单细胞藻类的培养共50页文档
贝类育苗单胞藻培养技术
2013.6饲料与添加剂辽东学院农学院 罗永成贝类育苗单胞藻培养技术随着贝类人工育苗技术的发展，单胞藻饵料的培育已成为育苗过程中的关键技术。
在贝类人工育苗过程中，需要培养大量的优质单胞藻作为幼体贝的饵料。
单胞藻培养的好坏，直接影响育苗的成败。
一、一级培养（保种室）1．培养设施 为在贝类人工育苗季节保存高纯度的优质藻种，育苗厂应具备专用的保种室，其面积大小依据规模而定。
保种室四面用玻璃窗采光，并加装人工光源，以备阴雨天光线不足时使用。
若是透明玻璃钢瓦屋顶的保种室，则在夏季高温时，会因光线太强和室温过高而抑制单胞藻生长，甚至“烫死”单胞藻，因此屋顶应设遮光设施。
室内应配有温度计，保种常用5000毫升三角烧瓶，用煮沸过滤海水。
保种室应储备以下用品，酒精棉、脱脂棉、筛绢网（300目）、显微镜、滤纸等器材，另在保种室旁配置专门的配药房，面积根据实际情况而定，保持配药房整洁干净。
2．培养条件 保种时每天需摇瓶3～4次，防止菌膜产生。
培养架上安装日光灯做光源，以备自然光不足时补充，强光照射用白窗帘遮光。
保种室的温度应控制在单胞藻的适温范围内，一般在北方应具备升温设施，使硅藻保持在16～18℃，金藻保持在20～22℃。
3．培养方法和步骤 培养容器内外先用稀H C剂清洗，再用淡水冲洗。
用300目的筛绢网把脱脂棉包裹在内过滤海水，然后用淡水冲去瓶外的生海水，放在电炉上加热消毒，海水煮沸后停5分钟至水泡消失，然后再加热煮沸，至水泡消失。
这样对细菌和原生动物的杀灭比较彻底，冷却备用。
4.营养盐 金藻、硅藻营养盐配方：分别配制甲液和乙液，然后按比例进行混合后使用。
甲液配方：三氯化铁6克、氯化锰1.5克、硼酸150克、钠盐220克、硝酸钠500克、硫酸二氢钠200克、微量金属溶液5毫升、蒸馏水5000毫升；乙液配方（微量金属溶液）：氯化锌4克、氯化钴3克、钼酸铵1.5克、硫酸铜1.5克、蒸馏水200毫升。
将消毒冷却后的甲液与乙液按100∶1的比例混合，如果培育金藻每1000毫升营养液需加入维生素B 1（0.1克/支）和维生素B 12（0.5毫克/支）各一支。
细胞藻类培养
因为：藻种培养在室内，培养容器为玻璃瓶。防止污染条件较好。
只要藻种级没有敌害生物污染，扩大培养到水池，生产周期短，就是发生污染敌害生物还需要一段生长、繁殖时间才能达到一定数量，所以影响不大。
（六）防治敌害生物的措施
首ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ接种的藻种最好取自指数生长期。
接种量大，从培养开始培养藻液在培养液中即占数量上的绝对优势。
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②保持培养藻液的生长优势和数量优势
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在培养过程中，严格防止污染是重要的，但从目前单细胞藻类的培养水平看，绝对防止敌害生物污染是不可能的，
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要根本的解决这个问题，就必须不断的补充新的“纯”藻种来取代在长期培养过程中已经受污染的藻种，这才可能使培养较好的顺利进行。
③做好藻种的分离、培养和供应工作
第二章 单细胞藻类培养
第二章 单细胞藻类培养
一、单细胞藻类的种类与生物特性 （一）单细胞藻类培养的种类 常用的饵料微藻主要有： 牟氏角毛藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体； 三角褐指藻：虾、蟹、海参、海胆的幼体、种贝； 中肋骨条藻：虾、蟹幼体； 底栖舟形藻：鲍、海参、海胆、埋栖贝类、舔食螺类的附着幼体； 底栖卵形藻：同上； 等鞭金藻：贝、虾、蟹、海参、海胆的幼体； 亚心形四片藻：轮虫、卤虫、种贝及虾的后期幼体； 海水小球藻：同上； 钝顶螺旋藻：虾、蟹幼体及配合饲料的添加剂；
水样采回后，进行显微镜检查，如果发现有需要分离的藻种，而这种藻种的数量较多时，可立即进行分离，若数量少，必须先经过预备培养，待数量增多后再分离。
