环境卫生学监测及标本采集方法
儿科病房、妇产科检查室、注 射室、换药室、治疗室、供应 室清洁区、急诊室、化验室、 各类普通病房和房间 ≤500
≤5
≤5
III类
≤10
≤5
IV类
传染病房
－
≤15
≤15
以上不得检出致病性微生物，如乙型溶血性链球菌，金黄色 葡萄球菌，沙门氏菌等。
四、所用材料
无菌吸管（0.5ml、5ml、 10ml）、 L棒、棉拭 子 、规格板 、普通琼脂平板、 10ml生理盐水等
五、采样方法
1、手卫生监测： 采样时间：一般情况下每季度监测一次。当 发生医院感染流行、高度怀疑或确定与医务人员 手的污染有关时，应及时进行监测。常规监测在 洗手后从事治疗操作前，特殊监测随时采样。 采样方法：棉拭子涂布法和直接压印法，
棉拭子涂布法
被检人五指并拢，用浸湿灭菌生理盐水的棉 拭子在医护人员手指曲面从指根到指端往返涂擦 2次，并随之转动采样棉拭子，采完后剪去操作 者手接触部分，将棉拭子投入10ml灭菌生理盐 水试管内立即送检。
戊二醛 过氧乙酸 含氯消毒剂类
季铵盐类
碘（溴）制剂 酚类
氯已定
汞制剂 醇类 酸类
卵磷脂（1.0%～2.0%）
硫代硫酸钠；亚硫酸钠；半胱氨脂（0.1%） 吐温－80 碱类
碱类
酸类
用无菌吸管吸取中和采样液0.2ml，转种于营养琼脂平板中， 用L棒涂抹于普通琼脂平板，置36 ℃温箱培养48小时观察结 果。
菌落数/ml＝
平均菌落数×稀释倍数 0.2
结果判断
• 使用中消毒液细菌菌落总数应≤100cfu/ml，不得检出致 病微生物。 • 无菌器材保存液必须无菌生长。
6、压力蒸汽灭菌效果监测
指示菌：嗜热脂肪杆菌芽胞（产品应根据厂家说明 书在有效期内使用）
方法：灭菌完毕，取出自含式生物指示物，至少冷却10 分钟以上，将安瓿折断或挤破，让管内溴甲酚紫蛋白胨 水培养基与嗜热脂肪杆菌芽胞菌片融为一体，同时将一 未经灭菌的生物指示物一同培养，56 ℃ 48小时后进行灭 菌效果判定。
环境卫生学监测及标本采集方法
一、医院感染微生物学监测
医护人员手、空气 、物体表面 医院 环境 卫生 学监 测 血液透析相关监测
消毒剂卫生学监测
压力蒸汽灭菌效果监测 内镜消毒灭菌效果监测
医院消 毒灭菌 及医疗 用品效 能监测
医疗用品的监测 微生物标本的采集
二、样品采集原则
医院重点部门的医护人员手、空气、物表的 微生物学监测应在清洁或消毒以后，医疗操作前 进行。如遇有医院感染流行或疑似环境污染时， 则需要立即进行监测，通过环境微生物检测，可 以及时发现传染源及传播途径。测定物品污染程 度或考核消毒措施的效果，都以样品所含微生物 的数量来计算。因此样品采集要有代表性。送检 时间一般不超过2小时。
所用材料
微生物让人类步步为营， 我们应该追求： “准确的病原学诊断” “针对性病原学治疗” 正确的微生物标本采集和运送， 是准确的病原学诊断的前提
基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检 5.棉拭子标本宜用运送培养基 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂 8.送检标本应注明来源和检验目的
菌落数/C㎡= 平皿上菌落平均数 平皿面积（ C㎡ ）
2、空气采样
可根据自身条件选用沉降法（空气暴露法）或空气采 样器法。 采样时间：采样时选在消毒处理后，操作前进行采样， 采样前应关好门窗，在无人走动的情况下，静止10分钟进 行采样。
沉降法： A：布点方法： 室内面积＞30m2设四角及中央5点，4角的布点位置距墙壁 1m处，离地面垂直高度为80-150cm。
（1）棉拭子采样法
对于平面物体，用5cm×5cm大小的标准灭菌规格版，放 在被检物体表面，用用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在规格版 内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1 －4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子装 入放有10ml灭菌生理盐水试管中。 对于门把手，金属，玻璃等曲面小型物体则采用棉拭子 直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，敷料，卫生纸等一次 性物品采样时，用无菌法取样品5g，放入装有10ml灭菌生理 盐水试管中。
检验方法： 1）将采样管敲打80次（或1分钟） 2）用灭菌吸管吸取0.2ml于营养琼脂平皿中，然后用无 菌L棒涂在整个平皿表面，置36°C温箱24小时观察结果。
计算公式：
菌落数/ C㎡＝
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
4、透析液微生物监测
检测方法：用无菌吸管吸取透析液进出水各2～3ml，放入 无菌试管，检测时可视透析液污染程度分别取原液或10倍稀 释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45 ℃ ～48 ℃的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，将平板置37 ℃培 养24小时，观察结果。 细菌总数/ml＝2个平板上的菌落总数×稀释倍数 评价标准：进水≤200cfu/ml 出水≤2000cfu/ml
