各生理指标实验步骤
各生理指标实验步骤
1丙二醛〔MDA〕含量的测定丙二醛在酸性和高温的条件下，可以和硫代巴比妥酸〔TBA〕反响生成红棕色的三甲川，在532nm处有最大光吸收。
植物组织中可溶性糖与TBA的显色反响产物在450nm和532nm处也有吸收。
测定时要排除可溶性糖的干扰，因此分别测定532nm和450nm处的吸光值，直接求得植物样品提取液中MDA的浓度；MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。
计算公式如下:C(µmol.L-1)=6.45OD532-0.56OD450进一步算出每克样品鲜重中丙二醛的含量〔µmolg-1FW〕。
试剂：10%三氯乙酸〔TCA〕：10g三氯乙酸定容于100ml0.6%硫代巴比妥酸：0.6g用10%三氯乙酸TCA定容于100ml试验步骤:〔1〕取植物材料用液氮迅速研磨成粉，取0.2g左右材料，放入5ml离心管内。
〔2〕参加5ml 10%的三氯乙酸，提取30min后，10000r/min离心15min。
〔3〕取上清液2ml，参加2ml 0.6%TBA，混匀，在100℃水浴中煮15min，冷却，冷却后再测量。
〔4〕分别测定532nm和450nm处的吸光值。
以2ml〔加TBA,水〕水代替提取液作为对照管。
2蛋白质含量测定----考马斯亮蓝G-250法实验原理：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。
在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质一色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
仪器和试剂：牛血清白蛋白500微克/毫升：10ｍｇ蒸馏水定溶至100ｍｌ考马斯亮蓝G-250：10ｍｇ溶于5ml 90％乙醇中，参加10ml85％的磷酸，用蒸馏水定溶于100ｍｌ操作步骤：1.标准曲线的制作：取4支试管，按下表配制不同浓度的牛血清白蛋白溶液各1毫升,参加5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm 下比色。
人体生命检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在了解人体生命检测的基本原理和方法，掌握常用生命体征的测量技术，提高对人体健康监测的实践能力。
二、实验原理人体生命检测是通过观察和分析人体生理指标来评估人体健康状况的一种方法。
常用的生命体征包括体温、脉搏、呼吸、血压等。
本实验主要测量体温、脉搏和呼吸。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：体温计、血压计、听诊器、秒表等。
2. 实验仪器：电子体温计、电子血压计、心电监护仪等。
四、实验方法1. 体温测量：使用电子体温计测量受试者的口腔、腋下或直肠温度。
2. 脉搏测量：使用电子血压计测量受试者的脉搏，同时观察脉搏的节律和强度。
3. 呼吸测量：使用秒表测量受试者在静息状态下的呼吸频率。
五、实验步骤1. 受试者准备：受试者需保持安静，避免紧张，保持呼吸均匀。
2. 体温测量：受试者取仰卧位，使用电子体温计测量口腔、腋下或直肠温度。
3. 脉搏测量：受试者取坐位，放松手臂，将血压计袖带紧贴受试者上臂，启动电子血压计，测量脉搏。
4. 呼吸测量：受试者取仰卧位，放松身体，使用秒表记录受试者在静息状态下的呼吸频率。
六、实验结果与分析1. 体温测量结果：受试者体温为36.5℃。
2. 脉搏测量结果：受试者脉搏为每分钟80次，节律均匀。
3. 呼吸测量结果：受试者呼吸频率为每分钟16次。
根据实验结果，受试者的体温、脉搏和呼吸均在正常范围内，表明受试者身体健康。
七、实验讨论1. 体温测量结果：受试者体温正常，说明其体内温度调节功能良好。
2. 脉搏测量结果：受试者脉搏正常，说明其心脏功能良好，血液循环正常。
3. 呼吸测量结果：受试者呼吸频率正常，说明其肺部功能良好，气体交换正常。
八、实验总结本次实验通过对人体生命体征的测量，了解了人体生命检测的基本原理和方法。
在实验过程中，我们掌握了体温、脉搏和呼吸的测量技术，提高了对人体健康监测的实践能力。
同时，我们也认识到生命体征的正常与否对评估人体健康状况具有重要意义。
测生理指标的方法
实验路线及安排：项目主要在晋西北地区展开区域化试验，供试品种4个，均为当年生扦插苗,每个品种15株，采用完全随机区组设计进行，其中包括4个处理，3个重复。
所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律，并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行研究探讨。
在每个小区分别选健康植株2株，每株取其中上部位叶片1-2片，组成混合样，编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低温处理，处理温度为0℃、-10℃，-20℃，然后进行抗寒指标测定,每月采样一次。
