 T4下降，T3正常：轻至中度甲减；碘缺乏；苯妥英钠、卡马西平。 T3和T4均下降：中至重度甲减；重症全身性疾病；低TBG血症；大剂量使用水杨酸制剂
谈一谈化学发光免疫分析技术在临床检验中的作用
谈一谈化学发光免疫分析技术在临床检验中的作用发表时间：2020-09-08T14:21:18.157Z 来源：《中国医学人文》2020年16期作者：色郎康珠[导读] 化学发光免疫分析（CLLA）属于一个新型的标记免疫分析的技术化学发光免疫分析（CLLA）属于一个新型的标记免疫分析的技术，主要是将具有灵敏度特别高的化学发光测定技术和高特异性的免疫反应相结合而创建的检测。
微量抗原或抗体，其具有非常灵敏的特点，还包括其检测内容比较细致、操作容易等等一些优良特点，所以被广泛的使用在临床的检验当中。
而且化学发光免疫分析能够帮助患者对于其所患的疾病以及身体病理特征进行更加及时更加有效的判断，这为临床的诊断提供了科学的参考依据。
基于此，本文结合实际生活中的相关治疗，对于化学发光免疫分析的相关技术以及具体的应用进行以下相关的分析和探讨，希望对大家能够有所帮助。
化学发光免疫技术的科学原理化学发光免疫技术的主要原理是通过化学发光剂，直接对患者的抗体或者是抗原进行基本的标记。
待抗原体、磁性颗粒性出现任何的反应之后，能够经过磁场的作用将游离和结合状态之下的化学发光剂进行快速的分离，进而能够将化学发光剂添加到已经结合的状态当中去，并且进行更加快速的反应。
同时，在这样的状态下进行监测，可以将发光度变小，测量的方式一定要通过定性或者定量的方式进行检测。
化学发光剂免疫技术的基本类型1、酶催化化学发光的免疫分析酶催化化学发光免疫技术主要是在抗体或者抗原在检测的标本中发生反应的时候，医生通过发光的酶来当做基本的标记物。
2、直接标记发光物质的免疫分析直接标记的发光剂免疫技术主要是通过更加直接的方式直接通过吖啶酯对抗体进行标记，等到抗体出现符合复合反应的现象以后，从中加入NaOH以及带有双氧水的氧化剂之后会出现碱性的化学性质，同时还会呈现出发光的特殊现象。
3、电化学发光的免疫分析电化学发光的免疫分析类型主要是分析了化学反应的光以及电化学，依托于三丙胺，并且将三丙胺当做电子的供体，通过使用三联吡啶钌对抗体或者抗原进行基本的标记，通过电场的基本作用发生电子转移的现象，同时还会出现发光的特殊反应。
荧光和化学发光免疫分析方法
荧光和化学发光免疫分析方法免疫分析是利用抗原抗体反应进行的检测方法，即利用抗原与抗体的特异性反应，应用制备好的抗原或抗体作为试剂，以检测标本中的相应抗体或抗原。
由于免疫的特异性结合，免疫分析方法具有很好的选择性，荧光免疫分析和化学发光免疫分析是其中典型的两种。
本文将对这两种免疫分析方法进行详细的介绍。
一、免疫免疫是指机体免疫系统识别自身与异己物质，并通过免疫应答排除抗原性异物，以维持机体生理平衡的功能。
免疫是人体的一种生理功能，人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分，从而破坏和排斥进入人体的抗原物质，或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等，以维持人体的健康。
特异性免疫系统，是一个专一性的免疫机制，针对一种抗原所生成的免疫淋巴细胞（浆细胞）分泌的抗体，只能对同一种抗原发挥免疫功能。
而对变异或其他抗原毫无作用。
1、抗原1.1抗原的定义抗原：是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答（免疫原性），并能与相应抗体在体内或体外发生特异性结合的物质（免疫反应性）。
抗原一般为大分子物质，其分子量在10kD以上。
1.2抗原的分类完全抗原：同时具有免疫原性和免疫反应性的抗原，如细菌、病毒、异种动物血清等。
半抗原：仅具有与相应抗原或致敏淋巴细胞结合的免疫反应性，而无免疫原性的物质。
如大多数的多糖、类脂及一些简单的化学物质，它们本身不具免疫原性，但当与蛋白质大分子结合后形成复合物，便获得了免疫原性，1.3抗原的性质决定簇是指抗原分子表面的基团，它直接决定免疫学反映的特异性。
抗原通过抗原决定簇与相应淋巴细胞表面抗原受体结合，从而激活淋巴细胞，引起免疫应答，抗原也藉此与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合。
因此，抗原决定簇是被免疫细胞识别的靶结构，也是免疫反应具有特异性的物质基础。
2、抗体2.1抗体的定义抗体：是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白。
2.2抗体的结构抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性故又称作免疫球蛋白。