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
检验方法： 1、将每个采样管敲打80次或1分钟， 2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂 布整个平板表面，置36℃ ±1℃温箱培养24小时观察结果计 算菌落数
计算方法：
菌落数/C㎡=
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
正确留取细菌培养的临床标本
骨髓标本 正常人的骨髓是无菌的，若从患者骨髓中检出细菌（排除 污染）提示细菌性骨髓炎或菌血症、败血症。 ◆标本采集 1、标本采集部位和时间 一般用骨髓穿刺针从髂骨采集 骨髓标本，最好在用药前，发热初期或高热期采集，阳性 检出率较高。 2、标本采集注意事项：⑴严格无菌操作。⑵标本采集后 立即注入血培养瓶，送检。
采血培养前质量保证: 静脉穿刺程序 1.70%酒精擦拭静脉穿刺点 >30秒钟 2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从穿刺点 向外画圈消毒,直径>3cm 3.70%酒精脱碘 培养瓶接种程序 1.70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,待60秒 2. 用无菌纱布清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然 后注入血液。
室内面积≤30m2设内、中、外对角线3点，内、外点的布点 位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。
B：采样方法：将普通营养琼脂平板或血平板（直径9cm）放 在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m，内外及四角距墙 1m，采样时，将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖 好并将平皿置于37 ℃温箱培养，24小时观察结果，并计算5个 平板的平均菌落数。洁净手术室则暴露30分钟。
8、医疗用品的监测
包括一次性医疗用品和消毒灭菌处理后的医疗用品。
采样时间：在消毒或灭菌处理后存放至有效期内采样。
采样方法：操作人员在认真清洁消毒手后，在净化台内 用无菌的方法，将拟检测的医疗用品：缝合针、针头、手 术刀片等小件物品投入5ml灭菌的生理盐水或营养肉汤内， 对手术钳、镊子等大的医疗器械在无菌操作下用沾有无菌 生理盐水的棉拭子反复涂擦采样，并将棉拭子投入5ml灭菌 的生理盐水溶液中。 检测方法：将采样管振打80次，用无菌吸管吸取1ml待检 样品于灭菌平皿内，加入已融化的45℃左右的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37℃温箱培养 48小时，观察结果。若平皿上无菌生长为灭菌合格。
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
标准
环境类别
范围
层流洁净手术室、层流洁净 病房
空气 （cfu/ m3）
物体表面 （cfu/ cm2）
医务人员手 （cfu/ cm2）
I类
≤10
≤5
≤5
II类
普通手术室、产房、新生儿室 （母婴同室病房）、早产儿室、 ≤200 普通保护性隔离室、供应室无 菌区、烧伤病房、重症监护病 房
正确留取细菌培养的临床标本
我国痰细菌培养现状
标本送检率低 结果重复性差 报告速度慢 感染菌与污染菌不易区分 药敏结果与治疗反应存在差距
咳痰标本
正确留取细菌培养的临床标本
咳痰标本不合格，你退检吗？ 如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于10个，应不做 或仅在特殊要求时做培养。 如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽 分泌物污染明显”。 复旦大学中山医院的做法 痰液外观：脓性，粘脓，粘液，水样….. 痰标本质量评价：合格，不理想（建议重送） 临床上约半数咳痰标本不合格！
手消毒效果要求： 卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡ 外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡
直接压印法：采样时被检人5指并拢，将平皿上培养 基表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送检。 将所采样本直接置36℃ ±1℃温箱培养24小时，根 据平皿面积计算细菌总数。
计算公式：菌落数/m3 ＝
50000N AT
A＝平板面积（C㎡） T＝平板暴露于空气的时间（min） N＝平均菌落数
3、物体表面的采样
采样时间：根据采样目的选择采样时间，如进行常规物 体表面监测，选择消毒处理后4小时内进行采样，若是暴发 流行时的环境微生物学监测则尽可能对未处理的现场进行 采样。 采样面积：常规监测时被采面积＜100cm2，取全部表面； ≥100cm2，取 100cm2。暴发流行时采样不受此限制。 所用材料：
.
