第九章凝集试验
免疫学实验-凝集试验
免疫学实验-凝集试验实验一凝集试验颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，抗原颗粒可相互凝集成肉眼可见的凝集块，称为凝集反应(Agglutination reaction)或凝集试验。
参与凝集反应的抗原称为凝集原（Agglutinogen），抗体称为凝集素（Agglutinin）。
细菌或其它凝集原都带有相同的负电荷，在悬液中相互排斥而呈现均匀的分散状态。
抗原与相应抗体相遇后可以发生特异性结合，形成抗原抗体复合物，降低了抗原分子间的静电排斥力，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于离子的作用，中和了抗原抗体复合物外面的大部分电荷，使之失去了彼此间的静电排斥力，分子间相互吸引，凝集成大的絮片或颗粒，出现了肉眼可见的凝集反应。
根据是否出现凝集反应及其程度，对待测抗原或待测抗体进行定性、定量测定。
凝集反应包括直接凝集反应和间接凝集反应两大类，本实验主要介绍直接凝集反应。
[目的要求]1. 掌握平板凝集试验和试管凝集试验的操作方法。
2. 掌握凝集试验的结果判定及判定标准。
3. 熟悉平板凝集试验和试管凝集试验所需材料和试剂。
[材料与试剂]1. 玻板，载玻片，试管（1cm x 8cm），试管架，刻度吸管，滴管，微量可调加样器，滴头（tip头），牙签或火柴棒，记号笔。
2. 灭菌的生理盐水，灭菌的0.5%石炭酸生理盐水。
3. 布氏杆菌病试管凝集抗原，布氏杆菌病平板凝集抗原，布氏杆菌病虎红平板凝集抗原，布氏杆菌病阳性血清，布氏杆菌病阴性血清，被检血清（牛、羊或猪）。
4. 鸡白痢平板凝集抗原，鸡白痢阳性血清，鸡白痢阴性血清，被检鸡血清。
[实验内容及操作方法]（一）试管凝集试验以牛布氏杆菌病试管凝集试验为例。
1. 试管准备：每份血清用试管4支，另取3支试管作为对照，作好标记，置试管架上。
如被检血清有多份，对照只需做1份。
2. 被检血清稀释：第1管加入2.3ml 0.5% 石炭酸生理盐水，第2、3、4管加入0.5 ml 0.5% 石炭酸生理盐水；然后用加样器或刻度吸管吸取被检血清0.2 ml，加入第1管中，反复吹吸5次混匀，吸取1.5 ml弃之，再吸取0.5 ml加入第2管中，混匀后吸取0.5 ml加入第3管，依此类推至第4管，混匀后吸弃0.5 ml（见表1-1）。
第九章-凝集反应
不同程度的凝集反应 确定抗体的滴度
三、与凝集反应有关的概念
1.O凝集、H凝集与Vi凝集 2.交叉反应与凝集吸收试验
1、O凝集、H凝集与Vi凝集
2、交叉凝集反应有凝集吸收试验
A
B
A 乙菌 交叉凝集反应
C
甲菌
2、交叉凝集反应有凝集吸收试验
+
抗原1
+
抗原2
抗血清
交叉反应
共同抗原与交叉反应
2、交叉凝集反应有凝集吸收试验
凝集吸收试验: 用一种过量的细菌抗原与发生交 叉凝集反应的抗血清相结合。可将 其共同抗体吸去，剩下抗体只能与 特异性抗原起反应，这种试验即称 凝集吸收试验。
第二节 间接凝集反应
间接凝集反应: 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒 性载体表面，然后与相应的抗体或抗 原反应，在电解质的作用下，出现肉 眼可见的凝集现象
第九章
凝集反应
学习目标
1.解释凝集反应的概念。 2.解释直接凝集反应、间接凝集反应、 协同凝集反应的原理。 3.说出抗人球蛋白试验的应用。 4.了解自身红细胞凝集。
凝集反应
