分枝杆菌
第十章分枝杆菌
皮肤结核
致病性
原发感染 多发生于儿童 原发综合征（原发灶、淋巴管炎、肺门 淋巴结炎）， 形成结核结节（即结核肉芽肿） 可痊愈，亦可扩散或潜伏并引起原发后 感染。 继发感染 多见于成年人。 病灶多局限于局部，较少扩散，可形成 开放性肺结核。
肺部感染
致病性
肺外感染
部分患者结核分枝杆菌可进入血液循环 引起肺内、外播散，如脑、肾结核 痰菌被咽入消化道或食入了消毒不严格 的牛奶也可引起肠结核、结核性腹膜炎 等 大多与结核分枝杆菌L型有关
（3）结果判定： 红肿硬结： 直径<5mm为阴性，说明未感染或感染后免疫 力低下； 5＜直径＜ 15mm为阳性，说明感染或疫苗接 种成功，对结核杆菌有免疫力； 直径＞15mm为强阳性，说明体内有活动性结 核感染，应追查病灶。
（4）适用： 选择BCG接种对象及效果测定。 婴幼儿结核病诊断参考。 测定肿瘤患者的细胞免疫功能状况。 流行病学调查。
一、生物学特性： 1、形态染色：细长稍弯，分枝状排列，用 药后可成为L型菌。
2、培养特性：营养要求高，菜花样小菌落。
3、抵抗力：耐酸碱、干燥、染料； 对酒精、湿热、紫外线敏感。 4、变异性：可发生形态、菌落、 毒力、免疫原性和耐药性变异。
二、致病性： 1、致病因素： （1）脂质： ①磷脂：能刺激单核细胞增生，抑制蛋 白酶的分解作用，形成结核结节和干酪 样坏死。 ②索状因子：破坏线粒体膜，抑制白细 胞的游走，引起慢性肉芽肿。 ③蜡质D：刺激机体产生迟发型超敏反应。
分枝杆菌属 与放线菌属
分枝杆菌属特点：
1、细长弯曲杆菌，呈分枝生长。 2、胞壁含有大量脂类，为抗酸杆菌。 3、分为结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌、 麻风分枝杆菌三类。 4、致病性与菌体成份有关，引起慢性肉芽 肿病变。
分枝杆菌
分布范围
非结核分枝杆菌广泛分布于外界环境、人及动物的机体。人类是麻风杆菌的唯一宿主。
分类
结核
非结核
麻风
结核分枝杆菌（M. tuberculosis），俗称结核杆菌或结核菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官， 但以肺结核为最多见（因为喜氧性）。结核病为传染病。
结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小1-4μmX0.4 μm。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细 胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸（mycolic acid）包围在肽聚糖层的外面，可影响 染料的穿入。分枝杆菌一般用萋-尼（Ziehl- Neelsen）抗酸染色法，以5%石碳酸复红加温染色后可以染上，但 用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。
分枝杆菌
一类细长略弯范围
目录
02 显著特性 04 分类
分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长略弯曲的，有时有分枝或出现丝状体。在分类学上已将分枝杆菌 属归纳于放线菌种。对人致病的放线菌可分含和不含分枝菌酸两类。分枝杆菌属于含分枝菌酸类。
本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸。这和其染色性、生长特性、致病性、抵抗力 等密切相关。一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆 菌(acid-fast bacilli)。该菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素，其致病性和菌体成分有关。引起的疾病 都呈慢性，并伴有肉芽肿。
第Ⅱ组
暗产色菌（scotochromogen）
这类细菌在暗处培养时菌落呈橘红色。在37℃生长缓慢，菌落光滑。对人致病的有瘰疠分枝杆菌（M.
麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌（M. laprae），俗称麻风杆菌，引起麻风，是一种慢性传染病。流行广泛。全 世界约有病例1200万，主要分布在亚、非和拉丁美洲。我国建国前流行较严重。
分枝杆菌分离培养和药敏试验
分枝杆菌分离培养和药敏试验引言分枝杆菌（Branchiobdella）是一类无脊椎动物寄生虫，常见于淡水环境中。
它们具有扁平的身体和分枝状的触手，因此得名。
分枝杆菌对环境条件非常敏感，因此分离培养和药敏试验对其研究具有重要意义。
分枝杆菌分离培养的方法1.样品采集：在淡水环境中选择活跃的分枝杆菌寄生体作为样品。
2.样品处理：将样品置于理化条件适宜的培养基中，如R2A培养基等。
以适宜的温度和光照条件下培养。
3.分离纯培养：利用无菌技术将分枝杆菌从其他微生物分离出来。
常用方法包括稀释涂布法、均匀涂布法等。
4.单菌种培养：将分离得到的单个分枝杆菌菌落接种到新的培养基上进行单菌种培养。
5.培养基优化：根据菌株特性，优化培养基组成、温度、光照和其他环境条件。
通过观察菌落形态、生长速度等指标，选择适宜的培养条件。
分枝杆菌药敏试验的方法1.制备药敏试验板：选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂、肉汤琼脂等。
将药物分别加入琼脂中，并制备成不同浓度的试验板。
2.培养分枝杆菌：将分枝杆菌菌液均匀涂布在药敏试验板上，培养在适宜的温度下。
3.药敏试验观察：观察菌落的生长情况和抑菌效果。
记录最小抑菌浓度（MIC）。
4.药敏结果解读：根据国际标准或相关研究的参考值，判断分枝杆菌对药物的敏感性和抗药性。
可以根据MIC值进行药物分类，如敏感、中度敏感和耐药。
5.药敏结果分析：根据实验结果，分析分枝杆菌的药物抗性特征，为临床治疗提供参考。
结论分枝杆菌分离培养和药敏试验是研究该虫寄生虫的重要手段。
合理的分离培养方法可以得到纯种菌落，为后续研究和药敏试验提供可靠的基础。
药敏试验能够判断分枝杆菌对药物的敏感性，为临床治疗提供重要参考。
参考文献： 1. Johnston, D.J. (2000). A new family of Branchiobdellidan (Annelida: Clitellata) ectosymbiontic on freshwater crayfishes: The Evansobdellidae. Proceedings of the Biological Society of Washington, 113(3): 842-850. 2. Erséus, C. (2001). Chapter 25 PhylumAnnelida: Clitellata, Branchiobdellida. In: Animal biodiversity: an outline of higher-level classification and survey of taxonomic richness (ed. by Z.Q. Zhang). pp. 281-282. 3. Erséus, C. (2005). Order Branchiobdellida. In: Annelida: Polychaeta, Myzostomida, Branchiura and Vestimentifera (ed. by J. B. Hutchings, S. P. Nimis, and C. Reish). pp. 97-100.。
第15章分枝杆菌
第15章分枝杆菌表15-1 分枝杆菌的分类分类生长速度菌落和色素产生代表菌种致病性结核分枝杆菌复合群生长缓慢结核分枝杆菌、牛分枝杆菌结核病非结核分枝杆菌RunyonⅠ组生长缓慢菌落不见光时为淡黄色,光照后则变为黄色或橙色堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)、海分枝杆菌(M. marinum ) 肺结核样病变；皮肤丘疹、结节与溃疡RunyonⅡ组在37℃生长缓慢在暗处培养时菌落呈橘红色瘰疠分枝杆菌(M. scrofulaceum)儿童淋巴结炎RunyonⅢ组40～42℃下生长慢通常不产生色素鸟-胞内分枝杆菌(M.avium)结核样病变，多见于肺与肾RunyonⅣ组在25～45℃快速生长。
