紫外可见分光光度计的使用.
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程一、仪器准备1.打开紫外可见分光光度计，等待它进行自检。
2.检查仪器是否正常，包括光源、检测器、单色器等。
如有故障，请及时修复或更换。
3.将样品室清洁干净，并检查透射池是否干净。
如有污染，请用纯水和无尘纸擦拭。
二、仪器校准1.对紫外可见分光光度计进行校准。
校准包括零点校准和波长校准。
2.零点校准：使用纯溶剂（例如纯水或纯乙醇）进行零点校准。
在选定的波长下，将溶剂放入透射池中，点击“零点校准”按钮进行校准。
3.波长校准：使用已知浓度且吸收峰位清晰的标准品进行波长校准。
在选定的波长下，将标准品放入透射池中，点击“波长校准”按钮进行校准。
三、样品测试1.取出已经准备好的样品，在样品室中放入透射池。
2.选择合适的波长范围和波长值。
根据样品的吸收峰位和浓度范围，选择一个适当的波长范围。
四、测量样品吸光度1.点击“开始”按钮进行测量。
仪器将在选定的波长下自动扫描，显示吸光度曲线。
2.观察吸光度曲线，确定样品的吸收峰位和吸光度值。
五、数据处理和结果记录1.根据吸光度曲线，确定样品的吸光度值。
可以选择峰值吸光度或在特定波长下的吸光度值。
2.如果需要，可以进行数据处理，例如计算吸光度差、构建标准曲线等。
3.记录测量结果，包括样品名称、浓度、波长范围、吸光度值等信息。
六、仪器维护1.测量完毕后，及时清洁透射池和样品室，避免样品残留。
2.关闭紫外可见分光光度计，并将仪器盖上，以防尘埃进入。
3.定期维护仪器，例如清洁光源、调整灯泡亮度等。
七、注意事项1.在操作过程中，避免直接接触光源和检测器，以免引起损坏。
2.使用纯净溶剂进行校准，避免杂质对测量结果的影响。
3.在进行波长校准时，选择已知浓度且吸收峰位清晰的标准品，以确保测量结果的准确性。
4.在清洁透射池时，使用纯净水和无尘纸进行擦拭，避免使用有机溶剂和粗糙材质。
5.操作过程中避免碰撞和震动仪器，以免影响测量结果。
6.长时间不使用时，及时关闭仪器，以延长仪器寿命。
紫外可见分光光度计操作规程
紫外可见分光光度计操作规程
《紫外可见分光光度计操作规程》
一、工作准备
1. 开机前检查：清洁光栅、检查光源和探测器是否正常。
2. 准备标准溶液：根据实验需要准备好待测溶液和标准溶液并进行标定。
3. 准备样品：将待测溶液转移至透明的玻璃试管或石英比色皿中。
二、仪器调节
1. 打开光度计：按照仪器说明书操作，打开光度计，等待仪器预热。
2. 调节参比通道：选择适当的参比波长，并将参比通道调至零点。
3. 调节样品通道：选择待测波长，并将样品通道调至零点。
三、测量操作
1. 测量样品：将待测溶液装入样品比色皿中，放入光度计样品槽内。
2. 执行测量：按照操作说明，进行测量并记录数据。
3. 清洗仪器：测量完成后，及时清洗样品比色皿和样品槽。
四、数据处理
1. 计算浓度：根据测量数据和标定曲线，计算样品的浓度。
2. 记录结果：将浓度及测量数据记录在实验记录表中。
五、仪器关闭
1. 关闭光度计：根据操作说明，正确关闭光度计。
2. 清洁仪器：清洁光度计表面和槽口，保持仪器干净整洁。
通过以上操作规程，能够正确、准确地操作紫外可见分光光度计，为实验数据的获取和分析提供可靠的支持。
同时，也能够保护和延长仪器的使用寿命。
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见分光光度计的使用方法1、电源开关,使仪器预热20分钟;▪仪器接通电源后,仪器即进入自检状态,自检结束后波长自动停在546nm处,测量的方式自动设定在透射比方式(%T),并自动调100%与0%T。
注意:①开机前,先确认仪器样品室内就是否有东西挡在光路上。
光路上有东西将影响仪器自检甚至造成仪器故障。
②检查透过率模式下,挡光位置,透过率就是否显示00、0%T。
否则要调整暗电流,按“0%T”键,使透过率显示为00、0%T。
返回对光位置时仍能显示100、0%T,否则重新调100%T。
通过“▲”与“▼”键,设定测试波长;按“100%T”键,使透过率显示为100、0%。
