橡胶树HMGS编码基因的分离鉴定
海南橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因检测与致病性分析
海南橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因检测与致病性分析海南橡胶树是一种重要的橡胶树种，广泛分布于海南省及南亚热带地区。
橡胶树在生长过程中常常会受到各种真菌病害的侵袭，其中影响最为严重的就是棒孢霉落叶病。
棒孢霉落叶病是由棒孢霉属真菌引起的一种橡胶树病害，其主要症状是橡胶树叶片上出现黄斑、褪绿、脱落，严重影响了橡胶树的生长和产量。
随着海南橡胶树种植规模的扩大，棒孢霉落叶病已成为橡胶树种植业面临的主要问题之一。
在病害防控中，对病原菌进行检测和致病性分析是非常重要的。
本文将对海南橡胶树棒孢霉落叶病菌进行检测，并对其毒素蛋白基因进行致病性分析，以期为棒孢霉落叶病的防治提供科学依据。
一、棒孢霉落叶病菌的检测1. 样品采集与处理为了进行棒孢霉落叶病菌的检测，首先需要采集橡胶树叶片样品。
在叶片出现病斑的部位，用消毒剪刀剪取足够大小的叶片样品，并将其放入密封袋中，避免样品被污染。
采集完样品后，将其送至实验室进行后续处理。
2. 菌种分离与鉴定将采集到的橡胶树叶片样品进行表面消毒处理，然后分离出潜在的病原菌。
将分离得到的菌落进行单一菌株培养，待其生长至一定密度时，进行形态观察和生理生化实验，以确定其属于棒孢霉属真菌。
随后，对其进行基因序列分析，以确定其确切的分类和种属。
3. PCR检测利用已知的棒孢霉落叶病菌的特异性基因序列设计引物，对分离得到的菌株进行PCR扩增，并进行明胶电泳检测。
通过PCR检测，确定橡胶树叶片样品中是否存在棒孢霉落叶病菌。
通过以上步骤，可以对橡胶树叶片样品中的棒孢霉落叶病菌进行有效检测，为后续的致病性分析提供了必要的菌种资源。
二、毒素蛋白基因检测与致病性分析1. 毒素蛋白基因的克隆与表达根据已知的棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因序列，设计引物，并对其进行PCR扩增克隆。
将得到的目的基因与表达载体连接，构建表达载体，并将其转化至大肠杆菌等表达宿主中。
通过大肠杆菌等表达系统，进行毒素蛋白基因的表达和纯化，得到高纯度的毒素蛋白。
橡胶树种质资源的遗传多样性分析
橡胶树种质资源的遗传多样性分析橡胶树（Hevea brasiliensis）为重要的经济作物，其乳胶可用于制造橡胶产品，是世界上主要的天然橡胶来源。
目前，橡胶树的种质资源已经广泛收集和保存，但多样性的分析对于保护和利用这些资源具有重要的意义。
本文将讨论橡胶树种质资源的遗传多样性分析，包括分析方法和分析结果。
一、分析方法1.分子标记分子标记可以用来分析植物的遗传多样性。
目前，主要有限位标记和多态性长度位点两种类型的分子标记。
在橡胶树的研究中，广泛使用的限位标记有RAPD（随机扩增多态性DNA）、AFLP（扩增片段长度多态性）、SSR（微卫星）、SNP（单核苷酸多态性）等。
这些标记用于分析橡胶树种质资源的遗传多样性，可以提供各种类型的信息，如基因座的数量、分布、遗传多样性指数、群体结构等方面的信息。
例如，RAPD适合于进行无标记的遗传多样性评价，而AFLP和SSR则适合进行可靠的系统发育和亲缘关系研究。
2.分析方法对于橡胶树种质资源的遗传多样性分析，主要使用的方法有：（1）遗传多样性指数遗传多样性指数包括多态性、PI指数、He指数、Hn指数等，用于评测群体内的遗传多样性水平。
常用的遗传多样性指数是多态性，通过计算各位点基因型频率的平均值得到。
（2）主成分分析（PCA）主成分分析（PCA）是一种对多变量数据进行降维处理的方法，可以提取数据的主要方差成分，并用少量的变量代表数据。
对于橡胶树的种质资源数据，PCA 可以用于降维处理，并确定主要的方差成分。
（3）聚类分析聚类分析将样品分成几类，使得同类样品之间的相似性比不同类样品之间的相似性大。
对于橡胶树的种质资源数据，聚类分析可用于确定群体内的遗传关系，并探索不同群体之间的遗传联系。
（4）结构分析结构分析是一种基于群体遗传学的分析方法，可以确定橡胶树种质资源中不同群体的遗传混合度和亲缘关系。
结构分析可用于确定不同种质资源来源的橡胶树的亲缘关系和系统发育。
二、分析结果橡胶树种质资源的遗传多样性分析结果表明：（1）橡胶树种质资源的遗传多样性水平较高，尤其以南美洲为主要的起源地区，南美洲群体的多样性水平比其他地区的高。
橡胶树基因组结构与基因功能的分析研究
橡胶树基因组结构与基因功能的分析研究橡胶树是一种重要的经济植物，其胶乳被广泛应用于橡胶生产。
近年来，随着生物技术的飞速发展，对橡胶树基因组结构与基因功能的研究也得到了越来越多的关注。
