血清免疫球蛋白测定(一)
免疫球蛋白检测标准
免疫球蛋白检测标准
免疫球蛋白检测通常包括对不同免疫球蛋白亚类（IgA、IgG、IgM 等）的测定。
这些检测可用于评估免疫系统的功能、检测感染或自身免疫疾病，以及监测治疗的效果。
检测的标准可能因实验室、地区和具体的免疫球蛋白亚类而有所不同。
以下是一些可能用于解释免疫球蛋白检测结果的一般标准：
1.正常范围：免疫球蛋白的正常范围可能因年龄、性别和实验室
的不同而异。
通常，实验室会提供一个正常参考范围，以帮助
解释患者的检测结果。
2.免疫球蛋白亚类比例：正常血清中各种免疫球蛋白亚类的比例
可能是相对稳定的，某些情况下异常的亚类比例可能提示潜在
的免疫问题。
3.特定疾病标志物：在某些情况下，特定的免疫球蛋白检测可以
用作某些疾病的标志物。
例如，抗核抗体（ANA）是自身免疫
疾病的标志物之一。
4.疫苗免疫：对于已接种疫苗的人群，免疫球蛋白的产生可能与
疫苗类型和接种时间有关。
特定的抗体水平可能被认为是免疫
有效性的指标。
请注意，这只是一般性的指导，具体的标准应该根据具体实验室的方法和仪器、患者的个体情况以及检测的免疫球蛋白亚类而有所不同。
因此，对于免疫球蛋白检测结果的解释应该由专业医疗人员进行，他们会结合患者的整体状况和临床信息进行综合评估。
血清免疫球蛋白M测定
血清免疫球蛋白M测定【基本信息】[简要描述]·免疫球蛋白M(Immunoglobulin M, IgM)是初次免疫应答反应中的免疫球蛋白(Ig)，也是相对分子质量最大的Ig，约占血清总Ig的5%-10%。
·IgM测定用于体液免疫活性、子宫感染可能性或急性感染评价，IgM型多发性骨髓瘤和华氏巨球蛋白血症诊断和治疗检测。
[其他名称]IgM【测定方法及参考值范围】可通过单向免疫扩散法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法测定。
参考值范围：成人血清IgM为0.5-2.6g/L；新生儿为0.01-0.06g/L。
【结果及临床意义】[增高]◇疾病因素·华氏巨球蛋白血症注释：IgM呈单克隆性明显增高。
·IgM型多发性骨髓瘤·初期病毒性肝炎(A型病毒性肝炎急性早期等)·类风湿关节炎·系统性红斑狼疮·宫内感染注释：宫内感染可能引起IgM浓度急剧升高，若脐血中IgM＞0.2g/L时，表示有宫内感染。
·慢性感染·淋巴瘤·肝硬化(原发性胆汁性肝硬化的早期等)·B型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。
·C型肝炎急性期注释：IgM升高不明显。
·慢性肝病·类狼疮性肝炎注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。
·肝细胞癌注释：抗原的持续刺激和血浆白蛋白减少的代偿作用，IgG、IgA和IgM均明显升高，增高程度与细胞浸润和纤维化程度呈正相关。
·链球菌感染·传染性单核细胞增多症·肾病综合征微小病变型恶化时·浆细胞骨髓瘤·施尼茨勒综合征注释：表现为慢性荨麻疹、不明原因发热、骨关节痛、骨硬化X线像。
·伴性IgM增高免疫球蛋白缺乏症·先天性高IgM综合征[降低]◇疾病因素·IgG型重链病·IgA型多发性骨髓瘤·先天性免疫缺陷症(原发性无丙种球蛋白血症、网状细胞异常形成症等)注释：网状细胞异常形成症属于复合性免疫缺陷症的一种类型，T、B和NK细胞显著减少，免疫球蛋白减少以至IgA和IgM多有测不出的程度。
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定-1
血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定-1血液及组织样品的制备分析组织中某种物质的含量、探索物质代谢的过程和规律，经常使用动物的肝、肾、脑、粘膜和肌肉等组织，也选用全血、血浆、血清或者无蛋白血滤液等血液样品，有时也采用尿液、胃液等完成各种生化实验。
掌握以上各种实验样品的正确处理和制备方法是保证生化实验顺利进行的关键。
一、血液样品(一）采血测定用的血液，多由静脉采集。
一般在饲喂前空腹采取，因此时血液中化学成分含量比较稳定，采血时所用的针头、注射器，盛血容器要清洁干净；接血时应让血液沿着容器壁慢慢注入，以防溶血和产生泡沫。
(二）血清、全血及血浆的制备1.血清的制备血清是全血不加抗凝剂自然凝固后析出的淡黄清亮液体。
制备方法是：将刚采集的血液直接注入试管或离心管中。
将试管放成斜面，让其自然凝固，一般经3h 血块自然收缩而析出血清；也可将血样放入37 ℃恒温箱内，促使血块收缩，能较快约析出血清。
为了缩短时间，也可用离心机分离（未凝或凝固的均可离心），分离出的血青，用吸管吸出置于另一试管中，若不清亮或带有血细胞，应重离心，加盖冷藏备用。
2.全血及血浆的制备取清洁干燥的试管或其它容器，收集动物的新鲜血液，立即与适量的抗凝剂充分混合，所得到的抗凝血为全血。
每毫升血液中加入抗凝剂的种类可以根据实验的需要进行选择，但是用量不宜过大，否则将影响实验的结果。
将已抗凝的全二于 2，000r / min 离心10min ，沉降血细胞，取上层清液即为血浆。
