免疫球蛋白测定IgGIgAIgM的测定1单向
体液免疫球蛋白测定
体液免疫球蛋白测定第一节血清IgG、IgA、IgM测定血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。
临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。
一、血清IgG、IgA、lgM测定（一）单向环状免疫扩散法该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。
在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。
（二）免疫比浊法该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。
二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义（一）年龄新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。
（二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。
慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。
宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。
SLE患者以IgG、IgA升高较多见。
类风湿关节炎患者以IgM增高为主。
（三）单一免疫球蛋白升高主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。
此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。
由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。
（四）免疫球蛋白降低先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。
IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。
IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。
IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。
第二节血清IgD和IgE测定正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。
唾液分泌型免疫球蛋白
唾液分泌型免疫球蛋白
唾液分泌型免疫球蛋白介绍：
唾液中的免疫球蛋白主要是SIgA和SIgG。
静止性唾液中SIg含量常高于刺激性
唾液。
常采用RIA和单向扩散法测定。
唾液分泌型免疫球蛋白正常值：
表1。
唾液分泌型免疫球蛋白临床意义：
儿童唾液的SIgA和SIgG含量明显低于成人，随年龄递增，16岁后接近成人水平。
(1)Ig增高：唾液腺的炎症、恶性肿瘤等可破坏血液-唾液屏障，使血液中的Ig 进入唾液，使SIgA、SIgG、SIgM均可增高。
某些病毒感染如麻疹早期，可从唾液中检出特异性SIgA型抗体，有助于诊断。
sjogren综合征属自身免疫性疾病，主要侵
犯外分泌腺，使唾液中SIgA增高。
口腔局部炎症亦可增高。
(2)Ig减低：病理性唾液Ig减低见于原发性或继发性免疫缺乏病如先天性丙种球蛋白缺乏症、原发性选择性SIgA缺乏症、应用免疫抑制剂和放射治疗时，龋齿患儿及大量吸烟者SIgA也可降低。
唾液分泌型免疫球蛋白注意事项：
放射免疫测定具有灵敏度(可测定钠克甚至皮克水平)、特异性强(可分辨结构类似的抗原)和准确性好(钠克量的回收率接近100%)。
唾液分泌型免疫球蛋白检查过程：
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血清免疫球蛋白M测定
血清免疫球蛋白M测定【基本信息】[简要描述]·免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)是初次免疫应答反应中的免疫球蛋白(Ig)，也是相对分子质量最大的Ig，约占血清总Ig的5%-10%。
·IgM测定用于体液免疫活性、子宫感染可能性或急性感染评价，IgM型多发性骨髓瘤和华氏巨球蛋白血症诊断和治疗检测。
[其他名称]IgM【测定方法及参考值范围】可通过单向免疫扩散法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法测定。