二、藻种的分离
（二）预备培养
1、容器： 通常采用三角烧瓶。 2、培养液： 各种藻类的培养液存在差异。 土壤抽出液Ⅰ:取土壤1kg，加纯水1000ml，煮沸60min，在暗处放置2d，过滤，以滤液600ml加纯水400ml。 土壤抽出液Ⅱ：取土壤1kg，加纯水1000ml，再加入NaOH2-3g，煮沸120min，冷却后过滤，滤液直接使用。 土壤抽出液Ⅲ：取土壤1kg，加纯水2000ml，煮沸煎浓，把上部泥浆倾入烧瓶中澄清，静置一昼夜后，次日吸取上清液，再煮沸煎浓。第三天在如法煎浓，最后倾入三角烧瓶中，加棉花塞，煎浓，直至得到1000ml的深褐色的土壤抽出液。每次使用后，煮沸灭菌保存。
单细胞藻类的培养方法
单细胞藻类的培养方法周德山1 胡希亮1 李茂才2(1.连云港市海洋环境检测中心,江苏连云港 222042;2.连云港市海洋与渔业局,江苏连云港 222100)单细胞藻类与我们的水产养殖息息相关,不同的单细胞藻类品种及组成使养殖水体表现出不同的颜色。
单细胞藻类是鱼、虾、蟹、贝类等的直接或间接饵料;水体中单细胞藻类的优劣决定了鱼、虾、蟹、贝类等生态环境的好坏。
在水体中培养单细胞藻类有多种方法,笔者将其总结如下:1 培养单细胞藻采用不同的接种方式1.1 在自然水域中直接培养单细胞藻 在目前的大部分池塘养成及部分鱼、虾、蟹、贝类等育苗过程中,直接利用自然淡水或海水培养单细胞藻。
经过滤的海水或淡水里有硅藻、绿藻等各种单细胞藻;有轮虫、桡足类、枝角类等各种浮游动物;有多种小型底栖动物等,利用繁殖自然水体里本身就有的单细胞藻,促进浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的生长繁殖,是目前水产养殖过程中,较为常见的基础饵料生物的培养方法。
自然繁殖单细胞藻的时间要根据生产需要而定,其标准为鱼、虾、蟹、贝类等动物育苗开始后,或者其苗种投放池塘后,育苗幼体或投放的苗种要有适宜的生长发育环境,要有充足的生物饵料吃。
虾、蟹、鱼、贝类等的池塘养成,一般在放养苗种半个月前,开始施肥繁殖单细胞藻,根据水色、透明度调节施肥量及施肥次数,一般将水色调节为黄色或黄褐色,透明度为30~50c m。
水色及透明度不同,单细胞藻的品种组成及密度不同,不同的养殖品种及同一品种的不同发育阶段,对水色及透明度的要求不一样。
在虾、蟹、鱼、贝类等的养殖过程中,要始终保持水质的肥、活、嫩、爽,使虾、蟹、鱼、贝类等水产养殖动物,生活在一个良好的生态环境中。
1.2 使用封闭或半封闭方式定向培养单细胞藻 在大部分的海产动物育苗及一些生态高效养成过程中,使用封闭或半封闭的纯种单细胞藻的三级培养。
如近几年,河蟹土池育苗已兴起热潮,海水的鱼类、贝类、虾类等各种土池育苗也已开始,土池育苗的关键,就是在池塘里繁殖优质的充足的单细胞藻,促使以单细胞藻作为饵料的各种浮游动物、底栖动物等基础饵料生物的大量生长繁殖。
单细胞藻类培养技术
单细胞藻类培养技术单细胞藻类培养技术是一种重要的生物技术，它可以被应用于多个领域，如生物燃料、食品工业和生态保护等。
本文将从单细胞藻类的特点、培养条件、培养方法以及应用领域等方面进行阐述。
单细胞藻类是一类由单一细胞组成的微型藻类，它们可以在自然环境中广泛分布，包括海洋、淡水、土壤等。
单细胞藻类具有很高的生物多样性，包括绿藻、蓝藻、硅藻等。
与其他藻类相比，单细胞藻类具有生长快、容易培养、生长周期短等优点，因此在科学研究和工业应用中具有广泛的应用前景。
单细胞藻类的培养条件是关键的，它们需要适宜的光照、温度、营养物质等。
光照是单细胞藻类生长的重要因素，它们需要充足的光照才能进行光合作用。
通常情况下，单细胞藻类的光照强度应该在10000-20000勒克斯。
温度也是单细胞藻类生长的重要因素，不同种类的单细胞藻类对温度的适应性不同，但通常在20-30℃之间生长最佳。
此外，单细胞藻类还需要适宜的营养物质，如氮、磷、钾等。
这些营养物质可以通过添加富含这些元素的培养基来提供。
单细胞藻类的培养方法包括传统培养、自然培养和高密度培养等。
传统培养是指将单细胞藻类放置在含有足够营养物质的培养基中，通过适当的光照和温度来进行培养。
