凝血四项原理及测定

透射比浊法，是根据待测样品在凝固过程中吸光度变化来确 定凝固终点的，采用50%这点作为检测值，是因为在50%这 一点光透射时间变化最大，纤维蛋白单体聚合反应率最高 （CS系列采用透射比浊法）。两者曲线相反
光学法和磁珠法用于血凝检测，就方法论而言各有千秋，光 学法的优点在于结构简单、灵敏度高。易于自动化等。缺点 在于易受特异血浆干扰，对此各厂家已采取不同措施予以弥 补。磁路法优点不受特异血浆的干扰（黄疸、溶血、乳糜）， 试剂量少，缺点，磁珠的质量、杯壁的光滑程度等，均会对 测量结果造成影响。
（1）凝血酶原时间测定（PT）
原理：待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的 血浆在组织因子存在时通过外原性激活途径激活因子X成Xa, Xa使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转化为纤 维蛋白而凝固，测定凝固所需时间即为凝血酶原时间。
用途：是外源性凝血糸统障碍较为理想的筛选试验，亦可用 于内、外凝血共同途径凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的邢台市第三医院检验科 刘晓彬
目录
1.凝血四项的测定与临床意义。 2.影响凝血四项测定结果的几种常见因素。
凝血四项的测定与临床意义
基本原理
目前国内外各生产厂家生产的全自动血凝仪都是基于凝固法 对血液凝固过程进行测量的。血液凝固是一系列凝血因子连 锁性酶反应的结果。血液中的凝血因子以无活性酶原形式存 在，当某一凝血因子被激活后，可使许多凝血因子按一定的 次序先后被激活，彼此之间有复杂的催化作用，被称为“瀑 布样学说”。这种“瀑布样学说”产生的激变在血液的生物 物理特性上表现为，电阻增大（电流法）粘度增强（磁珠 法），浊度上升（光学法）。由于电流法测量可靠性差，因 此为磁珠法和光学法所替代。
常见的几种报警信息分析
No coagulation（无凝集）
1 重度乳糜标本，吸光度变化很小，假性不凝集。 2 有大凝块，消耗大量的纤维蛋白原变为纤维蛋白，假性不
凝集。 3 曲线为一条直线，APTT>180s TT>150s。 4 从留置针中采血混有肝素。
Ranger over (超出线性范围）
目前可开展的血栓/止血成份检测方法主要有凝固法、底物显 色法、免疫法、乳胶凝集法等。
测定方法
光学法（比浊法）
光学法血凝仪是根据血浆凝固过程中浊度的变化来测定凝血 功能。根据仪器不同的光学测量原理，又可分为散射比浊法 和透射比浊法两类。
散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确 定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器 呈90度直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维 蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品 完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起 始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。 光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放 大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线（CA系列 散射光百分比终点法）。
3 标本的采集
采集时间：常规要求上午空腹采集，急诊随时采集。 采血顺利，止血带不应扎得过紧、时间过长，针头必须采用21号以上，并且采血
后迅速与抗凝剂混匀，避免用力振荡。 要遵循严格的标本采集顺序： 1.如果一次要求采血多管样本时，应按以下顺序采血：血培养→蓝帽管(凝血测定)或 黑帽管（血沉）→红帽管、橘黄帽管（促凝管）→绿帽管（肝素钠管或肝素锂管）→ 紫帽管（血常规）。 2.无血培养时，蓝帽管(凝血测定)必须 放在第二管采集，按照原有顺序选择第一管标 本采集。 3.只有蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）时，应先用黄帽管采集少许血液，然后再 采集蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）。
手工法测定：（1）在试管中加入待检血浆和APTT试剂各 100uL，混匀和100uL氯化钙同时置于37°温育箱中温育3min。 （2）加氯化钙溶液计时：在试管中加入氯化钙溶液100uL，立 即混匀并开始计时，不时缓慢倾斜试管，观察试管流动状态， 当液体不流动停止计时，记录时间。
APTT试剂应于2-8℃的冰箱保存，长期保存后可能会形成黄色 沉淀，用前需振摇均匀。
原理：待测血浆加入凝血活酶，在钙离子的参与下纤维蛋白原 转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定凝固所需要的时间即为 活化部分凝血酶时间。