细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等 颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载 体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体 （或抗原）发生特异性反应，在适当电解质 存在下，形成肉眼可见的凝集现象。
凝集反应 •凝集原：凝集反应中的抗原。 抗原
排斥
抗原
抗原
•凝集素：凝集参与反应的抗体
抗体
抗原 抗原
抗原
凝集反应
反应阶段： 抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象 反应特点： IgM的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应， 称不完全抗体
凝集实验报告范文
凝集实验报告范文实验名称：凝集实验实验目的：1.通过观察和探究凝集现象，了解凝集现象的产生机制；2.探究影响凝集的因素，如溶液浓度、温度、pH等。
实验原理：凝集是指溶液中的微粒聚集形成较大的团簇或沉淀的过程。
凝集的产生与溶质的浓度、温度、溶液pH、溶质的电荷等因素有关。
实验材料：1.十二烷基硫酸钠（SDS）溶液；2.五个不同浓度的SDS溶液；3.盐酸（HCl）和氨水（NH3·H2O）溶液；4.剪刀；5.显微镜；6.盖玻片。
实验步骤：1.准备五个不同浓度的SDS溶液，浓度递增，分别为0.2%、0.4%、0.6%、0.8%和1.0%。
2.在五个试管中分别加入相应浓度的SDS溶液，每个试管加入相同体积的溶液。
3.使用剪刀将五张盖玻片剪成小片，每张盖玻片在一定高度处弯折，并将弯折处添加到五个试管中的溶液中。
4.在每个试管中观察和记录显微镜下的凝聚现象，包括聚集团簇的形状、大小等。
5.在一定时间间隔内观察记录凝聚现象的变化。
实验结果：使用不同浓度的SDS溶液进行凝集实验后，我们观察到如下结果：1.SDS溶液浓度越高，凝聚团簇的大小越大，聚集得越快；2.添加盖玻片后，溶液中的SDS微粒开始聚集形成团簇，并逐渐增大；3.高浓度SDS溶液下的凝聚团簇形状更为规则，而低浓度SDS溶液下的凝聚团簇形状较为不规则。
实验分析：凝聚现象的形成与溶液中SDS微粒之间相互作用有关。
SDS为带有负电荷的表面活性剂，其负电荷会导致微粒之间的静电斥力，维持微粒的分散态。
当浓度较高或pH等因素改变时，SDS微粒之间的静电斥力减弱，从而促使微粒聚集形成团簇。
根据实验结果，可以推测以下几点：1.浓度较高的SDS溶液中，微粒间的静电斥力减弱，微粒之间更容易聚集，形成较大的凝聚团簇；2.SDS溶液浓度越高，凝聚团簇的大小越大，聚集得越快；3.低浓度SDS溶液中，微粒间的静电斥力较强，微粒的分散态相对稳定，凝聚团簇形状较为不规则。
实验结论：凝集是溶液中微粒聚集形成团簇的过程，其形成受到溶液浓度、温度、pH等因素的影响。
项目九 凝集反应
项目九凝集反应一、直接凝集试验(Direct agglutination)(一)玻片凝集试验【实验原理】天然的颗粒性抗原与相应抗体在适宜条件下反应，出现肉眼可见的凝集物，称为直接凝集反应。
玻片法属于定性试验，常用已知抗体直接检测未知的细胞性抗原，对抗原进行鉴定。
【试剂和器材】1．待检标本OX19变形杆菌18~24h琼脂斜面培养物。
2．试剂OX19变形杆菌诊断血清(用时以生理盐水作适当稀释)、生理盐水。
3．器材载玻片、接种环、滴管等。
【步骤和方法】1．于洁净玻片一端加诊断血清1滴，另一端加生理盐水1滴作对照。
2．用接种环挑取OX19变形杆菌18~24h琼脂斜面培养物，分别涂于生理盐水和诊断血清中，充分混匀。
