结核病诊断 T SPOT 实验
骨科结核感染T细胞斑点检测(SPOT)课件
根据感染部位，骨科结核感染可 分为脊柱结核、关节结核和骨结 核等。
临床表现与诊断
临床表现
早期症状可能不明显，随着病情发展 可能出现疼痛、肿胀、活动受限等症 状。
诊断
结合临床表现、影像学检查和实验室 检查进行诊断，其中T细胞斑点检测（ SPOT）是一种常用的实验室检查方法。
骨科结核感染的流行病学
采用其他检测方法进行确认。
05 SPOT检测的案例分享
案例一
患者情况
一位中年男性，因髋关节疼痛就诊，疑似髋 关节结核感染。
诊断结果
结合患者临床表现和SPOT检测结果，最终 诊断为髋关节结核感染。
SPOT检测
对患者进行T细胞斑点试验（SPOT），检测 结果显示阳性，提示存在结核感染。
治疗方案
患者接受抗结核药物治疗，并进行髋关节手 术治疗，术后恢复良好。
案例二
患者情况
一位青年女性，已确诊为脊柱结核感 染。
02
SPOT检测
对患者进行T细胞斑点试验（SPOT）， 检测结果显示阳性，提示结核感染活 动期。
01
治疗方案
继续抗结核药物治疗，并定期进行复 查。
05
03
病情变化
经过一段时间的抗结核药物治疗后， 患者病情得到控制，再次进行SPOT检 测。
04
检测结果
结合其他技术
扩大应用范围
探索将SPOT检测与其他诊断技术相结合， 提高诊断的全面性和准确性。
研究SPOT检测在骨科其他疾病诊断中的应 用价值，拓展其应用领域。
感谢您的观看
THANKS
监测疗效
治疗后，SPOT检测可以监测治疗效 果，评估病情恢复情况。
预测复发
通过长期监测SPOT检测结果，可以 预测结核感染的复发风险。
骨科结核感染T细胞斑点检测(SPOT)课件
报告格式应规范、清晰，易于阅 读和理解。建议使用表格、图表 等形式展示数据和结果。
SPOT检测结果的沟通与交流
医生应向受检者详细解释SPOT 检测结果的含义，并根据结果制
定相应的诊疗方案。
对于阳性或灰区结果，医生应进 一步询问受检者的结核病史、接 触史、临床表现等信息，以便更 好地评估病情和制定治疗方案。
病患者都有症状。
结核病对肺部、骨骼、肾脏等器 官均可造成损害，其中骨科结核
感要发生在脊柱、 髋关节和膝关节等部位，其中 脊柱结核是最常见的。
骨科结核感染的发病率呈逐年 上升趋势，主要与人口老龄化、 免疫系统疾病增多等因素有关。
骨科结核感染的流行病学特征 包括地域差异、人群分布和传 播途径等。
实验环境
确保实验室环境清洁、无 菌，符合进行细胞培养和 检测的要求。
样本采集与处理
采集样本
根据实验需求，采集患者的血液或淋巴结样本。
样本处理
将采集的样本进行离心，分离出血清或淋巴结组织。对血清或组织进行预处理，如去除杂质、过滤等。
SPOT检测实验步骤
细胞培养
将处理后的样本加入细胞培养板或瓶中，进行细胞培养。
T细胞斑点检测的优势与局限性
优势
T细胞斑点检测具有较高的特异性和敏感性，能够早期检测结核感染，尤其对 于潜伏感染者；该方法操作简便、快速，适合大规模筛查。
局限性
T细胞斑点检测无法区分活动性结核感染与潜伏感染，对于已经接受抗结核治疗 的患者可能出现假阴性结果；此外，该方法对于免疫抑制人群的准确性有待提高。
SPOT检测的未来发展方向与挑战
提高灵敏度和特异性
针对不同病种和人群，进一步 提高SPOT检测的灵敏度和特异
性，减少误诊和漏诊。
T-spot：结核感染T细胞斑点试验的临床应用ppt课件
一、T-SPOT.TB的原理
外周血T-SPOT即利用酶联免疫斑点技术
（ELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异性抗 原刺激后外周血单个核细胞释放的γ-干扰素来 检测抗原特异性 Ｔ淋巴细胞的应答反应，从而 判断结核感染状态。 每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T细胞， 记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T 细胞数量。
T-spot：结核感染T 细胞斑点试验的临 床应用
主要内容
原理 结果的判断 临床应用 评价