培养5～7天即可见到菌落个别种产生色素偶发分枝杆菌(M.fortuitum)极少致病麻风分枝杆菌人工培养基上不生长麻风第一节结核分枝杆菌俗称结核杆菌，是结核病的病原菌。
该菌可侵1/3感染了结核分枝杆菌。
特别是近年来世界范围内艾滋病的流行，结核病作为最多见的一种机会性感染，成为HIV阳性者死亡的主要原因，因此，结核病已成为全球重大公共卫生问题。
一、生物学性状（一）形态与染色在感染的组织中，结核分枝杆菌细长且直，大小约0.4×3 m（图15-1）；在人工培养基上，不同种呈现丝状、球状、串珠状等多形性。
由于结核分枝杆菌细胞壁中含有大量的脂质，不易着色，一旦被碱性染料着色后能够抵抗盐酸乙醇（含95%的乙醇和3%的盐酸）的脱色作用，被定性为抗酸菌（acid-fast bacteria），一般不用革兰染色法分类为革兰阳性或革兰阴性。
常用齐尼抗酸染色法（Ziehl-Neelsen acid-fast stain），以5%石碳酸复红加温染色后再经3%盐酸乙醇脱色，结核分枝杆菌被染成红色，而其他非抗酸菌及背景则被美蓝复染呈蓝色。
此外，结核分枝杆菌在药物如异烟肼的影响下，亦可变为抗酸染色阴性。
图15-1 痰标本中的结核分枝杆菌（箭头所指）（Brooks et al, 2004）（二）培养和生长特性结核分枝杆菌的初代分离培养应使用选择和非选择培养基。
分枝杆菌
每年达300万。
我国每年死亡约25万，仍为各类传染病之首。
因此，结核病再次成 为亟待解决的全球性 公共卫生问题。
一、生物学性状 形态与染色
细长略弯曲，抗 酸染色阳性。有分枝 生长现象。
抗酸染色的步骤：
5%石炭酸 加热 复红初染 5min 3%盐酸 酒精脱色
1min
碱性美 兰复染
1min
镜检
结核分枝杆菌（抗酸染色）
结核菌素试验
•
原理:Ⅳ型超敏反应在皮肤局部表现
• 试剂:旧结核菌素（OT） 纯蛋白衍生物（PPD）
• 方法：PPD5个单位前臂皮内注射，48－ 72h后观察结果
原理： Ⅳ型超敏反应在皮肤局部表现 结核菌素是结核分枝杆菌的抗原成份，注入机 体皮内后，若受试者曾感染过结核分枝杆菌，则结 核菌素与致敏淋巴细胞发生特异性结合，在局部释 放淋巴因子，引起注射局部变态反应性炎症，出现 红肿硬结；若受试者未感染过结核分枝杆菌，则无 局部变态反应发生。
第五节
分枝杆菌属
(Mycobacterium)
概 述
分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类细长稍 弯的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名。
主要特点：
1. 细胞壁中含有大量的脂质。 2. 不易着色，可用抗酸染色法使其着色，故又称 为抗酸杆菌。 3. 多引发慢性疾病。
分类
分枝杆菌
结核分枝杆菌
致病物质
脂质 蛋白质 荚膜
与致病有关的菌体成分
磷脂 促使单核细胞增生，抑制蛋白酶对组织的分解作用， 使病灶组织溶解不完全，引起结核结节的形成和干酪 样坏死 破坏细胞线粒体膜及微粒体酶类，抑制中性粒细胞游 走，引起肉芽肿
脂 质
索状因子
蜡质D 硫酸脑苷脂 结核菌素
分枝杆菌属的特点
分枝杆菌属的特点分枝杆菌属（Bacillus）是一类革兰氏阳性的芽孢杆菌，其中包括许多常见的细菌种类。
以下是分枝杆菌属的一些主要特点：1. 形态：分枝杆菌属的细菌是革兰氏阳性细菌，通常呈现为长杆状的细胞形态，有时会有分枝的外观，因此得名“分枝杆菌”。
2. 芽孢形成：这类细菌有很强的芽孢形成能力。
在适宜条件下，它们会形成芽孢，这是一种耐受恶劣环境的休眠状态，可以保护细菌免受极端温度、干旱、紫外线等条件的伤害。
3. 好氧性：大多数分枝杆菌属细菌是好氧生物，也就是说它们需要氧气来生存和进行代谢。
然而，有一些分枝杆菌属细菌也可以在缺氧条件下生长。
4. 好热性：分枝杆菌属有一些细菌种类在高温下生长能力强，甚至可以在70°C以上的温度下生存。
5. 好盐性：部分分枝杆菌属细菌对盐的耐受力较强，可以在含盐的环境中生活。
6. 常见食源细菌：分枝杆菌属的一些细菌是常见的食源细菌，例如肉毒杆菌和炭疽杆菌。
它们会引起食物中毒或其他食源性疾病。
总的来说，分枝杆菌属细菌的特点包括形态特征、芽孢形成能力、好氧性、热耐受性、盐耐受性等。