3．室温下静置数分钟，观察结果。
【结果判定】生理盐水对照应不发生凝集，为均匀混浊的乳状液。
在诊断血清中，如混悬液由混浊变澄清并出现肉眼可见的凝集小块为阳性结果；如与对照相同，则为阴性结果。
【注意事项】1．玻片应洁净、干燥、中性，以防止和减少非特异性凝集。
2．每一待检菌均须作生理盐水对照，如对照凝集则表示细菌(粗糙型)发生自凝，试验结果无效。
3．在载玻片两端涂布细菌时，应先在生理盐水中涂，然后在诊断血清中涂，以免将血清带入生理盐水中。
4．试验后的细菌仍有传染性，应将载玻片及时放入消毒缸内。
5．鉴定ABO血型时，室温若低于10℃，易出现冷凝集而造成假阳性结果。
【方法评价】此法操作简便，反应迅速，为定性试验，但敏感性较低。
【临床意义】主要用于细菌菌种的鉴定和分型以及ABO血型的鉴定。
(二)试管凝集试验【实验原理】试管法直接凝集试验常用于半定量检测，是将已知的颗粒性抗原悬液定量地与一系列倍比稀释的待检血清等量混合，静置一定时间后，根据各管的凝集程度，判断待检血清中抗体的效价。
【试剂和器材】1．标本用生理盐水1:10稀释的待检血清。
2．试剂诊断菌液(伤寒沙门菌H或O菌液，10亿/ml)、生理盐水。
3．器材37℃水浴箱、试管、1ml吸管、吸耳球等。
第九章 凝集试验
agglutination
凝集反应的定义？
细菌、红细胞等颗粒性抗原，或可溶 性抗原（或抗体）致敏的颗粒性载体与相 应抗体（或抗原）结合，在适当电解质存 在的条件下，出现肉眼可见的凝集现象。
抗原 = 凝集原（agglutingen） 抗体 = 凝集素（agglutinin）
直接凝集反应
玻片凝集试验 试管凝集试验
5. 什么是不完全抗体?
6．叙述抗人球蛋白试验的类型及其原理？
协同凝集反应(IgG-SPA) 载体 间接血凝试验(RBC) 明胶凝集试验（粉红色明胶颗粒）
特殊的凝集反应
自身红细胞凝集试验 抗球蛋白试验 冷凝集反应
复习题
1．凝集反应的定义是什么？
2．什么叫直接凝集反应，什么叫间接凝集反
应？它们之间有何异同？ 3．间接凝集技术类型分哪三类？ 4、叙述胶乳凝集试验、间接血凝试验、协同凝集 试验的原理。
第一节 直接凝集试验
直接凝集反应的特点： 1、抗原呈颗粒状，制成的液体为悬液 2、抗原颗粒相对抗体大，故反应所 形 成的凝集物主要成分为抗原。 3、抗原的比表面积比抗体大，试验时为 使抗体不过甚，通常需要稀释抗体。 4、因为要稀释的是抗体，故以出现凝集 现象的抗体最高稀释度判断效价。
直接凝集试验原理示意图
可溶性抗原(或抗体)吸附或偶联于颗粒载体
表面的过程。
4、致敏颗粒（sensitized particle): 指吸附有已知可溶性抗原或抗体的载体 颗粒
一、间接凝集试验基本类型
根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反 应方式，分如下三类 1、正向间接凝集试验 特点：抗原致敏载体检测标本中相应抗体
2、反向间接凝集试验
一
玻片凝集试验
1、原理及方法 （已知抗体检测未知抗原）
临床免疫学：凝集试验
凝胶内沉淀 反应
凝胶免疫电 泳技术
絮状沉淀试验 免疫浊度测定
单向免疫扩散试验 双向免疫扩散试验
对流免疫电泳 火箭免疫电泳 免疫电泳 免疫固定电泳
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一、单向免疫扩散试验
原理：将一定量的抗体混入琼脂糖凝胶中， 让待测抗原在凝胶中自由扩散,在两者比例合 适的部位结合形成沉淀环。环的大小与抗原 的浓度成正相关。
3
