微核诱导

2.制备待测液：过滤关东煮的汤汁，将其和水混合配制成100%、75%、50%的汤汁溶液。
3.用待测液处理根尖：每组选取4粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入待测溶液，浸没根尖。另外1组用蒸馏水做阴性对照，1组分别用200mg/L Pb(NO3)2溶液作为阳性对照。处理根尖6-24小时。
4.根尖细胞恢复培养：用蒸馏水浸洗3次，洗净后在置于培养皿用凉开水进行恢复培养22-26h(两个细胞周期)。
5.材料固定：将恢复培养后的种子从根尖顶端切下1cm长的幼根。用卡诺氏液固定24h，再换入70%的乙醇保存。
6.材料解离：将固定后的根尖材料用蒸馏水浸洗三次，每次5min，吸干，加入0.1mol/L的盐酸浸没根尖，在60℃恒温水浴中解离15～20 min。
7.制片：待幼根软化，吸去盐酸，用蒸馏水浸洗三次，每次1-2min，最后浸入水中，取根置于载玻片上，截下1-2mm长的根尖，滴一滴醋酸洋红染液，染色10min，压片观察。
经查找资料，发现卷烟烟气、杀虫双、甲胺磷、速灭杀丁、甲醛对诱发微核均有直接作用，且已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关。而卷烟烟气、杀虫双、甲胺磷、速灭杀丁、甲醛都是常识中对人身体有害的物质，所以我小组计划选用一种对人身体有害的物质来做诱导微核发生的材料。
关东煮是一种常见的小吃，深受广大学生喜爱，但经查阅新闻报道，常有关东煮内二氧化硫含量超标情况发生，且关东煮长时间处于加热状态，硝酸盐与亚硝酸盐含量也处于超标状态。经查找资料二氧化硫、硝酸盐、亚硝酸盐对微核也具有部分诱导作用，所以我小组选用关东煮的汤做诱导微核发生的材料。在资料中二氧化硫、硝酸盐、亚硝酸盐对微核的诱导作用均是和用药的剂量呈正相关，所以本小组预测实验结果中微核率的大小应该与所加关东煮的汤的计量成正相关。
②微核细胞率‰=具有微核的细胞数观察统计的总细胞数×1 000‰
进度计划：
1.取4粒初生根生长良好、根长一致的种子，放入待测溶液，浸没根尖用待测液处理根尖6h后，用蒸馏水冲洗，并移至蒸馏水中修复培养8h。
2.修复培养结束后，取蚕豆根尖0.5～1cm，置于卡诺氏固定液中固定24h。
3.
河北师范大学本科生自主设计型实验开题报告书
学院专业年级
论文题目
学生姓名
指导教师
课题论证：微核简称真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。一般认为微核是由有丝分裂பைடு நூலகம்期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。
8.镜检：在40×10倍显微镜下，凡小于主核1/4以下的，同主核有相同染色效果的，圆形、椭圆形或其他类似的形状的染色物质都可以算作微核。根据附表统计微核。
9.微核的定量表示：通常每一处理组至少观察5张较好的片子，每张片子至少观察1000个以上细胞。结果有两种表示方法：
①微核率‰=微核数观察统计的总细胞数×1 000‰
【3】山西大学学报（自然科学版），《二氧化硫对小鼠骨髓细胞微核的诱发及沙棘油的防护作用》，孟紫强，阮爱东；张波；桑楠；张建彪；
【4】浙江水产学院学报，《三种农药对黄鳝红细胞微核的诱导》，薛良义；
【5】安徽农业科学，《卷烟烟气及绿茶对蚕豆根尖细胞微核的诱导作用》，江鸿；叶贤文；
方案设计：
1、实验原理
微核简称真核生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外、大小应在主核1/3以下。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，但有些实验也证明整条的染色体或多条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成了第三个核块。已经证实微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。微核测试诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害是一种比较理想的方法。且有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率可达99%以上。可用微核测试应用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确显示各种处理诱发畸的效果，并可用于污染程度的监测。本组选择了关东煮的汤来做微核实验，因为这种街边小摊的食物存在很多卫生隐患，为了味道更好可能会放一些化学用品，更有甚者，汤汁经年不换，有害物质更是积累众多。
经查阅资料，大多数植物微核诱导的实验所用植物均为蚕豆，所以本小组拟使用蚕豆来做实验植物。
【1】安徽农业科学，《蚕豆细胞微核检测食品中硝酸盐和亚硝酸盐的遗传毒性》，黄德娟；黄德超；陈毅峰；彭冬铂；
【2】环境科学与技术，《甲醛污染对蚕豆根尖细胞微核的诱导作用》，韦立秀；孙艳娟；杨振德；朱麟；李明；陈方玉；
2、实验材料
材料：蚕豆种子、关东煮汤汁、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、盖玻片、载玻片、烧杯、刀片、滤纸
试剂：卡诺固定液、0.1mol/L的Hcl溶液、醋酸洋红染液、Pb(NO3)2溶液、蒸馏水。
3、实验过程
1.浸种催芽：选取大小均匀的蚕豆种子约60粒，直接放入盛有自来水的烧杯中，浸种24h，此间换水2次。种子吸胀后，将蚕豆种于放入培养皿中，用草纸覆盖并浇上自来水保持湿度，水淹没1/3，催芽48h。大部分初生根长至1-2cm时，根毛发育良好，准备来进行检测。