正确留取细菌培养的临床标本
血液标本 血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。 正常人的血液是无菌的，如从患者血液中检出细菌，一般 应视为病原菌（排除采集标本或其他操作过程污染），提 示有菌血症或败血症。 1、采血时间及次数 一般应在抗生素治疗前，发热初期 或高峰时抽血。伤寒患者应在发热一星期内抽血。化脓性 脑膜炎应在发热1～2天内抽血，亚急性心内膜炎的患者除 在发热期采血外，要多次抽血（24小时内3～４次）和增 加抽血量（可增至10毫升）。 2、抽血部位及抽血量 以无菌方法从患者肘静脉、股动 脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5～ 10ｍｌ，婴儿为1～2ｍｌ，血液抽出后，立即以无菌手续 注入血培养瓶，充分混合后送检。
≤5
≤5
III类
≤10
≤5
IV类
传染病房
－
≤15
≤15
以上不得检出致病性微生物，如乙型溶血性链球菌，金黄色 葡萄球菌，沙门氏菌等。
四、所用材料
无菌吸管（0.5ml、5ml、 10ml）、 L棒、棉拭 子 、规格板 、普通琼脂平板、 10ml生理盐水等
五、采样方法
1、手卫生监测： 采样时间：一般情况下每季度监测一次。当 发生医院感染流行、高度怀疑或确定与医务人员 手的污染有关时，应及时进行监测。常规监测在 洗手后从事治疗操作前，特殊监测随时采样。 采样方法：棉拭子涂布法和直接压印法，
棉拭子涂布法
被检人五指并拢，用浸湿灭菌生理盐水的棉 拭子在医护人员手指曲面从指根到指端往返涂擦 2次，并随之转动采样棉拭子，采完后剪去操作 者手接触部分，将棉拭子投入10ml灭菌生理盐 水试管内立即送检。
戊二醛 过氧乙酸 含氯消毒剂类
季铵盐类
碘（溴）制剂 酚类
氯已定
汞制剂 醇类 酸类
卵磷脂（1.0%～2.0%）
硫代硫酸钠；亚硫酸钠；半胱氨脂（0.1%） 吐温－80 碱类
碱类
酸类
用无菌吸管吸取中和采样液0.2ml，转种于营养琼脂平板中， 用L棒涂抹于普通琼脂平板，置36 ℃温箱培养48小时观察结 果。
菌落数/ml＝
平均菌落数×稀释倍数 0.2
结果判断
• 使用中消毒液细菌菌落总数应≤100cfu/ml，不得检出致 病微生物。 • 无菌器材保存液必须无菌生长。
6、压力蒸汽灭菌效果监测
指示菌：嗜热脂肪杆菌芽胞（产品应根据厂家说明 书在有效期内使用）
方法：灭菌完毕，取出自含式生物指示物，至少冷却10 分钟以上，将安瓿折断或挤破，让管内溴甲酚紫蛋白胨 水培养基与嗜热脂肪杆菌芽胞菌片融为一体，同时将一 未经灭菌的生物指示物一同培养，56 ℃ 48小时后进行灭 菌效果判定。
环境卫生学监测及标本采集方法
一、医院感染微生物学监测
医护人员手、空气 、物体表面 医院 环境 卫生 学监 测 血液透析相关监测
消毒剂卫生学监测
压力蒸汽灭菌效果监测 内镜消毒灭菌效果监测
医院消 毒灭菌 及医疗 用品效 能监测
医疗用品的监测 微生物标本的采集
二、样品采集原则
医院重点部门的医护人员手、空气、物表的 微生物学监测应在清洁或消毒以后，医疗操作前 进行。如遇有医院感染流行或疑似环境污染时， 则需要立即进行监测，通过环境微生物检测，可 以及时发现传染源及传播途径。测定物品污染程 度或考核消毒措施的效果，都以样品所含微生物 的数量来计算。因此样品采集要有代表性。送检 时间一般不超过2小时。
所用材料
微生物让人类步步为营， 我们应该追求： “准确的病原学诊断” “针对性病原学治疗” 正确的微生物标本采集和运送， 是准确的病原学诊断的前提
基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检 5.棉拭子标本宜用运送培养基 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂 8.送检标本应注明来源和检验目的
菌落数/C㎡= 平皿上菌落平均数 平皿面积（ C㎡ ）
2、空气采样
可根据自身条件选用沉降法（空气暴露法）或空气采 样器法。 采样时间：采样时选在消毒处理后，操作前进行采样， 采样前应关好门窗，在无人走动的情况下，静止10分钟进 行采样。
沉降法： A：布点方法： 室内面积＞30m2设四角及中央5点，4角的布点位置距墙壁 1m处，离地面垂直高度为80-150cm。
（1）棉拭子采样法
对于平面物体，用5cm×5cm大小的标准灭菌规格版，放 在被检物体表面，用用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在规格版 内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1 －4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子装 入放有10ml灭菌生理盐水试管中。 对于门把手，金属，玻璃等曲面小型物体则采用棉拭子 直接在物体表面按一定顺序涂抹采样，敷料，卫生纸等一次 性物品采样时，用无菌法取样品5g，放入装有10ml灭菌生理 盐水试管中。
检验方法： 1）将采样管敲打80次（或1分钟） 2）用灭菌吸管吸取0.2ml于营养琼脂平皿中，然后用无 菌L棒涂在整个平皿表面，置36°C温箱24小时观察结果。
计算公式：
菌落数/ C㎡＝
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
4、透析液微生物监测
检测方法：用无菌吸管吸取透析液进出水各2～3ml，放入 无菌试管，检测时可视透析液污染程度分别取原液或10倍稀 释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45 ℃ ～48 ℃的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，将平板置37 ℃培 养24小时，观察结果。 细菌总数/ml＝2个平板上的菌落总数×稀释倍数 评价标准：进水≤200cfu/ml 出水≤2000cfu/ml
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
检验方法： 1、将每个采样管敲打80次或1分钟， 2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂 布整个平板表面，置36℃ ±1℃温箱培养24小时观察结果计 算菌落数
计算方法：
菌落数/C㎡=
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
正确留取细菌培养的临床标本
骨髓标本 正常人的骨髓是无菌的，若从患者骨髓中检出细菌（排除 污染）提示细菌性骨髓炎或菌血症、败血症。 ◆标本采集 1、标本采集部位和时间 一般用骨髓穿刺针从髂骨采集 骨髓标本，最好在用药前，发热初期或高热期采集，阳性 检出率较高。 2、标本采集注意事项：⑴严格无菌操作。⑵标本采集后 立即注入血培养瓶，送检。
