凝血酶原时间测定sop(CA系列)
凝血酶原时间测定
凝血酶原时间测定凝血酶原时间（prothrombin time，PT）测定是外源凝血系统常用的筛选试验之一，它可反映凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ及Ⅰ的活性。
（一）检验原理凝固法。
于受检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白并使受检血浆凝固，血浆凝固所需的时间即为凝血酶原时间。
（二）检验方法学1.试剂（1）人脑或兔脑浸出液。
（2）0.025mol/L CaCl2。
2.标本采集与制备于硅化或塑料试管内加入0.109mol/L枸橼酸钠溶液0.2ml，然后加入受检全血1.8ml （1∶9抗凝）充分混匀，1500r/min离心10分钟，以此制备乏血小板血浆。
3.标本检验取玻璃小试管1支，加入血浆和组织凝血活酶试剂各0.1ml，37℃温育30秒，加入0.025mol/L氯化钠溶液0.1ml，立即启动秒表，不断轻轻倾斜试管，记录液体停止流动所需的时间，重复上述步骤2次，取2次结果的平均值，并以正常参比血浆（20份正常人混合血浆）作为对照。
（三）方法学评价1.未按离心要求导致受检血浆中血小板增多使凝血酶原时间假性缩短。
2.标本溶血，因红细胞中含有促凝成分，可使凝血酶原时间假性缩短；脂血可导致结果观察困难，故也影响检验结果的准确性。
（四）质量保证1.正常对照因每次使用的组织凝血活酶（兔脑、人脑、胎盘、肺组织等浸出液）的活性不尽相同，且每次检验的条件也各异，故每天均需作正常对照。
2.检验温度水浴温度应恒定在36～38℃，温度过高或过低均可使凝血酶原时间延长。
3.检验周期应在采血后4小时内完成检测，否则可使凝血酶原时间假性延长。
4.调整抗凝剂比例当血细胞比容小于20%或大于50%时，抗凝剂与血液的比例应按下式调整：抗凝剂量（ml）=（100-HCT）×采血量（ml）×0.00185。
（五）参考范围男性：11～13.7秒；女性：11～14.3秒。
受检者的测定值较正常对照值延长超过3秒才有临床病理意义。
血浆凝血酶原时间测定(手工法)
血浆凝血酶原时间测定(手工法)1.检验原理凝血过程是通过适量的凝血活酶、钙离子和孵育血浆触发，然后测定纤维蛋白凝块形成时间。
PT的长短反映了血浆中凝血酶原、纤维蛋白原和因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平，本试验是外源性凝血系统常用的筛选试验。
2.导致PT检测过高原因标本自身高和用药后高（比如肝素），抽血过程中抗凝剂未充分混匀或者抗凝剂失效，加了肝素的针头抽出的血液放入血凝管送检。
3.手工适用状态当标本在血凝仪器CA1500上血浆凝血酶原时间未能检测出来，测量状态为●完成，数据显示错误报警ERR032（无凝结物），对标本和试剂进行全面评估后，怀疑是血浆凝血酶原时间太长（>100S）（排除非自身原因），立即采用手工操作测定凝血酶原时间。
4.检验方法4.1．试剂准备：按照试剂瓶标签上标明的量（4mL），用去离子水复溶ThromborelS试剂，颠倒混匀8~10次，使用前用水浴箱预温到37℃5分钟，也可直接使用CA1500上的PT（经水浴箱37℃复温5分钟）。
请注意：试剂使用前小心混匀。
4.2．检验步骤及方法：3000r/min离心标本10分钟，用加样枪吸取血浆100uL到小塑料试管37℃孵育1分钟，加Thromborel S 试剂（已预温到37℃）200uL并同时开启秒表计时，不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流动所需要的时间，记录时间，重复以上操作2次，取最准确的那次时间（一般最后一次测量值准确度最高），即为该患者凝血酶原时间。
