黄酮类化合物显色反应
3、氨性氯化锶反应（SrCl2）： 在氨性甲醇溶液中，可与分子中具
有邻二酚羟基结构的黄酮类化合物 生成绿色~棕色乃至黑色沉淀。
4、三氯化铁反应：
多数黄酮类化合物因分子中含有游 离酚羟基，与三氯化铁水溶液或醇 溶液可产生阳性反应，呈现颜色； 当含有氢键缔合的酚羟基时，颜色 更明显。
（三）硼酸显色反应 在无机酸或有机酸存在条件下，5-羟基
黄酮及2’-羟基查耳酮可与硼酸反应，呈 亮黄色。
在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。 在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而
无荧光。
（四）碱性试剂显色反应
在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观 察样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后 的颜色变化的情况。
二氢黄酮类可转变为查耳酮类化合物， 显橙~黄色。
O
OH
2、锆盐—枸橼酸反应：
多用2%二氯氧化锆（ZrOCl2）甲醇 溶液。黄酮类化合物分子中有游离 的3-或5-OH存在时，均可反应生成 黄色的锆络合物。
3-OH, 4=O 锆盐
2%枸黄色不褪 黄色褪去
样品0.5-1mg 10ml甲醇溶
2%枸橼酸甲醇液 观察颜色
1ml2% ZrOCl2 黄色
（一）还原反应
1、盐酸-镁粉（或锌粉）反应：
多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄 酮醇类化合物显橙红~紫红色，少数显紫 ~蓝色，B环有-OH或OCH3取代时，颜色 随之加深。查耳酮、橙酮、儿茶素类不 显色。异黄酮类一般不显色。
花色素及部分查耳酮、橙酮等在单 纯浓盐酸酸性条件下颜色也会发生 变化，故须先做空白对照。
2、四氢硼钠（钾）反应：
NaBH4是对二氢黄酮类化合物专属 性较高的一种还原剂。与二氢黄酮 类化合物产生红~紫色。其它黄酮类 化合物均不显色。
（二）金属盐类试剂的络合反应
1、三氧化铝反应： 此反应可在滤纸、薄层上或试管中进行。 将样品的乙醇溶液和1%三氯化铝溶液反 应，生成的铬合物多呈黄色，置紫外灯 下显鲜黄色荧光，但4′━ 羟基黄酮醇或 7， 4′━ 二羟基黄酮醇显天蓝色荧光。
检查5-OH对位未被取代的黄酮。 将样品溶于吡啶中，加入Gibbs试剂显蓝
或蓝绿色。 Gibbs试剂: 甲液：0.5%2,6-二氯苯醌-4氯亚胺的乙醇
溶液。 乙液：硼酸-氯化钾-氢氧化钾缓冲液
（pH9.4）
组员：楼蒙蒙、孙苏娜、麻耀之、颜如冰
中药四班
OH
H
O
O
黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空气 后变为棕色。
当分子中有邻二酚羟基取代或3,4’-二羟 基取代时，在碱液中很快氧化，最后生 成棕绿色沉淀。
（五）与五氯化锑反应
五氯化锑 (SdCl5)： 查耳酮特征性显色反应 (红或紫红色沉
淀) 黄酮、二氢黄酮、黄酮醇类呈橙色。
（六）Gibbs反应
黄酮类显色鉴别反应
Kahlenberg 反应
将样品的氯仿或乙醇溶液滴在滤纸上，喷 20%的五化锑氯仿溶液 加热至 60℃--70℃，样品斑点呈蓝、灰、灰紫等多种颜色
三萜类化合物和甾体类化合物颜色鉴别反应大致相同
生物碱的沉淀反应很颜色反应 碘化铋钾试剂 即 KbiI4，生成橘红色至黄色无定形沉淀
碘化汞钾试剂 即 K2HgI4，生成类白色沉淀 沉
糖类和苷的检识
Molish 反应
1、加 5%a--萘酚乙醇液数滴摇匀，沿试管壁加入浓硫酸，两液之间出
（阳性结果为两
现紫环说明组成含有糖或苷类。阳性仅能说明含有游离或者结合的
液之间出现紫环） 糖；
2、与菲林试剂反应、滤液再和 Molish 试剂反应，呈阳性说明存在苷
类
菲林试剂反应
