黑龙江省部分地区马铃薯Y病毒株系检测

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马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法

马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法作者：罗燕娜，刘江娜，王航来源：《新疆农垦科技》 2015年第3期罗燕娜，刘江娜，王航（兵团第六师农业科学研究所，新疆五家渠831300）收稿日期：２０15—01—20摘要：本文对北疆地区马铃薯主要病毒的特性和致病症状进行了描述，并简要介绍了马铃薯主要病毒的检测技术。

关键词：马铃薯；病毒；检测方法马铃薯在我国广泛种植，已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。

由于光照强、昼夜温差大、气候冷凉等优势，新疆北疆沿天山一带的昌吉州、乌鲁木齐、昭苏、新源等地都非常适宜种植马铃薯，现种植面积已达2310hm2[1]。

然而在当前的马铃薯生产中，病毒病发生普遍而严重，成为制约马铃薯产业发展的主要障碍，是生产上亟待解决的突出问题[2]。

目前，已报道的马铃薯病毒种类超过25种、类病毒1种，其中，侵染乌鲁木齐地区马铃薯的主要病原病毒有PVX、PVY、PVA、PLRV,类病毒为PSTVd。

主要检测的马铃薯病毒有马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）及马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）[1]。

1马铃薯主要病毒种类及致病症状1.1马铃薯X病毒（PVX）X病毒又称普通花叶病毒，病毒粒子为长杆状，大小为515nm×13nm，基因组全长6.4kb[3]。

该病毒可通过叶片汁液摩擦传播，也可通过蚜虫以非持久性方式传播，还可通过种薯传播[1]。

感病植株症状多种多样，因栽培品种的敏感性不同和病毒株系的不同而存在差异，多数表现为轻花叶或潜隐症状，症状严重的则表现为严重的花叶或皱缩，产量损失可达50%。

1.2马铃薯Y病毒（PVY）Y病毒又称为重花叶病毒，病毒粒子形状为弯曲的线形，大小为750nm×11nm，多数通过桃蚜和大戟长管蚜传播。

PVY包括3个株系组：马铃薯Y病毒普通株系组（PVYO）、马铃薯点条斑株系（PVYC）和马铃薯Y病毒褐脉株系（PVYN）。

NCM—ELISA检测马铃薯Y病毒(PVY)技术的研究及应用

ＰＲ（ｏｅｉｖｕｒｓｅｔＲＰＲａｓｙＣＣｍｐｔｉｆｏｅｃｎＴ— Ｃｓａ）技术ｔｅｌ
１材料与方法
１１植物材料．
２０年７，采自哈尔滨市南岗区马铃薯生０５月产基地的马铃薯植株叶片样品，品种为早大白。
１抗原及抗血清．２
一
具有反应特异性强，灵敏度高的优点，检测植物叶片样品的最高稀释度可达到ｌ２０：５。通过对田间４０份样品的ＮＭ－ＬＳＣＥＩＡ和ＤＳＥＳＡ — ＬＡ检测比较，其检测结果吻合率达到１０Ｉ０％。由于ＮＭ— ＬＳＣＥＩＡ方法可以将样品点在硝酸
收稿日期：２０ — ３００６０－８
中加人１Ｌ粗抗血清，ｍ再加人９Ｌ蒸馏水，小心ｍ搅拌，加人１Ｌ０饱和硫酸铵，室温放置４ｉｍ５ｍｎ。４ ℃，１０・ｉ心１ｉ，弃去上清，将沉０００ｒｍｎ离５ｍｎ淀重新悬浮于１ｍＬ透析缓冲液（ＭＰＳｐ＝５ｍＢ，Ｈ７４中。４＿） ℃透析，更换３次透析液，每次５０ｍ。０Ｌ用分光光度计测量２０ａ的紫外吸收值以便计算８ｍ
可以快速、准确地进行不同株系的鉴定ｉｓ】。植物病毒的诊断主要通过症状观察、指示植物接种鉴定、血清鉴定、电镜观察等方法进行诊断【圳。早在１８９３年Ｖｔｎ等就利用ＥＩＡ技术成功地检测ｅｅｔＬＳ到自然状态下和打破休眠薯块中的ＰＹ和ＰＡ病ＶＶ毒。目，在生产上检测马铃薯病毒的方法主要有前

