梁润军细菌培养采样方法
细菌培养采样方法
细菌培养采样方法
细菌培养采样是一种重要的实验技术，它可以用来分离、鉴定和培养细菌，以便进行进一步的研究和应用。
下面是一种常见的细菌培养采样方法：
1.准备培养基：选择合适的培养基，如富含营养物质的琼脂培养基或含有特定选择性抑菌物质的培养基。
2.准备采样工具：消毒好的采样器具，如细菌采样棒。
3.采样位置：选择合适的采样位置，如患者的咽喉、伤口、粪便、水样等。
4.采样方法：使用采样器具在采样位置轻轻刮取一些样本，并均匀涂抹在培养基表面，或将样本浸入含有培养基的培养瓶中。
5.培养条件：根据需要，将培养皿或培养瓶放置在合适的温度、湿度和氧气条件下进行培养。
通常情况下，细菌可以在适宜的条件下迅速繁殖。
6.观察和分离：观察培养皿或培养瓶中是否有细菌生长，根据形态特征或其他特性来进行初步鉴定和分离。
细菌培养采样方法的具体步骤可能会因实验目的、样本类型和培养要求而有所不同，但上述步骤是一个常见的基本流程。
在进行细菌培养采样时，需要严格遵守
消毒、无菌操作和实验安全规范，以确保实验结果的准确性和可靠性。
无菌体液细菌培养的新方法探讨
无菌体液细菌培养的新方法探讨【摘要】目的：探讨无菌体液培养的最佳方法。
方法：对278份无菌体液标本用双相液体培养基法和直接接种法培养分离细菌。
结果：双相液体培养基检测278份标本，40份培养出细菌，阳性率为％，直接接种法培养19份标本培养出细菌，阳性率为％，经SPSS 软件处理，χ2检验，,差异有非常显着性。
结论：用双相液体培养基法培养无菌体液标本，可明显提高细菌检出率，是较好的方法。
【关键词】无菌体液；细菌培养；双相液体培养基无菌体液(胸腹水、关节液、胆汁、脓液等)标本细菌培养是诊断各种细菌感染的一种重要方法。
直接接种法(传统方法)细菌培养阳性率低,往往易造成误诊,为改变上述现状,作者经过两年的研究,终于发现一种新的细菌培养方法，即能做到床边接种又能增菌分离，现报告如下。
1 材料和方法材料标本来源278份标本为我院住院患者标本，其中胸腔积液52份，腹水51份，脑脊液49份，腹透液53份，胆汁37份，脓液36份。
培养基双相液体培养基(上海奥普生物医药有限公司提供)。
方法标本采集双相液体培养基接种法临床医生床边采样(立即接种)，无菌操作采集无菌体液标本≥3 ml,注入双相液体培养瓶内, 充分混匀,并覆盖整个固相培养基,立即送实验室，置35℃孵育箱培养。
直接接种法用接种环直接接种血平板、巧克力平板和麦康凯平板，置35℃孵育箱培养。
结果判断次日将培养瓶取出,观察液体是否混浊,固相是否有菌落和菌苔生长,若无菌生长或混浊,继续培养。
如有菌生长,立即涂片染色镜检、鉴定和药敏实验，48 h无菌生长,报告未见细菌生长。
鉴定涂片、染色分属后，采用珠海黑马生物鉴定板进行鉴定、药敏［1，2］。
2 结果两种方法检测分离出的细菌标本数用双相液体培养基检测278份标本，40份培养出细菌，阳性率为％。
胸腔积液标本阳性8份，阳性率%,腹水标本阳性8份，阳性率%,脑脊液标本阳性5份，阳性率%,腹透液标本阳性8份，阳性率%，胆汁标本阳性6份，阳性率%,脓液标本阳性5份，阳性率%；而用直接法培养，仅有19份标本培养出细菌，阳性率为％。
广东省人民医院临床病原微生物标本送检指南
送。
培养基；
时间大于 2 天
肛拭子培养――小儿菌痢尤其要做
2、采集量大 小时则放
于2 g
4℃冰箱）
痰，支气 取晨痰：1、要在护士或医生的指导下取
管肺泡灌 标本。2、先要让患者用凉开水清洗或漱 1、专用无菌
洗液，支 口以清除口腔内的正常菌群。3、指导患 痰杯
室温
3-5
气管刷取 者深咳嗽以获得下呼吸道的标本，放入一 2、采集量
5、可疑急性原发菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎、肺炎， 应在不同部位采集 2～3 份血标本。
6、怀疑为布鲁菌病应在预期发热前取血。 7、怀疑为细菌性脑膜炎者应在发热的头 1－2 天内抽血。颅内感染腰穿脊 液及脑室引流管近颅端均应送检，标签注明。 8、为提高血液标本微生物检出率、避免污染，建议抽血针头用后弃置， 换一未使用过的消毒针头将血液注入培养瓶内。 （二）尿标本： 以首次晨尿为最佳，必要时视情况随时留取。尿细菌培养标本按常规应于 病人使用抗生素之前或停药 5 日以上，留取清晨第一次清洁中段尿，保证尿在 膀胱内有 6－8 小时停留时间，取到尿标本后要在 1 小时之内做尿细菌培养（否 则应冷藏在 4℃冰箱内）。急性肾盂肾炎或慢性肾盂肾炎急性发作者，按尿细菌 培养的常规，原则上应于入院次日留尿液标本。做细菌培养之后，才能开始抗 生素治疗。由于尿频，即使在入院次日晨留尿也达不到尿在膀胱内保留 6－8 小 时的要求者，可考虑即刻留尿。尿频尿急无法忍尿者应考虑在最大忍尿后留标 本。 中段尿采集应注意清洁尿道口，弃去前段尿再留中段尿。 （三）痰及咽试子标本： 1、痰：在患者新入院时有咳嗽咳痰或必要时即可送检，通常以晨痰最好； 也有报道建议送痰标本 3 次可提高阳性率：即时痰(就诊时咳出的痰)、晨痰(早 晨起床后深咳出的痰)、夜间痰(就诊夜间咳出的痰)。 晨痰自然咳痰法应注意：患者清晨起床后，用清水反复漱口后深呼吸几次