3、正丁醇萃取液与 Molish 试剂反应，呈阳性说明存在苷类 生成砖红色沉淀，若反应呈阳性说明有还原性糖存在
1、如有 a--酚羟基或邻二酚羟基结构时，则可与 Pb2+、Mg2+等 金属离子形成络合物，显橙黄、橙红、紫红、蓝色
1、9 或 10 位未取代的羟基蒽醌类化合物，尤其是 1，8--二羟基 衍生物，其羟基对位的亚甲基上的氢很活泼，可与 0.1%对亚硝 基二甲苯胺吡啶溶液缩合反应产生紫、绿、蓝、灰颜色 2、本反应作为蒽醌类的定性鉴别反应，不受其他物质干扰
醌氯亚胺）
与 Gibb’s 试剂反应显蓝色，判断 C6 位是否有取代基
Emerson 反应（4--氨基安替 1、碱性条件下内酯水解生成酚羟基，如其对位（6 位）无取代
比林和铁氰化钾）
与 Emerson 试剂反应显红色，判断 C6 位是否有取代基
醌类化合物颜色鉴别反应 Feigl 反应 无色亚甲蓝显色反应
黄酮的检测方法和理化性质
黄酮类化合物理化性质不论在黄酮类化合物的提取分离方面还是在其结构测定的研究方面黄酮类化合物的理化性质及其显色反应都发挥着谱学技术所替代不了的作用。
下面仅就其与分离和结构测定密切相关的性质进行简要介绍。
一、性状黄酮类化合物多为结晶性固体少数如黄酮苷类为无定形粉末。
游离的各种苷元母核中除二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇有族光性外其余则无光学活性。
苷类由于在结构中引入糖的分子故均有旋光性且多为左旋。
黄酮类化合物的颜色与分子中是否存在交叉共轭体系及助色团OH、OCH3等的种类、数目以及取代位置有关。
以黄酮为例其色原酮部分原本元色但在2位上引入苯环后即形成交叉共轭体系并通过电子转移、重排，使共轭链延长。
因而显现出颜色。
一般情况下黄酮、黄酮醇及其苷类多显灰黄黄色。
查耳酮为黄橙黄色而二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮类因不具有交叉共轭体系或共轭链短故不显色二氢黄酮及二氢黄酮醇或显微黄色异黄酮。
显然在上述黄酮、黄酮醇分子中尤其在7位及4’位引入OH及OCH3等助色团后则因促进电子移位、重排而使化合物的颜色加深。
但OH、OCH3引入其他位置则影响较小。
花色素及其苷元的颜色随pH不同而改变一般显红pH 7、紫pH85蓝pH 85等颜色。
二、溶解性黄酮类化合物的溶解度因结构及存在状态苷和苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷不同而有很大差异。
一般游离苷元难溶或不溶于水易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙酯、乙醇等有机溶剂及稀碱水溶液中。
其中黄酮、黄酮醇、查耳酮等平面性强的分子因分子与分子间排列紧密分子间引力较大故更难溶于水而二氢黄酮及二氢黄酮醇等，因系非平面性分子。
故分子与分子间排列不紧密分子间引力降低有利于水分子进入溶解度稍大。
至于花色苷元花青素类虽也为平面性结构但因以离子形式存在具有盐的通性故亲水性较强水中溶解度较大。
黄酮类苷元分子中引入羟基将增加在水中的溶解度而羟基经甲基化后则增加在有机溶剂中的溶解度。
例如一般黄酮类化合物不溶于石油醚中故可与脂溶性杂质分开但川陈皮素56783’4’六甲氧基黄酮却可溶于石油醚。
执业中药师考试资料之黄酮类化合物
执业中药师考试资料之黄酮类化合物如何用UV法鉴别黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、异黄酮、查耳酮?答：带Ⅰ是桂皮酰基产生的，在300～400nm270nm处；带Ⅱ是苯甲酰基产生上的，在220～2800nm处。
带Ⅰ、带Ⅱ两峰皆强的有：黄酮：带Ⅱ峰位高，带Ⅰ峰位低，且在<350nm处。
黄酮醇：带Ⅱ峰位高，带Ⅰ峰位低，且在>350nm处。
查耳酮：带Ⅰ峰位高；带Ⅱ峰位低。
带Ⅰ为主峰、带Ⅱ较弱有：二氢黄酮：带Ⅱ峰位>270nm。