一、橡胶树基因组结构分析橡胶树基因组的大小约为2.15Gb，包含约85,000个预测基因。
与其他植物相比，橡胶树的基因组规模较大，基因密度较低。
同时，橡胶树的基因组也存在着一些特殊的结构和特征。
首先，橡胶树的基因组具有高度的杂合性。
在采用第一代基因测序技术时，由于橡胶树基因组的杂合性，导致序列拼接出现问题，影响了基因组组装的质量和准确性。
随着第二代基因测序技术的应用，这一问题得到了有效的解决。
其次，橡胶树的基因组存在着许多重复序列。
研究表明，橡胶树基因组中约60%的序列是重复序列，这给基因组的组装和注释带来了一定的难度。
最后，橡胶树基因组的注释也存在着一些挑战。
由于橡胶树基因组的杂合性和重复序列，导致基因注释的准确性受到一定程度的影响。
因此，需要采用多种方法综合分析，才能得出更准确的基因注释结果。
二、橡胶树基因功能分析橡胶树基因功能的研究对于深入了解橡胶树的生物学特性、提高橡胶生产效率具有重要意义。
在最近的研究中，许多橡胶树基因的功能已经被初步鉴定和分析。
其中，一些与胶乳生物合成相关的基因已经被鉴定出来。
例如，Hevea brasiliensis HMG-CoA合酶基因 (HbHMGS) 是参与异戊烷合成途径的关键酶，其过表达可以显著提高胶乳产量。
此外，还有一些与橡胶树逆境适应相关的基因也受到了关注。
例如，HbWRKY45基因编码的转录因子可以响应低温、高盐和干旱等逆境条件，模拟表达HbWRKY45基因可以显著提高橡胶树的耐逆性。
此外，一些基因的功能和橡胶树生长发育相关，例如，HbPAL基因编码的酚酸类对苯二酚合酶在橡胶树木质素的生物合成途径中起着重要作用，人工克隆HbPAL基因可用于提高橡胶树的木质素含量和降解木质纤维素。
橡胶树产排胶相关基因在死皮和健康橡胶树中表达模式分析
橡胶树产排胶相关基因在死皮和健康橡胶树中表达模式分析作者：李德军等来源：《热带作物学报》2014年第07期摘要橡胶树死皮（Tapping Panel Dryness，TPD）是天然橡胶单产提高的主要限制因子之一，给中国橡胶种植业带来巨大经济损失。
本文利用RT-PCR技术分析14个产排胶相关基因在死皮和健康橡胶树树皮中表达模式。
研究结果表明，有8个基因在健康橡胶树树皮中上调表达，其分别是法尼基焦磷酸合酶、小橡胶粒子蛋白、橡胶素、蔗糖转运蛋白5、橡胶延伸因子、几丁质酶、HMG辅酶A还原酶和HMG辅酶A合成酶，有4个基因在死皮橡胶树树皮中上调表达，他们分别是橡胶转移酶、牻牛儿基牻牛儿基二磷酸合酶、蔗糖转运蛋白2a和β-1，3-葡聚糖酶；另外，蔗糖转运蛋白2b和蔗糖转运蛋白1表达模式没有发生变化。
此结果为深入揭示橡胶树死皮发生分子机制提供新观点。
关键词橡胶树；死皮；产排胶相关基因中图分类号 S794.1 文献标识码 AAbstract Tapping panel dryness（TPD）is one of key limiting factors for increasing the yield of natural rubber， and it causes serious economic loss to the rubber production in China. In this study，the expression profiles of fourteen genes related to rubber biosynthesis and flow were analyzed between healthy and TPD rubber tree barks. Eight genes， such as farnesyl-diphosphate synthase，small rubber particle protein， hevein， sucrose transporter 5， rubber elongation factor，chitinase， HMG-CoA reductase and HMG-CoA synthase， were up-regulated in barks of healthy rubber tree； four genes including cis-Prenyl transferase， geranylgeranyl diphosphate synthase，sucrose transporter 2a and β-1，3-glucanase were up-regulated in barks of TPD rubber tree； In addition， the expression patterns of sucrose transporter 2b and sucrose transporter 1 were not changed between healthy and TPD rubber trees. The results provided new insights into the molecular mechanism underlying TPD in rubber tree.Key words Rubber trees；Tapping panel dryness；Rubber biosynthesis and flow-related genes doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.07.015对橡胶树死皮的报道最早见于巴西，1905年出现在亚洲，死皮分为坏死性和非坏死性2种类型[1]。