细菌的检验技术
滤式、静电吸附式、旋风式和离心撞击式采样器。
许欣
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六、空气样本
（二）空气中细菌等微生物采样的介质 采样介质(包括培养基)对细菌等微生物具有支撑、黏附、
保护和生长作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十 二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白) （三）空气中细菌等微生物采样方法及送检 1. 平板沉降法：参见医院空气采样规定。 2. 空气采样器采样：常用Andersen采样器
许欣
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五、消毒及卫生用品
（一）医疗卫生机构消毒及卫生用品 物表 ：5cm×5cm灭菌规格板，100cm2 区域 空气：高度150cm、距墙100cm；面积≤30m2，设
一条对角线上内、中、外3点；面积 ＞ 30m2，设4 角及中央5点，暴皿5min；或用采样器 手/皮肤粘膜：含中和剂棉拭子，5cm×5cm规格板 医疗用品：破坏、棉拭子 消毒剂：1ml加至9ml中和剂中
许欣
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一、临床样本的采集与送检
（五）其它临床样本 化脓和创伤样本：棉拭子 脑脊液、胆汁、胸水、腹水、心包液、关节液和鞘膜液
等：穿刺 生殖道：棉拭子 组织样本：内镜 炎症或组织坏死部位：手术
许欣
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二、食品卫生细菌学检验样本
（一）样品采集原则 注意代表性，防止样品受污染、变质和细菌生长 大样(一整批 )、中样(混合200g )和小样(检样25g) （二）样品采集方法 无菌用具、包装完好、混合、震摇、冷冻、冷藏 （三）采样的数量 根据食品种类的不同，采样的数量也应不同 （四）注意事项 3h内送实验室，无菌操作
许欣
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五、消毒及卫生用品
咽喉培养菌实验报告(3篇)
第1篇实验目的：本实验旨在通过咽喉拭子培养，分离和鉴定咽喉部位的常见细菌，了解咽喉部位细菌的种类及其生物学特性。
实验时间：2023年X月X日实验地点：XX医学院微生物实验室实验材料：1. 咽喉拭子2. 血琼脂平板3. 麦康凯琼脂平板4. 革兰染色液5. 生理盐水6. 琼脂穿刺针7. 镜检设备8. 微生物培养箱9. 标本鉴定试剂盒实验方法：1. 取样：使用无菌咽喉拭子，轻轻擦拭受试者咽喉部位，收集标本。
2. 制备平板：将咽喉拭子尖端剪入无菌生理盐水中，振荡混匀后，用无菌吸管取适量混合液，均匀涂布于血琼脂平板和麦康凯琼脂平板上。
3. 培养：将涂布好的平板倒置放入37℃培养箱中，培养24小时。
4. 观察：观察平板上菌落的生长情况，包括菌落形态、颜色、大小等。
5. 革兰染色：对疑似细菌进行革兰染色，观察细菌的革兰氏染色反应。
6. 鉴定：使用标本鉴定试剂盒对分离出的细菌进行鉴定。
实验结果：1. 菌落观察：- 血琼脂平板上观察到多个白色、圆形、光滑、边缘整齐的菌落，直径约为2-3mm。
- 麦康凯琼脂平板上观察到多个红色、圆形、光滑、边缘整齐的菌落，直径约为2-3mm。
2. 革兰染色：- 革兰染色结果显示，大部分细菌为革兰氏阳性菌，少数为革兰氏阴性菌。
3. 鉴定结果：- 通过标本鉴定试剂盒鉴定，大部分细菌为链球菌属，少数为葡萄球菌属。
实验讨论：咽喉部位是人体呼吸道的第一道防线，细菌在咽喉部位的生长与繁殖对呼吸道健康具有重要影响。
本实验通过对咽喉拭子进行培养和鉴定，成功分离出链球菌属和葡萄球菌属，表明咽喉部位存在这些常见细菌。
链球菌属和葡萄球菌属均为条件致病菌，正常情况下存在于人体呼吸道、皮肤等部位。
当人体免疫力下降或局部环境发生变化时，这些细菌可能导致呼吸道感染、咽炎、扁桃体炎等疾病。
结论：本实验成功分离和鉴定了咽喉部位的常见细菌，为临床诊断和治疗咽喉疾病提供了参考依据。
在日常生活中，应注意个人卫生，增强体质，预防咽喉疾病的发生。
微生物培养标本采集操作规程（共5篇）