二氢黄酮醇：带Ⅱ峰位>270nm。
异黄酮：带Ⅱ峰位<270nm。
黄酮类的酸碱性黄酮的酚羟基酸性由强到弱顺序是：7，4′-二羟基＞7-或4′—OH＞一般酚羟基>5-OH黄酮类的显色反应：还原反应：1.盐酸－镁粉反应：一般黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇类成分在乙醇或甲醇溶液中可被还原成红色至紫红色，个别的显蓝或绿色（如7、3′、4′－三羟基二氢黄酮）。
而异黄酮不显色。
此反应可用于鉴识黄酮类化合物，也可鉴识某提取物或提取液中是否含有上述黄酮类成分。
2.四氢硼钠（钾）反应：二氢黄酮的专属性反应，生成红-紫红色，而其它类不显色，故可用于鉴别。
金属盐类试剂的络合反应：铝盐和乙酸铅（有5羟基4酮、3羟基4酮和邻二酚羟基的黄酮类显阳性）；碱式乙酸铅一般的酚类均可生成沉淀。
锆-枸橼酸反应：3羟基4酮的比5羟基4酮的稳定。
区别黄酮与黄酮醇。
乙酸镁甲醇溶液：二氢黄酮、二氢黄酮醇类可显天蓝色荧光。
氨性氯化锶：有邻二酚羟基的黄酮类显阳性。
三氯化铁：有酚羟基的显阳性。
硼酸显色：有5羟基4酮、2′－羟基查耳酮类的呈亮黄色。
碱性试剂显色：二氢黄酮在碱性中可变成查耳酮而显色；有邻二酚羟基的、3、4′－二羟基的黄酮在碱性中不稳定；黄酮醇类在碱性中呈黄色，在空气中再变棕色。
如何用色谱法鉴别黄酮类化合物?1.纸色谱(pc)：适用于分离各种天然黄酮类化合物及其苷类混合物。
混合物的鉴定常采用双向色谱法。
中药化学练习试卷2(题后含答案及解析)
中药化学练习试卷2(题后含答案及解析)题型有：1. A1型题1．在黄酮的UV中，通常加入不同的诊断试剂来判断羟基的位置，判断7-OH的诊断试剂为（）。
A．NaOMeB．NaOAcC．NaOAc/H3BO3D．AlCl3E．AlCl3/HCl正确答案：B解析：本题考查加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义。
2．分离黄酮类化合物最常用的方法是（）。
A．氧化铝柱色谱B．气相色谱C．聚酰胺柱色谱D．纤维素柱色谱E．活性炭柱色谱正确答案：C解析：本题考查黄酮类化合物的分离。
3．某黄酮类化合物的紫外吸收光谱中，加入诊断试剂NaOAc(未熔融)后，带Ⅱ红移12nm说明该化合物存在哪种基团（）。
A．5-OHB．7-OHC．4＇-OHD．3-OHE．7-OH或4＇-OH正确答案：B解析：本题考查加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义。
4．鉴别黄酮类化合物分子中是否存在3-或5-羟基的试剂是（）。
A．二氯氧锆-枸橼酸B．三氯化铁C．四氢硼钠D．醋酸镁E．醋酸铅溶液正确答案：A解析：本题考查黄酮类化合物的显色反应。
5．氯化锶反应适用于黄酮结构中具有（）。
A．羟基B．邻二羟基C．亚甲二氧基D．甲氧基E．内酯结构正确答案：B解析：本题考查黄酮类化合物的显色反应。
6．提取黄酮类化合物常用的碱提取酸沉淀法是利用黄酮类化合物的（）。
A．强酸性B．弱酸性C．强碱性D．弱碱性E．中性正确答案：B解析：本题考查黄酮类化合物的分离。
7．四氢硼钠反应可用来鉴别哪类黄酮（）。
A．查耳酮B．黄酮醇C．橙酮D．儿茶素E．二氢黄酮正确答案：E解析：本题考查黄酮类化合物的显色反应。
8．黄酮类化合物的紫外光谱中“MeOH＋AlCl3“光谱等于”MeOH＋AlCl3/HCl”光谱，说明该化合物（）。
A．A环无邻二-OHB．B环无邻二-OHC．A、B环均无邻二-OHD．有5-0H，无3-OHE．有3-0H，无5-0H正确答案：C解析：本题考查加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义。
三氯化铝比色法测黄酮原理
三氯化铝比色法测黄酮原理
三氯化铝比色法是一种用于测定黄酮类化合物含量的方法。
这种方法通常涉及到黄酮化合物与三氯化铝（AlCl₃）反应形成有色络合物的过程。