如果您要获得被测样品的透射比参数时(透射比方式):T2、按方式键“MODE”将测试方式设置为透射比方式:▪显示器显示“3、按波长设置键“▲”或“▼”设置您想要的分析波长,如340nm;▪按波长设置键“▲”或“▼”直到显示器显示“340nm xxx x%T”▪每当波长被重新设置后,请不要忘记调整“100、0%T”。
4、将您的参比溶液与被测溶液分别倒入比色皿中;▪比色皿内的溶液面高度不应低于25毫米,大约25毫升。
否则,会影响测试参数的精确度。
▪被测试的样品中不能有气泡与漂浮物,否则,会影响测试参数的精确度。
5、打开样品室盖,将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中,盖上样品室盖。
▪一般情况下,参比样品放在样品架的第一个槽位中。
▪被测样品的测试波长在340nm—1000nm范围内时,建议使用玻璃比色皿,被测样品在190nm—340nm范围内时,建议适用石英比色皿。
▪仪器所附的比色皿,其透射率就是经过测试与匹配的,未经匹配处理的,比色皿将影响样品的测试精确度。
▪比色皿的透光部分表面不能有指印、溶液痕迹。
否则,将影响样品的测试精确度。
6、将参比溶液推入光路中,按“100%T”键调整零ABS。
▪仪器在自动调整100%T的过程中,显示器显示“ 340nm Blank 、、、”当100、0%T调整完成后,显示器显示“340nm 100、0%T”7、将被测溶液推或拉入光路中,此时,显示器上所显示就是被测样品的透射参比数。
标题 紫外-可见分光光度计的正确使用方法
标题紫外-可见分光光度计的正确使用方法紫外-可见分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种用于测量物质吸收和透过性的仪器。
正确的使用方法对于确保实验结果的准确性非常重要。
以下是紫外-可见分光光度计的正确使用方法的参考内容。
1. 仪器的准备：a. 检查光源和检测器：确保光源和检测器都处于正常工作状态，并没有损坏或需要更换的零件。
b. 清洁样品室：使用干净的棉纱或镜头纸轻轻擦拭样品室的玻璃表面，以确保获取准确的测量结果。
c. 预热：根据仪器的说明书，预热光度计至指定温度。
这个步骤通常需要一些时间，所以在进行实验前需要提前预热。
2. 样品的准备：a. 清洁样品：使用适当的方法和溶剂清洁或稀释样品，以确保最佳的光学透过性。
b. 样品的体积：添加合适量的样品到样品室中，以确保光路完全填充，并能够提供准确的测量结果。
如果样品室不完全填充或过于拥挤，可能会影响测量结果。
3. 校准：a. 参考空白：在测量目标物质之前，先进行空白测量。
在样品室中添加溶剂或介质，然后进行测量，并将其设置为参考光谱。
这样可以消除背景的干扰，使测量结果更加准确。
b. 波长校准：根据仪器的说明书，确定正确的波长校准，以确保获得准确的吸光度值。
这通常需要使用校准滤光片或标准样品来进行波长校准。
4. 测量操作：a. 设置波长：根据需要的波长，将仪器设置在对应的波长。
b. 吸光度的测量：在样品室中放置样品，并使用仪器进行吸光度测量。
等待仪器测量完成或按照仪器的指示进行测量。
c. 重复测量：进行至少三次重复测量，并计算平均值，以减小可能的误差。
5. 数据分析：a. 数据记录：记录测量结果和相应的实验条件，包括波长、样品浓度等信息。
b. 数据处理：使用适当的软件对数据进行处理，如绘制吸光度曲线、计算浓度或其他所需的数据处理操作。
6. 仪器的关机：a. 进行所需的数据保存或导出。
b. 关闭光度计，按照仪器的说明书进行正确的关机操作。
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见分光光度计的使用方法
紫外可见（UV-Visible）分光光度计是用于测量物质在紫外和可见光区域的吸收和透射特性的仪器。
以下是使用紫外可见分光光度计的一般步骤：
1. 打开紫外可见分光光度计的电源，并保证仪器充分预热。
2. 设置光源和检测器。
选择合适的波长范围（紫外或可见光谱），以及光源和检测器的位置。
