贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定
PVY株系间的分子变异及分子鉴定方法
（１ 黑 龙 江八 一 农 垦大 学 ，黑 龙 江 ． 大庆 １３ １ ；２ 河 南 工 业 大 学 生 物 工程 学 院 ，河 南 ６３９ ． 郑州 ４ ００ ５ ０ １）
摘
要：马铃薯 Ｙ病毒（ｏａ ｍｓ ’ Ｖ ）株 系分化现象明显 ，难于准确鉴定。本研究利用核酸序列分析工具 Ｐｔｔｖ Ｐ Ｙ ｏｉ Ｙ
（ｏａ ｂ ｒ ｅ ｒ ｉ ｒ ｇｐ ｔ ｉ ａｅ Ｔ Ｒ ） Ｐ ｔｔ ｔ ｅ ｃｏ ｃ ｉ ｓｏ ｄｓ ｓ ，Ｐ Ｎ Ｄ ，在 ｏ ｕ ｎ ｔ ｎ ｅ
Ｋ ｙＷ ｏｄ ： ｏ ａｏｖｒ ｓＹ： ｔ ｉ； ｌｃ ｌｒ ａｒ ｔ ｎ ｍｏｅ ｕａ ｅ ｔ ｃ ｔ ｎ ｅ ｒ ｓ ｐ ｔｔ ｉ ｓ ｒ ｎ ｍｏｅ ｕａ ｉ ｉ ； ｌｃ ｌｒｄ ｎｉ ａｉ ｕ ａ ｖ ａｏ ｉ ｉ ｆ ｏ
马 铃 薯 Ｙ病 毒 （ ｏ ｔ ｖｒｓＹ Ｐ Ｙ） 马 铃 薯 Ｐｔ ｏ ｉ ， Ｖ 是 ａ ｕ
ｃ ｎ ｌｇ ｎ ｓｏ ｉｅｅ ｔ ｐ ａ ｄｐ ｅ ｅ ｆ ｆ ｒｎ ｄ ＰＶＹ ｓ ｒ ｉｓ ｗｅ ｅ ａ ａｌｚ ｄ ｗｉ ｆ ｒ ａ ｉｓ ｔ ｏｌ， ｄ ｔ ｅ ｍｏ ｅ ｕ ａ ａ ｉ ｔ ｈ ｒ ｃ ｅ ｓ ａ ｔａ ｎ ｒ ｎ ｙ ｅ ｔ ｉ ｏ ｍ ｔ ｏ ｓ ａｎ ｌ ｃ ｌ ｒ ｒ ｉ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｍｏ ｇ ｈｎ ｃ ｈ ｖ ａ ｏｎ ｎ ｄｆｅ ｅ ｔ ｉ ｒ ｎ ＰＶＹ ｓ ｒ ｎ ｒ ｒ ｖ ｄ ｕ ．ｔ ｓｃ ｎ ｒ ｅ ａ ｅ ｎ ｃｅ ｔ ｅ ａ ０ ｎ ｉ ｓａ ｄ ８ ｔ ｉ ｓｉ ｐｇ ｎ ｓｄ ｆ ｒ ｎ ｔ ａｉｓｗｅ ｐ ｏ ｅ ｐ Ｉｗａ ｏ ｆ ｍ ｄｔ ｔ ｈ ｕ ｌｏ ｉ ｔ ｔ ｔ ｎ ６ ｎ ｔ ｃ ｅ ｅ ｗａ ｉ ｅ ｅ ｔ ｅ ｉ ｈ ｔ ｄ ５ ｓｅ ｓｅ ｎ
烟草马铃薯病毒
诊断与检测
PVY的诊断和检测通 常通过以下方法进行
诊断与检测
1
症状观察：观察植物的叶片和其他部位是否有 上述症状表现
生物学试验：将疑似感染PVY的植物样本通过 2 生物学试验进行确认。常用的方法是摩擦接种
健康植株，观察是否出现典型症状
3
血清学检测：使用抗PVY的特异性抗体进行血 清学检测，如ELISA(酶联免疫吸附试验)等
第2部分
症状表现
PVY感染的植物通常会 出现以下症状
症状表现
褪绿
叶片出现不规则的褪绿 斑点或斑块，颜色由绿 色逐渐变为黄色或白色
坏死
叶片上的坏死斑块逐渐 扩大，导致叶片枯死
卷曲
感染PVY的植物叶片可 能会向上卷曲，变形，
影响光合作用
落叶
感染严重的植物可能会 大量落叶，甚至导致整
株死亡
第3部分
RT-PCR(反转录聚合酶链式反应)：通过检测植 4 物样本中的PVY病毒RNA，进行快速、灵敏的检
测
第4部分
防治措施
PVY的防治需要采取综合措施，包括
选用抗病品 种：选择对 PVY具有抗 性的作物品 种，是防治 PVY最有效 的方法之一
种子消毒： 对播种用的 种子进行消 毒处理，如 用热处理、 化学药剂等 方法杀灭病 毒
未来，随着生物技术的不断发展，利 用基因编辑等技术培育抗病品种、研 发新型抗病毒药剂等方面将为PVY的 防治提供更加有效的方法和手段
防治措施包括选用抗病品种、种 子消毒、田间管理、化学防治、 生物防治和物理防治等综合手段
15
-
x
谢x
环保等优点
B
物理防治：利 用太阳能高温、 微波等方法对 感染PVY的植 物进行灭活处
人工诱发条件下41份烟草品种(系)对PVY的抗性鉴定及抗性分类