海南橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因检测与致病性分析
海南橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因检测与致病性分析【摘要】海南橡胶树是重要的经济作物，但受到棒孢霉落叶病菌的侵害严重影响。
本研究旨在通过对病菌的鉴定与分离，研究毒素蛋白基因的检测方法以及致病性分析，进一步探讨病原体的致病机制。
通过基因检测结果分析和病菌毒素蛋白基因的表达情况研究，揭示了病原体的潜在致病性。
研究结果表明，海南橡胶树棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因的检测与分析为进一步防控病害提供了重要依据，并为相关病害防治提供了参考，对于保障橡胶树的健康生长和增加橡胶产量具有重要意义。
【关键词】海南橡胶树、棒孢霉落叶病、菌毒素、蛋白基因、检测、致病性分析、表达情况、防控、病害、研究结果、防治、重要依据、参考。
1. 引言1.1 研究背景橡胶树是一种重要的经济林木种，在我国南方地区种植广泛，尤其是在海南岛地区。
海南岛橡胶树种植园中常常受到棒孢霉落叶病的侵害，严重影响了橡胶树的生长和产量。
棒孢霉落叶病是由棒孢霉属真菌引起的一种病害，其病原菌主要通过空气传播或由种子和其他植物器官传播扩散，感染橡胶树的叶片，导致叶片枯黄脱落，影响光合作用，降低了橡胶树的产量和品质。
针对海南橡胶树棒孢霉落叶病菌的防治，研究人员开始关注病菌的毒素蛋白基因。
毒素蛋白基因是病原菌生产的毒素的基因，对其检测与分析可以帮助我们更好地了解病菌的致病机制，为病害的预防和防治提供科学依据。
本研究旨在对海南橡胶树棒孢霉落叶病菌的毒素蛋白基因进行检测与分析，以揭示其致病性机制，为进一步的病害防治工作提供重要参考。
1.2 研究目的海南橡胶树棒孢霉落叶病是橡胶树上一种常见的真菌性病害，严重影响橡胶树的生长和产量。
针对这一问题，本研究旨在通过对棒孢霉落叶病菌毒素蛋白基因的检测与致病性分析，从分子水平上深入研究该病害的致病机制，为进一步防控病害提供重要依据。
具体研究目的包括：1.对海南橡胶树棒孢霉落叶病菌进行鉴定与分离，确定其致病性；2.建立毒素蛋白基因的检测方法，从基因水平探究棒孢霉落叶病菌的毒力因子；3.进行致病性分析，探讨病菌与宿主的相互作用机制；4.对检测结果进行分析，解析病菌毒素蛋白基因的表达情况，并探讨其在致病过程中的作用。
天然橡胶合成关键酶基因Hmg1启动子克隆与序列分析
中图分 类号 ￥９ ． ７４ １
Ｈｍ ｌ 动子 克 降与分 析 表达载 体构 建 ｇ启
巴西橡胶树 产生 的橡胶是顺式一 聚异戊 烯 ，它 的生物合 成与其它植物 的类异 戊二烯 次生代 谢途
径基 本相同， 是一种典型 的植物类异戊二烯的次生代谢途 径。在这 ・ 代谢途径 中， 一 ３ 羟基一 一 ３ 甲基戊二
张福城 邓 治 张云 霞 陈 守才
农 热作栽生学，放鑫 南俐 ７ 裹部带物培理重开实霎海 ㈤ ｍ 业 点 验 ” ’ 室 。
摘 要 在 岜西 橡胶 树天然橡 胶 的生物 合成途 径 中， 一 ３ 羟摹 一 一 ３ 甲基戊 ＿酸 单 酰辅 酶 Ａ还 原 酶 （ 一 ｙ ｒｘ 一 ３ Ｈ ｄｏ ｙ ３ Ｍｅ ｙｇ ｔ ｙ Ｃ ｅｚｍｅ ｅｕ ｔ ｅ Ｈ Ｒ 是关键 酶之 一 ， 了利用 其基 因 的启动 子和 瞬 时表 达系 统来筛 － ｔ ｌｌ ａ ｌ ｏ ｎｙ Ｒ ｄ ｃ ｓ ， ＭＧ ） ｈ ｕ ｒ Ａ ａ 为
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第２ ７卷 第 ３期 ２０ ０ ６年 ９月
热 带 作 物 学 报
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Ｖ １ ７ Ｎｏ ３ ｏ． ２ ．
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天然橡胶合成关键酶基 因 Ｈ ｇ ｍｌ 启动子克隆与序列分析
