2.植物硝态氮的比色测定
植物体内硝态氮含量的测定
实验二植物体内硝态氮含量的测定实验目的：掌握比色法测定硝态氮含量。
实验原理：在浓酸条件下，NO3－与水杨酸反应，生成硝基水杨酸。
生成的硝基水杨酸在碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸收峰的波长为410nm，在一定范围内，其颜色的深浅与含量呈正比，可直接比色测定。
实验仪器：可见分光光度计、天平（感量0.1 mg）、20 mL刻度试管、50 ml容量瓶、小漏斗、玻棒、洗耳球、水浴锅、封口膜、滤纸、移液管。
植物材料：菠菜试剂：500 mg/L 硝态氮标准溶液；5% 水杨酸－硫酸溶液；8% 氢氧化钠溶液。
实验注意事项：1.一定不要将5%水杨酸－硫酸溶液溅到桌面、试管外或衣物及皮肤上。
2.加热煮沸时要小心，以免烫伤。
实验内容：1.标准溶液配制吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液2、4、6、8、10 ml分别放入50 ml 容量瓶中，用去离子水定容至刻度，使之成20、40、60、80、100 mg/L的系列标准溶液。
2.样品中NO3－的提取取一定量的植物材料，剪碎混匀，用天平精确称取材料2 g ，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。
到时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。
3.反应吸取上述系列标准溶液和样品提取液各0.1 ml，分别放入烘干的试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。
再分别放入0.4 ml 5%水杨酸－硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20 min后，再加入8% NaOH溶液9.5 ml，摇匀冷却至室温。
则显色液总体积为10 ml。
4.绘制标准曲线以空白作参比，在410 nm波长下测定吸光度。
以硝态氮浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
5.样品中NO3—含量的计算在标准曲线上查得或用回归方程计算出硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含量。
NO3－－N含量= (C×V/1000 )/W式中C—标准曲线上查得或回归方程计算得NO3－－N浓度；V—提取样品液总量；W—样品鲜重。
植物中硝态氮的测定方法
硝态氮是植物最主要的氮源。
植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供应情况，因此可作为土壤肥氮肥的指标。
测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。
（一）原理在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。
（二）仪器与用具（1）722型分光光度计1台；（2）电子顶载天平1台（感量1/万）；（3）刻度试管20ml26支；（4）刻度吸管0.1ml. 0.5ml. 5ml. 10ml各1支；（5）容量瓶50ml8个；（6）容量瓶25ml3个；（7）小漏斗（∮5cm）3个；（8）玻棒1根；（9）洗耳球1个；（10）电炉1个；（11）铝锅1个；（12）玻璃塞；（13）定量滤纸7cm。
试剂：500ppmNO3-标准溶液精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。
5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml,浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。
置冰箱保存一周有效。
8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1dm3无离子水中即可。
（三）实验步骤1. 标准曲线的制作（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分别放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10. 20、30、40、60、80、100、120、ppm的系列标准溶液。
（2）吸收上述系列标准溶液0.11ml，分别放入刻度试管中，以0.11ml无离子水代替标准溶液作空白，再分别加入0.4ml水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液总体积为101ml。