人工诱发条件下41份烟草品种(系)对PVY的抗性鉴定及抗性分类陈博;吴委林;郑大浩;冯月;王蕾;朴世领【摘要】为筛选抗马铃薯Y病毒(PVY)的优良种质,以41份烟草品种(系)为试材,在烟叶的苗期进行了人工诱发抗性鉴定和分类.结果表明:不同烟草品种(系)对PVY的抗性差异很大,其病情指数(D)和抗性指数(RI)范围分别为(10.32±0.40)～(66.33±2.31)和(-2.64±0.09)～(-0.13±0.06).通过聚类分析法,将其划分为抗病、感病2大类群和高抗、中抗、中感、感病4个亚类群,2大类群之间均存在极显著差异,而4个亚类群之间存在显著差异.抗病类群包括高抗和中抗2个亚类群,共占参试材料的46.34％;其中,高抗亚类群包括SY04-3、SY04-6、SZ08-04等5个品种(占12.20％),中抗亚类群包括8107、SY04-5、SZ08-1等14个品种(占34.14％).感病类群包括中感和感病2个亚类群,共占参试材料的53.66％;其中,中感亚类群包括延晒三号、SZ08-2、SZ12-01等19份品种(占46.34％),感病亚类群仅包括NC95、NC89、K326等3个品种(占7.32％).基于病情指数(D)和抗性指数(RI)并通过欧氏距离-Ward's聚类分析法划分的类群及亚类群中所包含的品种(系)及其数量都相同,抗病性分类结果也一致.【期刊名称】《延边大学农学学报》【年(卷),期】2017(039)001【总页数】7页(P9-15)【关键词】烟草;马铃薯Y病毒;聚类分析;抗性鉴定【作者】陈博;吴委林;郑大浩;冯月;王蕾;朴世领【作者单位】延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002;延边大学农学院,吉林延吉133002【正文语种】中文【中图分类】S435.72马铃薯Y病毒病(PVY)是一种侵染烟草引起的病害，又被称作脉坏死病，褐脉病等，是由 PVY引起的蚜传病毒病，它是我国烟叶生产中的主要病害之一，在中国北方烟区危害严重，在南方烟区的危害呈上升趋势[1-3]。
烟草PVYReal—TimePCR定量检测体系的建立及应用
瑾。
（．国家 烟 草 专 卖 局 烟 草 病 虫 害 监 测 与 综 合 治 理 重 点开 放 实验 室 ， 中 国农 业 科 学 院烟 草 研 究所 ，青 岛 ２ ６０ ；２ １ ６ １ １ ．中 国农 业
摘 要 ：马铃薯 Ｙ病毒是近年来危害烟草生产的重要病毒之一， 严重影响烟草的产量与品质。本研究利用 Ｄ Ａ Ｎ软件 Ｎ ＭＡ
关 键词 ：Ｒ ａｔ ｅ ｅ ；Ｐ Ｙ ｅｌｉ Ｒ Ｖ ；检测 — Ｐ ｍ
中图分 类号 ：￥３ ． ４５ ２ ７
文章编 号 ：１０—ｌ９２１）１ ０９０ ０７５ １（ ００— ０ ４ ０ ０
Ｄ Ｉ１． ６￣ ｓ ． ０—１９ ００ １ ０ Ｏ ：０ ９ ９．ｓ １ ７ １． １． ． ３ ３ ｉｎ ０ ５ ２ ０ ０
Ｃｏｐ ｒｔ ｎ Ｂａｓ， ａ ｇ ｉ ３ ０ ０， ｉａ ｒ ｏａｉ ， ｉｅ Ｇｕ ｎ ｘ ３ ０ Ｃｈｎ ） ｏ ５ Ａｂｓ ｒ ｃ ： ｏａｏｖｒ ｓＹ （ ＶＹ） ｓｏ ｅｏ ｅｍｏ ｔｍｐ ｒａ ｔ ｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｅｄ ｍ ａ ｅｔ ｂ ｃ ｏｙｅｄ ｎ ｕ ｌｙｉ ｃ ｎ ｅ ｒ． ｔａ ｔ Ｐ ｔｔ ｉ Ｐ ｕ ｉ ｎ ｆ ｈ ｓ ｏｔｎ ｒ ｅ ｈｈ ｇ ａ ｇ ｔ ａ ｃ ｉｌｓａ ｄｑ ａｉ ｒ ｅ ｔ ａｓ ｔ ｉ ｖｕ ｗｉ ｏｏ ｔ ｎｅ ｙ
对 Ｇ ｎ ａｋ数据库 中 已登录的马铃薯 Ｙ病 毒 （ｏ ｔｖ ｕ ， Ｖ ）全基 因组序列进行序列 比对 ，设计 引物， 以烟草肌 动蛋 ｅＢ ｎ Ｐｔｏ ｉ ｓ Ｐ Ｙ ａ ｒ Ｙ
NCM—ELISA检测马铃薯Y病毒(PVY)技术的研究及应用
１ 材 料与方法
１１ 植物材 料 ．
２ ０ 年 ７ ，采 自哈尔滨市南 岗区马铃薯生 ０５ 月 产基地的马铃薯植株叶片样 品，品种为早大白。
１ 抗原 及抗 血清 ． ２
一
具有反应 特异性强 ，灵敏度 高的优 点 ，检测植 物叶 片样 品的最 高稀释 度可达到 ｌ ２０ ：５ 。通过 对田 间 ４ ０份样品 的 Ｎ Ｍ－ ＬＳ Ｃ Ｅ ＩＡ和 Ｄ Ｓ Ｅ Ｓ Ａ — Ｌ Ａ检测比较 ，其检测结果吻合率达到 １０ Ｉ ０ ％。由于 Ｎ Ｍ— ＬＳ Ｃ Ｅ ＩＡ方法可以将 样品点在硝 酸
收稿 日期 ：２ ０ — ３ ０ ０６０ －８