不同的分枝杆菌属细菌种类可能具有不同的特点。
当然，还有一些其他特点：7. 嗜酸性：某些分枝杆菌属细菌能够在酸性环境中生存和繁殖，这使得它们在一些发酵食品（如酸奶）的制作过程中发挥重要作用。
8. 广泛存在：分枝杆菌属细菌广泛分布于自然界中的土壤、水体、空气等环境中，同时也存在于宠物、农产品和人体等生物体表面和内部。
9. 产生酶和代谢产物：分枝杆菌属的许多细菌能够产生多种酶，例如淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶，以利用和分解广泛的有机物质。
此外，一些分枝杆菌属细菌还能产生抗生素等代谢产物。
10. 重要的工业应用：由于其特殊的生理特性和代谢功能，分枝杆菌属细菌在食品加工、饲料添加剂、环境修复和生物工程等领域中具有重要的应用价值。
需要注意的是，尽管分枝杆菌属细菌中的一些种类对人类和环境具有积极作用，但也有一些种类是致病菌，可以引起人类和动物的疾病。
实验十四：分枝杆菌
80%
PCR扩增
设计针对分枝杆菌特异性基因的 引物，以提取的DNA为模板进行 PCR扩增，以检测分枝杆菌的存 在。
实验步骤
02
01
03
1. 细菌培养
在无菌操作台上，将分枝杆菌接种在Middlebrook 7H10 Agar培养基上。
将接种后的培养基放入37℃恒温培养箱中，培养24-48 小时，直至形成可见菌落。
试剂与溶液
实验过程中需要使用到多种试 剂与溶液，如PBS缓冲液、 DNA提取液、PCR反应液等。
实验方法
80%
细菌培养
将分枝杆菌接种在Middlebrook 7H10 Agar培养基上，置于37℃ 恒温培养箱中培养，直至形成可见 菌落。
100%
DNA提取
使用细菌DNA提取试剂盒从分枝 杆菌菌落中提取DNA，为后续 PCR扩增提供模板。
完善培养方法和提高培养 效率
进一步优化培养基和培养条件，提高十四分 枝杆菌的培养效率和产量，为其应用研究和 产业化提供技术支持。
THANK YOU
感谢聆听
加强公共卫生管理
分枝杆菌感染具有一定的传染性，因此加强公共卫生管理对于预防和控制疾病的 传播具有重要意义。包括加强疫情监测、提高公众卫生意识、改善环境卫生等措 施。
07
实验总结与展望
本次实验成果总结
实验目标达成
01
成功分离并培养了十四分枝杆菌，并对其进行了初步的生物学
特性研究。
方法创新
02
采用了新的培养基和优化后的培养条件，提高了十四分枝杆菌
通过对菌落形态、生长速度、生化反应等特征的观察和分析，实现对分
枝杆菌的鉴定和分类。
02
分子生物学技术的应用
第章 分枝杆菌属
分枝杆菌属分枝杆菌属（Bacillus）是一类芽孢杆菌科中的细菌属，是一种常见的细菌。
分枝杆菌属细菌的形态为革兰氏阳性，有芽孢，不运动。
分枝杆菌属细菌存在于自然界中的土壤、水、空气、动植物沙门氏菌以及人体消化道中等地方。
此外，分枝杆菌属细菌还是许多纤维素降解菌之一，有着重要的应用价值。
1. 发现历史分枝杆菌属的物种首先被德国微生物学家F. Cohn于1872年所描述。
分枝杆菌属名称来源于拉丁语Baculum（杆子）而得名。
起初，包括芽孢杆菌属（Sporolactobacillus）和马铃薯杆菌属（Solanum）在内的多个属别被归于分枝杆菌属之下。
到了20世纪30年代，随着生物学的发展以及生物化学研究的深入，分枝杆菌属内部结构不断明朗起来。
1953年，福克勒（Foukceler）首次使用荧光染色技术，证实了分枝杆菌属细胞内有芽孢的产生，并为之制定了现代概念。
目前，分枝杆菌属内部物种的划分还在持续调整之中。
2. 特征2.1 形态学特征分枝杆菌属细菌形态为革兰氏阳性菌杆，大小为0.5 ~ 1.2 µm × 2 ~ 10 µm，杆状或为不规则形状。
除了胶孢杆菌属之外，其他细菌均不产生胶质囊或鞭毛等结构，而且周围亦不具有较多的纤毛或糖胶成份。
芽孢的形成是分枝杆菌属的一个显著特征。
分枝杆菌属细胞在恶劣环境条件下，通过细胞内分裂并将核质分割成若干形状不一、结构各异的小体，然后将其包裹在亚细胞层次的膜结构内，最终形成成熟的芽孢。
2.2 生理生化特征分枝杆菌属细胞在吸取营养和能量方面非常多样化，能够利用许多有机物和少数无机物。
分枝杆菌属能产生许多酶，包括外排酶、代谢酶、溶解酶等，具有泛酸稳定性。