参考值范围：成人血清IgM为0.5-2.6g/L；新生儿为0.01-0.06g/L。
【结果及临床意义】[增高]◇疾病因素·华氏巨球蛋白血症注释：IgM呈单克隆性明显增高。
·IgM型多发性骨髓瘤·初期病毒性肝炎(A型病毒性肝炎急性早期等)·类风湿关节炎·系统性红斑狼疮·宫内感染注释：宫内感染可能引起IgM浓度急剧升高，若脐血中IgM＞0.2g/L时，表示有宫内感染。
·慢性感染·淋巴瘤·肝硬化(原发性胆汁性肝硬化的早期等)·B型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。
·C型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。
·慢性肝病·类狼疮性肝炎注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。
·肝细胞癌注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。
·链球菌感染·传染性单核细胞增多症·肾病综合征微小病变型恶化时·浆细胞骨髓瘤·施尼茨勒综合征注释：表现为慢性荨麻疹、不明原因发热、骨关节痛、骨硬化X线像。
·伴性IgM增高免疫球蛋白缺乏症·先天性高IgM综合征[降低]◇疾病因素·IgG型重链病·IgA型多发性骨髓瘤·先天性免疫缺陷症(原发性无丙种球蛋白血症、网状细胞异常形成症等)注释：网状细胞异常形成症属于复合性免疫缺陷症的一种类型，T、B和NK细胞显著减少，免疫球蛋白减少以至IgA和IgM多有测不出的程度。
免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测—单向琼脂扩散法
免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测—单向琼脂扩散法
【申请单】请完成申请单所要求项目
×××市人民医院检验申请单
姓名
性别年龄
门诊号住院号
诊断或症状
检验标本
检验目的
送检科室医师
送检日期年月日
【方法选择】
表13-2 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测
方法单向琼脂扩散法火箭免疫电泳速率散射比浊法ELISA 放射免疫分析法本次检查选择√
以检测待检人血清IgG为例。
【材料准备】
1.抗原：待检人血清、IgG免疫球蛋白工作标准品（IgG含量为10mg/ml）。
2.抗体：羊抗人IgG抗血清（单扩效价1：100）。
琼脂糖或琼脂粉、生理盐水、NaN3，载玻片、微量加样器、打孔器、5ml吸管、吸耳球、三角烧瓶、湿盒、水浴箱、温箱、半对数坐标纸。
【操作方法】
将1.0%～1.5%琼脂（用PH8.2、0.05M的巴比妥缓冲液配成）加热溶化，加0.01%（0.1g/L）NaN3，置于56℃水浴中备用。
吸取99ml已经融化的琼脂于三角烧瓶中，置于56℃水浴中，将预温的羊抗人IgG抗血清1ml与琼脂充分混合，继续保温于56℃水浴中备用。
IG-AGM检测
疫球蛋白（lg）是一组具有抗体活性的蛋白质，主要存在于生物体血液、组织液和外分泌液中，是检查机体体液免疫功能的一项重要指标。
人类的免疫球蛋白分为五类，即lgG、lgA、lgM、IgD和lgE，其中IgD 和IgE含量很低，故我们常规所测定的Ig主要为lgG、lgA、IgM三项。
血清中免疫球蛋白异常，主要可分为三类：(1)几种不同的Ig水平增加：主要见于感染、肿瘤、自身免疫病、慢性活动性肝炎、肝硬化及淋巴瘤等。
自身免疫病中，如系统性红斑狼疮(SLE)以lgG、lgA、IgM升高多见，类风湿性关节炎以IgG、IgM升高多见。
(2)单一的Ig水平增加：又称为“M”蛋白病，主要见于：(1)多发性骨髓瘤(MM)，表现为仅有某一种Ig异常增高，而其他种明显降低或维持正常。
其中以IgG；型MM最常见，血清中lgG含量可高达70g／L，IgA型次之，IgD型较少见，IgE型最为罕见。
(2)巨球蛋白血症，是产生IgM的浆细胞恶性增生，血清中IgM可高达20g／L以上。
(3)一种或多种Ig水平减少：分为原发性或继发性的，前者属于遗传性，如瑞士丙种球蛋白缺乏症，选择性IgA、IgM缺乏症等。
继发性缺损见于网状淋巴系统的恶性疾病、慢性淋巴细胞性白血病、肾病综合征、大面积烧伤烫伤患者、长期大剂量使用免疫抑制剂或放射线照射所致。
lgD升高主要见于lgD型MM。
流行性出血热、过敏性哮喘、特应性皮炎患者IgD升高。
妊娠末期、吸烟者中IgD也可出现生理性升高。
IgE升高常见于超敏反应性疾病，如过敏性鼻炎、外源性哮喘、枯草热、慢性荨麻疹，以及寄生虫感染、急慢性肝炎、药物所致的间质性肺炎、支气管肺曲菌病、类风湿性关节炎和IgE型MM等。