中加人 １ Ｌ粗抗血清 ， ｍ 再加人 ９ Ｌ 蒸馏水 ，小心 ｍ 搅拌 ，加人 １ Ｌ ０ 饱和硫酸铵 ，室温放置 ４ ｉ ｍ ５ｍｎ 。 ４ ℃，１ ０ ・ｉ 心 １ ｉ，弃去上清 ，将沉 ０００ｒｍ ｎ 离 ５ｍｎ 淀重新 悬浮 于 １ｍ Ｌ透 析缓 冲液（ Ｍ Ｐ Ｓ ｐ ＝ ５ｍ Ｂ ， Ｈ ７４ 中 。４ ＿） ℃透析 ，更 换 ３次透 析 液 ，每 次 ５０ｍ 。 ０ Ｌ 用 分 光光 度 计 测量 ２０ａ 的紫外 吸 收值 以便 计 算 ８ ｍ
可以快速 、准确地进行不同株 系的鉴定ｉ ｓ 】 。植物病 毒的诊断主要通过症状观察 、指示植物接种鉴定 、 血清鉴 定 、电镜观 察等 方法进 行诊 断【 圳。早 在 １８ ９３年 Ｖ ｔｎ等 就利用 Ｅ ＩＡ技术成功地检测 ｅｅ ｔ ＬＳ 到 自然状态下和打破休眠薯块 中的 Ｐ Ｙ和 Ｐ Ａ病 Ｖ Ｖ 毒。 目 ，在生产上检测马铃薯病毒 的方法 主要有 前
马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展
马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展吴兴泉;李月;孙强;李萌萌;王梦科【摘要】There are many strains of potato virus Y ( PVY ) identified in the last few decades. As molecular technology and immunity technology were applied in the identification of the PVY strains, a series of strain identification methods were developed. Here the types of the strains and substrains, molecular characters and the identification methods of PVY are reviewed.%马铃薯Y病毒( PVY)株系分化现象明显，具有多个株系类型。
随着分子生物学技术和免疫学技术逐渐被引入PVY的株系鉴定中，产生了一系列的株系鉴定方法。
为此，对PVY的主要株系、亚株系的种类及分类依据、分子特征以及近年来应用于PVY株系鉴定的传统生物学方法、分子生物学方法、免疫学方法等进行了综述。
【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P5-8)【关键词】马铃薯Y病毒;株系;分子特征;鉴定【作者】吴兴泉;李月;孙强;李萌萌;王梦科【作者单位】河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;黑龙江北大荒农业股份有限公司八五四分公司，黑龙江虎林158403;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】S435.32马铃薯Y病毒(potato virus Y, PVY)是马铃薯上危害最严重的病毒之一，可造成马铃薯严重减产。
PVX病毒载体介导2种马铃薯Y病毒科病毒VPg蛋白表达诱导烟草叶片系统坏死的研究
PVX病毒载体介导2种马铃薯Y病毒科病毒VPg蛋白表达诱导烟草叶片系统坏死的研究作者：刘洋周鹏庹德财唐庆华言普黎小瑛沈文涛来源：《热带作物学报》2021年第08期摘要：芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus， TuMV）和槟榔坏死环斑病毒（Areca plam necrotic ringspot virus， ANRSV）是马铃薯Y病毒科（Potyviridae）中分别可诱导十字花科作物和槟榔产生坏死病症的2种不同属病毒。
VPg（Viral protein genome linked）作为与马铃薯Y 病毒科病毒基因组5′端的结合蛋白，在病毒复制、翻译和运动等侵染过程中发挥重要作用。
本研究利用In-Fusion克隆策略分别构建了可表达3′端融合Strep蛋白标签序列的ANRSV和TuMV VPg全长编码基因的马铃薯X病毒（Potato virus X， PVX）载体pPVX-VPg-AR和pPVX-VPg-Tu。