微生物培养标本采集操作规程（共5篇）第一篇：微生物培养标本采集操作规程微生物标本采集操作规程美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）概述临床通常将正常人喉以上部位称之为上呼吸道，上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无菌。
下呼吸道分泌物经过上呼吸道排出时常受该处的正常菌群的污染。
下呼吸道感染包括急性气管-支气管炎、慢性支气管炎急性发作、支气管扩张继发感染及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。
病原体有细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次体和原虫等。
上呼吸道感染临床诊断一般不难。
细菌学检验能明确感染病原及药敏结果，有助于疾病治疗、流行病学调查和医院感染的监测。
2 物品准备与申请2.1 领取清洁痰盒，推荐到采购办领取专门痰盒。
请拿检验申请单到病房二楼细菌室登记领取。
细菌室周一到周六上午正常上班。
其他时间如中午、夜班、节假日请到生化室联系。
2.2 填写检验申请单。
用钢笔填写，字迹清楚，填写完整。
填写内容包括：患者姓名、性别、年龄、科别、病区、床号、住院号、临床诊断、送检目的、申请医生及送检时间。
3 采集指征痰液标本是临床微生物学检验最常见的的标本，但不是下呼吸道感染的最佳标本。
有下列体征之一，应进行痰培养：（1）咳嗽咳嗽咳痰是下呼吸道感染最常见的症状。
（2）咯血包括泡沫血痰、鲜血和痰中带血等。
（3）呼吸困难呼吸急促或哮喘，常伴有胸痛。
（4）发热伴白细胞增高尤其是中性粒细胞或CRP明显增高。
（5）胸部影像学检查提示有感染可能。
4 采集方法4.1 自然咳痰法以晨痰为佳，采集标本前应用清水、冷开水漱口或用牙刷（不用牙膏）清洁口腔和牙齿，有假牙者应取下假牙。
尽可能在用抗菌药物之前采集标本。
用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入痰盒中，标本量应≥1ml。
咳痰困难者可用雾化吸入加温至45°C的10% NaCl水溶液，使痰液易于排出。
对难于自然咳痰患者可用无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。
细菌培养采样方法
细菌培养采样方法供应室工作环境监测各类环境空气、物体表面、医务人员手细菌菌落总数卫生学标准如下:消毒液的米样及检查方法采样方法：用无菌吸管吸取使用中的消毒液1ML，置于备好的试管内及时送检，送检时间不超过4时，必要时试管中加中和剂。
采样前准备：洗手，手套，口罩，无菌吸管，试管，酒精灯，打火机，无菌剪刀浸泡使用的消毒液细菌培养：用于灭菌的消毒液没有检出任何微生物为合格；用于消毒物品的消毒液其染菌量V 100cfu/ml.未检出致病菌或细菌生长均为合格；空气采样及检查方法检查原则：每个月一次，空气消毒结束后进行，一般不超过消毒后4小时，采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h。
未检出致病菌为合格，不得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等其它致病菌，不得超过规定区域所执行的标准参数；空气采样及检查方法：采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样；采祥高度：与地面垂直高度80 - 150cm；布点方法：室内面积<30M2设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m 处各取一点；室内面积>30m2,设东、西、南、北、中5 点，其中东、西、南、北点均距墙1m,注意采样时不走回头路，不得逆行；采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。
采样前准备：洗手，戴口罩，培养皿（看采样面积大小准备）；物体表面采样及检查方法采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样；采样面积：被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面> 100cm2取100cm2 ；采样方法：用5X5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。
连续采样1-4个规格板面积；剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。
不规则样物品如门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
一线总结!微生物取样、样品制备技巧及稀释、接种、培养方法汇总!