近年来糖化血红蛋白（HbA1c）正日益受到临床的高度重视，糖化血红蛋白（HbA1c)是血红蛋白A组分的某些特殊分子部位和葡萄糖经过缓慢而不可逆的非酶促反应结合而形成的，当血液中葡萄糖浓度较高时，人体所形成的糖化血红蛋白含量也会相对较高。
免疫球蛋白检测及应用PPT课件
（三）注意事项 1. 部分单克隆冷球蛋白可在低于 10 ℃时 发生沉淀，故取标本时要保温 2. 部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀， 但有的需要数天，故此应放置一周 3. 正常人血清也可含有冷球蛋白，但属多 克隆冷球蛋白的性质，且含量低 4. 冷纤维蛋白原、 C 反应蛋白 - 蛋白复 合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性， 实验时应加以区别
思考题： 1．IgG、IgA、IgM的测定技术 2．体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用 3．IgE、IgD、的测定技术 4．异常免疫球蛋白的检测技术来自THANKYOU
SUCCESS
2019/4/14
（一）定性分析 分离血清作二支分装，一支置 4℃， 一支置37℃，直立，一般于24～72小时， 4℃一管可出现沉淀 （二）定量分析 将沉淀用冷 pH7.0 ， 0.05mol/L 磷酸 盐缓冲液洗涤，然后将沉淀再溶解于 10 倍体积的 pH8.6 的 0.05mol 巴比妥 / 巴 比妥钠缓冲液中，置 37 ℃ 30min，进行 免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定
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2019/4/14
第四节 异常免疫球蛋白的检测
一、 M 蛋白的检测与鉴定 M 蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白，多 见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋 巴瘤。
（一）血清蛋白区带电泳 IgG 型多位于 α 区与慢 γ 区 IgA 型多位于慢 γ 区与 β 区 IgM 型多位于 β 2 区或 γ 区 IgD 型多位于 β 区或 γ 区 但最终鉴定需用特异性抗体，在轻链病 时 M 蛋白呈淡染区带常在 β 或 γ 区， 需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时 观察。
第三节 IgE 和 IgD 的测定
一、 IgE 的测定方法 1 、放射免疫法：固相抗 -IgE+IgE+ 125 I 标记抗人 IgE 2 、化学发光免疫分析法：固相抗 IgE+IgE+ 酶标抗 IgE+ 底物 3 、乳胶颗粒免疫浊度法 4 、酶免疫试验
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免疫球蛋白的测定(1)IgG、IgA.IgM的测定：有单向琼脂扩散法、速率散射比浊法等。
临床上Ig降低：见于各种先天性或获得性免疫缺陷病。
继发性常与免疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养不良等有关。
也可见于细胞毒药物治疗后。
临床上Ig升高：多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病等;也见于寄生虫疾病、结节病等。
单克隆性增高又称M蛋白增高，主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、重链病、轻链病，原发性巨球蛋白血症等。
(2)IgD的测定方法：有单向琼脂扩散法、ELISA等。
临床上其增高可见于多发性骨髓瘤等。
(3)IgE的测定方法：ELISA.间接血凝试验、放射免疫法、化学发光免疫分析、免疫荧光测定法等。
临床上IgE增高：见于IgE型多发性骨髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸粒细胞增多症、SLE.RA及某些霉菌病等。
临床上IgE减低：一般无意义。
可见于原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及细胞毒药物治疗后。
细胞因子的概述(1)细胞因子的概述是由免疫细胞产生的一大类能在细胞间传递信息，具有免疫调节和效应功能蛋白质或小分子多肽。
(2)共同特性：①化学性质大都为糖蛋白。