3. 使用背景校准。
将空白试剂槽放入样品槽中（样品槽通常是一个透明的玻璃或石英池），然后选择背景校准选项。
这将记录光通过样品槽的基线吸收。
4. 准备样品。
将待测样品溶液放入样品槽中。
确保样品槽没有气泡或污渍，以免影响结果。
注意，为了比较样品结果，可以将每个样品的浓度保持相对一致。
5. 设置波长。
选择测量波长，并调整仪器以使其与待测样品的最大吸收光谱相匹配。
某些仪器还允许选择多个波长以进行多重波长读数。
6. 开始测量。
按下“开始”或“测量”按钮，仪器将测量样品吸收光谱。
读数时间通常很短，大约为几秒到几分钟不等。
7. 记录结果。
读取仪器显示屏上的吸收值，并将其记录下来。
注意，部分仪器可以直接将结果导出到计算机或打印机上。
8. 清洁和关闭仪器。
在使用完毕后，使用适当的清洁溶液清洁样品槽，以防止残留污渍。
最后，将仪器关闭。
需要根据具体仪器的操作手册来设置和操作紫外可见分光光度计，因为不同的仪器可能有不同的步骤和功能。
紫外可见分光光度计的使用
紫外可见分光光度计的使用
• 分光光度计的结构类型:单光束分光光度计和双光束分光 光度计 • 不同相态样品的分析 • 比色皿的使用常识 • 吸光度读数范围 • 吸收波长的选择 • 参比溶液的选择 • 狭缝大小的选择 • 重复测定次数和波长扫描速度 • 测定波长间隔 • 标准曲线法和标准加入法 • 时间扫描功能
无吸收 无吸收 有吸收 有吸收
外加试剂 吸收情况
无吸收 有吸收 无吸收 有吸收
参比溶液 选择
纯溶剂空白 试剂空白 试液空白 加入掩蔽剂的溶液
狭缝的选择
• 狭缝的大小会影响到仪器的信噪比和标准曲线的 线性范围。 • 狭缝过大，通常会使线性范围变小，特别是当不 在最大吸收波长位置测定时更是如此。 • 狭缝过小，造成入射光能量过小，信噪比变差， 基线平直度和测量数据的重复性会变差。 • 此外，还需要考虑样品吸收峰宽度的影响。通常 单波长测定时，一般选择在最大吸收波长位置， 线性范围容易满足，可选择较宽的狭缝（1-2nm） 多波长测定时，很难同时在所有波长都满足线性 范围要求，应选择较小的狭缝。
• 在扫描光谱时需要选择，可根据样品吸收 峰的宽度进行选择，峰宽较大时，可选择 较大的波长间隔。反之亦反。通常每个正 常的吸收峰应该用不少于30个数据点表示 出来。
重复测定次数和波长扫描速度
• 对吸光度不是很大的样品，或者狭缝不是 很小，这时检测器检测的光信号的强度是 比较大的，重复性较好，可选择较少的重 复次数。相反，如果样品吸光度很大，狭 缝很小，选择较大的重复次数可获得更好 的结果。 • 一般可以用快速扫描，当信噪比较差，谱 峰窄且多时用慢速扫描。
测定波长间隔
• 原始待测溶液(含有Fe2+及其它共存组分)
紫外可见分光光度计的操作步骤
紫外可见分光光度计的操作步骤紫外可见分光光度计操作步骤紫外可见分光光度计是一种常用的实验仪器，常用于测量溶液的吸光度和透过率。
下面将介绍紫外可见分光光度计的操作步骤，帮助读者了解如何正确地使用该仪器。
1. 准备工作在开始使用紫外可见分光光度计之前，需要进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否正常运行，包括电源、灯泡和检测器等。
确保仪器处于正确的工作状态。
其次，准备好所需的样品溶液，并将其放置在透明的玻璃或石英容器中，以避免对测量结果的影响。
最后，检查擦拭仪器的可见光波长校准标准溶液，并确保其符合标准要求。
2. 打开仪器并调整参数将仪器接通电源并打开开关。
在仪器界面上选择所需的波长，可以通过键盘或旋钮来输入目标波长。
根据样品的特点和需要测量的光谱范围，选择起始波长和终止波长，并设置扫描速度。
一般情况下，快速扫描适用于样品溶液透过率的快速测量，而慢速扫描适用于吸光度的测量。
3. 校正零点在进行样品测量之前，需要对仪器进行零点校准。
校准零点是为了消除仪器的内部误差，确保测量结果的准确性和可靠性。
校正零点的方法是切换至“T”模式，即透过率模式，并将空白试剂（如纯溶剂或去离子水）放入光池中进行测量。
记录下校正后的透过率值。
4. 测量样品溶液吸光度将样品容器放入光池中，并选择“Absorbance”模式。