一、T-SPOT.TB的原理
结核分枝杆菌感染机体后被巨噬细胞吞噬，但
不能完全将其清除，巨噬细胞凋亡后释放出大 量特异性抗原，并递呈给特异性的CD4、CD8T 细胞，使其激活并释放大量γ-干扰素。 大量研究表明结核抗原特异分泌γ-干扰素的T 细胞可作为结核分枝杆菌感染的一种可靠标志 物。
有学者指出：
诊断活动性结核病患者外周血T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为442SFCs/10^6 PBMC 。 排除活动性结核病患者外周血T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为124SFCs/10^6 PBMC。 以72SFCs/10^6 PBMC为界值时,诊断活动性结核病 的敏感性为71.9%,特异性76.4%,ROC曲线下面积为 0.810。 以652SFCs/10^6PBMC为界值时,诊断活动性结核病 的特异性达95%。
二、结果的判断
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反应性”，参照 以下标准： 空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）（空白对照孔斑点数）≥6； 空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数） ≥2×（空白对照孔斑点数）； 检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且PHA对照孔正常。 当PHA对照孔结果为“不确定”且抗原A和抗原B孔结果都为“无 反应性”时，该实验结果被认为是“并不确定”，应当复查。
结核感染T细胞(T-SPOT.TB)
结核感染T细胞（T-SPOT.TB）一、名称结核感染T细胞（T-SPOT.TB）二、项目简介、临床意义及收费标准T-SPOT.TB是一种记数单个结核特异的效应T细胞的酶联免疫斑点（ELISPOT）检测方法，其灵敏高于ELISA方法。
该检测通过检测受结核分枝杆菌抗原刺激而活化的效应T细胞来诊断结核感染。
该检测适用于所有具有结核潜伏感染风险或怀疑是结核病的人群，无论年龄、性别、种族、治疗还是免疫状况，其诊断结核感染的敏感性为90%-95%，特异性为93%-100%。
对临床诊断或排除结核病具有重要的参考价值。
收费标准：740元/人份，收费依据：混合淋巴细胞培养（W0309050020）（250元）×2次；干扰素测定（W0309060008）（120元）×2种抗原。
三、标本采取1.静脉血：肝素锂（绿头管）抗凝管采集静脉血4ml，立即颠倒数次，充分混匀，以免血液凝固。
采血后向试管中注入血液时请缓慢进行，避免用力过猛造成细胞破坏影响检测结果。
2.脑脊液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀。
3.浆膜腔积液（胸水、腹水、心包积液）：无菌密闭容器留取50ml以上，每100毫升加2500IU（0.4ml）抗凝并立即混匀。
4.关节液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀。
四、检测时间、报告时间检测时间：每周二（节假日除外）进行检测，标本必须在上午9点前送达实验室。
报告时间：周三出报告。
五、注意事项1.标本采集后4小时内必须送到实验室进行检测，标本采集后如果超过4小时未送检将严重影响检测结果。
2.检测脑脊液、浆膜腔积液、关节液，须同时送检静脉血。
3.冬季运送标本时注意保温，避免冷冻。
六、联系科室和电话检验科微生物室(TeL：84205491)。
Tspot结核感染T细胞斑点试验的临床应用
“有反应性”结果表明样本中存在针对结核杆菌特异的效应T细胞 “无反应性”结果表明样本中可能不存在针对结核杆菌特异的效应
T细胞
二、结果的判断(影响因素分析)
既往结核病史或影像学提示陈旧性肺结核、有结核 密切接触史或高潜伏性结核感染率可使其诊断活动 性结核病的特异性降低。
一、T-SPOT.TB的原理