采血培养前质量保证: 静脉穿刺程序 1.70%酒精擦拭静脉穿刺点 >30秒钟 2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从穿刺点 向外画圈消毒,直径>3cm 3.70%酒精脱碘 培养瓶接种程序 1.70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞,待60秒 2. 用无菌纱布清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然 后注入血液。
室内面积≤30m2设内、中、外对角线3点，内、外点的布点 位置距墙壁1m处，离地面垂直高度为80-150cm。
B：采样方法：将普通营养琼脂平板或血平板（直径9cm）放 在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m，内外及四角距墙 1m，采样时，将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟，盖 好并将平皿置于37 ℃温箱培养，24小时观察结果，并计算5个 平板的平均菌落数。洁净手术室则暴露30分钟。
8、医疗用品的监测
包括一次性医疗用品和消毒灭菌处理后的医疗用品。
采样时间：在消毒或灭菌处理后存放至有效期内采样。
采样方法：操作人员在认真清洁消毒手后，在净化台内 用无菌的方法，将拟检测的医疗用品：缝合针、针头、手 术刀片等小件物品投入5ml灭菌的生理盐水或营养肉汤内， 对手术钳、镊子等大的医疗器械在无菌操作下用沾有无菌 生理盐水的棉拭子反复涂擦采样，并将棉拭子投入5ml灭菌 的生理盐水溶液中。 检测方法：将采样管振打80次，用无菌吸管吸取1ml待检 样品于灭菌平皿内，加入已融化的45℃左右的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置37℃温箱培养 48小时，观察结果。若平皿上无菌生长为灭菌合格。
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
标准
环境类别
范围
层流洁净手术室、层流洁净 病房
空气 （cfu/ m3）
物体表面 （cfu/ cm2）
医务人员手 （cfu/ cm2）
I类
≤10
≤5
≤5
II类
普通手术室、产房、新生儿室 （母婴同室病房）、早产儿室、 ≤200 普通保护性隔离室、供应室无 菌区、烧伤病房、重症监护病 房
正确留取细菌培养的临床标本
我国痰细菌培养现状
标本送检率低 结果重复性差 报告速度慢 感染菌与污染菌不易区分 药敏结果与治疗反应存在差距
咳痰标本
正确留取细菌培养的临床标本
咳痰标本不合格，你退检吗？ 如果低倍视野下鳞状上皮细胞大于10个，应不做 或仅在特殊要求时做培养。 如做培养，报告中注明“镜检结果表明标本口咽 分泌物污染明显”。 复旦大学中山医院的做法 痰液外观：脓性，粘脓，粘液，水样….. 痰标本质量评价：合格，不理想（建议重送） 临床上约半数咳痰标本不合格！
手消毒效果要求： 卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/c㎡ 外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/c㎡
直接压印法：采样时被检人5指并拢，将平皿上培养 基表面直接压贴在手掌根部至指尖曲面10～20秒后送检。 将所采样本直接置36℃ ±1℃温箱培养24小时，根 据平皿面积计算细菌总数。
计算公式：菌落数/m3 ＝
50000N AT
A＝平板面积（C㎡） T＝平板暴露于空气的时间（min） N＝平均菌落数
3、物体表面的采样
采样时间：根据采样目的选择采样时间，如进行常规物 体表面监测，选择消毒处理后4小时内进行采样，若是暴发 流行时的环境微生物学监测则尽可能对未处理的现场进行 采样。 采样面积：常规监测时被采面积＜100cm2，取全部表面； ≥100cm2，取 100cm2。暴发流行时采样不受此限制。 所用材料：
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正确留取细菌培养的临床标本
血液标本 血液标本的细菌培养是诊断菌血症或败血症的基本方法。 正常人的血液是无菌的，如从患者血液中检出细菌，一般 应视为病原菌（排除采集标本或其他操作过程污染），提 示有菌血症或败血症。 1、采血时间及次数 一般应在抗生素治疗前，发热初期 或高峰时抽血。伤寒患者应在发热一星期内抽血。化脓性 脑膜炎应在发热1～2天内抽血，亚急性心内膜炎的患者除 在发热期采血外，要多次抽血（24小时内3～４次）和增 加抽血量（可增至10毫升）。 2、抽血部位及抽血量 以无菌方法从患者肘静脉、股动 脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5～ 10ｍｌ，婴儿为1～2ｍｌ，血液抽出后，立即以无菌手续 注入血培养瓶，充分混合后送检。
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环境卫生学监测采样方法
布点：依据《医院洁净手术部建筑技术规范》
采样方法 将普通营养琼脂平皿放在室内手术区和周边区各采 样点，距地面 0.8—1.5m 高度，在手术区检测时应 无手术台。当手术台已固定，测定高度在台面之上
0.25m。暴露30min。
采样要求 提出选择室内消毒后或规定的通风换气后与
医疗活动前进行空气标本的采样，或怀疑与 医院感染暴发有关时采样，使用普通营养琼 脂平板采样。（注意：采样前，关闭门、窗， 在无人走动的情况下，静止10min后采样。）
采样高度（沉降法） 平板置距地面垂直高度0.8m～1.5m处。
布点方法 室内面积≤30㎡，设一条对角线上取3点采样，即中 心一点，两端各距离墙1m处各取一点；室内面积 ＞30㎡，设东、南、西、北、中5点采样，其中东、 南、西、北点距离墙1m。采样高度距地面0.8— 1.5m。
采样方法 将直径9cm普通营养琼脂平板放置各采样点， 将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时
间（Ⅱ类环境 15min 、 Ⅲ类环境 5min ）后
盖上平皿盖及时送检。
采样方法
检测培养 将送检平皿置 36 ℃±1 ℃恒温箱培养 48h,计数菌落数，若怀疑与医院感染暴 发有关时，进行目标微生物的鉴定。 结果处理 计算所有平板菌落数，按公式换算结果。如临床科室要求培养致病菌， 则挑取可疑菌落进行鉴定。 计算公式：每个房间所有平板菌落总数/采样点/（皿．暴露时间） 报告: 沉降法按平均每皿的菌落数报告：cfu/（皿．暴露时间） 例如： 2cfu/(5min· 直径9cm平皿) 。
１.洁净手术部（室）和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总 数要求应遵循ＧＢ50333．