1896年Widal反应诊断伤寒病。 1900年Landsteriner在血凝现象的基础上发现人类
ABO血型系统,并于1930年获得诺贝尔奖。
反应阶段：
• 抗原抗体的特异性结合 • 出现肉眼可见的凝集现象
4
临床应用：定性或半定量检测
根据凝集现象的出现与否定性判断抗原抗体 是否对应。
将血清标本倍比稀释后再进行反应，以出现 凝集反应的最高稀释度作为抗体的滴度（效 价）。
【熟悉】 1、对流免疫电泳、免疫电泳的原理。 2、免疫固定电泳的临床应用和双向免疫扩散的实 际应用。
【了解】单向免疫扩散、对流电泳和免疫电泳的应用。
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沉淀反应的概念 沉淀反应（precipitation）是指可溶 性抗原与相应抗体在适当条件下发生
特异性结合产生可见沉淀物的现象。
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沉淀反应
液相沉淀反 应
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技术要点
先将患者血清或血浆在醋纤膜或琼脂 上作区带电泳，根据血清蛋白质的电荷 、分子量等不同将其分开。 为了精确识别单克隆区带，样品同时 在六条泳道上进行测试。 然后将IgG、IgA、IgM、κ轻链和λ 轻链的抗血清加于分离的蛋白质泳道； 参考泳道则加蛋白质固定剂，用于区带 对照，作用一定时间后洗去游离蛋白质 ，染色后观察结果，对样品中所含成分 及其性质进行分析、鉴定。
抗体检测方法凝集试验
抗体检测方法凝集试验引言：抗体检测是一种重要的实验室技术，广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域。
其中，凝集试验作为一种常见的抗体检测方法，被广泛应用于血清学、免疫学和感染病的诊断中。
本文将详细介绍凝集试验的原理、步骤和应用。
一、凝集试验的原理凝集试验是利用抗体与抗原结合形成可见团块的原理进行的。
在试验中，当抗体与抗原相互结合时，会发生凝集现象，形成可见的凝集团块。
这种凝集现象是由抗体与抗原的特异性结合引起的，凝集团块的大小和形态可以反映抗体与抗原结合的强度和类型。
二、凝集试验的步骤凝集试验包括凝集试验的前处理、试验操作和结果判定三个步骤。
1. 前处理：首先，需要对样本进行处理，一般是离心分离血清或血浆。
离心分离后，可以得到清晰的血清或血浆液体。
2. 试验操作：将待测抗原加入试验管中，然后加入抗体滴度梯度，如1:2、1:4、1:8等。
搅拌均匀后，静置一段时间，观察是否出现可见的凝集团块。
3. 结果判定：根据凝集团块的形态、大小和数量进行判定。
如果观察到大而均匀的凝集团块，说明抗体与抗原特异性结合，说明待测样本中存在抗原；如果观察不到凝集团块，说明抗体与抗原没有结合，说明待测样本中不存在抗原。
三、凝集试验的应用凝集试验广泛应用于医学和生物学领域，具有以下几个主要应用方面：1. 血清学诊断：凝集试验可以用于检测病原微生物引起的感染性疾病，如病毒感染、细菌感染等。
通过检测患者血清中的抗体，可以确定感染的病原微生物种类和感染程度。
2. 免疫学研究：凝集试验可以用于检测免疫球蛋白的抗原性和特异性，如免疫球蛋白M（IgM）在病毒感染后的产生和特异性。
3. 抗体药物开发：凝集试验可以用于筛选和鉴定抗体药物的效力和特异性。
通过与目标抗原的结合情况，评估抗体药物的治疗效果和疗效。
4. 血型鉴定：凝集试验还可以用于血型鉴定，通过检测血清中的抗体与红细胞表面抗原的结合情况，确定血型类型。