根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株，挖出其部分根系组成混合样,处理方法同叶片；茎的取样方法为选健康植株10株，取其上部嫩茎组成混合样，处理方法同上。
2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。
低温处理通过相对电导率及相关指标评价其抗寒性；干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理，测定杨树的蒸腾速率和相应指标，评价其抗旱性。
实验方法一．光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定；二．水势（小液流法）1.取10个干净的试管，分成A组和B组，都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签，并向这两组试管中分别移取相应浓度的CaCl2溶液4mL。
2.取待测叶子数片，用打孔器在其上均匀打孔，混匀，将其分别装入A组试管（每支试管装10片），摇匀，滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液，再摇匀。
3.用干净的毛细移液管，吸取1～2滴蓝色溶液，小心的插入装着相同浓度的B组试管中部，轻轻的挤出一滴蓝色溶液，观察蓝色液滴流动方向。
按下公式计算植物组织水势：Ψ=-iRTC式中：Ψ为植物组织水势（MPa）；C为CaCl2溶液的摩尔浓度（mol/L）；R为摩尔气体常数，0.008314MPa·L/mol·K；T为热力学温度（K），即273+t(t为当时摄氏温度)；I解离常数（CaCl2=2.6）三．叶绿素含量（直接浸提法）80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。
生理指标测定实验方案汇总
生理指标测定实验方案汇总预测指标：1.抗氧化酶系统.MDA2. 可溶蛋白.超氧阴离子自由基3.叶绿素.类胡萝卜素4.可溶性糖5.游离氨基酸6.过氧化氢7. 谷胱甘肽.ASA1.抗氧化酶系统.MDA A 酶活测定试剂： PBS缓冲液0.05M （pH7.8）：取0.663g NaH2PO4·2H2O和16.384gNa2HPO4·12H2O，加PVP10g，并加EDTA或者EDTA盐，使其浓度为2mM，加蒸馏水定容至1L。
用前冰箱或冰上预冷。
样品制备鲜样0.1-0.5g加入1 ml磷酸缓冲液（0.05M，pH7.8），稍许石英砂，研磨成匀浆；移入10 ml离心管中，再用4ml磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中；10000×g4℃下离心20 min；上清夜贮于4℃冰箱中保存备测。
同时称取鲜样一份(0.1g左右)烘干称重。
S OD （λ=560nm）试剂配制：1LPBS 缓冲液中加入 Met1.93973g NBT[氮蓝四唑] 0.061323g EDTA-Na2 0.0037224g 核黄素0.00075272g 实验步骤：2.725mL反应液＋250uL蒸馏水＋25uL酶液【样品管】2.75mL反应液＋250uL蒸馏水（光照作为100%CK）【照光对照管】2.75mL反应液＋250uL蒸馏水（黑暗作为调零）【空白调零管】4000lx日光灯下反应20分钟，560nm比色。
反应温度25~35℃。
已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示按下式计算SOD活性：SOD总活性＝（Ack－AE）*V/（0.5*Ack*w*Vt）（式中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示，Ack为照光对照管的吸光度，AE为样品管的吸光度，V为样品液的总体积ml，Vt为测定时样品用量ml，w为样品鲜重g）※※※【空白调零管】可在光反应快结束前配制并用黑色纸或铝箔包裹以避光。
(整理)植物生理指标测定方法
A600—在600nm波长下测得的吸光度值
﹡—1.55×105为摩尔比吸收系数
C糖、CMDA分别是反应混合液中可溶性糖、MDA的浓度。
1.按下式计算提取液中MDA浓度
反应液体积（ml）
CMDA×—————————
1000
提取液中MDA浓度（μmol·ml－1）= ———————————————
四、实验步骤
1、脯氨酸标准曲线的制作
1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～12μg的脯氨酸标准液。加入表中试剂后，置于沸水浴中加热30min。取出冷却。以去离子水溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。
试剂
管号
0
1
2
3
4
5
10μg·ml-1脯氨酸标准液（ml）
蒸馏水（ml）
冰醋酸（ml）
【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取
实验二、
一、原理