外周血T-SPOT即利用酶联免疫斑点技术 （ELISPOT）通过检测结核分枝杆菌特异性抗 原刺激后外周血单个核细胞释放的γ-干扰素来 检测抗原特异性 Ｔ淋巴细胞的应答反应，从而 判断结核感染状态。
每一个斑点代表一个分泌细胞因子的T细胞， 记数斑点数量可以获得外周血中结核致敏的T 细胞数量。
二、结果的判断
试验分四组：空白对照组、抗原组(ESAT-6和CFP-10)、阳性 对照组(植物血凝素PHA)。
通常正常结果，空白对照孔没有或有很少的斑点而PHA对照 孔斑点数超过20个。
空白对照孔斑点数超过10个时结果被认为是“不确定”。
当PHA对照孔斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确 定”。
二、结果的判断
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反应性”，参照 以下标准：
空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）（空白对照孔斑点数）≥6；
空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数） ≥2×（空白对照孔斑点数）；
检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且PHA对照孔正常。 当PHA对照孔结果为“不确定”且抗原A和抗原B孔结果都为“无
有学者指出：
诊断活动性结核病患者外周血T-SPOT.TB斑点形成 细胞中位数为442SFCs/10^6 PBMC 。
QB—SPOT结核实验
QB—SPOT结核实验
结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）是一种运用IGRA技术，检测被结核分枝杆菌特异的早期分泌靶抗原6（ESAT-6）和培养滤液蛋白10（CFP 10）分别刺激后释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞，以辅助诊断结核感染的实验室检测技术。
TBspot试验通常指T-SPOT试验，即结核杆菌感染T细胞斑点试验，又称为结核菌感染干扰素释放试验，是利用结核特异性抗原，通过酶联免疫斑点技术，检测受试者体内是否存在结核效应的T淋巴细胞，从而判断被检查者是否感染结核杆菌。
该检查的原理是结核杆菌感染之后，T淋巴细胞会形成免疫记忆。
通常在体外分离到T淋巴细胞之后，培养增殖T细胞的同时，用相应的特异性抗原，进行刺激，激活T细胞记忆，有记忆的细胞则会分泌大量的干扰素。
结核T-SPOT检查即为结核菌T细胞斑点检测，是临床用于诊断结核病的新型检查方法。
通过检测干扰素的量，判断该细胞是否存在结核感染形成的记忆，进而通过进一步的反应判断是否存在结核菌感染。
但它的结果不能作为单独或决定性诊断活动性结核的证据，阳性结果仅提示患者体内存在结核杆菌特异性的效应T细胞。
但是否为活动性结核，则需要结合患者的临床症状及其他检测指标，进行综合判断。
现在已经有多项研究的结果显示，T-SPOT试验只能判断是否感染过结核，但无法鉴别活动性结核与潜伏性结核，因此对于活动性结核的诊断价值有限。
结核感染T细胞斑点试验
四．对小于4岁儿童，与结核菌素实验比较敏感性无优势，美国CDC更推荐结核菌素实
验。
T-SPOT-TB—应用
在结核性脑膜炎、结核性胸膜炎中的诊断意义
1.
敏感性优于ADA、TB-DNA，约在62-75%，特异性无统计学差异。
在结核病治疗中的评价意义
得（interferon gamma release assays）
IGRAs用于检测结核感染。IGRAs通过检
测代表结核分支杆菌的抗原刺激T淋巴细胞
反应后释放IFN-γ的量来判断是否存在结
核杆菌感染。
T-SPOT-TB—定义
以结核特异的混合抗原A和
混合抗原B（分别为ESAT6和CFP-10的部分多肽片
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的阐述您的观点。
汇报人姓名
1.
其数值高低与严重程度无关。
2.