5.结果计算在LIS系统上输入该患者的凝血酶原时间，其它根据下列公式计算：凝血酶原活度（PTA）=[（对照PT﹣对照PT*0.6）÷（患者PT-对照PT*0.6）] *100%凝血酶原比值（PTR）=患者PT/对照PT国际标准化比值（INR）=PTR ISI6.报告确定无误后及时报告危急值，并在LIS上输入计算出来的结果，在备注栏中注明“手工法结果”，审核报告发出。
7.标本存放1小时内（3000r/min*10min）分离血浆，室温放置不超过2小时，2~8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月），只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。
凝血酶原时间分类标准
凝血酶原时间分类标准
凝血酶原时间（PT）是指在缺乏血小板的血浆中加入过量的组织因子（兔脑渗出液）后，凝血酶原转化为凝血酶，导致血浆凝固所需的时间，主要反映外源性凝血是否正常。
其分类标准如下：
•正常参考值：对于成人，PT的正常值通常在11-15秒之间；对于新生儿，由于他们的凝血系统还在发育中，因此正常值会稍长一些，大约在18-22秒之间。
另外，也有观点认为，PT的正常值应在12-14秒之间。
•临床意义：当PT超过正常对照值3秒以上时，具有临床意义。
PT延长可能见于先天性凝血因子缺乏，如凝血酶原（因子Ⅱ）、因子Ⅴ、因子Ⅶ、因子Ⅹ及纤维蛋白原缺乏，或者获得性凝血因子缺乏，如继发性/原发性纤维蛋白溶解功能亢进、严重肝病等。
此外，使用肝素，血循环中存在凝血酶原、因子Ⅴ、因子VII、因子Ⅹ及纤维蛋白原的抗体，也可能导致PT延长。
相反，PT缩短可能见于妇女口服避孕药、血栓栓塞性疾病及高凝状态等。
总的来说，凝血酶原时间的分类标准主要依赖于其正常值范围以及临床应用中的变化情况。
这些指标有助于医生判断凝血系统的状态，从而制定相应的治疗方案。
希森美康凝血功能CA-500标准SOP文件
Sysmex CA 500系列全自动血凝仪标准操作规程目录1. 概述 (3)2. 仪器运行条件 (6)3. 样本检测程序 (17)4. 质控检测程序 (23)5. 标准曲线制作 (29)6. 维护及耗材置换 (35)7. 附录 (49)第一部分概述1.使用目的CA-500系列全自动血凝分析仪用于凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统功能的检测,为出血性和血栓性疾病的诊断与鉴别诊断、溶栓及抗凝治疗的监测与疗效观察提供有价值的指标。
2．检测原理全自动血凝分析仪CA-500系列用于凝血、抗凝、纤维蛋白溶解系统因子的检测，其中CA510采用凝固法；CA530采用凝固法，发色底物法两种检测原理：CA550采用凝固法，发色底物法和免疫分析法三种检测原理。
2．1凝固法（散射光比浊法加百分比终点法）2．1．1散射光比浊法CA-500系列采用光学检测法，将血液凝固过程中的混浊度变化转换成散射光的变化后进行检测。
光源（卤素灯）发出的660nm光照射到标本，光电二极管接收90°直角方向散射光信号并转换为电信号，仪器内微机据此绘制出凝固曲线，用百分比检测法来确定凝固时间。
图1-1：光学检测系统2．1．2百分比检测法仪器把加入试剂后最初的散射光量设为0%，把反应结束后不再变化的散射光量设为100%。
将与50%散射光量相对应的时间作为凝固终点报告，因为50%的部位单位时间内散射光量的变化最为显着，纤维蛋白单体的聚合速度最快。
我们把这种方法称为“百分比终点法”。
图1-2：凝固时间的测定2．2发色底物法首先人工合成含某种活性酶裂解位点的化合物，且化合物连接上产色物质，该修饰后的化合物称作产色底物。
待检样品中含有活性酶或往样品中加入活性酶（被测物质含量同酶活性呈一定的数量关系），酶作用于裂解位点使产色物质被解离下来，在被检样品中产生颜色变化，检测透射光的变化。
根据酶活性同吸光度的变化、酶活性同所需检测物质含量间均存在一定的数量关系，由吸光度变化推算出所检测物质含量。
凝血参考值参考标准
凝血参考值参考标准凝血是一种非常重要的生理过程,对于人体的健康至关重要。