２.非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新 生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空 气中的细菌菌落总数≤４cfu／（１５ｍｉｎ· 直径９ｃｍ平皿）。
环境卫生学监测及标本采集方法
菌落数/ml＝
平均菌落数×稀释倍数 0.2
结果判断
• 使用中消毒液细菌菌落总数应≤100cfu/ml，不得检出致 病微生物。 • 无菌器材保存液必须无菌生长。
6、压力蒸汽灭菌效果监测
指示菌：嗜热脂肪杆菌芽胞（产品应根据厂家说明 书在有效期内使用）
方法：灭菌完毕，取出自含式生物指示物，至少冷却10 分钟以上，将安瓿折断或挤破，让管内溴甲酚紫蛋白胨 水培养基与嗜热脂肪杆菌芽胞菌片融为一体，同时将一 未经灭菌的生物指示物一同培养，56 ℃ 48小时后进行灭 菌效果判定。
5、使用中消毒剂监测
为监测消毒溶液在连续使用过程中的污染菌量，应定期 到各科室采样做生物学测定。 采样方法：用无菌吸管吸取消毒液1ml加至装有9ml含有 相应中和剂的营养肉汤内，以中和消毒药物的残效作用，中 和时间10分钟至1小时。
常用消毒剂中和剂及其浓度表
消毒剂 甲醛 中和剂及其浓度 亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 氨水 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%） 甘氨酸（1.0%）；赖氨酸 亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%） 硫代硫酸钠（0.1%～0.5%） 硫代硫酸钠（0.1%～1.0%） 吐温－80（0.5%～3.0%） 卵磷脂（0.3%） 硫代硫酸钠（0.1%～0.5%） 亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 亚硫酸钠（0.1%～0.5%）；卵磷脂（0.1%～0.3%） 硫代硫酸钠（0.1%）；半胱氨脂（0.1%） 吐温－80（1%～10%）；卵磷脂（0.1%～0.3%）
儿科病房、妇产科检查室、注 射室、换药室、治疗室、供应 室清洁区、急诊室、化验室、 各类普通病房和房间 ≤500
≤5
≤5
环境卫生学监测方法
（0.45ym）过滤浓缩，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），置36C±1C温箱培养48h,计数菌落数。当滤膜法不可计数时：菌落总数（cfu/件）=m（cfu/平板）x50（A.4）式中：m为两平行平板的平均菌落数。
当滤膜法可计数时：菌落总数（cfu/件）=m（cfu/平板）+mf（cfu/滤膜）（A.5）式
装有10mL采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂。
3、检测方法
把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液l.OmL接种平皿，将冷至40°C〜45°C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL〜20mL,36C±1C恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。
3、可使用经验证的现场快速检测仪器进行环境、物体表面等微生物污染情况和医疗器材清洁度的监督筛查；也可用于医院清洗效果检查和清洗程序的评价和验证。
一、空气微生物污染检查方法
1、米样时间
I类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；II、III、W类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。
2、检测方法
4、消毒后内镜：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40C〜45°C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL〜20mL,36C±1C恒温箱培养48h,计数菌落数（cfu/件）。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜
5、结果计算
平皿上菌落的平均数x采样液稀释倍数
物体表面菌落总数（cfu/m2）=
采样面积（cm2）
€
三、医务人员手卫生检查方法
当滤膜法可计数时：菌落总数（cfu/件）=m（cfu/平板）+mf（cfu/滤膜）（A.5）式
装有10mL采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米（cm2）计算。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂。
3、检测方法
把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液l.OmL接种平皿，将冷至40°C〜45°C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL〜20mL,36C±1C恒温箱培养48h，计数菌落数，必要时分离致病性微生物。
3、可使用经验证的现场快速检测仪器进行环境、物体表面等微生物污染情况和医疗器材清洁度的监督筛查；也可用于医院清洗效果检查和清洗程序的评价和验证。
一、空气微生物污染检查方法
1、米样时间
I类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；II、III、W类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。
2、检测方法
4、消毒后内镜：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40C〜45°C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL〜20mL,36C±1C恒温箱培养48h,计数菌落数（cfu/件）。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜
5、结果计算
平皿上菌落的平均数x采样液稀释倍数
物体表面菌落总数（cfu/m2）=
采样面积（cm2）
€
三、医务人员手卫生检查方法
环境卫生学监测采样方法
• ▲消毒和灭菌物品效果监测
• 灭菌物品监测是指灭菌后的物品或一次性使用的 医疗用品、无菌器械等是否达到灭菌要求.消毒剂 监测是指医院常用灭菌剂、消毒剂[酒精、碘伏、 戊二醛及含氯消毒剂]的生物监测.
• 一、医疗用品采样及检查方法
• ⑴采样时间：在消毒或灭菌处理后,存放有效期内 采样.