通过农杆菌渗透注射接种本生烟（Nicotiana benthamiana），利用RT-PCR、Strep蛋白标签亲和层析和Western blot等方法证明了PVX病毒载体能够介导VPg-AR和VPg-Tu蛋白在本生烟中系统表达，且发现这2种VPg蛋白的过量表达诱导本生烟叶片产生了不同程度的系统性坏死病症。
进一步采用DAB和NBT染色，在产生坏死症状叶片中检测到大量活性氧（reactive oxygen species， ROS）的积累。
因此，推测VPg可能是TuMV和ANRSV诱发植物病症产生的一个决定因子，为后续研究这2种病毒诱导症状形成机制奠定了基础。
关键词：芜菁花叶病毒;槟榔坏死环斑病毒;马铃薯X病毒;VPg蛋白;侵染;本生烟Abstract： VPg （viral protein genome-linked）is a protein that is covalently attached to the 5′ end of positive strand viral RNA and acts as a primer during RNA synthesis in Potyviridae. Turnip mosaic virus （TuMV， genus Potyvirus） and Areca plam necrotic ringspot virus （ANRSV，genus Arepavirus） are typical members of in the family Potyviridae and cause damaging disease in many kinds of Brassicaceae and Areca catechu， respectively. In this study， we constructed Potato virus X （PVX） -based vectors pPVX-VPg-AR and pPVX-VPg-Tu for individually expressing TuMV， ANRSV- encoded VPg protein （VPg-AR and VPg-Tu） with a Strep-tag in Nicotiana benthamiana plants by agroinfiltration. The expression of recombinant VPg-AR and VPg-Tu was identified using RT-PCR of total RNA and western blot analysis of strep-tagged proteins from PVX-VPg-AR and pPVX-VPg-Tu -infected plant leaves， respectively. The ectopic expression of VPg-AR and VPg-Tu caused severe systemic necrosis in N. benthamiana. Further study revealed that the overexpression of VPg-AR and VPg-Tu resulted in accumulation of reactive oxygen species （ROS） after 3，3′-diaminobenzidine （DAB）-HCl and nitroblue tetrazolium （NBT） staining for detect ion of H2O2 and O2− radicals in PVX-VPg-AR and PVX-VPg-Tu-infected plant leaves.The results demonstrated that VPg might be a pathogenicity determinant that plays key roles in symptom formation of TuMV and ANRSV.Keywords： Turnip mosaic virus; Areca nut necrotic ringspot virus; Potato virus X; VPg protein; infection; Nicotiana benthamiana馬铃薯Y病毒科（Potyviridae）是仅次于双生病毒科（Geminiviridae）的第二大植物病毒科和第一大植物RNA病毒科[1-2]。