以下是该方法的基本原理：
一、黄酮化合物存在：当样品中存在黄酮类化合物时，这些化合物具有和三氯化铝反应的特性。
二、三氯化铝反应：黄酮类化合物中的羟基与三氯化铝发生配位反应。
这个反应导致黄酮和三氯化铝形成有色的络合物，颜色的形成通常伴随着吸光度的增加。
三、吸光度测量：形成的有色络合物在特定波长下（通常在紫外光谱区域）具有吸收峰。
通过测量吸光度，可以确定有色络合物的浓度，从而间接反映原始样品中的黄酮类化合物的含量。
这种比色法的选择性和灵敏度取决于样品中的黄酮类化合物的种类和结构。
对于特定的黄酮类化合物，可能需要优化反应条件和测定波长以获得准确的测定结果。
黄酮类成分的鉴别
黄酮类成分的鉴别
黄酮类成分的鉴别主要有以下几种方法：
1.显色反应：黄酮类化合物可与某些试剂反应，表现出颜色变化。
例如，铝盐与黄酮类化合物生成黄色络合物；氯化锶与黄酮类化合物生成绿色~棕色~黑色沉淀；硼酸与黄酮类化合物生成亮黄色；草酸与黄酮类化合物生成黄色并有绿荧光；枸橼酸与黄酮类化合物只显黄色。
2.还原试验：镁粉和浓盐酸与黄酮类化合物反应，可生成紫-蓝-红色。
3.金属盐络合反应：某些金属盐，如AlCl3、Pb(OAc)2、Mg(OAc)2，可与黄酮类化合物生成络合物，表现出颜色变化。
4.荧光分析法：在紫外光的激发下，黄酮类化合物可发出荧光，表现出颜色变化。
5.高效液相色谱法：通过高效液相色谱法可以分离和测定黄酮类化合物的含量和组成。
6.质谱法：质谱法可用于鉴定黄酮类化合物的分子结构和化学成分。
分析化学检识鉴别 (黄酮)
还原反应
盐酸-镁粉反应
1、多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇显红~紫红色
2、少数显蓝、绿色，B环上有-OH或-OCH3颜色随之加深
3、查耳酮、橙酮等无该显色反应；花色素引起假阳性反应
钠汞齐还原反应
1、黄酮、异黄酮、二氢黄酮、二氢异黄酮类显红色
2、黄酮醇类显黄色~淡红色；二氢黄酮醇显棕黄色
三萜类化合物和甾体类化合物颜色鉴别反应大致相同
生物碱的沉淀反应很颜色反应
沉
淀
反
应
碘化铋钾试剂
即KbiI4，生成橘红色至黄色无定形沉淀
碘化汞钾试剂
即K2HgI4，生成类白色沉淀
碘-碘化钾试剂
即KI--I2，生成红棕色无定形沉淀
硅钨酸试剂
即SiO2·12WO3·nH2O，生成类白色或淡黄色沉淀
苦味酸试剂
Sabety反应
5%溴的氯仿液，产生蓝、紫、绿
Ehrlich反应
产生紫色或红色
对二甲胺苯甲醛
室温显蓝色，氢化yu在80℃加热10min显蓝色，继而转为绿色，最后转为黄色，在水蒸汽上蓝色可再现
通用显色剂...
硫酸
110℃出现颜色或荧光
五氯化锑
萜醇由灰到紫蓝，加热转为棕色；紫外灯下棕色荧光
三氯化锑
萜醇由灰到紫蓝，加热转为棕色；紫外灯下棕色荧光
无沉淀
沉淀
鞣质的化学性质
还原性
酚羟基多，易被氧化，能还原菲林试剂
与蛋白质沉淀
结合产生不溶于水的沉淀，作为提纯、鉴别的方法之一
与重金属沉淀
沉淀，在提取分离中此方法可除去鞣质
与生物碱沉淀
沉淀，在提取分离中此方法可除去鞣质
与三氯化铁作用
黄酮类化合物的理化性质及颜色反应
3. 锆盐: 2%氯氧化锆甲醇液
3-OH, 4=O 5-OH, 4=O 锆盐 2%枸橼酸 黄色不褪 黄色褪去
黄色锆络合物
样品0.5-1mg 10ml甲醇溶 2%枸橼酸甲醇液 观察颜色
1ml2% ZrOCl2
黄色
OH
HO
O OH O OH O H2O Zr O Cl
4. 镁盐
醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。
方法：样品5-10mg溶于5ml无水CCl4中，加1ml 2%的五氯化锑的CCl4溶液。
反应必须无水，否则生成沉淀不稳定。
（六）Gibbs反应
检查5-OH对位未被取代的黄酮。
将样品溶于吡啶中，加入Gibbs试剂显蓝或蓝绿色。 Gibbs试剂: 甲液：0.5%2, 6-二氯苯醌-4氯亚胺的乙醇溶液。 乙液：硼酸-氯化钾-氢氧化钾缓冲液(pH9.4)