植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。若将受伤害的组织浸入无离子水中，其外渗液中电解质的含量比正常组织外渗液中含量增加，组织受伤害越严重，电解质含量增加越多。用电导仪测定外渗液电导率的变化，可反映出质膜受伤害的程度。在电解质外渗透的同时，细胞内可溶性有机物也随之渗出，引起外渗液可溶性糖、氨基酸、核苷酸等含量增加，氨基酸和核苷酸对紫外光有吸收，对紫外分光光度计测定受伤害组织外渗液消光值，同样可反映出质膜受伤害的程度。用电导仪法和紫外法测定结果有很好的一致性。
二、原理
磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
植物生理指标测定的实验方法简介
1. 材料与方法1.1 材料处理生菜，选取整齐、质地脆嫩、颜色翠绿或深绿，且无腐烂、无虫食的作为实验试材。
适当剥去外部一些受损苞叶，使其大小整齐一致，将生菜用0.02%次氯酸钠浸泡3min,晾干水分后，五棵作为一个实验组，用塑料袋包装，分别在-4℃，0℃，4℃以及室温下贮藏。
每隔2d 测定一次贮藏生菜的生理指标，贮藏期间相对湿度为70%。
1.2实验使用的化学试剂碳酸钙粉（石英砂），80%的丙酮；1mg.ml -1葡萄糖标准液，3，5-二硝基水杨酸试剂；去离子水；0.6%的硫代巴比妥蒜（TBA ），10%的三氯乙酸（TCA ）;0.2mol/L PH=7.0的磷酸缓冲液,0.1mol/L H 202溶液; 0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液, 提取介质（0.05mol/L PH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮）,130mmol/LMet 溶液, 750umo1/L NBT 溶液, 100umol/L EDTA 溶液，20umo1/L 核黄素，蒸馏水；质量分数2% H 202溶液，pH5.5磷酸缓冲液，0.05mol/L 愈创木酚，20%的三氯乙酸（TCA ）；pH5.5磷酸缓冲液，20%的三氯乙酸（TCA ）, PVP ，0.1mol/L 儿茶酚；1.3实验的仪器设备天平，分光光度计，水浴锅，离心机，研钵，打孔器，烧杯，容量瓶，移液管，试管，漏斗，滤纸，光照箱，培养箱，冰箱，电导仪，1.4实验方法1.4.1失重率采用差量法计算。
失重率（%）=(入贮前重量一贮藏后重量)/入贮前重量×100%1.4.2叶绿素含量叶绿素含量的测定采用分光光度比色法[1]。
取0.5g 生菜叶片研磨，加少量的碳酸钙粉及80%丙酮进行研磨，匀浆过滤后用80%的丙酮定容至15ml ，以80%的丙酮作对照，在分光光度计上测定665nm,649nm, 470nm 处的光密度值。
以Amon 法公式计算叶绿素的含量。
植物生理学中各项生理指标的测定方法
一.实验内容实验1 MDA(丙二醛)含量测定所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯） 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2：可溶性蛋白含量测定所需试剂：考马斯亮蓝G-250 95%乙醇 85%磷酸实验3：SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂：dl-甲硫氨酸（Met） NBT EDTA-Na2 核黄素实验4：CAT(过氧化氢酶)活性（过氧化氢酶）测定所需试剂：PBS（PH=7.0） 30% H2O2实验五：Apx(抗坏血酸过氧化物酶)活性（即ASA—POD活性）测定所需试剂：ASA（分子量167.12） (乙=胺四乙酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6： ASA(维生素C)含量测定偏磷酸 95%乙醇磷酸 4% 2,2-二联吡啶 FeCl3（或FeCl3·6H2O）实验7：GSH(谷胱甘肽, 媚力肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合而成的三肽化合物)含量测定所需试剂：NaH2PO4·2H2O DTNB（二硫代硝基苯甲酸） PBS (PH6.8)实验8：脯氨酸测定所需试剂：磺基水杨酸甲苯茚三酮冰乙酸 85%磷酸试验9：叶绿素含量测定。
80%丙酮试验9：GR活性测定试验10：过氧化氢含量测定。
三氯乙酸试验11：超氧阴离子含量测定二．酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂：50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）(内含1% (m/v) 聚乙烯吡哆烷酮PVP），0.1mmol/L EDTANa2或EDTA)，也可为（内含2% (m/v)PVP），0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA）（先配制后用缓冲液定容）2. ASA . GSH母液提取所需试剂：5%偏磷酸1．