凝血参考值即血浆中凝血功能检测项目的正常值范围,也是评估患者凝血功能是否正常的主要依据。
以下是凝血参考值的详细说明。
一、凝血时间（PT）和活化部分凝血时间（APTT）凝血时间是在体外加入凝血促进物质后,从加试剂开始计时到在凝结断裂时停止的时间。
在正常情况下,凝血时间应在10-14秒之间。
活化部分凝血时间是在加入特定激活物后,从加试剂开始计时到凝结断裂的时间。
常规情况下,活化部分凝血时间正常值为20-35秒。
二、凝血酶原时间（TT）凝血酶原时间是指在加入凝血促进物质后,从加试剂开始计时到生成凝血酶并凝结的时间。
正常情况下,凝血酶原时间应在14-21秒之间。
三、国际标准化比值（INR）国际标准化比值是指根据凝血时间和患者血浆的凝血因子含量计算出来的比值。
它是经常用来监测患者正在使用的口服抗凝药物的疗效。
正常情况下INR应该在0.8-1.2之间。
四、血小板计数血小板是人体中重要的细胞成分,它们参与凝血。
在正常情况下,血小板计数应该在150-450×10⁹/L之间。
五、纤维蛋白原（FIB）纤维蛋白原是血液中的一个蛋白质,对于维持正常的凝血功能意义非凡。
在正常情况下,FIB的参考值应该在2.0-4.0克/升之间。
六、 D-二聚体（D-Dimer）D-二聚体是一种蛋白质片段,在人体的凝血和纤溶过程中发挥重要的作用。
在正常情况下,D-Dimer的参考值应该在0-0.5微克/升之间。
综上所述,凝血参考值是一种非常重要的生理指标。
通过了解这些参考值,我们能更好地了解患者的凝血状态,及时发现异常情况并采取措施进行干预治疗。
凝血酶时间测定
凝血酶时间测定
一、试管法
目的掌握凝血酶时间测定的试管法
原理在血浆中加如标准化的凝血酶溶液后，在凝血酶的作用下，其血浆凝固所需要的时间就是凝血酶时间
器材水浴箱、试管、试管架、吸样管，胶吸头、离心机、秒表。
试剂
1.凝血酶溶液有商品试剂盒子供应，将高浓度的凝血酶用生理盐水稀释5~10倍以
能使正常对照血浆的凝血酶时间在16~18s
2.正常参比血浆
标本同凝血酶原的时间测定
操作
1.分离乏血小板血浆与凝血酶原时间测定
2.预温取0.1ml参比血浆加入试管中，置于水温37的水中预热5min。
3.测定正常参比血浆的TT 于试管中加入凝血酶0.1ml，同时启动秒表记录时间。
以出
现浑浊的最初凝固点作为终点，记录血凝时间。
重复做2~3次，取其平均值，即是参比血浆的TT
4.测定待测血浆以同样的方法检测待测血浆的TT
5.报告方式XXs
参考值每个试验方法都有其相应的参考值。
通常16~18s 超过参考值3s以上的才有临床意义。
注意事项
1.标本血浆力求新鲜，应该在采血后1h内完成，置于冰箱内保存不超过4h
2.采血采血要稳。
准、快，不能混入组织液。
3.凝血酶
（1）凝血酶通常是悬浮液，用前一定要充分混匀。
（2）已经稀释好的凝血酶溶液不能久置室温下，在4度下可保存3天血凝仪法，，简单方便快捷。
课件：凝血酶原时间测定
【操作】
1．分离血浆:采血后真空试管 2500r/min离心15分钟，收集血浆。
2．平衡温度 ：水浴箱恒温至37度。
3．测定：取代测血浆0.1ml至玻璃试 管，37度孵育3分钟，加入37度预温的 pt试剂0.2ml开始计时，记录凝固时间 即为pt值。
参考值：10-14s
【注意事项】 1．试剂 由于不同来源、不同制备方法的组织凝血活酶对 结果影响很大，造成结果的可比性差，特别影响判断口服 抗凝剂的治疗效果。世界卫生组织(WHO)提出以人脑凝血 活酶67/40批号作为标准品，并以ISI表示各种制剂与67/40 之间的相互关系。67/40为原始参考品，定67/40的ISI为1.0。 市场上供应的组织凝血活酶试剂应注明ISI值，选用ISI<2.0 的组织凝血活酶为宜。 2．标本 (1)应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻 璃器械收集标本，如硅化试管、硅化注射器等。所用试管 必须洁净、干燥、无划痕。 (2)采血要顺利，仔细检查标本有无溶血、黄疸、脂血和血凝 块，任何微小的凝块都会影响测定结果，必须重新采血。 溶血的血浆可导致凝血时间假性缩短。部分凝血可导致凝 血时间假性延长。