血浆比血清分离得快而且量多：两者的差别，主要是血浆比血清多含一种纤维蛋白原，其它成分基本相同。
3.抗凝剂凡能够抑制血液凝固反应进行的化合物称为抗凝剂。
抗凝剂种类甚多，实验室常用的有如下几种，可根据情况选择使用。
（1）草酸钾（钠）优点是溶解度大，可迅速与血中钙离子结合，形成不溶性草酸钙，使血液不凝固。
每毫升血液用1-2mg 即可。
配制方法：配制10％草酸钾水溶液二吸取此液0.1ml 放入一试管中，慢慢转动试管，泛草酸钾尽量铺散在试管壁上，置80 ℃ 烘箱烤干（若超过150 ℃ 则分解），管壁即呈一薄层三色粉末，加塞备用。
免疫学实验 免疫比浊(免疫球蛋白的测定)
3 免疫胶乳比浊法
原理
选择一种大小适中，均匀一致的胶乳颗 粒，吸附抗体后，当遇到相应抗原时，则 发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之 内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则 使透过光减少。这种减少的程度与胶乳凝 集成正比，与抗原量成正比。
（a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线； （b）结合后，则形成光线衰减
2. 海德堡（heidelberger）曲线理 论
2 抗体的质量
（1）特异性高 （2）效价高 （3）亲和力高 （4）抗血清来源
3 抗原抗体反应的溶液
• pH 6.5~8.5
• 电解质 离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）
4 增浊剂的使用
• PEG、tween-20等非离子型亲水 剂
• 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。
（二）类型
1. 透射免疫比浊法 2. 散射免疫比浊法 3. 免疫胶乳比浊法
1 透射免疫比浊法
原理：
抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物 (IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复 合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减 少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线 吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物 的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量 成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出 待检抗原含量。
•
样本管吸光度
• 浓度＝————————×校准液浓度（g/L）
•
校管吸光度
• 结果及讨论
– 检测报告 – 检测意义
实验二、免疫浊度测定 ——免疫球蛋白检测
实验步骤见说明书 IgG9.77g/L IgA1.72g/L IgM1.37g/L
沉淀反应
微生物与免疫教研室
球蛋白测定实验报告
一、实验目的1. 理解球蛋白在血清蛋白中的组成及其在生物体中的作用。
2. 掌握使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离和定量血清中球蛋白的方法。
3. 通过实验了解球蛋白的等电点、分子量及其在电场中的迁移行为。
二、实验原理血清中的蛋白质主要包括清蛋白、球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等。
球蛋白是血清中含量较高的蛋白质之一，主要由多种免疫球蛋白组成，对于机体的免疫功能至关重要。
醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离技术，基于蛋白质分子大小、电荷和形状的差异，在电场中实现分离。
在醋酸纤维薄膜电泳中，血清蛋白质在pH8.6的缓冲液中带负电荷，向正极移动。
由于不同蛋白质的分子量、形状和电荷量不同，它们在电场中的迁移速度不同，从而在薄膜上形成不同的区带。
通过比较已知标准蛋白质的迁移距离和待测样品的迁移距离，可以定量分析血清中球蛋白的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样品- 醋酸纤维薄膜- 标准蛋白质溶液- 电泳缓冲液- 染色剂（如氨基黑10B）- 洗脱剂- 显微镜2. 实验仪器：- 电泳仪- 电泳槽- 显微镜四、实验步骤1. 制备样品：将血清样品与适当比例的缓冲液混合，制成均匀的蛋白质溶液。
2. 准备电泳槽：在电泳槽中注入电泳缓冲液，确保槽内液面平稳。
3. 准备醋酸纤维薄膜：将薄膜浸泡在缓冲液中，使其充分湿润。
4. 加样：将样品和标准蛋白质溶液点样于薄膜上，注意样品点的均匀性。
5. 电泳：将薄膜放入电泳槽中，接通电源，进行电泳。
6. 染色：电泳结束后，将薄膜取出，放入染色剂中染色。
7. 洗脱：将染色后的薄膜放入洗脱剂中，去除非蛋白质成分。