烟草马铃薯Y病毒病发病的相关因素研究

ｈｇｌｕｃｐａｌｉｉｓＩｖｓｉａｏｓｓｏｄｔａｅｔｂｃｏｎａｏａｏｆｅｄｎｐｃｔｒｈｄｄｓａｅｅｏｓｙａｄｉｈｙｓｓｅｔｂｅｔｔｓｖｒ．ｎｅｔｔｎｈｗｅｔａｃｅｐｔｔｌｓａｄａｒｏｃａｉｅｓｄｓｒｕｌ，ｏｈｕｇｉｈｔｏｈｒｉｉｏｒｉｎｈｍｏｎｈｄｓａｔｅａｕｔｆｐｉｓｗａｎｉｏｔｎａｔｒｃｕｉｇＰｏａｍｐｒａｔｃｏａｓＶＹｓａｅＷｃｎｔｕｔｄｔｅｍａｈｔｄｌｉｈｒｖａｅｅｒｌｔｎｆｎｉｄｅｓ．ｏｓｒｃｅｔｍａｉｍｏｅｃｅｌｄｔｅａｏｈｃｗｈｅｈｉ
ＳｍｓｎＮＮＢｒｙｔｂｃｏＮｉｔｎｂｃｍ，ｃｔｎｌｔｏａＮｉｔｎｌｕｔａＬＰｙａｉｆｒａａＣｐｉｕｎｕｍａｕ，ｕｌａｃ，ｃｉａｔａｕＮｉｉａｇｕｉｓ，ｃｉａｓｃ，ｈｓｌｏｉｎ，ａｓｃｍａｎｕｅｏｏａａｏａｎｏａｒｉｓｌｄ
中国烟草科学ＣｉｅｅｏａｃｃｎｅｈｎｓｂｃｏＳｉｃＴｅ
２１－２２（）０１１，３６
烟草马铃薯Ｙ病毒病发病的相关因素研究
孙剑萍，孙宏伟，虞艳芳
（黑龙江省牡丹江烟草科学研究所，黑龙江牡丹江１７１）５０１摘要：烟草马铃薯Ｙ病毒病在全国各烟区普遍发生，经研究检测马铃薯带毒种薯是该病最主要的初侵染来源。马铃薯Ｙ

马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展

马铃薯Y病毒的株系种类、分子特征及鉴定方法研究进展吴兴泉;李月;孙强;李萌萌;王梦科【摘要】There are many strains of potato virus Y ( PVY ) identified in the last few decades. As molecular technology and immunity technology were applied in the identification of the PVY strains, a series of strain identification methods were developed. Here the types of the strains and substrains, molecular characters and the identification methods of PVY are reviewed.%马铃薯Y病毒( PVY)株系分化现象明显，具有多个株系类型。

随着分子生物学技术和免疫学技术逐渐被引入PVY的株系鉴定中，产生了一系列的株系鉴定方法。

为此，对PVY的主要株系、亚株系的种类及分类依据、分子特征以及近年来应用于PVY株系鉴定的传统生物学方法、分子生物学方法、免疫学方法等进行了综述。

【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】4页(P5-8)【关键词】马铃薯Y病毒;株系;分子特征;鉴定【作者】吴兴泉;李月;孙强;李萌萌;王梦科【作者单位】河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;黑龙江北大荒农业股份有限公司八五四分公司，黑龙江虎林158403;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001;河南工业大学生物工程学院，河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】S435.32马铃薯Y病毒(potato virus Y, PVY)是马铃薯上危害最严重的病毒之一，可造成马铃薯严重减产。

马铃薯晚疫病调查测报方法

马铃薯晚疫病测报调查方法马铃薯晚疫病Phytophthora infestans(Mont)de Bary是我省马铃薯生产上的一个重要病害，在我省马铃薯产区普遍发生，严重影响了我省马铃薯产业发展。