• ⑵采样面积：被采表面＜一00cm二取全部表面,被 采面积≥一00cm二取一00cm二.
采样[室内清洁消毒后一小时内]. • ⑵采样高度：与地面垂直高度八0-一五0cm.
• ⑶布点方法：室内面积≤三0m二,设一条对角线上取 三点,即中心点、两端各距墙一m处取点；室内面积 ≥三0m二,设东西南北中五点,四边各点均距墙一m.
• ⑷采样方法： • 用直径九cm的普通培养皿在采样点暴露[将平皿盖
环境卫生学 监测采样方法
护理部
• 环境卫生学监测的目的 • 检测我们的消毒效果是否达到标准要求,追询
消毒方法是否正确. • 规范采样的意义 • 采集标本准确,无污染,培养结果准确.
一、环境卫生学监测项目： 包括空气、物体表面、使用中消毒液和医务人员手
的监测. 二、我院每月进行环境卫生学监测的部门：
打开,扣放于平皿旁]五分钟,无菌方法盖好立即送检.
• 二、物体表面采样方法 • ⑴采样时间：选择消毒处理后进行采样. • ⑵采样面积：被采表面＜一00cm二取全部表
面,被采面积≥一00cm二取一00cm二.
• ⑶采样方法：用五×五cm二的标准灭菌规格版,放在 被检物体表面,用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子 一支,在规格版内横竖往返各涂抹五次,并随之转动棉 拭子,
• 连续采样四个规格板面积,剪去手接触部分,将棉拭 子放入装有一0ml采样液的试管中送检.门把手等小 型物品则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样.
环境卫生学监测要求及采样方法--ppt课件优选全文
≤10
不得检出 不得检出
Ⅳ类环境
普通门（急）诊及其检查、治疗（注射、换 药等）室、感染性疾病科门诊及病区等
≤10 不得检出
注：★致病菌指溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌。母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生
儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门氏菌。
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（二）物体表面消毒效果监测
4、注意事项
①根据物体表面是否规则选用规格板或直接涂擦的方法进 行采样。
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（二）物体表面消毒效果监测
1、采样时间 在消毒处理后或怀疑与医院感染暴发有关时 进行采样。
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（二）物体表面消毒效果监测
2、采样方法
①用5cm×5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸
有 含相应中和剂的棉拭子1支，在规格板内横竖
往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个
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烧试管口与橡胶塞，塞紧橡胶塞，并做好标记送检
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方法二：将手接触的部分烧断，投入10ml含相应中和剂的试管中，并塞紧橡胶塞,做好标记送检
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门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体表面采样
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3、结果判定
环境类别
Ⅰ类环境
范围
层流洁净手术室、层流洁净病房和无菌药物 制剂室
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一、环境卫生学
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二、规范采样的意义
采集标本准确，无污染，培养结果准确。
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三、采样前物品准备
检验科准备：培养皿，无菌试管，无菌棉拭子 等
科室准备：无菌剪刀，无菌棉签，无 菌手套， 酒
环境卫生学监测采样方法
2、使用中消毒、灭菌剂采样
⑴采样时间：采取更换前使用中的消毒、灭菌剂。
⑵采样方法：用无菌吸管吸取1ml被检液体，注入无菌 试管中送检。
3、医护人员手的采样
⑴采样时间：在洗手后及接触病人或从事医疗活动前进行采样。
⑵采样面积和方法：被检人五指并拢，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1 支在双手指掌面从指跟到指尖来回擦拭2次（一只手涂擦面积约 30cm2），边涂擦边转动棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入 装有10ml采样液的试管中送检，采样面积按平方厘米计算。
⑶布点方法：室内面积≤30m2,设一条对角线上取3点， 即中心点、两端各距墙1m处取点；室内面积≥30m2, 设东西南北中5点，四边各点均距墙1m。
⑷采样方法：
用直径9cm的普通培养皿在采样点暴露（将平皿盖打 开，扣放于平皿旁）5分钟，无菌方法盖好立即送检。
2、物体表面采样方法
⑴采样时间：选择消毒处理后进行采样。
⑴采样时间：在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采 样。
⑵采样面积：被采表面＜100cm2取全部表面，被采面 积≥100cm2棉拭子在被检物 体表面来回涂擦2次（特别是器械 关节），剪去手接 触部分，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管中送检。
压印法 检测时将平板上的培养基表面 压贴在物体上 10～20秒，送检。
环境卫生学监测的目的 检测我们的消毒效果是否达到标准要求，追询 消毒方法是否正确。 规范采样的意义 采集标本准确，无污染，培养结果准确。
一、环境卫生学监测项目：
包括空气、物体表面、使用中消毒液和医务人员手 的监测。
二、我院每月进行环境卫生学监测的部门：
手术室、监护室、产房、婴儿沐浴室、供应室无 菌间、治疗室、换药室等重要部门进行卫生学监测 。