一线总结！微生物取样、样品制备技巧及稀释、接种、培养方法汇总！一、样品前处理（1）无论何种抽样方案,均要求样品有代表性。
采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。
假如是冷冻样品按要求冷冻保藏，干燥食品可放在常温冷暗处，易腐和冷藏样品应放入10℃环境。
冷冻样品来不及检验应放入-15℃以下冰箱内，待检样品存放时间不应超过36h。
（2）样品解冻假如是冷冻样品，样品取出后，在0-8℃的冰箱中解冻，时间不超过18小时；也可在温度不超过45℃环境中解冻，时间不超过15min。
（3）检测前预备试验前将工器具移到无菌间，最好用紫外线照耀20min分钟灭菌消毒，达到无菌状态。
操作试验的预备物品均质杯、酒精及酒精棉、移液器、灭菌枪头、平皿、稀释液、剪刀、镊子、无菌盆或筐等物品，检查一下是否齐全。
二、检测1、样品标识将样品进行相应标识标记，其中菌落总数根据4789.2操作，每一个稀释度做两个平行，一般做三个稀释度每个样品一摞。
大肠菌群及金黄色葡萄球菌根据4789.3和4789.10中的MPN法检测，每个稀释度3根管，一般也是做3个稀释度。
2 取样先将样品外包装正反面用酒精喷洒（假如样品表面有冷凝水先擦拭洁净后再用酒精喷洒）（1）固体样品① 75%酒精棉消毒开启部位及其四周，再用火焰灭菌的剪刀剪开。
② 在电子称上放上均质杯去皮调整至零。
③ 用火焰灭菌后的剪刀和镊子取样，称取25g有代表性样品。
④ 加入225ml灭菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水（开盖瓶塞时瓶口部和瓶塞应在火焰通过1-2次，以杀灭从空气中落入杂菌）后。
⑤擦拭洁净剪刀镊子后浸泡于75%酒精容器中。
⑥将均质杯盖上盖子后8000转均质1-2min后作为样液。
（2）液体样品①冷冻样品完全解冻后使用。
②75%酒精棉消毒开启部位及其四周，再用火焰灭菌的剪刀开启，用灭菌吸管取充分混合后样25ml。
③加入225ml灭菌磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水混匀作为样液。
(3) 粉末状样品以及半固体样品①将样品混合匀称。
细菌培养标本采集方法
细菌培养标本采集方法
血液及骨髓培养
1、适应症：血培养主要用于检测菌血症、真菌血症患者血液中的微生物，健
康人血液中是无菌的。
骨髓培养主要使适用于骨髓炎者。
2、标本采集：应在病人发热初期1-2天内（治疗前）无菌采集，采集量约为
培养液的1/10，通常5-6ml，已用过抗生素的患者，在48小时内取6个标本，每次均在使用抗生素前采集。
以上操作均采用无菌技术采集标本，诸如培养瓶后送实验室。
呼吸道标本培养
痰培养
1、适应症：适用于气管炎、支气管炎及肺部感染的患者。
2、标本采集：一般以清晨第一次痰液为佳，支气管扩张或支气管相通的空洞
者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液。
3、咽拭子：在留取标本前要用清水反复漱口，以减少正常菌群的污染，应在
采集部位（咽喉壁或悬雍垂后侧）反复涂抹数次，单咽拭子药避免接触皮肤粘膜。
4、自然咯痰法：以清晨第一次痰液为宜，采集前漱口。
脓液及创伤感染分泌物培养
1、适应症：适用于术后感染或局部感染的患者。
2、标本采集：用无菌棉拭子取脓液及病灶分泌物送检，也可以以无菌手续取
组织碎片送检。
尿液培养
1、标本采集：以清晨第一次中段尿为佳，女性要清洗外阴部位，男性清洗尿
道口，取中段尿约10ml。
夏季不超过一个小时，冬季不超过2小时。
2、适应症：适用于泌尿系感染的患者。
大便标本培养
1、适应症：适用于肠道感染的患者。
2、标本采集：多采用自然排便或结肠拭子采集法，应采集发病初期用药前的
新鲜的、脓血或粘液便。
杞县人民医院护理部
2011年8月10日。
临床微生物标本送检指南
第四步：戴手套
如需对穿刺部位进行触诊，戴 无菌手套
•
如无需对穿刺部位进行触诊， 戴非无菌手套
• •
第五步：抽血
血量： 用注射器无菌穿刺取血后，勿换 针头直接注入血培养瓶
儿童 人群
成人 新生儿
需氧
10ml ≥0.5 ml
厌氧
10ml 不需
总量
20ml
-血量充足：先注厌氧瓶，后注
需氧瓶 -血量不足：优先注入需氧瓶，剩
≥4ml
不需
余注入厌氧瓶（因真菌、绿脓杆菌、
窄食单胞菌多长在需氧瓶内）