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化学发光的分类
按化学反应类型
酶促化学发光：
辣根过氧化物酶系统
碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统
按发光持续时间
闪光（Flash）:
发光时间在数秒内，如吖啶酯
以原位进样(In Situ Injector) 和时 间积分法测量
非酶促化学发光：
吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁-鲁米诺系统
辉光（Glow）:
针对掩蔽性抗原
胰 岛 素
真胰岛素
抗体选择——HCG
(TSH、PRL、LH、FSH类似)
多抗或无选择性单抗
普通HCG
β 亚 单 位
α 亚 单 位
α 亚 单 位
β 亚 单 位
α 亚 单 位
X
α亚单位特异
β 亚单位特异
针对掩蔽性抗原
β HCG
α β 亚 亚 单 单 位 位
β 亚单位特异
β 亚单位特异
β HCG游离亚单位
常、服用类固醇药物等均可造成这些激素测定结果的异常。
消化样品 ↓ 萃取有机相 ↓ 分子筛柱分离各类甾体 ↓ 测定
减少—— 结合蛋白 类似物 前体 代谢产物 ——干扰
血清直接测定 + 高特异性单抗 + 结合蛋白屏蔽技术
经典方法
直接测定法
游离甲状腺激素测定方法的进展
常见甲功指标：TSH、FT3、FT4、TT3、TT4 对甲亢的诊断价值依次为：TSH=FT3＞FT4＞TT3＞TT4 对甲低的诊断价值依次为：FT4=TSH＞TT4＞FT3＞TT3 但FT3 、 FT4灵敏度要求高，且易受干扰 发光法提高了灵敏度，使得其临床应用普遍性超过TT4和TT3 第一代（放免） 两步法 操作时间长 灵敏度差 准确性差 第二代 类似物法 操作时间短 灵敏度较好 准确性较好 血清FT3 、 FT4试剂盒的发展 （消除结合蛋白对测定的影响） 测定游离激素的参考方法（“金”标准）：平衡透析法（透析液过多可导致测值偏高） 操作复杂、采样量大，不适于临床常规 第三代 反向竞争法 （标记抗体） 操作时间短 灵敏度更好 准确性更好
发光（Luminescence）
化学发光（Chemiluminescence） 生物发光（Bioluminescence）
由于化学反应（通常是氧化）或生物化学反应产生电 子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量并 产生光子，从而导致的发光现象。与荧光最大的区别 在于无需激发光，因此后者也被称为光致发光。 生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发 光体温度升高所致，因此其反应能量绝大部分用于发 光而不是发热，发射波长也与温度无关。 发光测定属发射光谱分析，多采用动力/速率法或积分 法，无需终止反应，也不受朗伯-比尔定律限制； 而酶标显色测定属吸收光谱分析，多采用终点法，需 终止反应，并受朗伯-比尔定律限制。
灵敏度(mol/L)
10-18
10-15
10-12
10-9
酶标 荧光
放免
发光
几种标记/检测技术理论线性范围的比较
线性范围
105 104 103
102
酶标 荧光
放免
发光
几种标记/检测试剂的有效期比较
有效期（月）
18
15 12 9 6
3
0
酶标
荧光
放免
发光
试剂盒
仪器
100,000
人民币 人民币
特殊防护 治理污染
单光子计数器是目前高灵敏度 发光分析仪的核心部件
激发光阴极 产生光电子 在各打拿极之间得到 能量和数目的倍增
在阳极上形 成较强信号
发光样品 产生光子
光电倍增管 高 压 高速分频器 高速比较器 高速放大器
相对发光单位 数字脉冲(RLU)
脉冲信号
单光子计数器的工作特性
光子计数（Y） 理论/校正曲线
由于：单光子计数是在检测随机光子事件 因此：随光子数量增多检测效率持续下降 所以：准确的校正技术是设备品质的关键
发光时间在数十分钟以上，如：
HRP-Luminol系统
AP-AMPPD系统 黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、 以速率法测量。
闪光与辉光及其测量方式的差别
闪光尖峰 发光信号
积分法测量
辉光坪区
速率法测量
原位进样
时间
商业化产品中常见的化学发光系统（一）
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统
O
H2 O 2 +
游离激素测定法的试金石——稀释实验
以游离T4为例,样品稀释20倍以内测值无明显变化 （应扣除实验本身对样品的稀释度并注意基质效应,建议用6-8%BSA稀释）
FT4 + TBG