这种方法适用于小规模的实验室培养。
自然培养是指将单细胞藻类放置在自然环境中进行培养，通常用于单细胞藻类的采集和筛选。
高密度培养是指通过增加培养密度来提高单细胞藻类的生产效率。
这种方法通常需要使用封闭式光合反应器，并控制光照、温度、二氧化碳等因素。
单细胞藻类的应用领域广泛，其中最重要的应用领域之一是生物燃料。
单细胞藻类具有高效的光合作用和生长速度，可以生产出大量的油脂和碳水化合物，这些物质可以被用于生产生物柴油和生物乙醇等。
此外，单细胞藻类还可以被应用于食品工业，如螺旋藻、衣藻等可以被用于制作蛋白粉、饮料和健康食品。
另外，单细胞藻类还可以被用于生态保护，如蓝绿藻可以用于污水处理和环境修复。
单细胞藻类培养技术是一项重要的生物技术，可以被应用于多个领域。
单细胞藻类的培养(3)3+6h
水生4号
（NH4）2SO4 Ca(H2PO4)2·H2O+2（CaSO4·H2O） MgSO4·7H2O NaHCO3 KCl FeCl3（1％） 土壤浸出液 水 0.200g 0.030g 0.080g 0.100g 0.025g 0.150mL 0.500mL 1000mL
2．浮游硅藻培养液 浮游硅藻培养液
水生硅1（ 水生硅 （mg/Ｌ） Ｌ）
硝酸氨 磷酸氢二钾 氯化钙 硅酸钠 土壤浸出液 水 120 硫酸镁 70 40 磷酸二氢钾 80 20 氯化钠 10 100 柠檬酸铁 5 20 硫酸锰 2 1000mL pH 7.0
水生硅2（ 水生硅 （mg/Ｌ） Ｌ）
尿素 过磷酸钙 硫酸镁 硫酸锰 EDTA－铁 150 50 50 3 1mL 氯化钾 30 硅酸钙 100 碳酸氢钠 3 土壤浸出液 4mL 水 1000mL
2、稀释法：该法源于中野治房（1933）的方法。用已 、稀释法 消毒试管5只，在第一管盛蒸馏水10mL，第2～5管都装 5mL，用高压蒸汽消毒，待冷却后，第1管用滴管滴入混 合藻液1～2滴，充分振荡，使均匀稀释。次用消毒吸管， 从第1管中吸取5mL滴入第二管中如前振荡，使均匀稀释。 以后依次同样滴入第3～5管，并都充分均匀稀释。然后 把五个已盛又消毒的琼胶培养基培养皿，加热使之溶解， 待冷却而尚未凝固时，分别滴入五个试管的藻液各一滴， 用力振荡，使藻液充分混于培养基中。待冷凝后，把五 个培养皿放在受着漫射光窗口，一直到出现藻群时为止。 在20℃左右时，约10天即出现藻群。用消过毒的白金丝 取些藻群，进行琼胶固体培养基的不通气培养。此过程 反复多次，直至得到完全分离的纯藻种群为止。 此法稀释要使用较多容器分组培养，比较麻烦，但 较易成功。
单胞藻培养
保种多用100ml的三角烧瓶，开始扩种时， 培养容器逐步扩大。 100ml 250ml 500ml 3000ml 5000ml 三角烧瓶的优点是瓶口小，不易落入孢子， 不易被污染。可以煮沸消毒，也可以在烘箱 中消毒。
（3）培养室和培养池
培养室是进行中继培养和大量培养的场所。 培养室要求光线充足，一般采用投光率80％ 左右的玻璃钢瓦覆盖，四周墙壁均开设大面 积的玻璃窗。房子四周应通风、宽畅，避免 背风闷热。 培养室内主要设施有培养池、培养容器和操 作工具等。
2 、水的消毒
培养单胞藻用水必须经过严格的消毒，以防 敌害生物的污染。通常在选择消毒方法时， 必须考虑以下几个方面： ①能够达到杀灭敌害生物的目的； ②经消毒处理后的水必须无毒，对藻类的生 长、繁殖无不良影响或影响不大； ③对三级培养所采取的方法必须能够在有限 时间内对大量水进行消毒而不影响生产； ④消毒方法必须经济、简单、易行。
④漂白粉Ca（ClO）2：又称氯石灰，在水中释 放氯气和初生氧，有强杀菌作用。成本低，消毒 也比较彻底，是生产上二、三级培养池和大型容 器、工具常用的消毒方法。 工业用漂白粉一般含有效氯30～35％，消毒时 按100～300ppm的有效氯含量配成水溶液，容 器、工具浸泡30min以上，消毒水冲洗2～3次 即可；培养池消毒，用高浓度浆糊状洒淋池壁， 半小时后用消毒水冲洗干净。 市售漂白精一般含有效氯70％，比漂白粉高一倍， 其使用参照漂白粉。
第四节
单细胞藻类的培养方式和设 备
1、培养方式