此外，分枝杆菌属能抵抗许多化学物质和物理条件的影响，能生长于广泛的嗜酸或嗜碱环境中，也能在较高的温度下繁殖。
2.3 分类根据细胞结构、代谢特征及生命周期等特征，目前分枝杆菌属细菌被分为16个物种。
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32
2、分离培养
（3）接种培养
取0.1ml处理的各种标本悬液和沉淀物，接种固体培养基 35-37℃
5%-10%CO2培养 一周内每天观察，以后每周观察一次，直到8周 根据生长时间、菌落形态、产生的色素等特点加以判定 报告方式：培养阳性 （斜面上20个菌落以下，报菌落数） 培养阴性 必须观察8周
（多用于尿标本的前处理）
胰酶-新洁尔灭：1g/L胰酶消化后，再用0.3%新洁尔灭处理5min以液化
和杀灭杂菌
NALC-2%NaOH（N-乙酰-L-半胱氨酸，2%氢氧化钠 ）适用各种标本处理
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2、分离培养
（2）培养基选择 鸡蛋为主的培养基 L-J培养基 曲氏 小川 琼脂为基础的培养基 米氏7H10和7H11 液体培养基 米氏7H9和吐温白蛋白肉汤，主要用 与药敏试验
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标本 涂片检查 分离培养 处理过的标本 或无污染标本
核酸检测
抗体检测
直接涂片
5
结核分枝杆菌扫描电镜照片
L-型结核分枝杆菌扫描电镜照片
Ziehl-Neelsen 抗酸染色（痰直接涂片）
Ziehl-Neelsen 抗酸染色（纯培养）
6
金胺“O”染色，荧光显微镜下菌体发出黄绿色或橙黄色荧光
7
2、培养特性
专性需氧，8-12%CO2刺激生长，最适温度 35-37℃，
PH6.5-6.8，需要一定的湿度 生长缓慢， 18～24h分裂一代，在固体培养基上2-4周才 能长出菌落。菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄 色，表面粗糙，形似菜花样 液体培养基生长较快，多表面生长，形成菌膜，易碎沉于 管底。有毒力菌株在培养液中呈索状生长 营养要求较高，必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及 含某些无机盐类的特殊培养基（如罗氏培养基）上才能生 长
毒的牛型结核分枝杆菌培养于含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230次 传代而获得减毒菌株，再接种动物，不能致病而使其获得免疫力，1921 年开 始应用于人类来预防结核病
耐药：是结核卷土重来的原因之一
12
卡 介 苗 的 发 明 人
Calmette, 1863-1933
Guerin, 1871-1961
1
分枝杆菌属是一类细长或略弯曲、有时呈分枝或丝状 的杆菌。
+ 主要特点 – 形态上：细长弯曲，分枝状生长 – 结构上：细胞壁含大量脂类（占干重的60%，与染色性、 抵抗力、致病性等密切相关） – 染色上：呈抗酸染色阳性（不易着色，加温或延长时 间着色后，能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用） – 致病性上：引起疾病都呈慢性，并伴肉芽肿 – 需氧，无荚膜、芽胞，不产生内外毒素及侵袭性酶 + 分类 – 结核分枝杆菌复合群 – 非结核分枝杆菌 – 麻风分枝杆菌
卡介苗名中的「卡」与「介」 分别代表卡密特与介伦的缩写
13
二、致病性与免疫性
结核分枝杆菌不产生内、外毒素，无侵袭性酶， 其致病性主要由于 细菌繁殖引起炎症 菌体成分 代谢产物毒性作用 抗体对菌体成分产生免疫病理损伤
14
二、致病性与免疫性 1、致病物质 脂质、蛋白质、多糖 （1）脂质 含量与毒力有密切关系关 ,以糖脂为重要
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郭霍现象
有毒TB
正常豚鼠
感染过或已免疫豚鼠 1-2天，局部红肿、浅溃烂 不扩散、易愈合
10-14天,局部溃烂 坏死、经久不愈
全身扩散
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3、免疫性与变态反应 （3）结核菌素试验 应用结核菌素对皮肤进行试验，检测受试 者对结核分枝杆菌是否有免疫功能和迟发 型超敏反应