选促 进橡 胶树 生物 合 成的调 节剂 ，利 用 Ｇｅｏ ｃＷａ ｉｇ方 法从 高产 树 热研 ７ ３ — ７的 叶 片基 冈组 Ｄ ｎ ｍｉ ｌ ｎ ｋ —３９ ＮＡ 中
克 隆 了 Ｈｍ ｌ５ 端 调 控 序 列 。 序 列 分 析 结 果 表 明 ， 巴两 橡 胶 树 Ｈｍ ｌ启 动 了 转 录 起 始 他 点 的 保 守序 列 ｇ ｇ Ｃ Ｃ Ｔ Ａ，与 其他植物 基 因的非常 一致 ；在 ５端 调控序 列 中发现几 个典 型 的真核 生物顺 式调 控元 件 Ｔ Ａ— ＴＡＣ ＡＴ ｍｏｉ Ｃ Ｔ ｍｏｉ Ｃ Ｔ Ａ— ｔ 、 Ｒ 等 。 克 隆得剑 的 Ｈ ｇ 启动 子序 列分 别替换 了 ｐ Ａ Ｉ ３ ２中 ｔ 、 ＡＡ — ｔ 、 Ｇ Ｃ ｍｏｉ Ｅ Ｅ ｆ ｆ ｆ 用 ｍ ｌ 端 ５ Ｃ ＭＢＡ１０ 的 Ｃ ＭＶ３Ｓ启 动 子 ，构 建 了序 列缺 失 ｐ ＡＭＢ Ａ１０ ａ ５ Ｃ Ｉ ３ ２表 达 载 体 ｐ ＡＭＢＡ１０ Ｈ９０ ｐ ＡＭＢＡ１０ Ｈ ０ Ｃ Ｉ ３ ２ ０ 、Ｃ Ｉ ３ ２ ５ ０和
橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定
橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定贺永国;李哲;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;马晓晓【摘要】[目的]克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(HbHMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础.[方法]根据已报道的HEV2.1序列(GenBank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与HbHMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定.[结果]用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6％.将PHEV2.1与HbHMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体pCAMBIA230 1-PHEV2.1-HbHMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功.[结论]将PHEV2.1和HbHMGR1基因先构建到pCAMBIA3301载体上再克隆至pCAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至pCAMBIA2301载体上出现PstⅠ突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1-HbHMGR.【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2016(047)002【总页数】6页(P163-168)【关键词】橡胶树;乳管特异性启动子PHEV2.1;HbHMGR1基因;植物表达载体;构建;鉴定【作者】贺永国;李哲;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;马晓晓【作者单位】海南大学园艺园林学院,海口570228;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州 571737;海南大学园艺园林学院,海口570228;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州 571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州 571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州 571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州 571737;海南大学农学院,海口 570228【正文语种】中文【中图分类】S794.1【研究意义】转录水平调控是基因表达调控的主要环节，对植物启动子功能进行研究不仅可以揭示相应基因的表达模式，还能为利用植物基因工程技术实现基因的高效特异性表达提供有效途径。
橡胶树种质资源的倍性鉴定
橡胶树种质资源的倍性鉴定橡胶树（Hevea brasiliensis）是热带地区栽培最广泛的橡胶植物，主要分布在东南亚地区。