中国部分马铃薯产区马铃薯Y病毒(PVY)的株系分化与鉴定
株 系分 布 普 遍 ， 能 已经 成 为 中 国部 分 马 铃 薯 产 区 Ｐ Ｙ 的主 要 流 行 株 系． 可 Ｖ
关键词 ： 马铃 薯 Ｙ病 毒 ； 系； 子 鉴 定 株 分
中 图 分 类 号 ：４ ２ １ Ｓ ３ ． 文献标志码 ： Ａ
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｈ ｔ ｄ ｎ ｔ ｅ ＰＶＹ ｔ ａ ｎ ｄ ｆｅ ｅ ｔａ ｉ ｎ ａ ｄ ｉ ｅ ｔｆｃ ｔｏ ｆ ｓ ｍ ｅ ｓｒ ｉ ｉ ｒ ｎ ｉ ｔｏ ｎ ｄ ｎ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｏ ｉ ｐ ｔ ｔ ｒ ｄ ｃ ｎ ｒ ａ ｎ Ｃｈｉ ａ ｏ ａ ｏ ｐ ｏ ｕ ｉ ｇ ａ ｅ ｓｉ ｎ
第４ ５卷 第 ５期
２ ０１１矩
河 南 农 业 大 学 学 报
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｎ ｎ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌＵｎ ｖ ｒｉｙ ｏ ｒ ａ ｆＨｅ ａ ｒｃ ｌｕ ａ ｉ ｅ ｓｔ
Ｖｏ ． ５ Ｎｏ ５ １４ ． ０ｃ ． ｔ ２ Ｏ１１
１ ０月
文章 编 号 ：０ ０— ３０ ２ １ ）５— ５ ８— ４ １０ ２ ４ （０ １ ０ ０ ４ ０
马铃薯 Ｙ病 毒 （ ｏａ ｉ ｓＹ，Ｖ 是 马铃 薯 ｐ ｔ ｏｖ ｕ Ｐ Ｙ） ｔ ｒ 上 最常见 、 危害最 重 的马铃薯 病毒 之一 ， 病严重 时 发 减 产 可 达 ８ ％ 以 上． 铃 薯 Ｙ 病 毒 为 正 义 单 链 ０ 马
Ｒ Ａ病 毒 ， Ｎ 线状 ， 全基 因组长度在 ９７０ｎ 左右 ， １ ０ ｔ 由
２ ．Ｈｅａ ｇｉ ｌ ｒｌ ｎｖｒｉ ， ｈ ｎ ｚｏ ５ ０ ２， ｈｎ ） ｎ ｎＡ ｒ ｕｔ ａ Ｕ ｉｅｓｙ Ｚ ｅｇｈｕ４ ０ ０ Ｃ ｉａ ｃ ｕ ｔ
Ａ ｓ ａ ｔ Ｔ ｅｐ ｅｅ ａｄ ｃ ｅ ｅｏ Ｖ ｓｌｔ ｒｍ ｔｅ Ｈ ｉ ｎｊ ｎ ，Ｓ ａｘ ａｄ Ｇ ｉ ｏ ｂ ｔ ｃ ： ｈ ｌｇｎ ｎ ｐ ｇｎ ｆ Ｐ Ｙ ｉ ａｅ ｆ ｈ ｅ ｏ ｇ ａ ｇ ｈｎ ｉ ｎ ｕｚ ｕ ｒ ４ ｏ ｓ ｏ ｌ ｉ ｈ
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贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定罗红香;李余湘;刘会忠;徐明勇;王林玉;赵中汇;何玉安;李章海;江彤【摘要】2010年从贵州省黔南州烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本.采用Tas-ELISA检测PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC.结果显示,201个样本中共检测出171个样本受到PVY侵染,其中PVYN 37个,占21.6%；PVYO 133个,占77.8%；PVYC 0个,PVYN和PVYO复合侵染1个,占0.6%.PVY株系分布具有一定规律,侵染黔南州烟草的PVY以PVYO为主要株系,PVYN侵染相对较少,为次要株系,所有样本均没有检测到PVYC侵染,复合侵染零星发生.