1. 1%AlCl3或Al(NO3)3： 生成络合物为黄色(max=415nm)，并有荧光。
OH O OH
OH OH O
2. 铅盐
1%PbAc2 或碱式醋酸铅水液。生成黄 - 红色沉 淀。
醋 酸 铅 可 沉 淀 具 有 邻 二 酚 羟 基 或 兼 有 3-OH, 4=O或5-OH, 4=O者。
碱式醋酸铅可沉淀具有一般酚类化合物。
黄酮类化合物的理化性质及颜色反应
一、物理性质
1. 多为结晶性固体，少为（如黄酮苷类）无定形 粉末。 2. 旋光性：游离苷元中，除二氢黄酮、二氢黄酮 醇、黄烷、黄烷醇及双黄酮有旋光外，其余无旋 光性。 苷类由于结构中引入糖的分子，均有旋光性， 且多为左旋。
3. 颜色：与①分子中是否存在交叉共轭体系
②助色团的数目
（三）硼酸显色反应
条件：
天然产物化学全套 - 黄酮类化合物的检识与结构鉴定
B
6' 5'
OR'
~ 7.10, d, J ≈ 8.5 Hz ~ 7.90, d, J ≈ 2.5 Hz ~ 7.90, d, J ≈ 8.5, 2.5 Hz
25
第四节 分析：
检识与结构鉴定
二、紫外光谱
OH HO O OH
黄酮或3-O-苷 I=410-359=51nm，4'-OH
O-Glycosyl OH O
II=271-259=12nm，7-OH
I=387-359=28nm，B环有邻二OH AlCl3/HCl与AlCl3相比， I=402-433= -31nm, B环有邻二OH AlCl3/HCl与MeOH相比，
（但不包括5, 6-位）
O
注：与其在甲醇溶液中的光谱进行比较
19
第四节
检识与结构鉴定
二、紫外光谱
4、三氯化铝及三氯化铝/盐酸（AlCl3及AlCl3/HCl）
AlCl3可与下列结构系统络合，引起相应吸收带红移。
O O
OH
OH OH O O
OH
生成的铝络合物的相对稳定性顺序： 黄酮醇3-OH ＞ 黄酮5-OH ＞ 二氢黄酮5-OH ＞ 邻二酚OH ＞ 二氢黄酮醇3-OH
3
处理、喷2%AlCl3甲醇溶液(UV下检查)等
第四节
检识与结构鉴定
一、色谱法
（一）双向纸色谱法
第一向展开 —— 分配作用
展开剂：醇性溶剂，
如 n-BuOH-HOAc-H2O(BAW, 4:1:5上层)
Rf值：苷元＞单糖苷＞双糖苷， 一般苷元 > 0.7，苷 < 0.7
4
黄酮类化合物的检识与结构鉴定
+28,B邻二
HO O
OH OH
OR OH O
芦丁紫外图谱
芦丁甲醇液
1 359.50 2 257.50
芦丁甲醇钠
2 411.00 3 328.00 4 272.50
分析： 1. 3-OH是否取代，苷和苷元 2. 带Ⅰ红移52，强度增强，
示4′-OH 3. 328处有吸收，：示7-OH
游离
芦丁乙酸钠
2 384.50 0.494
4 273.50 0.751
芦丁甲醇液
1 359.50 2 257.50
分析：带Ⅱ红移16，示有-OH（5~20）， 由红移幅度示6或8位无含氧基取代
芦丁乙酸钠
2 384.50
0.494
4 273.50
0.751
芦丁乙酸钠/硼酸
2 379.00
0.609
4 261.50
水溶性大的Rf值较大。二氢黄酮>黄酮
用水性展开剂展开，对同一类型苷元的黄酮苷 其Rf值依次为：
双糖苷＞单糖苷＞苷元
色谱检识---纸色谱
2．醇性展开剂（如BAW）展开，分配色谱
如分子中羟基数目越多，极性越大，则Rf值越小；相 反，羟基数目越少，则Rf值越大。
用醇性展开剂展开，对同一类型苷元的黄酮苷其Rf值
三、红外光谱
1、 C=O 1700 cm-1 （强峰）
2、 醇 ： 酚：
OH OH
3350 cm-1 3300 cm-1
3、 苯环 ： 1600 cm-1 1500 cm-1
四、1H-NMR的应用： ——是分析黄酮结构的重要方法
测定黄酮溶剂：氘代溶剂
氘代溶剂
CDCl3 DMSO-d6：溶解范围广，信号分辨力强，可以