橡胶树的种质资源的倍性（ploidy）鉴定是基因探索、品种鉴定和育种改良的重要一步。
1. 倍性的概念和意义倍性指的是一个生物个体细胞中染色体的数量，通常用n表示单套染色体的数量。
在动植物中，可以分为单倍体（haploid，n）、二倍体（diploid，2n）、三倍体（triploid，3n）、四倍体（tetraploid，4n）等。
橡胶树的种质资源中存在不同倍性的个体，倍性鉴定可以帮助确定橡胶树个体的基因组组成，为品种鉴定、材料筛选及育种改良提供依据。
2. 倍性鉴定方法（1）细胞计数法：通过观察和计数个体细胞的染色体数量，确定其倍性。
取橡胶树叶片或根尖组织，制备细胞悬液后，通过显微镜观察染色体形态，计数染色体数量。
通过计算细胞中染色体平均数目，即可确定倍性。
（2）流式细胞术：通过染色体计数流式细胞术（chromosome counting flow cytometry），对大量个体细胞进行快速测定。
该方法利用激光流式细胞仪（flow cytometer）测量个体细胞中染色体DNA含量，并通过DNA含量与倍性的关系建立染色体DNA标准曲线，从而确定个体的倍性。
该方法具有高通量、高精度和快速的特点，因此在种质资源倍性鉴定中得到广泛应用。
3. 植物倍性的影响因素植物倍性的产生通常是由于染色体非整倍体的产生，其原因可以是自然发生的突变、杂交后代的多倍化或基因改造等。
橡胶树的倍性也会受到遗传背景、环境因素和生长发育过程中的影响。
当橡胶树个体在无性繁殖过程中出现染色体非整倍体，如二倍髓核（2C）、四倍髓核（4C）等情况，就会影响到橡胶树的倍性。
4. 倍性与橡胶树育种倍性鉴定对于橡胶树的育种与改良具有重要意义。
不同倍性的橡胶树个体在遗传上具有的变异程度和遗传潜力是不同的，特别是多倍体在某些性状上具有优势，如叶片大小、产量、抗逆性等。
橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化
橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化马晓晓;李哲;戴雪梅;毕政鸿;方家林;黄华孙;李运合;贺永国【期刊名称】《南方农业学报》【年(卷),期】2014(045)005【摘要】[目的]克隆橡胶树HbHMGR1基因,转化橡胶树易碎愈伤组织,为橡胶树遗传转化和品种改良打下基础.[方法]根据已经报道的HbHMGR1基因序列(NCBI 登录号X54659.1)设计特异引物,通过RT-PCR克隆HbHMGR1基因,构建pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1植物表达载体.再用EHA105(携带pCAMBIA2301-35 S-HbHMGR1,内含NPTⅡ和uidA基因)侵染橡胶树易碎愈伤组织,数月筛选后对抗性易碎愈伤组织系进行GUS染色和分子检测.[结果]成功克隆了HbHMGR1基因,双酶切重组质粒、重组质粒的PCR扩增结果证明成功地构建了该基因的植物表达载体pCAMBI-A2301-35S-HbHMGR1.侵染后抗性橡胶树易碎胚性愈伤组织GUS检测为蓝色,且分子检测呈现阳性,共获得15个抗性易碎愈伤组织系.[结论]橡胶树HbHMGR1基因在愈伤组织阶段开始表达,有效提高了HbHMGR1基因在橡胶中的表达量.【总页数】6页(P818-823)【作者】马晓晓;李哲;戴雪梅;毕政鸿;方家林;黄华孙;李运合;贺永国【作者单位】海南大学农学院,海口570228;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室,海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室,海南儋州571737;海南大学农学院,海口570228;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室,海南儋州571737;中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室,海南儋州571737;中国热带农业科学院南亚热带作物研究所,广东湛江524091;海南大学园艺园林学院,海口570228【正文语种】中文【中图分类】S794.1【相关文献】1.橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定 [J], 贺永国;李哲;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;马晓晓;2.橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定 [J], 贺永国;李哲;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;马晓晓3.橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化 [J], 李哲;贺永国;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;李运合;马晓晓4.橡胶树乳管特异性启动子连接HbHMGR1基因的易碎胚性愈伤组织转化 [J], 李哲;贺永国;黄绵佳;曾宪海;林位夫;刘洁琼;张春红;李运合;马晓晓;5.橡胶树HbHMGR1基因克隆及其愈伤组织转化 [J], 马晓晓;李哲;戴雪梅;毕政鸿;方家林;黄华孙;李运合;贺永国;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国常用橡胶树品种鉴定方法研究
中国常用橡胶树品种鉴定方法研究作者：王生瑞王师笈朱军黄家权来源：《热带作物学报》2016年第08期摘要橡胶树（Hevea brasiliensis）产生的胶乳是天然橡胶的最重要来源，不同品种产生胶乳的能力不同，但不同的橡胶树品种形态差异小，难以区分。
利用简单的方法区分不同的橡胶树品种具有重要的意义。
以天然橡胶生物合成相关的7个基因家族中的目的基因及启动子序列为模板，设计基因特异的PCR引物16对，分别扩增21个橡胶树栽培品种的基因组DNA，扩增条带的多态性可将19个品种区分开（除了云研77-4和南华1号外）。
再利用橡胶小粒子编码蛋白基因（SRPP2）特异的引物，扩增云研77-4和南华1号的SRPP2基因，PCR反应产物直接测序，通过单核苷酸水平上的差异可准确的将二者区分开。
本研究通过简单的PCR扩增及其扩增产物的直接测序，建立了一种稳定性好、简单快速、经济高效的鉴定橡胶树品种的方法。
关键词橡胶树；克隆；引物设计；品种鉴定；单核苷酸差异中图分类号 S794.1 文献标识码 AAbstract The latex of the rubber tree（Hevea brasiliensis） is the most important source of natural rubber. The ability of latex production and adaptability of different rubber tree clones varied greatly， however， it is difficult to distinguish clones based on morphological traits， which is an important task in field work. In this study， sixteen pairs of gene specific primers were designed basing on gene and promoter sequences of genes related to natural rubber biosynthesis， these primer pairs were used respectively to amplify the genomic DNA of 21 rubber tree clones widely grown in China. The results showed that banding profile of these primer pairs could distinguish the 19 rubber tree clones， except Yunyan77-4 and Nanhua1. PCR amplification products using gene（SRPP2 encoding small rubber particle protein）specific primers were used for sequencing analysis， these two clones could be distinguished based on single nucleotide differences. In this study， a simple，stable and cost effective method using PCR band profile and PCR product sequencing to identify rubber tree clones was established.Key words Rubber tree；Clone；Primer design；Clone identification；Single nucleotide differencedoi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.08.001橡胶树（Hevea brasiliensis）原产于巴西亚马逊河流域赤道气候带，为多年生乔木，是典型的热带雨林树种。