（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。
实验三 植物营养(铵态氮,硝态氮)
高级植物生理实验报告植物营养农学院农药学东保柱20132020542013年12月27日实验1 植物组织铵态氮含量的测定（茚三酮比色法）一、实验原理植物吸收的氮主要是氨态氮和硝态氮，后者经过还原过程形成氨，前者经同化后形成谷氨酰胺和谷氨酸，然后形成其他氨基酸和蛋白质。
测定氨态氮的方法有多种，本实验为改良的茚三酮比色法。
α-氨基酸与水合茚三酮溶液一起加热，经氧化脱氨变成相应的α-酮酸，酮酸进一步脱羧变成醛，水合茚三酮则被还原，在弱酸环境中，还原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反应，缩合生成蓝紫色物质。
根据蓝紫色的深浅，在580nm 波长下测定吸光值。
本实验中在茚三酮试剂中添加乙二醇并补加正丁醇和丙醇，可以克服茚三酮的不稳定性。
二、仪器设备研钵、烧杯、漏斗、量筒、具塞试管、三角瓶、容量瓶、移液管、天平、沸水浴锅、可见分光光度计三、试剂1. 10%醋酸(100mL)2. 1% 抗坏血酸（100mL）3. 5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液（0.005g定容至1000mL）4. pH5.4醋酸缓冲液：8.8mL 0.2mol/L 醋酸（冰醋酸11.55mL稀释至1000mL）加41.2mL 0.2mol/L醋酸钠（醋酸钠16.4g或三水醋酸钠27.2g 配成1000mL）。
5. 水合茚三酮试剂：1.1g茚三酮放到烧杯中，加入15mL正丙醇，摇匀，溶解，后加入30ml正丁醇和60ml乙二醇，混匀，再加9mL pH5.4醋酸缓冲液，混匀。
保存于棕色瓶中，冰箱保存，适用期限10天。
四、操作步骤1. 标准曲线的绘制以下表所示量从5μg/mL 亮氨酸或丙氨酸溶液中分别取溶液并在每个试管中加蒸馏水至2mL，对照加2mL 蒸馏水，后在各试管中加入3mL 水合茚三酮试剂和0.1mL 1%抗坏血酸，摇匀。
盖上试管塞，于沸水中加热15分钟，取出后搅拌冷却15分钟。
冷却后的有色溶液中加无水乙醇至10mL，在波长580nm 处测吸光值，以铵态氮浓度（μg/mL）为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
植物组织中硝态氮含量的测定
植物组织中硝态氮含量的测定目的意义根系吸收的无机态氮，有铵态氮和硝态氯。
植物体内硝态氮合量可以反映土壤氮素供应情况，常作为施肥指标。
叶菜类和根菜类中常含有大量硝酸盐，在烹调和腌制过程中可转化为亚硝酸盐而危害人体健康。
测定植物组织硝态氮含量对研究植物氮素营养和农产品安全性均有重要作用。
一、实验原理本实验采用硝基水杨酸比色法测硝态氮，其原理是在有浓硫酸的条件下NO3-与水杨酸生成硝基水杨酸。
产物硝基水杨酸在碱性条件下(PH>12)呈黄色，在410 nm处有最大吸收峰，在范围内，其颜色的深浅与含量成正比，可直接比色测定。
二、材料、设备和试剂1.材料玉米、接骨木、瓜类、葡萄等植株幼苗。
2.设备电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、容量瓶、刻度试管、漏斗、滤纸等。
3.试剂（1）100mg/L硝态氮标准溶液精确称取烘干至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水（无离子水）中，定容至1000ml。
（2）5%水杨酸-硫酸溶液称取5g水杨酸溶于100ml浓硫酸中（密度为1.84），搅拌溶解后，贮存于棕色瓶中，置冰箱保存1周有效。
（3）8%氢氧化钠溶液称取20g氢氧化钠溶于250ml蒸馏水中。
三、操作方法1．标准曲线的制作(1)吸取100 mg/L硝态氯标准溶液1m1、2ml、4m1、6m1、8ml、10ml、12m1分别放入10ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，使之成为10、20、40、60、80、100、120µg /m1硝态氮的系列标准液。
(2)取8支试管，分别编号为0-7，以0号管加入0.1ml蒸馏水作空白，1-7号管分别吸取上述系列标准溶液0.1ml。
再分别加入0.4ml 5％水杨酸—硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20min后，再加入8％NaOH溶液9.5ml，摇勾冷却至室温，以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度，以硝态氯含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
见下表。