环境卫生学监测及标本采集方法PPT(69张)
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
棉拭子涂布法
棉拭子涂布法
检验方法： 1、将每个采样管敲打80次或1分钟， 2、用灭菌吸管取0.2ml于营养琼脂平板中，再用无菌L棒涂 布整个平板表面，置36℃ ±1℃温箱培养24小时观察结果计 算菌落数
计算方法：
菌落数/C㎡=
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
≤5
≤5
菌区、烧伤病房、重症监护病
房
儿科病房、妇产科检查室、注
III类
射室、换药室、治疗室、供应 室清洁区、急诊室、化验室、
≤500
≤10
≤5
各类普通病房和房间
IV类
传染病房
－
≤15
≤15
以上不得检出致病性微生物，如乙型溶血性链球菌，金黄色
葡萄球菌，沙门氏菌等。
四、所用材料
无菌吸管（0.5ml、5ml、 10ml）、 L棒、棉拭 子 、规格板 、普通琼脂平板、 10ml生理盐水等
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
环境类别
范围
标准
空气
物体表面 医务人员手
（cfu/ m3） （cfu/ cm2） （cfu/ cm2）
I类
层流洁净手术室、层流洁净
病房
≤10
≤5
≤5
普通手术室、产房、新生儿室
（母婴同室病房）、早产儿室、
II类
普通保护性隔离室、供应室无 ≤200
采样面积：常规监测时被采面积＜100cm2，取全部表面； ≥100cm2，取 100cm2。暴发流行时采样不受此限制。
所用材料：
（1）棉拭子采样法
对于平面物体，用5cm×5cm大小的标准灭菌规格版，放 在被检物体表面，用用浸湿灭菌生理盐水的棉拭子在规格版 内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子，连续采样1 －4个规格板面积。用无菌剪刀剪去手接触部分，将棉拭子装 入放有10ml灭菌生理盐水试管中。
环境卫生学监测及标本采集方法
环境卫生学监测及标本采集方法
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
环境类别
范围
标准
空气
物体表面 医务人员手
（cfu/ m3） （cfu/ cm2） （cfu/ cm2）
I类
层流洁净手术室、层流洁净
病房
≤10
≤5
≤5
普通手术室、产房、新生儿室
（母婴同室病房）、早产儿室、
II类
普通保护性隔离室、供应室无 ≤200
环境卫生学监测及标本采集方法
阳性对照 黄 黄
效果判定
阴性对照 紫 紫
试验管 紫 黄
结果 灭菌认可 灭菌失败
环境卫生学监测及标本采集方法
7、内镜消毒灭菌效果监测
采样时间：消毒、灭菌后，使用前。
采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注 射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检 • 口注入，用无菌试管从活检出口收集，及时送检。
• 计算公式：
• 菌落数/ C㎡＝ •
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
环境卫生学监测及标本采集方法
4、透析液微生物监测
•检测方法：用无菌吸管吸取透析液进出水各2～3ml，放入 无菌试管，检测时可视透析液污染程度分别取原液或10倍稀 释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45 ℃ ～48 ℃的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，将平板置37 ℃培 养24小时，观察结果。
正常人的血液是无菌的，如从患者血液中检出细菌，一般 应视为病原菌（排除采集标本或其他操作过程污染），提 示有菌血症或败血症。
1、采血时间及次数 一般应在抗生素治疗前，发热初期 或高峰时抽血。伤寒患者应在发热一星期内抽血。化脓性 脑膜炎应在发热1～2天内抽血，亚急性心内膜炎的患者除 在发热期采血外，要多次抽血（24小时内3～４次）和增 加抽血量（可增至10毫升）。
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
环境类别
范围
标准
空气
物体表面 医务人员手
（cfu/ m3） （cfu/ cm2） （cfu/ cm2）
I类
层流洁净手术室、层流洁净
病房
≤10
≤5
≤5
普通手术室、产房、新生儿室
（母婴同室病房）、早产儿室、
II类
普通保护性隔离室、供应室无 ≤200
环境卫生学监测及标本采集方法
阳性对照 黄 黄
效果判定
阴性对照 紫 紫
试验管 紫 黄
结果 灭菌认可 灭菌失败
环境卫生学监测及标本采集方法
7、内镜消毒灭菌效果监测
采样时间：消毒、灭菌后，使用前。
采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注 射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检 • 口注入，用无菌试管从活检出口收集，及时送检。
• 计算公式：
• 菌落数/ C㎡＝ •
平均菌落数×稀释倍数 采样面积×0.2
环境卫生学监测及标本采集方法
4、透析液微生物监测
•检测方法：用无菌吸管吸取透析液进出水各2～3ml，放入 无菌试管，检测时可视透析液污染程度分别取原液或10倍稀 释液0.5ml放入2个灭菌平皿内，45 ℃ ～48 ℃的营养琼脂 15～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，将平板置37 ℃培 养24小时，观察结果。
正常人的血液是无菌的，如从患者血液中检出细菌，一般 应视为病原菌（排除采集标本或其他操作过程污染），提 示有菌血症或败血症。
1、采血时间及次数 一般应在抗生素治疗前，发热初期 或高峰时抽血。伤寒患者应在发热一星期内抽血。化脓性 脑膜炎应在发热1～2天内抽血，亚急性心内膜炎的患者除 在发热期采血外，要多次抽血（24小时内3～４次）和增 加抽血量（可增至10毫升）。
环境卫生学监测采样方法
3
➢ 三、采样前的准备 ➢ 1.环境准备 ➢ 2.物品准备：无菌培养皿、无菌生理盐
水试管、无菌棉拭子、1ml注射器（无 菌）、无菌剪刀（刀片）、无菌生理 盐水（支）、无菌手套、酒精灯、打 火机、胶布、笔
4
➢四、采样方法 ➢1.空气采样 ➢⑴采样时间：选择消毒处理后与进行医
疗活动之前采样（室内清洁消毒后1小 时内）。 ➢⑵采样高度：与地面垂直高度80-150cm。
取全部表面，被采面积≥100cm2取 100cm2.