用途：是内源性凝血系统Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子较为理想的筛选 试验，亦可用于内源性凝血因子定量，凝血因子Ⅶ和其他凝血 因子测定，特别是Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子和释放酶测定，肝素治 疗的监控等。
HCT结果异常增高（大于55%）也会导致凝血结 果异常，常见于一些心脏病病人、慢阻肺病人、新生 儿、血液病的病人。这些异常结果复查后大多正常。
处理步骤如下：
发现HCT异常（离完心后标本血浆少、细胞多）→查 看血常规HCT结果→根据前面的公式或表格得出需要 抽血的量→电话通知临床（指导护士采用粗针头注射 器抽取相应量的静脉血取下针头，将血顺管壁缓慢注 射到凝血采血管中，立即充分混匀后即刻送检）。
（3）凝血酶时间测定（TT）： 原理：待测血浆加入适量凝血酶，纤维蛋白原转化为不溶性的纤 维蛋白而凝固，测定所需时间即为凝血酶时间。 用途：是检测受试者纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白能力常 用的筛选试验。增高见于DIC纤溶亢进期，血中纤维蛋白（原） 降解产物（FDPs）增高；降低无临床意义。
（4）纤维蛋白原浓度测定（FBG）： 原理：高浓度的凝血酶存在时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤 维蛋白原（FIB）含量成反比关系。测量该稀释血浆凝固时间， 换算即得纤维蛋白原浓度。OVB要放置常温状态下才可进行检 测。 用途：用于纤维蛋白定量测定。
为什么要遵循严格的标本采集顺序？
采血不顺利、第一管抽凝血的标本，都可能引 起标本中混入组织液使凝血活酶受到污染， 凝血因子激活而导致 PT和APTT结果延长
第一管抽凝血的标本，可由于采血针连接管导 致抽血量不足。
抗凝剂的选择 根据WS/T359-2011《血浆凝固实验血液标本的采集及处理指
标本准备
离心前查看标本（标本的采集量，有无凝块），保证以 1500～2500g，离心10分钟，以取得乏血小板血浆，离心后还必 须查看标本有无溶血、凝块（注意观察交界面是否平整）、乳 糜等。
根据 CNAS-CL02-A001:2018 拒收标准： 1 溶血、有凝块标本 2 采检量不准确，采集量+-10%的标本 3 红细胞压积大于55%时应调整抗凝剂量重新采集。
南》的要求，选用抗凝剂为0.109mol/L的枸橼酸钠，它能有效 地阻止因子Ⅴ和Ⅷ的活化，严格按1:9的比例抗凝。 注意： 当HCT>55%或<25%时，应按如下公式重新核算抗凝 剂的用量:
抗凝剂量(ml)=0.00185×全血量(ml) × [100-HCT(%)]。 采血体积(ml)=0.2/0.00185×[100-HCT(%)]
PT、APTT结果偏低时，一般是病人处于高凝状态比如 DIC， 但要注意标本有无小的凝块（当有小凝块的时候，由于 凝血因子的激活结果一般偏低）。
结果带星号的时候，要注意查看曲线和标本状态。 用药过量或者是重症患者，有时一项或几项全都是星号， 查看反应曲线，如果反应曲线是一条直线，并且与临床沟通、 复查后，报告结果PT/APTT/TT大于多少秒，注意纤维蛋白原 不能报告不凝，PT活动度和INR删除不报。
异常结果的判断与案例分析
当凝血结果有异常时，首先确认标本状
态（包括血浆量的多少、HCT是否异常、有
无小的凝集、是否有溶血乳糜等），查看标
本的编号、姓名与仪器的数据是否对应，然
后考虑病人的年龄、所在病区、可能的诊断、
有无前回值、及时与临床沟通（采血是否顺
利、了解病人的相关变异因素），必要时复 查标本。
影响凝血四项测定结果的几种常见因素
1 光源稳定性，试剂复溶有效期及是否更换新批号， 反应杯是否光滑无毛刺，冰箱温度是否符合要求， OVB是否放置常温或常温放置时间过长，试剂杯是 否定期清洗等。
2 定期清洁蒸馏水桶。如果长时间不清洁，水桶内 壁会长菌、会有异物沉淀等，进而堵塞仪器管道， 影响检验结果。
手工法测定：用加样枪吸取50uL血浆到小塑料试管37℃孵 育1分钟，加Thromborel S 试剂（已预温到37℃）100uL并 同时开启秒表计时，不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流 动所需要的时间，记录时间。
测定温度36.5—38.5℃,过低或过高均使PT延长（温育箱中 进行）。
（2）活化部分凝血酶时间测定（APTT）：
1 小于仪器可报最小时间即PT<7s APTT<15s,此时仪器测 得数值是不可靠的，需要手工复查。（主要常见原因）
2 混有肝素无法测量值。
选择适合自己医院的检验项目，提高检验质量。
文献报道，临床检验的全过程中，这三个过程占总分析误差 的比例如下 ➢ 分析前的误差占总误差的46%~68.2% ➢ 分析中的误差占总误差的＜15% ➢ 分析后的误差占总误差的18.5%~47%