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橡 胶树 ＨＭＧＳ编 码基 因的分 离鉴 定
邓 小敏 ， 陈 莹２，于 洁２，杨署 光 ， 田维敏
１．中国热带农业 科学院橡胶研 究所／农 业农村部橡 胶树生物 学与遗传资源 利用重点实验 室／海南 省热带作物栽 培生理学重点 实验室 ，海南儋州 ５７１７３７；２．海 南大学热带农 林学院 ，海南儋州 ５７１７３７
摘 要 羟 甲基 戊二 酸单 酰辅酶 Ａ合 成酶 （ＨＭＧＳ）将 乙酰 辅酶 Ａ转化 为羟 甲基戊 二酸 单酰 辅酶 Ａ，是 甲羟戊 酸代谢 途径 的限 速酶之 一 。本研 究从 橡胶 树热 研 ８７９和 热研 ７．３３．９７品系 的胶 乳 中分离 出 ＨｂＨＭＧＳ１和 ＨｂＨＭＧＳ２基 因 。相 比 ＨｂＨＭＧＳ１基 因在胶 乳 和树皮 中的共表 达模式 ，胶 乳 中高 丰度表 达 的 ＨｂＨＭＧＳ２基 因可能是 乳管 细胞 中参 与天然橡 胶合 成 的主效 基 因 ，而 ＨｂＨＭＧＳ１是 功能冗 余 基因 。ＨｂＨＭＧＳ２基 因在 橡胶 树高 产 品系热研 ８７９胶乳 中 的表 达量 亦高 于测序 品系 热研 ７．３３．９７，表 明 ＨｂＨＭＧＳ２基 因 的高水平 表 达可 能有助 于橡 胶 的合 成 。其 上游启 动 子的顺 式作用 元件 差异 可能 与该基 因在 热研 ８７９和热研 ７．３３．９７的差异 表达 有关 。ＨｂＨＭＧＳ２基 因 的转 录亦 受茉 莉酸诱 导 ，可 能参 与 了茉 莉酸信 号 调控 天然橡 胶 的合成 过程 。ＨｂＨＭＧＳ２基 因在 大肠 杆菌 中成功 表达 为后 续研究 该基 因 的功能 、利用 该基 因生产 活性 物质 提供 新 的基 因资源 。 关 键词 橡 胶树 ；ＨｂＨＭＧＳ１；ＨｂＨＭＧＳ２；鉴定 ；原核 表达 中图分 类号 ｓ７１８．４６ 文 献标识 码 Ａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ ３－ｈｙｄｒｏｘｙ－－３—－ｍ ｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ ｃｏｅｎｚｙｍ ｅ－－Ａ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｉｓ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｔｅ－－ｌｉｍ ｉｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｍ ｅｖａｌｏｎａｔｅ ｍ ｅｔａｂｏｌｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｖｉａ ｃａｔａｌｙｚｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｅｔｏａｃｅｔｙｌ—ＣｏＡ ｔｏ ｆｏｒｍ ３－ｈｙｄｒｏｘｙ－３一ｍ ｅｔｈｙｌｇｌｕｔａｒｙｌ－ＣｏＡ ． Ｈ ｂＨＭ ＧＳ１ ａｎｄ Ｈ ｂＨＭ ＧＳ２ ｇｅｎｅｓ ｗ ｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｌａｔｅｘ ｏｆ Ｒｅｙａｎ ８７９ ａｎｄ Ｒｅｙａｎ ７－３３—９７ ｒｕｂｂｅｒ ｔｒｅｅ ｃｌｏｎｅｓ． Ｗ ｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＣＯ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ Ｈ ｂＨＭ ＧＳ１ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｂａｒｋ ａｎｄ ｌａｔｅｘ，ｔｈｅ ＨｂＨＭ ＧＳ２ ｇｅｎｅ ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｔｅｘ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｉｔ ｍ ａｙ ｂｅ ｔｈｅ ｍ ａｉｎ ＨＭ ＧＳ ｍｅｍｂｅｒ ｇｅｎｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｎａｔｕｒａｌ ｒｕｂｂｅｒ ｂｉｏ· ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｉｎ ｌａｔｉｃｉｆｅｒ ｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ Ｈ ｂＨＭ ＧＳ１ ｇｅｎｅ ｍ ａｙ ｂｅ ｔｈｅ ｒｅｄｕｎｄａｎｔ ｇｅｎｅ ｉｎ ｒｕ ｂｂｅｒ ｔｒｅｅｓ．