植物DNA提取经典方法
CTAB法提取植物总DNA
关于CTAB法提取基因组DNA，原理CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。
通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中；CTAB 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。
用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。
使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。
缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。
2.不能完全抑制RNase的活性。
氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
提取植物DNA方法
提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。
以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。
接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。
之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。
最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。
首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。
接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。
然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。
最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。
3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。
首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。
高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。
然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。
4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。
首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。
然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。
这些方法在植物科学研究中被广泛使用。
在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。
植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。
需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。
样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。
此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。
实验一 DNA提取
实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。
本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。
2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。
提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。
DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。
以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。
当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。
当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。
为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。
关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。
DNA提取总结
(1)将小麦叶片（约0.1g）放入研钵中，加入液氮冷冻，快速研成粉末后倒入1.5mL离心管中；(2)每管加入600μL SDS DNA提取液（含2%的巯基乙醇），于65℃水浴30min，其间温和混匀几次；(3)取出离心管，加入60μL 5mol/L KAc，立即上下颠倒温柔混匀（5~6次），冰上放置20min；(4)于12,000 rpm离心10min；(5)将上清液（约600μL）转移至新的离心管中，加入4μL RNase，室温放置5min；(6)加入600μL酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）；(7)于12,000 rpm离心15min；(8)将上清液转移至新的离心管中，记下体积，加入0.6~0.7倍体积的异丙醇，于-20℃下沉淀10~30min；(9)于10,000 rpm离心5min，弃上清，将沉淀用75%乙醇洗2~3次；(10)挥发干净乙醇，加入50μL ddH2O，-20℃保存;(11)1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。
一、实验目的掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。
学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。
二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。
十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。
再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。
植物dna提取方法
植物dna提取方法
提取植物的DNA可以通过以下几个步骤：
1. 植物材料准备：选择新鲜的植物组织，如叶片、茎、根或花朵。
使用刀片将组织切碎，将其放入离心管或试管中。
2. 细胞破碎：可以使用物理或化学方法将细胞破碎，以释放DNA。
常用的方法有研钵法、冻融法或特定的细胞破碎缓冲液。
3. DNA溶出：将细胞破碎液加入含有溶出缓冲液的试管中，使DNA从细胞中溶出。
溶出缓冲液通常含有EDTA、盐和洗涤剂等成分。
4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，去除DNA溶液中的蛋白质。
蛋白酶K可以在高温下活性化，并能降解多种蛋白质。
5. DNA沉淀：加入等体积的冷乙醇或异丙醇，使DNA分子沉淀。
可以通过离心沉淀DNA，并将上清液倒掉。
6. DNA纯化：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除杂质。
然后用适量的缓冲液重新溶解DNA。
7. DNA检测：可以使用紫外光谱仪或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度和质量。
注意事项：
- 实验操作时应注意无菌条件，以避免污染。
- 建议在化学通风橱等无菌环境下进行DNA提取。
- 每个步骤中所用试剂和设备应事先消毒或经过无菌处理。
- DNA提取过程中应尽量避免DNA的降解，可以采取低温、迅速和轻柔的操作方式。
CTAB法提取植物DNA
清洗
• 将上清液再次离心，去除其中的杂质和蛋白质。 将得到的上清液转移到新的离心管中。
DNA的纯化与溶解
在上清液中加入等体积的异丙醇，混 匀后放置一段时间，使DNA沉淀下来。
将清洗后的DNA晾干，然后加入适量 的TE缓冲液溶解DNA。此时可以得到 高质量的植物DNA样品，可用于后续 的实验或保存备用。
利用ctab法提取的DNA进行遗传多样性 分析，有助于了解植物种群的遗传结构和 演化历程。
在植物育种中的应用
分子标记辅助育种
利用ctab法提取的DNA进行分子标 记辅助育种，能够快速准确地鉴定优 良基因型，提高育种效率。
转基因育种
通过ctab法提取的DNA可以用于构建 基因，为转基因育种提供重要的 基因资源。
DNA浓度测定
根据DNA溶液的吸光度值，计算DNA的浓度。
DNA完整性评估
通过电泳检测DNA片段的大小和完整性，评估DNA的质量。
04 ctab法提取植物DNA的 应用与展望
在植物遗传研究中的应用
基因定位
通过ctab法提取的DNA可用于基因定位 ，确定基因在染色体上的位置和功能。
VS
遗传多样性分析
实验过程中的安全注意事项
实验操作安全