%10.3969/j.issn.1007-5119.2012.05.011【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2012(000)005【总页数】3页(P60-62)【关键词】贵州;烟草;马铃薯Y病毒;ELISA;株系鉴定【作者】罗红香;李余湘;刘会忠;徐明勇;王林玉;赵中汇;何玉安;李章海;江彤【作者单位】贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;中国科学技术大学烟草研究中心,合肥 230051;安徽农业大学植保学院,合肥 230036【正文语种】中文【中图分类】S572.08马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的典型成员，能侵染烟草、马铃薯、番茄和辣椒等多种茄科作物[1]。
根据PVY的鉴别寄主症状反应和血清学反应类型，进一步将其划分为多个株系，常见的有PVYO、PVYN和PVYC等株系。
PVYO在不同马铃薯品种上引起轻重不一的花叶，而在烟草上引起斑驳和花叶；PVYN在马铃薯上一般表现为叶片无症或轻型斑驳，而在烟草上引起叶脉和叶柄坏死；PVYC在马铃薯栽培品种上引起条痕花叶症状[2-3]。
我国植病工作者在上世纪 90年代以来也做过一些PVY株系鉴定工作。
吴元华等[4]鉴定东北烟区烟草上发生的 PVY有普通株系（PVYO）、脉坏死株系（PVYVN）、点刻条斑株系（PVYC）和茎坏死株系（PVYNS）4个株系。
王劲波等[5]鉴定山东烟区主要有PVYO和PVYN 2个株系。
江彤等[6]鉴定安徽烟草可能存在PVYO株系和PVYNTN株系。
由于PVY不同株系发生复合侵染以及不断发现新的PVY株系和亚株系，PVY株系的鉴定变得越来越复杂。
PVY侵染烟草引起的马铃薯Y病毒病在国内烟区广泛分布[7-8]，特别在东北烟区和黄淮烟区危害严重[9-10]，大幅度降低烟叶产量和质量，成为阻碍烟叶生产的瓶颈。
近年来，贵州省烟草马铃薯Y病毒也呈现逐年加重趋势，特别是黔南烟区 PVY大面积流行，在局部地区甚至造成毁灭性损失[11]。
为减轻贵州黔南烟草病毒病危害，摸清当前贵州黔南烟区马铃薯Y病毒病发生发展的变化趋势，鉴定黔南烟区 PVY株系已成为当务之急。
本研究采用以 Tas-ELISA为主的血清学检测手段来鉴定PVY株系，血清学鉴定方法较快速且可短时间鉴定大量样本，因此，利用血清学方法加强对黔南烟草上 PVY的株系变化进行系统鉴定和检测，明确黔南烟草 PVY株系的分布，将为选育适合黔南烟区PVY重病区种植的抗病品种以及制定烟草PVY的防治措施提供理论依据。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 病样来源 2010年从贵州省黔南州瓮安、福泉、贵定、龙里4个县烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本。
样本表现为叶脉坏死、叶缘纵向下卷、叶片叶面皱缩、脉间轻花叶、矮化等症状。
其中瓮安县珠藏镇、牛场坝乡；福泉县龙昌镇；贵定县新浦乡、新巴镇；龙里县巴江乡、洗马镇的样本数分别为34、28、36、44、7、27、25个。
1.1.2 试剂马铃薯 Y 病毒各个株系诊断试剂：Potato Virus Y necrotic strain Reagent Set，Potato Virus Y strain C Reagent Set，Potato Virus Y strains O and C Reagent Set（美国Agdia公司）；碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG （Promega公司）；硝基苯磷酸酯钠盐（Sigma公司）；96孔酶标板（美国Corning公司）。
1.2 试验方法Tas-ELISA检测方法参照Agdia公司马铃薯Y病毒各个株系诊断试剂使用说明并略加调整。
PVY多克隆抗体1:200稀释后分别包被酶标板，4 ℃孵育过夜；加入1:10稀释的病汁液样品，25 ℃孵育2 h；加酶标记物稀释液（含A酶标抗体和B 酶标抗体），25 ℃孵育2 h；硝基苯磷酸酯钠盐（PNP）显色，25 ℃孵育1 h，酶标仪测定吸光值（OD405）。
每步用含吐温的磷酸盐缓冲液（PBST）洗涤3～5次，测定时每个样品均设2次重复。