14
➢⑶采样方法：用浸有无菌生理盐 水的棉拭子在被检物体表面来回 涂擦2次（特别是器械 关节）， 剪去手接触部分，将棉拭子放入 装有10ml采样液的试管中送检。
15
➢ 2、使用中消毒、灭菌剂采样 ➢ ⑴采样时间：采取更换前使用中的
消毒、灭菌剂。 ➢ ⑵采样方法：用无菌吸管吸取1ml被
5
➢⑶布点方法：室内面积≤30m2,设 一条对角线上取3点，即中心点、 两端各距墙1m处取点；室内面积 ≥30m2,设东西南北中5点，四边 各点均距墙1m.。
6
➢⑷采样方法： ➢ 用直径9cm的普通培养皿在采
样点暴露（将平皿盖打开，扣 放于平皿旁）5分钟，无菌方法 盖好立即送检。
7
➢ 2、物体表面采样方法 ➢ ⑴采样时间：选择消毒处理后进
环境卫生学 监测采样方法
1
➢环境卫生学监测的目的 ➢检测我们的消毒效果是否达到标
准要求，追询消毒方法是否正确。 ➢规范采样的意义 ➢采集标本准确，无污染，培养结
果准确。
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一、环境卫生学监测项目： 包括空气、物体表面和医务人员手的监 测。
二、我院每月进行环境卫生学监测的部门： 手术室、监护室、产房、婴儿沐浴室、 供应室无菌间、治疗室、配剂室、换药 室等重要部门进行卫生学监测
➢ 三、采样前的准备 ➢ 1.环境准备 ➢ 2.物品准备：无菌培养皿、无菌生理盐
水试管、无菌棉拭子、1ml注射器（无 菌）、无菌剪刀（刀片）、无菌生理 盐水（支）、无菌手套、酒精灯、打 火机、胶布、笔
4
➢四、采样方法 ➢1.空气采样 ➢⑴采样时间：选择消毒处理后与进行医
疗活动之前采样（室内清洁消毒后1小 时内）。 ➢⑵采样高度：与地面垂直高度80-150cm。
取全部表面，被采面积≥100cm2取 100cm2.
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➢⑶采样方法：用浸有无菌生理盐 水的棉拭子在被检物体表面来回 涂擦2次（特别是器械 关节）， 剪去手接触部分，将棉拭子放入 装有10ml采样液的试管中送检。
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➢ 2、使用中消毒、灭菌剂采样 ➢ ⑴采样时间：采取更换前使用中的
消毒、灭菌剂。 ➢ ⑵采样方法：用无菌吸管吸取1ml被
5
➢⑶布点方法：室内面积≤30m2,设 一条对角线上取3点，即中心点、 两端各距墙1m处取点；室内面积 ≥30m2,设东西南北中5点，四边 各点均距墙1m.。
6
➢⑷采样方法： ➢ 用直径9cm的普通培养皿在采
样点暴露（将平皿盖打开，扣 放于平皿旁）5分钟，无菌方法 盖好立即送检。
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➢ 2、物体表面采样方法 ➢ ⑴采样时间：选择消毒处理后进
环境卫生学 监测采样方法
1
➢环境卫生学监测的目的 ➢检测我们的消毒效果是否达到标
准要求，追询消毒方法是否正确。 ➢规范采样的意义 ➢采集标本准确，无污染，培养结
果准确。
2
一、环境卫生学监测项目： 包括空气、物体表面和医务人员手的监 测。
二、我院每月进行环境卫生学监测的部门： 手术室、监护室、产房、婴儿沐浴室、 供应室无菌间、治疗室、配剂室、换药 室等重要部门进行卫生学监测
环境卫生学监测及标本采集方法(PPT 69页)
常用消毒剂中和剂及其浓度表
消毒剂
甲醛
戊二醛
过氧乙酸 含氯消毒剂类
季铵盐类
碘（溴）制剂 酚类 氯已定 汞制剂 醇类 酸类 碱类
中和剂及其浓度
亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 氨水 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）
甘氨酸（1.0%）；赖氨酸 亚硫酸钠（0.1%～0.5%） 双甲酮（0.1%～1.0%）+吗啉（0.6%～1.0%）
正确的微生物标本采集和运送， 是准确的病原学诊断的前提
基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检 5.棉拭子标本宜用运送培养基 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂. 8.送检标本应注明来源和检验目的
正确留取细菌培养的临床标本
2、抽血部位及抽血量 以无菌方法从患者肘静脉、股动 脉采血。采血量以培养基的1/10为宜，成人一次采血5～ 10ｍｌ，婴儿为1～2ｍｌ，血液抽出后，立即以无菌手续 注入血培养瓶，充分混合后送检。
采血培养前质量保证: 静脉穿刺程序 1.70%酒精擦拭静脉穿刺点 >30秒钟 2.1%2%碘酊30秒或10%碘伏消毒60秒,从穿刺点
三、医院各重点部门空气，物体表面，医护人员手 细菌数标准。
环境类别
范围
标准
空气
物体表面 医务人员手
（cfu/ m3） （cfu/ cm2） （cfu/ cm2）
I类
层流洁净手术室、层流洁净
病房
≤10
≤5
≤5
普通手术室、产房、新生儿室
（母婴同室病房）、早产儿室、
II类
普通保护性隔离室、供应室无 ≤200