效应T细胞随结核杆菌的清除而消失，其阴性及阳性结果可作为评估治疗效果的手段之一 。
T-SPOT-TB—应用
01
敏感性优于结核菌素试验，且不受卡介苗接种影响。
02
较少受到其他分支杆菌感染影响。
03
其阴性预测值高于阳性预测值，排除诊断意义更高。
在潜伏性结核杆菌 感 染者 的 筛选 中
染二科
核感染T细胞斑点试验
T-SPOT -TB）
击 / 此 / 处 / 添 / 加 / 副 / 标 / 题
演讲人姓名
由来----γ
干扰素释放
试验
（IGRAs）
在2001年前，美国仅批准结核菌素皮肤试
验（TST）用于结核分支杆菌的检测。在
结核tspot检测流程
结核tspot检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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5%
再次激活
有临床症状 具有传染性
- 结核杆菌可以通过涂片、 培养检测出
- 胸部的 X-光或 CT 扫 描显示异常
- 肺外结核难以诊断 (特别是儿童)
实验室检查
影像检查
+ 临床 指征
病理检查
14
• 02
• 结核杆菌实验室检查
• 结核诊断--临床应用
• 几乎所有的临床内科科室 都需要结核的鉴别诊断：
10
• 结核病发病机制
起始期
结核分枝杆菌通过飞沫进入呼吸道，被肺泡巨噬细胞吞噬杀灭， 不留任何痕迹和感染证据。 特点：不存在结核杆菌复制，不存在免疫周围细胞的免疫应答
反应期
结核分枝杆菌在体内复制，形成感染灶，由T细胞介导的细胞免 疫和迟发型变态反应，进一步清除细菌。
特点：激活体内免疫反应（CMI和DTH），宿主获得抗结核抵抗力
n "Specificity" (100-A)% n "Specificity" (100-A)%
Lalvani et al Am J Respir Crit Care Med 2001; 163: 824-28 † 26
• 特异性高 Lalvani et al J Infect Dis 2001 183;3: 469-7 †
11
• 结核病发病机制
共生期
在低氧、低pH、抑制性脂肪酸和宿主免疫机制共同作用下抑制细菌的增殖。 结核分枝杆菌未被完全清除，细菌和宿主处于共生状态，结核杆菌主要存 在于坏死组织中央。特点：可激发和维持T细胞的免疫记忆，在一定条件 下再次发病
增殖 传播期
长期休眠的结核细菌在一定条件下，再次增殖，突破宿主免疫屏障，引起结核病 特点：结核播散
100.0% (12/12)
Ferrara et al Lancet 2006 376;1328-34*
83.3% (20/24)
Lee et al Eur Respir J 2006 28;24-30*
96.6% (84/87)
Goletti et al Clin Microbiol Infect 2006 12;6:544-50*
适用于多种标本；操作简便，价格低廉。
2份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性；
1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+肺部影像学检查符合活动性肺结核表现。
肺结核治疗评估的主要依据之一
18
• 结核分枝杆菌-实验室检查
缺点：不能区别是否为非结核分枝杆菌 不能区别死活菌。 结核杆菌暴露于异烟肼时，某些条件会失去抗酸性，出现假阴性。
12
接触活动性结核病患者
暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除
- 没有症状,结核杆菌仍旧 存在而不能被检测
- X-光/ CT 扫描显示正常
- 没有抗体应答
- 诊断困难
- 传统的结核感染检测只有 TST（PPD）
机体被感染
受机体免疫力抑制 没有临床症状
终身处于感染状态
潜伏感染
活动性结核与潜伏感染
5%
美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183) Vincenti et al Clin Exp Immunol. 2007 Oct;150(1):91-8*
Wang et al Emerging Infect Dis 2007 13;4:553-8
国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655) Losi et al Eur Respir J. 2007 Dec;30(6):1173-9
98.3% (57/58)
基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很 Clarke et al Clin Exp Immunol 2007 150(2):238-44.