2．样品制备称新鲜植物组织l-2g研成匀浆，(或称经70℃烘干磨碎过60目即孔径0.25mm筛的干样100mg)装入20m1具塞刻度试管，加无离子水10-20ml，盖紧塞子，置于45℃恒温水浴浸提1h，其间不断摇动，然后过滤或离心(如含色素需脱色)，滤液备用。
植物生理学实验
植物生理学实验课程名称：植物生理学实验名称：植物组织含水量的测定（一）实验属性：基本实验计划时数：3学时教学目标与基本要求：1．掌握植物组织自然含水量和相对含水量的测定方法2．能够利用所学测定方法测定同一植物在不同生态环境下的自然含水量和相对含水量。
实验内容或指导思想：1．自然含水量：⑴求称量瓶重量；⑵求称量瓶与植物样品总重量；⑶将材料烘至恒重；⑷结果计算。
2．相对含水量：⑴同1方法先求材料鲜重；⑵求饱和鲜重；⑶求组织干重；⑷结果计算。
实验教材及参考书：1．张志良，1997。
植物生理学实验指导，高等教育出版社。
2．A.И.耶尔马科夫等著，吴相钰译：1956。
植物生物化学研究法，科学出版社。
实验名称：植物组织渗透势的测定（二）实验属性：基本实验计划时数：3学时教学目标与基本要求：1．学习以质壁分离法测定植物组织渗透势的方法。
2．以所学方法测定不同植物材料的组织渗透势。
实验内容或指导思想：1.配制梯度浓度蔗糖溶液；2.撕取植物材料表皮，浸入不同溶液5—10分钟；3. 显微镜观察确定引起半数以上细胞发生初始质壁分离的浓度和不引起质壁分离的最高浓度；④计算。
实验教材及参考书：1．张志良，1997。
植物生理学实验指导，高等教育出版社。
2．F.H.魏海姆等，中国科学院植物研究所生理生化研究室译：1974。
植物生理学实验，科学出版社。
实验名称：植物组织水势的测定（三）实验属性：基本实验计划时数：3学时教学目标与基本要求：1．学习以小液流法测定植物组织水势的方法；2．运用所学方法测定不同生态环境下植物组织的水势。
实验内容及指导思想：1. 配制浓度梯度蔗糖溶液并将各浓度溶液分为试验组和对照组；2 将植物材料置试验组溶液中30min，并在其中加入甲烯蓝粉末少许，震荡均匀；3 以弯头滴管取蓝色溶液置于相应浓度对照组试管中部，轻轻挤出，观察蓝色液流动向。
4 计算。
实验教材及参考书：1．张志良，1997。
植物生理学实验指导，高等教育出版社。
硝态氮的测定方法
硝态氮的测定方法
硝态氮是污染水体中的重要指标，它是水体中有害物质浓度的重要反映，是水质污染的重要指标之一。
硝态氮的测定对于检测水质污染有重要意义。
硝态氮的测定，可以采用分光光度法、离子选择电极法和高效液相色谱法。
分光光度法是测定硝态氮水体中最常用的方法，原理是利用不同浓度的氮溶液和其他溶液，用比色杯比色，在一定波长的紫外光照射下，当硝态氮的浓度达到一定的程度时，其色度值才能达到一定的标准。
离子选择电极法是测定硝态氮最常用的方法之一，其原理是通过使用离子选择电极来测定水体中硝态氮的浓度，利用电极反应产生的电流大小来确定硝态氮的浓度，从而测
定硝态氮的含量。
高效液相色谱法是一种常用的测定硝态氮的方法，其原理是将待测样品中的硝态氮离子进行分离，然后用高效液相色谱仪进行检测，最终给出硝态氮的浓度。
硝态氮的测定是水质污染的重要指标，它的测定方法有分光光度法、离子选择电极法和高效液相色谱法。
这三种方法各有优缺点，应根据测定要求和检测结果来选择最合适
的方法，以便准确测定硝态氮的含量。
植物体内硝态氮含量的测定
原理
在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应， 生成硝基水杨酸。生成的硝基水杨酸在 碱性条件下（pH>12）呈黄色，最大吸 收峰的波长为量呈正比，可直接比 色测定。
材料、仪器与试剂
植物材料：菠菜 仪器：分光光度计；天平（感量0.1 mg）； 试管；刻度吸量管0.1 ml、0.5 ml、5 ml、10 ml各1支；50 ml容量瓶；小漏斗（ø 5cm）3个； 玻棒；洗耳球；水浴锅；封口膜；7 cm 定量 滤纸若干；
• 在标准曲线上查得或用回归方程计算出 硝态氮的浓度，再用以下公式计算其含 量。 V NO3 -N含量= (C× 1000 )/W • 式中 C—标准曲线上查得或回归方程计 算得NO3- —N浓度； • V—提取样品液总量； • W—样品鲜重。
注意事项：
1、一定不要将5%水杨酸-硫酸溶液溅到桌面、
实验步骤 1. 标准曲线的制作
（1）吸取500 mg/L 硝态氮的标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8 ml、10 ml分别放入50 ml 容 量瓶中，用无离子水定容至刻度，使之成10、20、 40、60、80、100mg/L的系列标准溶液。
(2)吸取上述系列标准溶液0.1 ml，分别放入烘干的 试管中，以0.1 ml 蒸馏水代替标准溶液作空白。再 分别放入0.4 ml 5%水杨酸-硫酸溶液，摇匀，在室 温下放置20 min后，再加入8% NaOH 溶液9.5 ml， 摇匀冷却至室温。则显色液总体积为10 ml。 (3)绘制标准曲线：以空白作参比，在410 nm 波长 下测定吸光度。以吸光度为横坐标，硝态氮浓度 为纵坐标，绘制标准曲线并计算出回归方程。