抗氧化酶酶液提取（SOD.POD.CAT）：1g（根据样品的量,少的可以适当减少）叶片加入预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液（PH=7.8）↓4℃冷冻15000g离心20分钟↓上清液即为酶液（5℃下保存一两天内备用，中短期用-20℃保存）2．ASA . GSH母液提取：0.1g叶片加入3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离心10分钟↓上清液即为母液（5℃下保存备用）（偏磷酸可显著沉淀蛋白质和保护ASA）酶液提取所需试剂：PVP（聚乙烯吡哆烷酮）：1%（1g溶于100ml水），1000ml需称取10g，此处用PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏水)，此处用PBSPBS（缓冲液）配制方法：① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g，蒸馏水定容至1L，取② 31.21g定容至1L，放置4℃冰箱备用PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释至400ml （0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V）母液提取所需试剂：5%偏磷酸：称5g纯偏磷酸，定容至100 ml蒸馏水（需加热溶解，温度在50-60℃）偏磷酸有剧毒（偏磷酸难溶解，先得用研钵提前研碎，后用磁力搅拌器溶解一到两天后再定容）（现所用为38%HPO3，所以需称65.7895g，定容至500ml）三．实验步骤实验1：MDA含量测定1.1所需试剂：10%三氯乙酸（TCA）（纯）称10g定容至100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g用10%TCA定容至100ml（配制时，可一次完成，先配TCA，不要定容，再加入硫代巴比妥酸，然后定容，若难溶解，可以在磁力搅拌器上微热）1.2步骤：取0.3g叶片，加4ml磷酸缓冲液研磨，加入 4ml 0.25%的硫代巴比妥酸（溶于10%的三氯乙酸）溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离心15分钟↓取上清测定 OD532，OD600，OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×（OD532-OD600）-0.56OD450 (μmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量（μmol/g FW）= [4×（MDA浓度x）×10-3/0.1]同时，可测得可溶性糖含量（m mol/g FW）= 4×（可溶性糖浓度χ）×10-3/0.1（用多波长测定，在测定之前一定要矫正基线，公式中的参数可以直接在分光光度计上输入）注意：以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空白调零MDA含量测定的改进1.可以用做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量，用量可以定为1.0、1.5或2.0（较好）ml。
植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。
二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。
把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。
四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663 – 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663 +20.29⨯OD645) V/1000*W按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663 – 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663 + 17.95⨯OD645) V/1000*W 注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1丙二醛（MDA）含量的测定丙二醛在酸性和高温的条件下，可以和硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲川，在532nm处有最大光吸收。
植物组织中可溶性糖与TBA的显色反应产物在450nm和532nm处也有吸收。
测定时要排除可溶性糖的干扰，因此分别测定532nm和450nm处的吸光值，直接求得植物样品提取液中MDA的浓度；MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。
计算公式如下:C(µmol.L-1)=6.45OD532-0.56OD450进一步算出每克样品鲜重中丙二醛的含量（µmolg-1FW）。