Detjen et al CID 2007 1;45(3):322-8*
90.0% (27/30) 92.9% (26/28)
强阳性：活动性结核病可能
27
• PPD--结核菌素试验
PPD试验临床价值
PPD所含抗原为致病性分枝杆菌、环境分枝杆菌及卡介苗 菌株所共有，其结果受到卡介苗接种及其他分枝杆菌感染的 影响，特异性较差。
当出现免疫功能低下时可出现假阴性结果，敏感性低。
免疫力正常的阴性有一定意义。强阳性有一定意义。有结 核变态反应、淋巴结核强阳性多。
84.2% (32/38)
89.9% (62/69)
98.4% (62/63)
95.9% (47/49)
92.0% (1139/1238)
32
• 结核杆菌
T-SPOT.TB
TST
All Studies of Specificity in Subjects in Low Endemicity Settings
40
100.0% 100.0%
Pathan et al J Immunol 2001; 167: 5217-5225 †
32
100.0%
Ch只apm针an对et a结l AID核S 分200枝2 16杆;228菌5-9复3 †合群敏感，与绝4大0 多数10环0.0境% 分枝杆菌和卡介苗（BCG）
23
• 细胞免疫学检查
• 结核菌素皮肤试验（PPD试验） • γ干扰素释放试验（T-SPOT试验）
24
• 免疫学检查
细胞免疫学检查 PPD--结核菌素试验
迟发型细胞超敏反应 1）方法：1:2000 OT或PPD液0.1毫升(5单位)，左
前臂屈侧中部皮内注射，48-72h测量皮肤硬结的直
径。
25
• PPD--结核菌素试验
22
• 抗酸杆菌培养优缺点
▪敏感性较直接涂片法高，理论上10-100条菌/毫升可检出阳性； ▪特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度、色素产生初步判断非 结核分枝杆菌； ▪分离出具有活力的纯培养物，为进一步药敏试验提供基础。
▪需时长，根据接种量的大小，一般2-8周才能得到肉眼可见菌落。 ▪结果受标本保存运送时间、培养基成分和质量、前处理方法等影响， 操作较直接涂片法复杂，需经严格培训 。 ▪需培养基凝固灭菌器、离心机、涡旋振荡器、恒温培养箱等设备。 ▪成本是直接涂片法的7-8倍。
Kim et al Arch Intern Med 167;20:2255-2259 Connell et al PLoS ONE 2008. 3; 7:e2624* Kobashi et al. Scand J Infect Dis 2008. 40; 8: 629-34* Kobashi et al. J Infect. 2008 [Epub ahead of print].* Domínguez et al. Diagn Microbiol Infect Dis. 2008.* [Epub ahead of print] Goletti et al. PLoS ONE. 2008. 3; 10: e3417.* Bosshard et al. Respir Med. 2008. [Epub ahead of print] Higuchi Med Microbiol Immunol. 2008. [Epub ahead of print]*
经济、简便，可以用于流行病学大规模的筛查和普查，但 存在着明显的缺陷。
28
• T-SPOT实验
细胞免疫学检查 T-SPOT试验原理
结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到 结核抗原刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ）。 因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断。 既用抗体捕获培养中细胞所分泌的细胞因子，并以酶联斑点显色方式 将其表现出来。 刺激抗原：ESAT-6蛋白(早期分泌抗原靶6） 、CFP-10蛋白（培养滤液蛋白） 由结核分枝杆菌特有的RD1基因编码，可刺激活化的效应T淋巴细胞产生γ干扰素。
7
• 结核病
• 由结核分枝杆菌引起的慢性感染性疾病
8
• 结核病—临床表现
症状
体征
1.全身症状：消瘦、 盗汗、低热、乏力 2.呼吸系统症状：咳 嗽、约1/3咯血 3结核变态反应表现
因肺结核好发于 肺上叶尖后段及 下叶背段，故锁 骨上下、肩胛间 区叩诊音浊
9
• 结核病发病机制
起始期 T细胞反应期 共生期 细胞外增殖期和传播期
4
• 结核分枝杆菌的发现
1882年 德国柯赫医生发现结核致病菌----结核杆菌
5
• 结核杆菌的变迁
1897年提出结核病的飞沫传播 1922年，卡介苗为预防结核病 首次对新生儿接种 1945年，链霉素的问世使肺结 核不再是不治之症。
……
6
• 结核分枝杆菌—特点
(M.tuberculosis)
生物学主要特点： 1. 细胞壁中含有大量脂质 2.引起的疾病都呈慢性 并伴肉芽肿 3.抗酸染色阳性
O2 O2
O2 O2 O2 CO2
FFFOF2FFOFF2
F F
无或微弱荧光
强荧光
21
• 结核杆菌培养
结核菌培养临床价值—确诊结核
1份痰标本直接涂片抗酸杆菌镜检阳性+ 1份痰标本结核分枝杆菌培养
痰涂片阴性，肺部影像学检查符合活动性肺结核影像学表现 +1份痰标本结核分枝杆菌培养阳性
用于耐多药结核疗效判定
RD1基因在BCG以及大部分环境分枝杆菌中缺失。
29
• T-SPOT试验
γ干扰素 检测阴性
γ干扰素 检测阳性
TB抗原多肽
T细胞
活化T细胞
γ 干扰素
30
步 骤
31
T-SPOT
• T-SPOT灵敏度
Reference
Sensitivity
Jafari et al 2006 AJRCCM 174;9:1048-53