在实验过程中，应遵循实验室安全规定，避免交 叉污染和意外事故的发生。
防护措施
佩戴实验服、手套、口罩等防护用品，确保实验 操作人员的安全。
化学品使用
正确使用和处理实验过程中涉及的化学试剂，避 免对实验操作人员造成伤害。
实验结果的判定与评估
DNA纯度检测
通过紫外分光光度计检测DNA溶液的A260/A280值，判断DNA 的纯度。
参考文献3
CTAB法提取植物DNA的步骤包括将植 物组织研磨成粉末，加入预热的缓冲 液和CTAB，混合均匀后进行离心，取 上清液加入乙醇沉淀，离心后取出 DNA进行洗涤和干燥。在提取过程中 需要注意避免交叉污染和样品间的混 淆。
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质，它携带着生物体的遗传信息。
提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。
本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA结合形成离子对，然后通过盐溶液的浓度差异，使DNA从溶液中沉淀出来。
该方法适用于提取植物细胞中的DNA。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。
其原理是利用DNA在酚相中溶解，而其他细胞组分则在氯仿相中溶解，通过酚/氯仿两相的分离，从而将DNA分离出来。
该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性，将DNA吸附在硅胶颗粒上，然后通过洗涤、离心等步骤，将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。
该方法适用于提取各种样品中的DNA。
4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。
其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合，然后通过磁力的作用，将颗粒和DNA一起沉淀下来，最后通过洗涤等步骤，将DNA从颗粒上洗脱下来。
该方法具有快速、高效的特点，适用于高通量的DNA提取。
以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。
不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。
在实际操作中，可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。
同时，为了保证提取到的DNA质量和纯度，还需要注意提取过程中的一些关键步骤，如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。
DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤，通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品，为后续的实验和分析提供可靠的基础。
随着技术的不断进步，提取方法也在不断改进和优化，为科学研究提供更多的可能性。
植物根部dna提取方法
植物根部dna提取方法
植物根部DNA提取方法：
1. 取植物根部样本，洗净表面的土壤，用滤纸吸干表面水分；
2. 将根部样本用刀割碎成小段，放入离心管；
3. 加入提取液（含有CTAB）混匀，放入水浴中加热至70℃，静置20分钟；
4. 加入等体积的氯仿混匀，离心5分钟；
5. 将上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇混匀；
6. 冷冻-解冻3次，离心5分钟，取上层清液至新的离心管中；
7. 加入等体积的冷乙醚混匀，离心5分钟，取上层清液至新的离心管中；
8. 加入1/3体积的3M NaAc，和相当体积的无水乙醇混匀，离心5分钟，倒掉上层液体；
9. 加入体积相当的冷70%乙醇混匀，离心5分钟，倒掉上层液体；
10. 接下来将沉淀经过漂白、洗涤、乙醇干燥等步骤，最后加入适量的无菌水或TE缓冲液溶解即可获取纯净的植物根部DNA。
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植物DNA提取经典方法：CTAB法原理
植物DNA提取经典方法：CTAB法原理
植物DNA提取经典方法CTAB法
标题:植物DNA提取经典方法：CTAB法原理
摘要: CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0 7mol L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复……
关键词:植物DNA提取经典方法CTAB法
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CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。
在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
注：CTAB溶液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。
一、CTAB提取缓冲液的经典配方：
Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；
EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；
NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，存在于液相中；
CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；
β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除。
二、CTAB提取缓冲液的改进配方：
(1) PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖；
(2) 蛋白质的去除：酚/氯仿抽提使用变性剂变性(SDS、异硫氰酸胍等)高盐洗涤蛋白酶处理核酸分离，纯化；
(3)多糖的去除：高盐法：用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl，高盐可溶解多糖。
用多糖水解酶将多糖降解。
在提取缓冲液中加一定量的氯苯(1/2体积)，氯苯可以与多糖的羟基作用，从而去除多糖。
用PEG8000代替乙醇沉淀DNA：在500 μL DNA液中加入200μl 20% PEG8000 (含1.2 M NaCl)，冰浴20min.核酸分离，纯化；
(4) 多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂：β-巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂：如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)，它们与酚类有较强的亲和力，可防止酚类与DNA的结合；
(5) 盐离子的去除：70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸，其它的杂质均被洗掉，达到纯化DNA的目的另一种方式加入1/10体积的NaAc(pH5.2,3M)，用预冷的乙醇或异丙醇沉淀RNA吸附或沉淀后应用70%的乙醇洗涤，以除去盐离子等若长期储存建议使用TE缓冲液溶解TE中的EDTA能螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNasepH值为8.0，可防止DNA发生酸解。
三、基因组DNA提取常见问题
DNA中含有蛋白、多糖、多酚类杂质。
DNA在溶解前，有酒精残留，酒精抑制
后续酶解反应，DNA中残留有金属离子，有RNA的存留。
对策：重新纯化DNA，去除蛋白、多糖、多酚等杂质，重新沉淀DNA，让酒精充分挥发，增加70%乙醇洗涤的次数(2-3次)，加入RNase降解RNA。
（1）DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。
DNA提取常见问题：材料不新鲜或反复冻融、未很好抑制内源核酸酶的活性、提取过程操作过于剧烈，DNA 被机械打断，外源核酸酶污染反复冻融。
尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融，液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液。
在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA时，可增加裂解液中螯合剂的含量，细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。
所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌。
将DNA分装保存于缓冲液中,避免反复冻融。
（2）DNA降解，DNA提取常见问题。
实验材料不佳或量少，破壁或裂解不充分，吸附或沉淀不完全，洗涤时DNA丢失。
尽量选用新鲜(幼嫩)的材料，动植物要匀浆研磨充分；G+菌，酵母裂解前先用生物酶或机械方式破壁。
高温裂解时，时间适当延长(对于动物细胞,细菌可增加PK的用量)。
增加吸附的时间、或低温沉淀小心操作。