结论：凝集试验作为一种常见的抗体检测方法，具有简单、快速、经济的优点，被广泛应用于医学、生物学和生物工程等领域。
凝集试验实验报告
凝集试验实验报告凝集试验实验报告引言：凝集试验是一种常用的实验方法，用于检测血液凝集性的指标。
本次实验旨在通过凝集试验的操作和观察，了解血液凝集性的变化规律，并探讨其与人体健康状况的关系。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血液样本：采集自20名健康人士的静脉血样本。
- 凝集试验试剂：包括抗凝剂、红细胞凝集试剂等。
- 试验仪器：包括离心机、显微镜等。
2. 实验方法：- 步骤一：采集血液样本，并在离心机中离心10分钟，得到血浆。
- 步骤二：将血浆分成多个试管，并加入不同浓度的红细胞凝集试剂。
- 步骤三：观察试管中红细胞的凝集情况，记录下凝集程度。
- 步骤四：重复实验，得到多组数据，进行数据统计与分析。
实验结果与讨论：通过实验观察，我们得到了一系列关于血液凝集性的数据。
在红细胞凝集试剂浓度逐渐增加的情况下，我们观察到了血浆中红细胞的凝集现象。
随着试剂浓度的增加，红细胞凝集的程度也逐渐加强。
这表明，红细胞凝集性与试剂浓度呈正相关关系。
进一步分析数据，我们发现不同个体之间的血液凝集性存在差异。
有些人的血浆中红细胞凝集较为明显，而有些人则几乎没有凝集现象。
这可能与个体的生理状况、遗传因素等有关。
然而，本次实验的样本量较小，无法得出明确的结论。
未来的研究可以考虑扩大样本量，进一步探究血液凝集性与个体差异之间的关系。
此外，我们还观察到了血浆中红细胞凝集的时间变化规律。
在试剂加入后的最初几分钟，红细胞凝集的程度逐渐增加。
然而，随着时间的推移，凝集程度逐渐趋于稳定。
这可能是由于试剂与血浆中的某些成分发生反应，导致红细胞凝集的过程达到平衡。
这一发现为凝集试验的操作提供了一定的时间窗口，使实验操作更加灵活和方便。
结论：通过本次实验，我们了解了凝集试验的操作方法，并观察到了血液凝集性的变化规律。
血液凝集性与试剂浓度、个体差异以及时间等因素密切相关。
然而，本次实验仅为初步探索，还有许多问题有待进一步研究。
凝集试验作为一种常用的实验方法，在医学研究和临床诊断中具有重要的应用价值，未来的研究可以进一步深入探究血液凝集性与人体健康状况之间的关系，为疾病预防和治疗提供更多的参考依据。
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第九章凝集试验
一、单选题：
1．ABO血型鉴定原理是（A）
A、直接凝集反应
B、正向间接凝集反应
C、反向间接凝集反应
D、间接凝集抑制试验
2．肥达试验的原理是（A）
A、直接凝集反应
B、正向间接凝集反应
C、反向间接凝集反应
D、间接凝集抑制试验
3．试管凝集试验的效价判断标准是依据出现肉眼可见的如下凝集现象（C）
A、“+”
B、“+或++”
C、“++”
D、“+++”
4．间接抗球蛋白实验用于检测（B）
A、血清中结合的抗体
B、血清中游离的不完全抗体
C、红细胞表面结合的不完全抗体
D、红细胞表面结合的完全抗体
5．协同凝集试验所用的载体是（D）
A、新鲜红细胞
B、洗涤红细胞
C、聚苯乙烯颗粒
D、金黄色葡萄球菌
二、知识应用题：
1．试述间接血凝试验的基本原理。
答：用已知的抗原或抗体致敏红细胞，并在适宜的条件下与标本中相应抗体或抗原结合，出现红细胞凝集着为阳性。
根据凝集的程度判断阳性反应的强弱。
2．简述抗人球蛋白试验的类型及其在临床上的应用。
答：一：直接抗球蛋白试验。
用于检查红细胞表面结合的不完全抗体。
二：间接抗球蛋白试验。
用于检测血清中游离的不完全抗体。