1、影响马铃薯晚疫病发生的主要因素1.1 气候因素晚疫病为一种典型的流行病。

气候条件与发病流行有极为密切的关系。

当条件适于发病时，病害可迅速爆发，从开始发病到全田枯死，最快不到半个月。

晚疫病发生要求高湿、凉爽的气候，在多雨年份的夏秋季以及南部地区的冬春季，最易流行成灾。

因此，雨水或湿度则是影响流行的关键因素。

在阴雨连绵或多雾、多露条件下，最利于晚疫病大发生和流行。

1.2 寄主抗病性不同品种对晚疫病抗病性有很大差异。

病害能否流行及流行程度，与品种抗病性的强弱有极大的关系。

病害在感病品种上发展快、病菌产生孢子囊数量大、传播快，容易流行成灾。

2、调查项目与方法2.1 中心病株调查选择低洼潮湿、生长旺盛、成熟较早的感病品种田3-5块，从植株开始现蕾期时起，进行调查。

每2天踏查1次，或根据“标蒙”气候标准（见3.1）预测中心病株出现以后，每块地踏查1000-2000株，掌握中心病株出现日期以初始发病指数。

结果记入表1。

表 1 马铃薯晚疫病中心病株及病情调查表单位：年度：调查人：日期（月/日）地点品种生育期中心病株出现日期（月/日）调查面积（㎡）发病面积（hm2）调查株数（株）发病株数（株）病株率（%）各级发病株数病情指数备注级1级2级3级4级2.2 发病初期普查在发现中心病株后和病害扩展初期，及时组织病情普查，以掌握面上情况，指导防治。

普查面积一般不低于栽培面积的5%。

每块田取5-10个点，每点隔双株查10-20株，调查发病情况。

根据病情分级标准，计算出不同发生程度的面积。

结果记入表2。

表2 马铃薯晚疫病发病情况普查表单位：年度：调查人：日期（月/日）地点品种生育期调查田块数发病田块数病田率（%）共查株数（株）发病株数（株）病株率（%）各级发病株数备注轻中重3、预报方法3.1发病始期预测利用“标蒙”气候标准，结合田间中心病株调查预测田间发病始期。

马铃薯六种主要病毒通用RT-PCR检测体系的建立

马铃薯六种主要病毒通用RT-PCR检测体系的建立张威;白艳菊;景芝;范国权;高艳玲;申宇;张抒;孟宪欣;王军【摘要】马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯S病毒（PVS）、马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯M病毒（PVM）和马铃薯A病毒（PVA）是马铃薯生产田中发生率较高、危害较严重的病毒，因此，建立特异性强、灵敏度高、检测速度快的RT-PCR分子检测体系对保障马铃薯种薯质量具有非常重要的意义。

试验筛选了6种病毒的特异引物、优化了PCR部分的试剂以及确定了退火温度。

结果表明，当Mg2+浓度为2.6 mmol/L、dNTPs浓度为0.1mmol/L、Taq DNA聚合酶浓度为0.03 U/μL，以及退火温度为55.5℃时反应体系最稳定。

最终，建立了一套通用RT-PCR检测体系，只需要变换每种病毒的引物，就可以实现对PVX、PVY、PVS、PLRV、PVM和PVA病毒的RT-PCR检测。

每种病毒检测灵敏度均能达到pg以上。

%The higher incidence and more serious viruses in potato fields are potato virus X (PVX), potato virus Y (PVY), potato virus S (PVS), potato leafroll virus (PLRV), potato virus M (PVM), and potato virus A (PVA), so it is very important to guarantee the quality of seed potato by establishment of RT-PCR molecular detection system with specificity, high sensitivity and fast detection speed for these viruses. In this research, the primer for each virus was screened, PCR reagents were optimized, and annealing temperature was determined. The results indicated that when the concentration of Mg2 + was 2.6 mmol/L, dNTPs was 0.1 mmol/L, Taq DNA polymerase was 0.03 U/μL, and annealing temperature was 55.5℃, the reaction system was the most stable. Finally, a universal RT-PCR detection system was established, which only need tochange primer for each virus when the RT-PCR detection for PVX, PVY, PVS, PLRV, PVM and PVA was needed. The detection sensitivity of each virus could reach the level of pg.【期刊名称】《中国马铃薯》【年(卷),期】2015(000)004【总页数】6页(P222-227)【关键词】马铃薯;PVX;PVY;PVS;PLRV;PVM;PVA【作者】张威;白艳菊;景芝;范国权;高艳玲;申宇;张抒;孟宪欣;王军【作者单位】黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨 150030;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院植物脱毒苗木研究所，黑龙江哈尔滨 150086;黑龙江省农业科学院作物育种研究所，黑龙江哈尔滨 150086;北大荒垦丰种业股份有限公司，黑龙江哈尔滨 150090【正文语种】中文【中图分类】S532马铃薯是世界上最重要的粮食作物之一，具有分布范围广、适应性强、产量高、用途广等特点。