8. 观察与记录：将薄膜置于显微镜下观察，记录各蛋白质区带的迁移距离和宽度。
五、实验结果与分析1. 通过电泳，观察到血清样品在醋酸纤维薄膜上形成了清晰的蛋白质区带，包括清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等。
2. 通过比较样品和标准蛋白质的迁移距离，计算出各蛋白质区带的分子量。
体液免疫功能的检测
体液免疫功能的检测临床上一个反复发作的化脓感染，常使医生想到患者是否有免疫缺陷病，一般原发免疫缺陷发病年龄很小，而继发免疫缺陷病人多在30岁以上。
绝大多数免疫缺陷病人多表现为体液和细胞免疫同时受损，所以应全面检查这两方面的功能。
遗憾的是，目前应用的检测方法的局限性，其结果常难以得出明确结论。
一、免疫球蛋白的定量检测1．血清免疫球蛋白的测定血清免疫球蛋白（Ig）的测定是检查体液免疫功能最常用的方法。
由于目前还没有发现由IgD和IgE缺陷所致疾病，所以通常检测Ig G、IgM、IgA，这三类Ig就可以代表血清Ig的水平（表20-2）。
检测发现三类Ig水平均明显低下，就可考虑体液免疫缺陷。
但在分析儿童Ig水平时，应注意Ig的水平随年龄而变化。
体液免疫功能缺陷首先考虑患者血清Ig 水平，如果所有类别Ig水平均降低，即称为一般性联低丙种球蛋白血症。
如果免疫球蛋白水平极度低下，或IgG、IgM、IgA,三类Ig总量低于2mg/ml则称为严重低丙种球蛋白血症或无丙种球蛋白血症(agammaglobulinemia)。
如果只一种或两种Ig水平降低，则称为异常丙种球蛋白血症（dysgammaglobulinemia）。
一般性低丙种球蛋白血症多见于继发性免疫缺陷病。
无丙种球蛋白血症常见于原发免疫缺陷病。
但是常有约50%IgA缺陷病人无临床症状，伴有反复感染的IgA缺陷病人常同时有IgG的缺陷。
常规的定量检测血中Ig的方法是单向免疫扩散和免疫比浊法。
表20－2 人类血清免疫球蛋白正常量类别变化较大时期（mg/ml）达到成人水平与均值IgG 1 ～5岁8.0 ～10.04 ～8岁 8.0 ～10.09 ～13岁 10 ～11.0 8岁以后12．0±2.6mg/ml (150±321IU/ml)IgA 1 ～2岁0.54 ～8岁 1～1.59 ～13岁 1.5～2.0 12岁以后2．0±0.5mg/ml (140±36IU)/ml)IgM 1 ～4岁1.04 ～8岁 1.09 ～13岁 1.0 男性1岁女性2岁1.1±0.3mg/ml (130±40IU)/ml)注：IU=国际单位2．分泌型IgA(SIgA)的测定 SIgA是粘膜抗感染的重要因素，但是粘膜抗感染还包括少量渗出的IgM和IgG，还有细胞免疫的作用。
免疫球蛋白测定方法与影响因素课件
1、标准液对测定结果的影响
• • • 1.1 标准液中Ig类型的不均一性： 1.2 标准液中Ig分子大小的不均一性 那么要求Ig标准液能代表健康人群平均水 平的Ig类型和分子大小，基质效应要小。
• • • •
1.3 Ig的国际标准： 1.3.1 WHO 67/97 定义：每瓶含100IU的血浆蛋白冻干品 WHO 67/97的明显缺限:
见表1
方
法
原
理
标本类型 血清 血清
简 要 评 价 慢，非特异性，不能 分类Ig，方法过时 慢，不能分类Ig，是 检测单克隆Ig的筛选 方法 较准确，慢
盐沉淀（金沉淀） Ig在某些盐（金化合物）溶液中形成沉淀，再用总 蛋白测定法测定Ig含量 电泳 蛋白分离成Alb和各种球蛋白;Ig在γ带
免疫扩散（ （彩扩法） ） 免疫荧光
BN II的抗原过剩检测
预反应检测抗原过量 抗原过量
特殊项目的预反应- 避免抗原过量，增加结果的可靠性
IgM为例说明BN II的抗原过量检测原理
• 因此BN II在检测IgA和IgM时，能将抗原过 剩的风险降到最低！ • 但是， BN II的抗原过量不能完全消除， 在极少数情况下，非常高的免疫球蛋白浓 度可能会产生错误的低结果。尤其是单克 隆免疫球蛋白可能会显示与多克隆标准品 不同的反应，在个别情况下，这可能会导 致结果降低的假象或导致非线性结果。
决定定抗原抗体复合物光学性质的因素; 光线透射与散射的数量及特性取决于 复合物的直径(d), 发射光的波长()， 检测器与发射光的角度， 介质的折射系数有关。
•
•
•
①大多数蛋白质分子比光的波长要小得多( 510nm), 只产生Rayleigh 散射。 ②在直接抗原抗体反应期间，最初形成的小复 合物会通过交联而增大，到达大约3 x 10 E6 Da 大小的限度，产生Rayleign-Debye 散射。 ③在另一些反应中，抗体附着于大的颗粒上 (IgE)，再和抗原形成的不可溶复合物，其大小 较光的波长要大得多。在这些情况下出现的是 Mie 散射
《诊断学》第二版PPT第二十四章 临床常用免疫学检测
血清免疫球蛋白分类
根据重链稳定区的分子 结构和抗原特异性的不 同，分为五类：IgG、 IgA、IgM、IgD、IgE
血清免疫球蛋白分类
检测方法
酶联免疫法（ELISA) 放射免疫（RIA) 荧光标记免疫(IFA) 化学发光法（CLIA) 免疫透射比浊、免疫散射比浊
减低：免疫复合物性疾病（如肾小球肾炎）、 自身免疫性疾病活动期、感染性心内膜炎、病 毒性肝炎、慢性肝病、肝硬化、重症营养不良 和遗传性补体成分缺乏症等