(4)血液与抗凝剂要充分混匀。血液与抗凝剂比例 ( 9:1 ) 要准确。枸椽酸盐比例过高或过低，都 会影响PT测定结果的准确性。 (5)采血后宜在1h内完成测定。血浆在4℃保存不 应超过4h ，-20℃可保存14d，-70℃可保存6个月。 (6)由于每次使用的氯化钙凝血活酶活性不尽相同， 测定的条件也略有变动，故每次测定均需有正常 对照。 (8)分离血浆时离心条件要确保。以2500 r/min 离心10min，以获得乏血小板的血浆；如果血浆中 富含血小板，可导致凝血时间假性缩短。
(3)所有标本均做2～3次测定，结果相差应小于5 ％。若2个结果相差大于5％，再做1次单份或双份 测定，取相近2个结果的均值报告。
凝血酶原时间国际标准值
凝血酶原时间国际标准值
凝血酶原时间（PT）是一种常见的凝血功能指标，用于评估凝
血系统的功能。
国际标准化比值（INR）是一种用来标准化不同实验
室测定结果的方法，以便能够进行比较。
国际标准值是指在正常情
况下，一个健康的成年人的凝血酶原时间或国际标准化比值应该是
多少。
在一般情况下，国际标准值的范围是0.8至1.2。
这意味着在
正常情况下，一个健康的成年人的凝血酶原时间或国际标准化比值
应该在0.8至1.2之间。
然而，这个范围可能会因实验室的测定方
法和使用的试剂而有所不同，因此在具体情况下，应该以医生或实
验室提供的参考范围为准。
需要注意的是，个体的健康状况、年龄、性别、药物使用等因
素都可能会对凝血酶原时间产生影响，因此在进行凝血功能检查时，应该综合考虑个体的情况来进行评估。
如果凝血酶原时间或国际标
准化比值超出正常范围，可能需要进一步的检查和治疗。
总之，国际标准值是指在正常情况下，一个健康的成年人的凝
血酶原时间或国际标准化比值应该在0.8至1.2之间，但具体范围
可能会因实验室的测定方法和个体情况而有所不同。
建议在进行凝血功能检查时，应该咨询医生或实验室以获取准确的参考范围。
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血浆凝血酶原（PT）测定
1. 实验原理:
确定量的血浆样本经过一定时间的加温后,加入一定浓度的凝血酶试剂,采用波长为660nm的光照射样本,凝血过程中血浆的混浊度可以通过测量散射光光强度的改变来测定,从散射光光强度的测定,
可以作出凝血曲线,。
凝血酶可使血浆标本中的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成凝块。
形成凝块的时间即检测时间。
2. 标本采集
2.1早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血.
2.2
3.8％(w/v)枸椽钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀.
3. 标本存放
1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在37℃迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试.
4. 标本运输：低温条件下运输.
5. 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定.
6. 实验材料:
6.1 德国Dade Behring Marburg 公司Test Thrombin试剂（干粉）,每瓶加5ml配套缓冲液溶解(50毫升),未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期.复溶试剂2～8℃保存不超过5天.
6.2 缓冲液，用于凝血酶试剂的溶解,2～8℃贮存到说明书上有效期.