确保样品溶液充满光池，避免气泡的存在。
开始测量后，仪器将自动测量样品的吸光度，并显示在仪器界面上。
记录下测量值，可以根据需要保存或导出数据。
5. 数据处理与分析获取吸光度数据后，可以进行相应的数据处理与分析。
比如，可以计算样品溶液的浓度、绘制吸光度曲线等。
根据实验需求，选择不同的数据处理方法，并使用相应的软件进行分析。
确保选择合适的数据处理方法和参数，以获得准确的结果。
6. 关闭仪器在使用完毕后，需要正确地关闭紫外可见分光光度计。
首先，将波长设定为较高的数值，以避免损坏检测器。
然后，关闭仪器的电源开关，将仪器断电。
紫外可见分光光度计的原理与使用方法
紫外可见分光光度计的原理与使用方法单光束分光光度计的原理是：光源发出光束通过准直系统，经过光栅
的分光作用后进入样品池，与样品发生相互作用后经过检测器，最后由显
示器显示吸光度数值。
双光束分光光度计的原理是：光源发出光束，一部分经过参比池进行
比较，另一部分经过样品池与样品相互作用，分别被检测器检测后与参比
值进行比较，最后由显示器显示吸光度数值。
使用紫外可见分光光度计的方法如下：
1.准备工作：
-检查仪器是否处于正常工作状态，确认光源、检测器和显示器的功
能正常。
-清洁样品池，确保无杂质和残留。
2.样品处理：
-准备需要测量的样品溶液，并将其转移到清洁的样品池中。
-如果样品浓度过高，可能会引起光透过度低，此时可进行适当稀释。
3.测量步骤：
-打开仪器电源，进行预热，通常需要一段时间让光源稳定。
-选择合适的波长范围和检测模式（吸光度/透过度）。
-调节仪器，使得显示器上的示数为零或基线稳定。
-将样品池放入样品室，尽量避免空气泡存在。
-记录或保存测量数据，可以进行后续数据处理和分析。
4.清洁和维护：
-测量完成后，及时清洁样品池和其他相关部件，防止污染和积累。
-关闭仪器电源，注意安全操作。
总结一下，紫外可见分光光度计是一种基于比尔－朗伯定律原理的实验仪器，主要用于测量物质溶液或气体的光吸收特性。
使用时需要进行准备工作，处理样品并进行测量，同时注意仪器的清洁和维护。
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紫外可见分光光度计基本原理及分析技术紫外可见分光光度计基本原理与分析技术紫外可见分光光度计基本原理与分析技术允许打印和进一步使用原文来自Analytik Jena AG 2007版翻译：汪素萍目录1 定义和基本原理 (5)1.1 光的吸收及光谱 (5)1.2 透射和吸收 (6)1.3 定性分析 (6)1.3.1 光谱与结构 (6)1.3.2 影响光谱的因素 (7)1.3.3 定性信息 (7)1.4 定量分析 (8)1.4.1 Lambert-Beer 定律 (8)1.4.2 标准曲线的绘制 (8)1.4.3 用于光度测量的样品制备 (9)1.5 动力学 (9)1.6 UV VIS 分光光度计的更多应用 (10)1.6.1 蛋白和DNA 分析 (10)1.6.2 DNA熔点测定 (11)1.7 导数光谱 (12)1.7.1 色度分析 (13)1.7.2 膜厚度的测定 (14)2 UV VIS 分光光度计的结构 (16)2.1 UV VIS 分光光度计的组成 (16)2.2 光源 (16)2.3 分光系统 (16)2.3.1 单色器系统 (16)2.3.2 多色器系统 (17)2.4 光谱带宽 (18)2.5 样品室 (19)2.6 检测器 (19)2.7 单/双光束 (19)3 比色池 (20)4 UV VIS 分光光度计的附件 (23)4.1 简单池架一览表 (23)4.1.1 应用：快速测试池用于牛奶中钙的测定 (24)4.1.2 应用：微量池和可调池架用于DNA 分析 (24)4.2 流通池测量 (25)4.2.1 应用：用流通池定量测定磷酸盐 (25)4.3 多联池 (27)4.3.1 应用：多联池用于酶动力学 (27)4.4 用于固体样品测定的附件 (29)4.4.1 固体样品架和反射附件 (29)4.4.2 应用：SPECORD ®透射测量法测定膜厚度 (29)4.4.3 应用：积分球用于牙齿表面白和黄指数的测定 (30)4.4.4 应用：防晒霜的测定 (32)4.5 光纤探头 (33)4.5.1 应用：ATR 探头用于颜料测定 (33)1 定义和基本原理1.1 光的吸收和光谱电磁辐射与固体、液体或气体的相互作用产生各种现象，比如吸收、反射或散射。