②细胞因子可以旁分泌、自分泌或内分泌的方式发挥作用。
③一种细胞可产生多种细胞因子，不同类型的细胞可产生一种或几种相同的细胞因子。
(3)类型：按其作用大致可分为免疫调节因子和免疫调控因子两大类。
主要的细胞因子有：白细胞介素、干扰素、生长因子、趋化因子家族、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、转化因子家族以及其他细胞因子等。
①白细胞介素(IL)：现在已取得克隆化的基因、明确产物性质和活性的白细胞介素成员有15个在免疫细胞成熟、活化、增生和免疫调节等过程中发生重要作用，此外IL还参与机体的多种生理及病理反应。
免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测—单向琼脂扩散法
免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测—单向琼脂扩散法【申请单】请完成申请单所要求项目×××市人民医院检验申请单姓名性别年龄门诊号住院号诊断或症状检验标本检验目的送检科室医师送检日期年月日【方法选择】表13-2 免疫球蛋白IgG、IgA、IgM的定量检测方法单向琼脂扩散法火箭免疫电泳速率散射比浊法ELISA 放射免疫分析法本次检查选择√以检测待检人血清IgG为例。
【材料准备】1.抗原：待检人血清、IgG免疫球蛋白工作标准品（IgG含量为10mg/ml）。
2.抗体：羊抗人IgG抗血清（单扩效价1：100）。
琼脂糖或琼脂粉、生理盐水、NaN3，载玻片、微量加样器、打孔器、5ml吸管、吸耳球、三角烧瓶、湿盒、水浴箱、温箱、半对数坐标纸。
【操作方法】将1.0%～1.5%琼脂（用PH8.2、0.05M的巴比妥缓冲液配成）加热溶化，加0.01%（0.1g/L）NaN3，置于56℃水浴中备用。
吸取99ml已经融化的琼脂于三角烧瓶中，置于56℃水浴中，将预温的羊抗人IgG抗血清1ml与琼脂充分混合，继续保温于56℃水浴中备用。
制板：取4ml抗体琼脂溶液倾注于玻片中上，制成厚1.5mm的琼脂板，置室温冷却凝固。
浇板时要薄厚均匀、平整、无气泡。
打孔：待琼脂凝固后，用打孔器打孔，孔径为3mm，孔距10～12mm。
要求孔打得圆整光滑，孔缘不能破裂、底部勿与玻片分离。
稀释免疫球蛋白工作标准及待检人血清：1支IgG免疫球蛋白工作标准品加0.5ml蒸馏水溶解后使用。
加样：将上述稀释的IgG免疫球蛋白工作标准品分别滴入相应的抗体孔内，其余孔滴加待检的稀释血清，每个检样加两个孔，每孔滴加10微升。
扩散：将琼脂板置水平湿盘内，放进37℃温箱，IgG免疫板扩散24小时后取出置黑色背景前观察结果，（如果沉淀环不清晰，可用1%鞣酸液浸泡免疫板半小时后观察，或者用生理盐水浸泡2～3小时候观察），必要时可以染色后观察。
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女：337±60 IU/ml 临床意义：
含量增高：特应性皮肤病、枯草热、哮喘、 过敏性休克等
含量降低：先天性低丙球蛋白血症等
2、变应原特异性IgE检测：放射变应原吸附 试验（radioallergosorbent test,RAST)
步骤：变应原交联载体 加待检血清或正常 对照血清加 125I-抗人IgE 洗去未结合 125I-抗人IgE γ计数器测放射值
结果判定：以大于正常人3.5倍为阳性
临床意义：
(1) 参见血清总IgE测定
(2) 确定变应原
三、M蛋白测定：——免疫电泳
M蛋白： 浆细胞或B淋巴细胞单克隆增殖产生的结构均
一的多无活性的单克隆免疫球蛋白。 方法步骤：血清蛋白电泳加抗体于琼脂槽内扩
散、沉淀 结果判断：在α2-γ区附近形成致密弓形沉淀弧 临床意义：主要见于多发性骨髓瘤(multiple myeloma)，也可见于巨球蛋白血症 mactoglobulinemia)、恶性淋巴瘤(malignant lymphoma)和重链病
散射比浊法
参考值：IgG：12.87±1.35g/L IgA：2.53±0.34g/L IgM：1.08±0.24g/L
临床意义： 1、低Ig血症： 先天性 — 体液免疫缺陷、联合免疫缺陷病 获得性 — 淋巴肉瘤、肾病综合征等 2、高Ig血症： 慢性感染、自身免疫病（类风湿性关节炎等）
二、IgE测定 1、血清总IgE测定：－ELISA法 方法：抗IgE包被反应板 IgE标准品或待测
2、免疫比浊法：
原理：当抗原与抗体在稀释系统中反应，而比例合适 时，形成的免疫复合物在聚乙二醇等作用下自液相 析出，使检样的浊度或光散射程度发生改变，分为 透射比浊和散射比浊。
步骤：
抗Ig＋标准血清中（含PEG）孵育测OD值制 标准曲线
抗Ig＋待检血清中（含PEG） 孵育测OD值根 据标准曲线求值