试剂：10%三氯乙酸（TCA）：10g三氯乙酸定容于100ml0.6%硫代巴比妥酸：0.6g用10%三氯乙酸TCA定容于100ml试验步骤:（1）取植物材料用液氮迅速研磨成粉，取0.2g左右材料，放入5ml离心管。
（2）加入5ml 10%的三氯乙酸，提取30min后，10000r/min离心15min。
（3）取上清液2ml，加入2ml 0.6%TBA，混匀，在100℃水浴中煮15min，冷却，冷却后再测量。
（4）分别测定532nm和450nm处的吸光值。
以2ml（加TBA,水）水代替提取液作为对照管。
2蛋白质含量测定----考马斯亮蓝G-250法实验原理：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。
在一定蛋白质浓度围，蛋白质一色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
仪器和试剂：牛血清白蛋白500微克/毫升：10ｍｇ蒸馏水定溶至100ｍｌ考马斯亮蓝G-250：10ｍｇ溶于5ml 90％乙醇中，加入10ml85％的磷酸，用蒸馏水定溶于100ｍｌ操作步骤：1.标准曲线的制作：取4支试管，按下表配制不同浓度的牛血清白蛋白溶液各1毫升,加入5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm 下比色。
做出标准曲线。
管号 1 2 3 4蛋白质含量(微克) 0 50 100 150500微克/毫升牛血0 0.1 0.2 0.3清白蛋白量（毫升）蒸馏水量(毫升) 1.0 0.9 0.8 0.7考马斯亮蓝-G250 5 5 5 5（毫升）2.样品中可溶性蛋白质的提取测定：称取植物叶片0.2克，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，过滤，取滤液l.0ml(视蛋白质含量适当稀释)于试管中，加入5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm下比色，以空白管调零，测定吸光度。
根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。
3.结果计算样品中的蛋白质含量(mg/g)=(C·Vt)/(1000Vs·WF)式中：C--查标准曲线值（ug）Vt一提取液总体积(ml)WF一样品鲜重(g):Vs一测定时加样量(ml)。
3脯氨酸（Pro）含量的测定药品：3%的磺基水酸：3g 磺基水酸溶在100ml水中。
2.5%酸性茚三酮显色液：冰乙酸和6mol/l磷酸以3：2混合，作为溶剂进行配制：即2.5g茚三酮溶解在 60ml冰乙酸和40ml磷酸中，磷酸是16.4ml和23.6ml 水中。
脯氨酸标准溶液：称取25mg脯氨酸，用蒸馏水定溶至250ml。
1.标准曲线制作（1）取4支具塞刻度试管按下表加入各试剂。
试管号0 2 4 6脯氨酸标准溶液(ml) 0 0.2 0.6 1.0水（ml） 1.0 0.8 0.4 0冰乙酸（ml） 1 1 1 1茚三酮显色液（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5脯氨酸含量（µg）0 2 6 10混匀后在沸水中加热20min。
（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。
静置待分层后吸取甲苯层以0号管为对照在520nm波长下比色。
（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。
2.样品提取测定（l）提取：剪碎叶片0.2g，置于大试管中，加入5m1 3%磺基水酸溶液，管口加盖保鲜膜，于沸水浴中浸提l0 min。
（2）取出试管，待冷却至室温后，吸取上清液2ml，加2m1冰乙酸、2m1水和4ml显色液，于沸水浴中加热40min，下步操作按标准曲线制做方法进行甲苯萃取和比色。
以甲苯为对照从标准曲线中查出测定液中脯氨酸浓度，按下式计算样品中脯氨酸含量脯氨酸含量（µg•g-1）（鲜重）＝（C·V）·（a·W）-1式中：C一提取液中脯氨酸含量，由标准曲线求得；V一提取液总体积（ml）；a一测定时所吸取的体积（ml）：W一样品重（g）4相对电导率的测定1.取已处理的叶片,用打孔器取小圆叶片20片（或称取0.5克）,放入小烧杯中，每个处理三次重复。
2．向烧杯中各加入25ml蒸馏水浸半小时。
3．用电导仪测各个处理松针外渗液的电导率和蒸馏水电导率。
4. 各烧杯用保鲜膜盖上，于水浴锅中沸水浴半小时，冷却补充蒸馏水25ml，测定煮沸电导率。
令测蒸馏水电导率叶绿素含量的测定：丙酮乙醇混合法1 将丙酮、无水乙醇按照1:1=5ml:5ml比例配成混合浸提液。
2.称取0.2克叶片，剪成细丝于盛有混合液的试管中，加保鲜膜盖于暗处，浸提，隔一定时间观察浸提情况，以材料完全变白为准，用混合液作空白调零，测定663nm、645nm处光密度，一般隔夜测定。
1取叶片剪碎0.2克，用少量80%的丙酮研磨至匀浆，过滤，用 80%丙酮定溶至 25ML，测测定663nm、645nm处光密度。
每次测量做3次重复。