•
第六步：混匀
血标本接种到培养瓶后，轻
轻颠倒混匀以防血液凝固 （不要大力摇晃）
•
抽取导管血和外周血以诊断 导管相关性血流感染，标记
抽血部位和抽血时间尤为重
要
第七步：从另一部 位穿刺采集第二套 血培养，方法同前
第八步：
•
血培养瓶尽快送实验室，任何延迟上机将会延迟或 阻止检测细菌的生长
本。
开放性损伤和脓肿：尽量去除表面覆盖物和渗出液， 并用拭子用力擦拭损伤基底或边缘取样。取自表浅 切口感染的标本不进行厌氧培养。伤口进展边缘处 活检标本检测厌氧菌、分枝杆菌和真菌最佳。
严格的无菌操作； 收集于无菌可密封试管； 如果多于1管，实验室应接收被血污染较少的脑脊液
（如第2或第3管等）；
灵敏度：75%，特异度：18%
临床微生物标本采集规范与否是整个微生物检
测流程中的第一关键因素，如果始动环节得不
到保障，整个流程也只能产生令临床茫然、甚
定量培养：106CFU/ml，灵敏度达76±9%， 特异度75±28%
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选择消毒处理后4h内进行采样。 3.2采样面积 被采表面＜100cm² ，取全部表面：被采表面≥100cm² ，取100cm² 3.3采样方法 用5×5cm² 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生 理盐水采样液的棉拭纸1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随 之转动棉拭纸，连续采样1—4个规格板面积，用无菌剪剪去手接触 部分，将棉拭纸放入装10ml采样液的试管中送检。门把手等小型物 体则采用棉拭纸直接涂抹物体的方法采样。放入物品前后，瓶口必 须按常规在酒精灯上烘烤，然后盖好盖塞送细菌培养。
医疗用品采样方法
5.1采样时间 在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。 5.2采样量及采样方法
可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射
器和注射针等均参照《中华人民共和国药典》1990年版一 部附录中《无菌检查法》规定执行。对不能用破坏性方法 取样的特殊医疗用品，可用浸有无菌生理盐水采样液的 拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面＜100cm² ，取全
2.4采样方法 用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送 检培养。
空气采样方法
2.5操作时，前臂不能越过已打开的培养皿；放培养 器皿时，要从内往外放，取时要从外往内，动作不 能粗重，以免影响培养效果。 2.6按照平开平放法或平开扣放法放置5分钟，即送 检验室化验结果。
物体表面采样方法
部表面；被采表面≥100cm² ，取100 cm² 。
谢 谢!
细菌培养采样方法
梁润军
空气采样方法
2.1采样时间 选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。 2.2采样高度 与地面垂直高度80—150cm。 2.3布点方法
室内面积≤30m² ，设一条对角线上取3点，既中心一点、两端各 距墙1m处各取一点：室内面积＞30m² ，设东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均距墙1m。
医护人员手采样方法（试管法）
医务人员手采样目的：是为了检测医务人员的责任感，防止将带有细菌 的手污染无菌伤口。 1、按无菌操作要求，进行手细菌采样。 2、选定抽查对象，（手术室参加手术者事先不能通知被抽查对象）。 4.1 采样时间 在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 4.2 采样面积及方法 被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭纸一支在双手指曲 面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面30cm² ）并随之转动采 样棉拭纸，用无菌剪剪去手接触部位，将棉拭纸放入装有10ml采样液的 试管内送检。采样面积按平方厘米计算。