2.样品中硝酸盐的测定
(1)样品液的制备： 取一定量的植物材料，剪碎混匀， 用天平精确称取材料2 g 左右，放入试管中，加入10 ml 去离子水，用塑料封口，置于沸水浴中提取30 min。到 时间后取出，用自来水冷却，将提取液过滤到25 ml容 量瓶中，并反复冲洗残渣，最后定容至刻度。 (2)样品液的测定： 吸取样品液0.1 ml放入烘干的试管 中，然后加入5%水杨酸-硫酸溶液0.4 ml，混匀后置室 温下20 min，再慢慢加入9.5 ml 8% NaOH溶液，待冷 却至室温后，以空白作参比，在410 nm 波长下测其吸 光度。
比色法测硝酸盐
植物硝酸盐含量的测定（紫外光度法）
一、实验试剂
1. 100mg/L硝态氮标准溶液：精确称取烘至恒重的KNO3 0.7221g溶于蒸馏水中，定容至1000ml。
2. 5%水杨酸─硫酸溶液：称取5g水杨酸溶于100ml比重为1.84的浓硫酸中，搅拌溶解后，贮于棕色瓶中，置冰箱保存一周有效。
3. 8%氢氧化钠溶液：80g氢氧化钠溶于1L蒸馏水中即可。
二、操作步骤
1.样品中可溶性蛋白的提取
取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克分别放入三支刻度试管中，加入10ml 无离子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分钟，到时间后取出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。
2．标准曲线的绘制
分别吸取0.00、10.00、20.00、30.00、40.00、50.00ml标液于50ml试管中定容，配制成浓度分别为0、20、40、60、80、100mg/ml的葡萄糖溶液。
3．可溶性蛋白的测定
吸取0.2ml溶液，加入0.8ml水杨酸，混匀（黄色），置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，在410nm测定吸光度。
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中国海洋大学实验报告
2015年11月02号姓名：白杰专业年级： 2014级生物科学学号： 14050011001同组者：曹昱
课程：植物生理学实验题目：植物硝态氮的比色测定
一、实验目的
学会硝态氮的测定方法，学会分光光度计的使用。
二、实验原理
用蒸馏水将植物组织中的硝酸盐和亚硝酸盐提取出来，加入锌粉将硝酸根还原成亚硝酸根后，与对氨基苯磺酸生成重氮盐，再与α-萘胺结合生成玫瑰红色的偶氮染料，在520nm波长处有吸收峰，并且在一定范围内其颜色的深浅与溶液中硝态氮含量成正比，可以用分光光度法进行测定。
三、仪器试剂
1、仪器及用品
分光光度计，研钵，容量瓶，比色管（50ml），试管，移液管，烧杯，三角瓶（100ml）。
2、试剂
（1）硝酸盐标准溶液：取恒重硝酸钠0.6071g溶于一升水中，配成100μg/ml硝态氮溶液储存于冰箱中（0ºC~5ºC）备用。
（2）20％冰醋酸溶液（V/V）：取20ml分析纯冰醋酸加80ml水。
（3）混合粉剂：含硫酸钡100g，α-萘胺2g，锌粉2g，对氨基苯磺酸4g，硫酸锰10g，柠檬酸75g。
3、实验材料：植物叶柄
四、实验步骤
1、标准曲线的绘制
将硝酸盐标准溶液稀释成0μg/ml，4μg/ml , 8μg/ml，12μg/ml,16μg/ml,20μg/ml 浓度的硝态氮溶液各10ml，摇匀后分别吸取2ml转入到50ml比色管中，加冰醋酸溶液18ml，再加0.4g混合粉剂，剧烈摇动1分钟，静置10分钟，用双层滤纸过滤于洁净的试管中，以蒸馏水作对照，测定其520nm波长处的吸光光度值，以浓度为横坐标，标准样品的吸光度值为纵
坐标绘制标准曲线或做出回归曲线。
2、植物组织中硝态氮的提取
称取待测的植物功能叶柄0.5g左右，剪成1~2mm的碎片，置于干燥的100ml三角瓶中，加入蒸馏水20ml，加塞进行激烈振荡1~3分钟，放置10分钟。
澄清后，取上部清液2ml，按标准曲线的步骤进行显色和必比色，测定植物样品的吸光度值。
五、数据处理
叶柄：0.533g
将y=0.084代入上式得：x=7.25
植物组织中硝态氮含量：c×V=7.25×40=290μg/g
六、思考题
1、通过你的实验你认为本实验的主要误差来源有哪些？
1）剧烈晃动因摇动的人不一样，所以可能产生一些误差
2）过滤时更换滤纸可能造成一定误差
3）植物剪得不够碎
2、在配置标准溶液时应注意哪些问题？
加液时间要大概相等，摇晃尽量让一个人去做，烧杯、试管、移液管要及时清洗干净，过滤时应保证正常。