马铃薯Y病毒株系分化研究进展

致更为严重的症状。鉴此，Ｐ从ＶＹ各株系的特征、生的分子机制、测与鉴定方法、国Ｐ产检我ＶＹ
株系分化情况等方面对目前ＰＹ株系分化方面已取得的研究进展进行了综述。Ｖ
关键词：马铃薯Ｙ病毒；系；分化；鉴定方法株
（南工业大学生物工程学院，南郑州４００）河河５０１
摘要：马铃薯Ｙ病毒（ＶＹ）我国马铃薯上最重要的病毒之一，布广泛，害严重。ＰＰ是分危ＶＹ株系
分化现象明显，已被广泛认同的ＰＶＹ株系种类包括３种：ＶＹｔＰ。株系、ＶＹＰ株系和Ｐ株系。ＶＹ近年来，有很多研究表明，ＶＹ可通过基因突变或基因重组等方式分化出多种不同类型的株系，Ｐ引
铃薯Ｙ病毒（ｏａｏｖｒｓＰＹ）马铃薯上最常ｐｔｔｉｕＹ，Ｖ是
１ＰＶＹ株系种类及各株系的主要特征
目前，已被广泛认同的ＰＹ株系种类包括３：Ｖ种Ｐ。株系、ｖｙＶＹｐＮ株系和ｐｃ株系。ｐｙ系ＶＹｖ（株
中图分类号：３Ｑ９３文献标识码：Ａ文章编号：０４２８２１）０— ００— ３１０ —３６（０１１０１０
ＰｒｇｅｓｏｆｅｅｔａｉｎｏｔｔｉｕＳｒｉｓｏｒｓｎＤｉｒｉｔｆＰｏａｏＶｒｓＹｔａｎｆｎｏ
Ｋｅｏｄ：ＰｔｔｉｓＹ（ＶＹ）；Ｓｒｉ｛ＤｉｅｅｔｔｏｙｗｒｓｏａｏｖｒＰｕｔａｎｆｒｎｉｉｎ；Ｄｅｅｔｏｔｏｆａｔｃｉｎｍｅｈｄ

贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定

贵州黔南烟草马铃薯Y病毒(PVY)株系的血清学鉴定罗红香;李余湘;刘会忠;徐明勇;王林玉;赵中汇;何玉安;李章海;江彤【摘要】2010年从贵州省黔南州烟草产区共采集201个表现明显马铃薯Y病毒病症状的烟草样本.采用Tas-ELISA检测PVY的3个株系PVYN、PVYO和PVYC.结果显示,201个样本中共检测出171个样本受到PVY侵染,其中PVYN 37个,占21.6%；PVYO 133个,占77.8%；PVYC 0个,PVYN和PVYO复合侵染1个,占0.6%.PVY株系分布具有一定规律,侵染黔南州烟草的PVY以PVYO为主要株系,PVYN侵染相对较少,为次要株系,所有样本均没有检测到PVYC侵染,复合侵染零星发生.%10.3969/j.issn.1007-5119.2012.05.011【期刊名称】《中国烟草科学》【年(卷),期】2012(000)005【总页数】3页(P60-62)【关键词】贵州;烟草;马铃薯Y病毒;ELISA;株系鉴定【作者】罗红香;李余湘;刘会忠;徐明勇;王林玉;赵中汇;何玉安;李章海;江彤【作者单位】贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;贵州省黔南州烟草公司,贵州都匀 558000;中国科学技术大学烟草研究中心,合肥 230051;安徽农业大学植保学院,合肥 230036【正文语种】中文【中图分类】S572.08马铃薯Y病毒（Potato virus Y，PVY）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的典型成员，能侵染烟草、马铃薯、番茄和辣椒等多种茄科作物[1]。