游离 T4 游离结合蛋白
K
T4TBG
结合常数
结合T4
其中：K=
[T4TBG] [FT4] [TBG]
(固定常数，不变)
由于绝大部分T4呈结合状态，因此：[T4TBG]≈[TT4](总T4); [TBG]≈[总TBG]－[TT4]
故， K≈
[TT4] [FT4] ([总TBG]－[TT4])
即， [FT4]≈
[TT4] K([总TBG]－[TT4])
所以，样品被稀释N倍后， [FT4]≈ [TT4]/N K ([总TBG]/N－[TT4] /N) = [TT4]/N
相
同
[TT4] = K([总TBG]－[TT4]) K ([总TBG]－[TT4])/N
临床检验中的发光免疫分析
原理、优势和值得注意的问题
杨晓林
北京大学医学部研究员 中国生物物理学会光生物学专业委员会副主任委员 国际生物发光和化学发光学会( ISBC）学术理事 Council member of scientific advisory board of International Society on Bioluminescence & Chemiluminescence
线性范围
待测物浓度（ X ）
发光免疫分析技术 的现状及应注意的问题
商品化光生物学标记检测技术性能比较
技术类型 标记、反应体系 酶 促 过氧化物酶、鲁米 诺、氧化剂、增强 剂等 螺旋金刚烷环氧化 物、碱性磷酸酶 非 酶 促 时间分辨荧光 吖啶酯、过氧化氢 主要优点 测量方式简单（速率 法）成本较低、灵敏 度较高 测量方式简单（速率 法）灵敏度较高 灵敏度较高 试剂成本高、发光时间短测量方式复杂（积 分法）需原位进样(In Situ Injector)仪器 成本及维护费用较高试剂成本较高 测量方式复杂（脉冲激发、间歇式测量、流 动池）仪器成本及维护费用高环境及样品中 同类元素可导致本底干扰 主要不足 工作曲线随时间漂移低端斜率呈非线性下移
80,000 60,000 40,000 20,000 0
放免
酶标
发光
三种免疫测定技术的成本及费用 三种免疫测定技术的成本及费用
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0+2SD在该曲线上所对应的浓度值。 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度。 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
已成为现代生物技术最活跃的领域之一
光生物学检测技术的优越性
彻底消除了放射性危害 无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长
容易实现连续、动态、重复测定
适合于复合标记系统进行多指标并行测定 操作简单，反应速度快，容易实现自动化 灵敏度和线性范围超过以往技术
几种标记/检测技术理论极限灵敏度的比较
对仪器的要求：结构简单、运行效率高、故障率低、维护费用少 对试剂盒的相应要求：标准化、成套化、简单化，具体为：
反应/洗涤/测定条件一致；操作步骤少且趋于一致 反应时间短； 通用成分多、专用成分少
Hook(前滞)效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
分析灵敏度（最低检测限）（95%可信度）： S0-2SD在该曲线上所对应的浓度值 功能灵敏度： 测定误差（变异）≤20%的最低可检测浓度 线性范围： （分析）功能灵敏度---变异≤20%的最高检测浓度 相关系数≥0.99的曲线范围
NH2 O
NH HRP NHOHN2 NH2
CO2+Photon (425nm) CO2-
增强剂（Enhancer）
OH R
N
R B OH
OH
R
OH
S
商业化产品中常见的化学发光系统（二）
O
O OCH 3
AP
O
O OCH 3
OPO32O
OOCH3
AMPPD及其衍生物 的化学发光系统
O
*
光子(477nm)
+
O-
商业化产品中常见的化学发光系统（三）
CH3 N+ CH3 N CH3 N + H 2O
吖 啶 酯 化 学 发 光 系 统
OHH+
H2O2
C=O O
HO C=O O
HOO C=O O
R
R CH3 N 光子 + CO2 + O O
R CH3 N + C=O O R OH
发光检测的剂量--反应关系曲线
饱和点 实际计数曲线
模拟（光电流）测量曲线
发光强度（X）
单光子计数式发光检测仪
单光子计数器 计数/贮存器
打 印 机
程控高压 样品运动/定位装置 原位注射泵 控制器 计 算 机
程控自动门锁及检测装置
发光仪执行模块
发光仪控制模块
光生物学技术的应用范围
军事侦测 公安稽查 卫生检疫 药物筛查 医学诊断 环境检测 航天遥感 生命科学 ……