Ｔｈｅ ｈｉｇｈ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌ ｏｆ Ｈ ｂＨＭ ＧＳ２ ｇｅｎｅ ｉｎ ｌａｔｅｘ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｉｔ ｗａｓ ｂｅｎｅｆ ｉｃｉａｌ ｆｏ ｒ ｎａｔｕｒａｌ ｒｕ ｂｂｅｒ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｉｔｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｉｎ Ｒｅｙａｎ ８７９ ａｎｄ Ｒｅｙａｎ ７－３３－－９７ ｍ ａｙ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｉｓ－·ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔ ｌｏｃａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｕｐｓｔｒｅａｍ
ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｙａｎ ８７９ ａｎｄ Ｒｅｙａｎ ７－３３—９７ ＨｂＨＭ ＧＳ２ ｇｅｎｅｓ．Ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｊａｓｍｏｎａｔｅｓ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｉｔ ｍａｙ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅ ｉｎ ｔｈｅ ｊａｓｍｏｎａｔｅｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｎａｔｕｒａｌ ｒｕｂｂｅｒ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｐｒｏｃｅｓｓ．Ｔｈｅ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｅｘ—
Ｉｄｅｎｔｉｆ ｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ Ｍ Ｇ Ｓ－ｃｏｄｉｎｇ Ｇ ｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｈ ｅｖｅａ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ
ＤＥＮＧ Ｘｉａｏｍ ｉｎ ，ＣＨＥＮ Ｙｉｎｇ ，ＹＵ Ｊｉｅ ，ＹＡＮＧ Ｓｈｕｇｕａｎｇ ，ＴＩＡＮ Ｗ ｅｉｍ ｉｎ
１．Ｒｕｂｂｅｒ Ｒ ｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍ ｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａ ｇｒｉｃｕｌｔ ｕ ｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｋ ｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｒｕｂｂｅｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍ ｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒ ｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｒｕｒａｌ Ａｆａｉｒｓ／Ｈａｉｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｃｒｏｐｓ，Ｄａｎｚｈｏｕ，Ｈａｉｎａｎ ５７ １ ７３７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ａｇ ｒ ｉｃｕｌｔ ｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｈａｉｎａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｎｚｈｏｕ， Ｈ ａｉｎａｎ ５７１７３７，Ｃｈｉｎａ