根据PVY的鉴别寄主症状反应和血清学反应类型，进一步将其划分为多个株系，常见的有PVYO、PVYN和PVYC等株系。

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ｐｌａｃｅｓｏｆＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］．ＪｏｕｎａｒｌｏｆＮｏ￣ｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔＹ，２０１４，４５（１）：４７－５２．（ｉｎＣｈｉｎｅｓｅｗｉｔｈＥｎｇｌｉｓｈａｂｓｔｒａｃｔ）
ＣｅｎｔｅｒｏｆＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒａｎｔｉｎｅ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＥｎｔｙ－ｒＥｘｉｔＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｎｄＱｕａｒａｎｔｉｎｅＢｕｒｅａｕ，Ｈａｒｂｉｎ
ＺＨＡＮＧＨｏｎｇｘｉａｎｇ ’ ，ＹＡＮＧＬｉｑｕｎ ’ （１．ＳｔａｔｅＫｅｙＴｅｓｔｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｏｔａｔｏＶｉｒｕｓｅｓｏｆＣｈｉｎａ，Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ
１５０００１，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＲｉｃｅＢｉｏｌｏｇｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄ
ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹｓｔｒａｉｎｓｉｎｉｎｆｅｃｔｅｄｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓｆｒＯｍ
ｓｏｍｅｐｌａｃｅｓｏｆＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ／ｕｕＨｏｎｇｙｉ ’ ，ＬＩＡＮＧＷｕｓｈｅｎｇ，ＬＩＵＺｈｏｎｇｍｅｉ ’ ，
ＬｉｕＨｏｎｇｙｉ，ＬｉａｎｇＷｕｓｈｅｎｇ，ＬｉｕＺｈｏｎｇｍｅｉ，ｅｔａ１．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹｓｔｒａｉｎｓｉｎｉｎｆｅｃｔｅｄｐｏｔａｔｏｐｌａｎｔｓｆｒＯｍｓｏｍｅ
关键词：黑龙江省；马铃薯；马铃薯Ｙ病毒；病毒株系鉴定；焦磷酸测序
中图分类号：￥５３２文献标志码：Ａ文章编号：１００５ — ９３６９（２０１４）０１ — ００４７ — ０６
刘洪义，梁五生，刘忠梅，等．黑龙江省部分地区马铃薯Ｙ病毒株系检ｉ￣ＪＪ［Ｊ１．东北农业大学学报，２０１４，４５（１）：４７－５２．
第４５卷第１期
２０１４年１月
东
北农
业
大学
学
报
４５（１）：４７－５２
Ｊａｎ．２０１４
ＪｏｕｎａｒｌｏｆＮｏｒｔｈｅａｓｔＡｇｒｉｃｕｈｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
黑龙江省部分地区马铃薯Ｙ病毒株系检测
刘洪义，梁五生。，刘忠梅，张洪祥，杨立群
（１．黑龙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心，国家马铃薯病毒检测重点实验室，哈尔滨
２．浙江大学农业与生物技术学院生物技术研究所水稻生物学国家重点实验室，杭州
１５０００１
ＰＶＹ。和ＰＶＹ；北安有１个样品感染ＰＶＹ。结合之前报道的９份黑龙江省马铃薯病样的ＰＶＹ株系鉴定结果，表明黑龙江省大田种植的马铃薯至少存在ＰＶＹ、ＰＶＹ。、ＰＶＹ和ＰＶＹ４种ＰＶＹ株系侵染；而且，由于ＰＶＹ侵染了１６份已鉴定病样中的７份，而其余３种株系均仅侵染３份病样，显示ＰＶＹ可能为优势株系。
网络出版时间２０１４ — １ — ９２１：１０：３４

【ＵＲＬ］ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／２３．１３９１．Ｓ．２０１４０１０９．２１１０．０１１．ｈｔｍｌ
３１００５８）
摘
要：从黑龙江省克山、讷河、五大连池和北安大田种植的马铃薯上采集马铃薯病叶，提取总ＲＮＡ，利用
之前验证过的引物，进行反转录、ＰＣＲ扩增，以及焦磷酸测序，以鉴定感染的马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）株系。结果表明，克山有２个样品分别感染ＰＶＹ。和ＰＶＹ；讷河有２个样品感染ＰＶＹ；五大连池有２个样品分别感染