6.3 Dade Citrol质控血浆.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装.复溶后,室温保存2小时,2～8℃4小时.
7. 仪器设备:
7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪
7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司
7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500
7.4 仪器技术参数:
7.4.1 速度:最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时
7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能.
7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加.
7.5 仪器校准程序:
7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂型号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校
准.
7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行)
8. 操作步骤:
8.1 检查前准备:
8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽.
8.1.2 添加足够反应杯(不能超出警告线)
8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸镏水等.
8.2 开机
先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定.
8.3 输入工作清单:
从主菜单选,选
并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（APTT、APAPTT、Fbg、APTT）”，
可按，选完项目后按
某项目时只需按该项目（按键如
（快速输入可用.
8.4 放置样本
按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler 进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本)
8.5 .
盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作
清单,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态.
8.6 每日维护:完成每日的测定后,关机前维护.
8.6.1 冲冼针Rinse Probe
8.6.2 清空废液瓶,和已使用过的反应杯.
8.6.3 将试剂架连用试剂放入冰箱.
8.7 关机:先关主机,再关打印机.
9．检验结果的判断与分析:
9.1 仪器测定APTT线性范围在5-200s,测定完成仪器将显示每个参数的结果，若不能对参数进行正确
计算,将出现下列信息:
﹡﹡﹡,﹡出现错误,不能得到分析数据
ˉˉˉ,ˉ不能计算参数
＋＋＋，＋数值超出线性范围.
9.2 仪器设定APTT参考范围在24-36s,如果得到一个不正常数值,在数据的左侧将出现下列标记:
﹡出现错误信息
< 数据低于可报告的低限
> 数据高于可报告的高限
10. 质量控制:每批样本同时测定两个浓度水平(高值和正常值)的质控品,以2S为警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控.质控规则详见室内质控作业指导书.
11. 临床意义:APTT是用于判定血栓前状态或血栓性疾病的筛查项目.
11.1 参考范围: 24-36s，（患者结果超过正常对照3秒以上有临床意义）
11.2纤维蛋白原溶解治疗的监测
11.3纤维蛋白形成障碍或怀疑重度纤维蛋白原缺乏的筛查
11.4 肝素诱导活化部分凝血活酶延长和纤维蛋白形成障碍的鉴别诊断
12．变异的潜在来源
12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不能用于APTT测定项目，抗凝比例不当也将影响结果的准确性。
12.2样本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现小凝块；混匀时过分用力，使红细胞破坏出
现溶血，均会造成结果变异。
12.3纤溶药物的影响：如双香豆素、链激酶、尿酶等
12.4妊娠与急性炎症的影响
13. 操作注意事项:干粉试剂及质控血浆溶解
13.1 确认溶剂类型，一般溶解液包括：蒸馏水、生理盐水、缓冲液、厂家特定溶解液，必须按说明书
要求使用。
13.2 溶解时，轻轻转动容器，保证干粉完全溶解，避免剧烈振荡。
13.3复溶后，室温放置5-10分钟方可使用。
14. 仪器维护与保养
14.1 日常维护（见8.6）
14.2 每周维护
14.2.1液路冲洗：仪器在“Ready”状态下，从主菜单按
→按键运行此程序→完成后按返回。
14.2.2清洁仪器：定期用擦布擦干净仪器内外，包括试剂槽。
14.3 需要时维护：
14.3.1调整压力：仪器在“Ready”状态下，以主菜单按→按
键，显示压力是否在其调整范围内？若不在，则打开仪器右侧相应压力调整旋钮，旋动调整好压力，再锁紧旋钮。
14.3.2更换灯泡：关机→从仪器右侧取下灯泡外盖及内盖→换上好的灯泡→装上内外盖→从主菜单按
14.3.3更换保险管：关机→从仪器左侧旋下保险盖→更换上好的保险管→装上保险管盖。
15. 参考文献
15.1 叶应妩.王毓三等《全国临床检验操作规程》第三版，东南大学出版社.
15.2 Sysmex公司《Sysmex CA-1500操作手册》1998.6修订本.。