2 结果黔南州瓮安、福泉、贵定、龙里4县201个烟草样本的ELISA检测结果见表1。
从表1可看出，201个样本中，共检测出171个样本受到PVY侵染，阳性率为85.1%。
其中瓮安、福泉、贵定、龙里PVY的阳性率分别为88.7%、75.0%、80.4%、92.3%。
171个受PVY侵染的样本中，PVYN 37个，占21.6%；PVYO 133个，占77.8%；PVYC 0个，PVYN和 PVYO复合侵染 1个，占 0.6%。
其中，瓮安县55个阳性样本全部是PVYO，占100%；福泉县27个阳性样本中，PVYN占11.1% ，PVYO占88.9%；贵定县41个阳性样本中，PVYN占34.1%，PVYO占65.9%；龙里县48个阳性样本中，PVYN占41.7%，PVYO占56.3%，PVYN和PVYO复合侵染占2.1%。
侵染黔南州烟草的 PVY株系分布具有一定规律，PVYO在4县分布均为主要株系，PVYN侵染相对较少，为次要株系，所有样本均没有检测到PVYC侵染，复合侵染零星发生。
表1 贵州省黔南州201个烟草样本的PVY株系鉴定结果Table 1 The results of ELISA detection of 201 of tobacco samples from Qannan, GuizhouPVY各株系检出率/%地点检测样本数/个检出PVY样本数/个 PVY阳性率/% PVYN PVYO PVYC PVYN＋PVYO瓮安 62 55 88.7 0.0 100.0 0.0 0.0福泉 36 27 75.0 11.1 88.9 0.0 0.0贵定 51 41 80.4 34.1 65.9 0.0 0.0龙里 52 48 92.3 41.7 56.3 0.02.1合计 201 171 85.1 21.6 77.8 0.0 0.63 讨论从贵州省黔南州瓮安、福泉、贵定、龙里4县采集烟草样本时发现，黔南烟区疑似感染 PVY的烟株普遍表现为叶脉坏死、叶缘纵向下卷、叶片叶面皱缩、脉间轻花叶、矮化等症状。
ELISA检测进一步证明，叶片背面支脉坏死的烟株基本都能检测到PVY的侵染，但PVY在烟草上的症状表型与PVY株系之间没有明确的关系，无论 PVYN还是PVYO都在烟草上表现出叶脉坏死症状。
因此，根据脉坏死症状仅可以初步诊断烟株受到PVY侵染，但无法确定 PVY的株系，必须进一步通过血清学检测才可以明确PVY的株系类型。
本试验采用Tas-ELISA检测了黔南烟草PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC，发现侵染黔南烟草的PVY以PVYO为主，PVYN为次要株系。
黔南 PVY株系分布在该地区具有一定规律，瓮安县位于黔南州的最北部，感染瓮安烟草的 PVY样本全部是PVYO，没有检测到PVYN侵染；福泉县位于瓮安县南部，该县烟草样本以PVYO侵染为主，也能检测到少量PVYN侵染。
贵定县的新浦乡、新巴镇以及龙里县的巴江乡、洗马镇相距不远，位于黔南州的西部。
总体上，这4个乡镇烟草样本仍然以 PVYO侵染为主，但龙里县巴江乡烟草样本以PVYN侵染为主，占66.7%（数据未列出），与其他地方PVYO为优势株系有差异。
贵定县新巴镇烟草PVY发病很轻，田间病株率低于1%（数据未列出），可能与该镇处于相对较封闭的山区，高带毒率的介体蚜虫尚没有大量迁入有关。
笔者在黔南州采样时，也做了PVY病情普查。
瓮安县PVY发病最为严重，发病田块病株率30%～70%（数据未列出）不等，病情特别严重田块呈枯黄一片，后期无法控制，烟农甚至弃烤。
有的烟农因为马铃薯 Y病毒病损失巨大，不愿意再种植烤烟，PVY造成的危害和损失在黔南烟区已成为烤烟生产瓶颈。
因此，明确黔南烟草 PVY株系分布，为筛选出适合黔南烟草 PVY重病区种植的抗病品种具有重要意义。
鉴于黔南烟区以PVYO为优势株系，进行地方性品种抗病性选育时，就应该选择PVYO作为接种毒源。
另外，黔南PVY株系种类可能随蚜虫的迁飞或烤烟品种的改变发生变化，因此，还需要继续监测黔南烟草PVY株系的变化。
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