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结核菌素试验
结核菌素试剂： 旧结核菌素OT 纯蛋白衍生物PPD（目前都用） 两种PPD: PPD-C （人型制成）； BCG-PPD（卡介苗制成）
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培养结果报告方式
(1)分枝杆菌培养阴性:斜面无菌落生长,以 “培养阴性”报告,不可以“–”表示. (2)分枝杆菌培养阳性（１＋）：菌落生长 占斜面面积的1/4以下（20个菌落以上）
(3)分枝杆菌培养阳性（2＋）：菌落生长 占斜面面积的1/4以上，1/2以下
(4)分枝杆菌培养阳性（3＋）：菌落生长 占斜面面积的1/2 以上，3/4以下 (5)分枝杆菌培养阳性（4＋）：菌落生长 布满整个斜面 (6)报实际菌落数: 20个菌落以下
以
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抗酸染色的原理
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌 酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色， 要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中 的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故 名抗酸染色
萋-尼抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸 复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再 加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及 背景中的物质为兰色
15
1、致病物质
（2）蛋白质 主要成分为结核菌素 可激发机体的结核菌素反应 有免疫原性，与蜡脂D结合引起迟发型超敏反应 （3）多糖 由阿拉伯半乳糖、阿拉伯甘露聚糖、甘 露聚糖、葡萄聚糖组成 干扰抗原抗体反应，与免疫血清产生沉淀反应 吸引中性粒细胞，诱发超敏反应 是荚膜的主要成分
பைடு நூலகம்21
3、免疫性与变态反应 （2）超敏反应
+ 机体抗结核分枝杆菌特异性免疫的同时，也形成了对结
核分枝杆菌的迟发型超敏反应，免疫性和超敏反应的关系 可用郭霍现象说明 郭霍现象 – 再感染时溃疡浅、易愈合，不扩散，表明机体已有一 定免疫力 – 但再感染时溃疡发生快，说明在产生免疫的同时有超 敏反应的参与 + 免疫性和迟发型超敏反应是不同的细胞免疫，可由不同类 型的Ｔ细胞介导
午后低热、盗汗、食欲不振、乏力和消瘦等
呼吸道表现
咳嗽咯痰、咯血、胸痛及气急，肺部湿啰音
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原发灶 淋巴管炎 肺门淋巴结炎 哑铃形阴影
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结核结节 干酪样坏死 空洞
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3、免疫性与变态反应 （1）免疫性
人体对结核分枝杆菌有相当强的免疫力（感染率高，发病
率低） 胞内感染菌，T细胞为主的细胞免疫 结核免疫属于传染免疫或带菌免疫，即结核分枝杆菌或其 组分在体内存在时，机体对入侵的结核有较强的免疫力， 当体内的结核或其组分消失后，抗结核免疫也消失 机体感染后产生多种抗体，但对机体无保护作用，与机体 免疫程度也无平行关系
4
+ 一、生物学性状 + 1、形态与染色 细长、略有弯曲的杆菌 革兰染色阳性，不易着色，一般采用萋-尼抗酸染 色，抗酸阳性，属于抗酸杆菌的一种 镜下：成团、成束，排列无序，也有成链、索状 金胺“O”染色，荧光显微镜下菌体发出荧光 无芽胞、鞭毛、菌毛，一般无荚膜 L型细菌呈非抗酸性 G＋性颗粒（Much颗粒）