按培养的场所分室内培养和室外培养 按培养基的形态分固体培养和液体培养 按培养的纯度分纯种培养和单种培养 按藻液的流动情况分静止培养和循环流动水培养 按气体交换情况分充气培养和不充气培养 按采收方式分一次培养、连续培养和半连续培养 按藻液与外界接触程度分封闭式培养和开放式培养 按培养规模和目的分小型培养、中继培养和大量培 养
1单细胞藻类的培养4-26
藻种的数量：保证高比例接种
藻种级培养时的藻种量与培养液量之比为 1∶2-1∶4 中继培养和生产性培养的接种比例一般不 小于1∶10-1∶20
镜检 将采回的水样进行镜检，如果发现有需要分离的藻类，
预备培养 用作预备培养的培养液，各种藻类是不同的，一
般绿藻和硅藻的浓度应小一些，一般只有原配方的1/2、1/3 或1/4。对一些难以培养的藻类一般要加入土壤浸出液。如果
水样中藻类较多，就应该同时使用几种不同的培养液进行培 养，使藻类在适合自己繁殖的培养液中进行生长繁殖
酸、EDTA。
植物生长激素 培养液中加入某些植物生长激素，如赤霉素，可以促
进藻类细胞生长，用量为0.01-0.1mg/l。
藻类培养液制备与配方
根据培养液的性质，藻类培养液可分为无机培 养液和有机培养液
配制无机培养液的原则
离子间相互平衡的培养液，称为生理培养液 在配制原液时，必须使各种盐类完全溶解，不发生沉 淀，原液应该无色透明。 培养液的稀释水，在进行纯培养或科研时用蒸馏水， 在大量生产培养时，用自来水或消毒的海、淡水。 在配制培养液时，配方中常量元素可直接称取或先配 成母液后移取，微量元素通常先配成浓缩1000倍的母 液后移取
高锰酸钾 配成5ppm浓度的高锰酸钾溶液洗涤器皿，也可遍
洒培养池的壁，然后用消毒水冲洗干净。
石炭酸 按3-5%比例配成溶液，将干净的器具在溶液中浸泡
30分钟，再用消毒水冲洗干净。
二 培养液的配制
培养用水的消毒 培养液的成分
配方的选择和营养盐用量的计算
营养盐的添加
1 培养用水的消毒
第四节 单细胞藻类的培养方法
五步法
容器和工具的消毒——培养液的配制——
单胞藻培养
回培养方式
连续培养在国外应用较多，我国目前应用很少。 连续培养在国外应用较多，我国目前应用很少。 国外连续培养两种最普通的方式为“恒浊器” 国外连续培养两种最普通的方式为“恒浊器”和 恒化器” “恒化器”。 恒浊器是人为确定藻液收获密度， 恒浊器是人为确定藻液收获密度，由光电仪器自动 监测，当培养容器中藻细胞超过规定数值， 监测，当培养容器中藻细胞超过规定数值，藻液自 动流出，新培养液同时流入， 动流出，新培养液同时流入，自动化仪器不断调整 流出率，保持藻液细胞密度相对稳定； 流出率，保持藻液细胞密度相对稳定； 恒化器是以一种重要的营养物质（如硝酸盐） 恒化器是以一种重要的营养物质（如硝酸盐）的浓 度为指标，当这种营养物质的浓度降到某一水平时， 度为指标，当这种营养物质的浓度降到某一水平时， 收获一定量的藻液， 收获一定量的藻液，同时加入等量的含有一定数量 的营养物质的培养液， 的营养物质的培养液，保持培养容器中藻细胞生长 率的稳定。 率的稳定。
2、培养设备与设施
单胞藻培养设备与设施主要包括： 单胞藻培养设备与设施主要包括： 工作室 培养容器 培养室与培养池 水处理系统 充气系统
（1）工作室
回培养设备
工作室是饵料培养工作人员进行单胞藻培养经常 性工作的地方，常位于车间的一端。 性工作的地方，常位于车间的一端。 工作室配备显微镜、常用仪器、工具、试剂、 工作室配备显微镜、常用仪器、工具、试剂、药 肥料等； 品、肥料等； 工作室附设一保种间和一清洗消毒间。 工作室附设一保种间和一清洗消毒间。 保种间主要进行藻种的分离、保存和培养等工作， 保种间主要进行藻种的分离、保存和培养等工作， 面积视培养规模而定，一般为10 10～ 配有空调、 面积视培养规模而定，一般为10～20m2，配有空调、 冰箱、具人工光源的培养架等； 冰箱、具人工光源的培养架等； 清洗消毒间，主要供少量海水和容器、 清洗消毒间，主要供少量海水和容器、工具等消 毒用，设有清洗水池、消毒池、灭菌锅、 毒用，设有清洗水池、消毒池、灭菌锅、电炉等 面积一般10 10～ 面积一般10～15m2。