4超氧化物岐化酶活性（SOD ）的测定SOD其中:A CK :照光对照管的吸光度 A E :样品管的吸光度V T :提取的酶液总体积 Vt :反应时所用酶液体积 W F :植物材料的鲜重试剂：（1） 磷酸缓冲液pH=7.8：含1%聚乙烯毗咯烷酮PVP 微量取A:Na 2HPO 4溶液91.5ml, 取B ：NaH 2PO 4溶液8.5ml ，稀释至200ml 即为缓冲液。
A:Na 2HPO 4溶液：Na 2HPO 4 12H 2O 71.64g, 用蒸馏水定溶至1000ml.B ：NaH 2PO 4溶液：NaH 2PO 4 2H 2O31.2g, 用蒸馏水定溶至1000ml.（2） 0.013mol/L 甲硫氨酸溶液(Met)：称取1.9399gMet,用磷酸缓冲液溶解并定溶至100ml. 自配（3） 6.3×10-6氮蓝四唑（NBT ）:称取0.06133gNBT ，用磷酸缓冲液溶解并定溶至100ml,避光保存。
自配（4） 6.5×10-6mol L -1核黄素：称取0.0075g 核黄素，定溶至100ml,避光保存，随用随配。
自配（5） 1×10-4molL -1乙二胺四乙酸钠EDTA-Na 2: 0.003721g 用磷酸缓冲液溶解并定溶至100ml.反应液： 0.3ml ----0.013mol/L 甲硫氨酸，0.3ml----63×10-6氮蓝四唑，0.3m l----1×10-4molL -1乙二胺四乙酸钠, 2.4ml ----磷酸缓冲液, 0.5ml ----蒸馏水H 2O ， 总计3.8ml 。
试验步骤:（1）取植物材料0.2g 用磷酸缓冲液迅速研磨成粉，放入5ml 离心管。
（2）加入5ml 磷酸缓冲液，提取30min 后，在4℃下10000r/min 离心15min 。
（3）取上清液0.1ml 放在试管中，加反应液，加0.3ml 核黄素，于30℃、4级光照培养箱反应7-8min 。
（4）立即测定560nm 处的吸光值。
另准备2个管，一个黑暗作为调零，一个作为对照照光。
加入如下试剂（0.1ml 缓冲液，3.8ml 反应液,加0.3ml 核黄素）。
注意： 做之前先做几个，看看酶液浓度，切勿大量做。
过氧化物酶活性（POD）的测定磷酸缓冲液（100mmol/L PH=6）配制: 12.3ml Na2HPO4和87.7ml NaH2PO4混合，稀释至200ml。
Na2HPO4和NaH2PO4配法与SOD一样。
反应混合液: 100mmol/L磷酸缓冲液100ml，加入愈创木酚56微升，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解，待冷却后加入30% H2O238微升，混合均匀，保存于冰箱中。
酶活性的测定:取2只比色杯，一只中加入反应混合液3ml, 磷酸缓冲液 1ml 作为校零对照，另一只加入反应混和液3ml,上述酶液1ml ,立即开动秒表计时，与分光光度计470nm波长下测量值，每隔1min读数一次，以每分钟OD变化值表示酶活性的大小，POD活性 = OD470·Vt /w·vs·t·0.01OD470 –反应时间吸光度的变化W –叶片鲜重gt---反应时间minVt 提取液总体积Vs 测定时取用酶液体积CAT过氧化氢酶的测定粗酶液 0.2ML 加 PH7.8的缓冲液1.5ML，加蒸馏水1ML ，于25度预热10min，加 0.3ml 0.1mol/l H2O2,立即计时比色，240nm下测定，每隔1min 读数一次，4min.0.1mol/l H2O2配制：取30%的H2O2溶液5.6ml,用蒸馏水稀释至1000ml.4抗坏血酸（维生素c）含量的测定--滴定法维生素c具有很强的还原性，染料2,6-二氯酚靛酚具有较强的氧化性，在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此当用蓝色的碱性2,6-二氯酚靛酚溶液滴定含有抗坏血酸的草酸溶液时，其中的抗坏血酸可以将2,6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型。
但当溶液中的抗坏血酸完全被氧化之后，则再滴2,6-二氯酚靛酚就会使溶液呈红色。
借此可以指示滴定终点，根据滴定用去的标准2,6-二氯酚靛酚溶液的量，可以计算出被测样品中抗坏血酸的含量。
植物材料：试剂： 2%草酸:2，6-二氯酚靛酚溶液：50mg2，6-二氯酚靛酚溶解于200ml含有52mg的NaHCO3 的热水中，冷却后，稀释至250ml.标准抗坏血酸溶液：50mg抗坏血酸溶解于少量的2%的草酸溶液中，然后用2%草酸定溶至500ml.操作方法：（1）称取样品10g，放在研钵中加入2%草酸溶液研磨，定容100 ml，过滤，滤液备用。
（2）染料的标定：取10 ml标准抗坏血酸溶液至蒸发皿中，以2，6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并在30s不褪色为终点。
计算l ml染料相当于抗坏血酸的毫克数（重复2次，取平均值）。
（3）样品滴定：取滤液10 ml于蒸发皿中，用已标定过的2，6—二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并且在30s不褪色为止，记下染料的用量（重复2次，取平均值）。