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2、所致疾病
结核分枝杆菌主要通过呼吸道、消化道和 受损伤的皮肤等多种途径侵入易感机体，引起 多种组织和器官的结核病，以通过呼吸道引起 的肺结核最为多见 肺结核可分为原发感染和原发后感染（继 发感染） 肺外感染有肠结核、脑结核、皮肤结核、 肾结核、骨结核、结核性腹膜炎等
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全身结核中毒症状
肺結核-“面色蒼白、身體消瘦”、 一陣陣撕心裂肺的咳嗽 -“白色瘟疫” -“癆病”
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2、分离培养
对结核病诊断、疗效观察及药物研究均具有重要意义
（1）标本前处理：去除污染菌和液化标本
40g/LNaOH：2：1比例消化痰液，37℃水浴箱15-30min，其间震荡2-3次，
以3000r/min离心15min后，取沉淀接种培养基
4%H2SO4：2-4倍混合，室温作用20min，其间震荡2-3次，后接种培养基
抗酸杆菌阴性（―）：连续观察300个不同视野未发现抗 酸杆菌 报告抗酸杆菌菌数： 1-8条抗酸杆菌/300视野 抗酸杆菌阳性（1+）：3-9条抗酸杆菌/100视野 抗酸杆菌阳性（2+）：1-9条抗酸杆菌/10视野 抗酸杆菌阳性（3+）：1-9条抗酸杆菌/每视野 抗酸杆菌阳性（4+）：≥10条抗酸杆菌/每视野
索状因子：为6,6-双分枝菌酸藻糖,破环细胞线粒体膜，影响
细胞呼吸，抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿 磷脂: 使单核细胞增生，使巨噬细胞转变为类上皮细胞,从而 形成结节 蜡脂D :为糖脂和分枝菌酸复合物,激发机体产生迟发型超敏 反应 硫酸脑苷脂:抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体结合，使细菌长 期在细胞内存活
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结核分枝杆菌
四不怕 ◆耐干燥：在干燥痰内可存活6-8个月 ◆耐酸（3% HCl或6% H2SO4) 、耐碱（4% NaOH) ◆对碱性染料有抵抗力：1：75000结晶紫和1：13000孔雀绿 ◆对青霉素等抗生素不敏感 四怕 ◆对70%-75乙醇敏感：数分钟被杀死 ◆对湿热敏感：62～63℃15min或煮沸即被杀死 ◆对紫外线敏感：直接日光照射数小时即被杀死 ◆对抗痨药物敏感，但长期用药容易出现耐药性
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+ 结核分枝杆菌
(M.tuberculosis)，简称结 核杆菌，是引起结核病的病 原菌。 + 1882年由德国医生和细菌学 家罗伯特 · 郭霍 （ Robert Koch ）发现并分离到 + 在我国对人致病的主要有人 型和牛型结核分枝杆菌
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结核病流行概况
结核病至今仍为重要的传染病，估计世界人口中1/3感 染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800-1000万新病
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+ 结核菌素试验意义
卡介苗接种后免疫效果测定 作为婴幼儿结核病诊断参考
测定肿瘤患者等细胞免疫功能
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+ 三、微生物学检验
（一）、标本采集 痰；尿；粪；胃液；CSF；胸腹水；脓液；血液等 （二）、检验方法 1、涂片检查 （1）直接涂片 薄(0.01ml 10mm*10mm)、厚(0.1ml 20mm*15mm)涂片法 （2）集菌涂片法 沉淀集菌法：20g/LNaOH,37℃30min或高压灭菌液化后， 3000r/min离心30min后，取沉渣涂片 漂浮集菌法 （3）荧光显微镜 金胺“Ｏ”染色，荧光显微镜下菌体发出荧光