二、补体C3检测
是一种由肝脏合成的β2-球蛋白。C3在补体系 统各成分中含量最多，是经典途径和旁路途径 的关键物质。它也是一种急性时相反应蛋白。
参考值
参考值 0.5 ～2.6 g/L
临床意义
IgM增高 见于初期病毒性肝炎、肝硬化、类 风湿关节炎、SLE等，原发性巨球蛋白血症时， IgM呈单克隆性明显增高
IgM降低 见于IgG型重链病， IgA型MM，先 天性免疫缺陷病，使用免疫抑制剂，淋巴系统 肿瘤和肾病综合症。
四、免疫球蛋白E的检测
– 半分子病：系由一条重链和一条轻链组成的单克隆 Ig片段。
– 恶性淋巴瘤：血液中可出现M蛋白。 – 良性M蛋白血症：
第二节 血清补体检测
补体是一组具有酶源活性的糖蛋白，由传统途 径的九种成分C1(C1q/C1r/C1s）-C9，旁路途 径的三种成分及其衍生物B/D/P/H/I等因子组 成
参与机体的抗感染和免疫调节,介导病理反应
识别阶段
细胞膜
C3转化酶的形成
活 化 阶 段
C4b2b 为C3转化酶
C4b
C5转化酶的形成
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血清免疫球蛋白测定(一)
B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。
免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。
免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。
1分类
根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。
1.1IgG
IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。
根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。
IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病毒有抗体活性，并有激活补体的作用。
1.2IgA
IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。
存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病毒作用。
1.3IgM
IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。
是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。
IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。
1.4IgD
其作用与过敏反应有关。
据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。
它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。
1.5IgE
与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。
IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。
当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。
2正常参考值
IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。
3临床意义
3.1血清免疫球蛋白降低
血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。
血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失增多和分解加快引起。
合成不足：血清免疫球蛋白降低可由于原发性或继发性合成缺陷所致。
原发性免疫缺陷病有性联先天性丙种球蛋白缺乏症、婴儿暂时性丙种球蛋白低下症、伴IgM升高的性联低丙种球蛋白血症、选择性IgA缺乏症、选择性IgM缺乏症、选择性IgG亚类缺乏症等。
继发性免疫缺陷病有慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和恶性肿瘤等。
丢失增多：从胃肠道丢失的见于溃疡性结肠炎、消化道癌肿、吸收不良综合征、淋巴瘤、肠淋巴管扩张症。
从皮肤丢失的有急性灼伤、特异反应性皮炎。
从浆膜腔丢失的有胸膜炎、腹膜炎、反复抽胸腹水。
从肾脏丢失的有肾小球肾炎（微小病变型、膜性、增殖性）、肾静脉血栓形成、SLE和淋巴瘤。
主要是由于蛋白从尿中丢失或毒素抑制免疫球蛋白合成，后者首先影响IgM，其次影响IgA，然后再影响IgG。
分
解加快：见于湿疹-血小板减少-反复感染综合征、肌强直性营养不良和共济失调毛细血管扩张症。
此外，毒性甲状腺肿和库兴氏综合征的免疫球蛋白降低，可能与分解加快有关。