UV VIS分光光度计是专用于研究紫外和可见范围内辐射与物质间相互作用的。
波长波数图 1 电磁辐射当原子或分子吸收电磁辐射就会从基态转变为高能态的激发态，在这一过程中吸收特殊波长的能量。
和原子相比，各种分子状态有着相当宽的能量范围。
在红外区受激，分子会转动和振动，而在可见和紫外区则可以通过价电子观察到特定能级(量子的吸收。
图 2：吸收和吸收光谱(抗坏血酸这些量子的能量可以用辐射的波长来定义。
波长越短，量子的能量越高。
各吸收点的位置和相对的吸收值的大小可以用UV VIS 分光光度计测定。
1.2 透射和吸收如果入射光的强度I 0 透过一个厚度为d 的介质，除反射和散射的损失外，光强度会因样品的特征吸收而减弱。
此时的出射光(透射强度为I 。
图 3：透射透射T 用以下公式定义：或样品的吸收值A 用以下公式表示：（公式 1）（公式 2）和透射形成对比，溶液的吸收随光强度的减弱而增加。
1.3 定性分析1.3.1 光谱与结构来自分子吸收带的UV VIS 光谱通常是相对较宽的。
和近红外光谱（产生许多窄带吸收）相比，提供的定性信息相对较少。
有机分子在UV VIS 范围内的吸收通常通过生色基团 (颜色表现的种类产生。
下表1中列出了各种生色基团及其最大吸收。
表1生色基团分子式实例最大吸收羰基-(酮羰基-(醛氨基2硝基2丙酮乙醛乙酰胺硝基甲烷羧基醋酸氮氮键重氮甲烷如果使生色基团与另一个共轭，吸收带会先相长波方向位移。
1,5-己二烯（无共轭）最大吸收185nm1,3,5-己三烯（无共轭）最大吸收250nm独特的环状不饱和烃在UV VIS 范围表现出非常有特点的吸收带。
图 4：苯蒸气的UV VIS光谱图1.3.2 影响光谱的因素对波长而言，精确值与特效取代基和溶剂二者有关。
通常随着溶剂极性的增加，吸收光谱会发生蓝移(向短波方向；随着溶剂极性的减弱，会红移(向长波方向。
表 2溶剂（极性逐渐增加）透射限于nm 处n-（正）己烷氯仿二乙醚乙醇水其他参数，比如pH 值和温度等，也会影响波长的位置和最大吸收强度。
1.3.3 定性信息UV VIS 分光光度计可以给出以下定性信息：z 纯物质的鉴定 z HPLC 分离后纯物质的鉴定（使用二极管阵列系统更合适）z 纯度测试（例如：蛋白质或DNA/RNA） z 蛋白和核酸的熔点曲线 z 饱和与不饱和化合物的识别 z 酮类和稀醇形态的识别 z 羰基带的鉴定 z 键合关系和取代效果的解析 z 酶活性1.4 定量分析1.4.1 Lambert-Beer 定律Bouguer-Lambert-Beer 定律表达吸收和浓度的关系。
Bouguer （1696－1758）吸收值与光程长度成正比 Lambert （1728－1777）Beer （1825－1863）吸收值与摩尔浓度成正比（公式 3）A(λ） - 吸收波长λε(λ） - 摩尔的对数吸收波长（L mol-1 cm-1） c - 浓度（mol L-1） d - 池程长（cm ）Lambert-Beer 定律是限定性定律，在以下情形下不成立：z 待测物质的浓度太高（> 0.01M/I； z 待测物质和溶剂间有副反应； z 使用的幅射线非单色；z 杂散光 (散射光，例如：由物体引起的反射现象。
这就意味着，Lambert-Beer 定律的正确性需要研究。
该研究为校准过程。
1.4.2 标准曲线的绘制绘制标准曲线就是测定已知浓度样品(标准溶液，用各浓度值和对应的各测定吸收值绘制的曲线。
Lambert-Beer 定律在校准曲线的线性范围内应用。
非线性校准曲线在一定程度上也是可以用的，这就扩展了校准范围。
图5：标准曲线1.4.3 用于光度法测定的样品制备在大部分情况下，须将各待测样品转化为有色化合物。
试剂的使用即为显色过程： z 自然界的无机物。
尽管广泛存在，但不被使用。
z 自然界的有机物。
已知的有机试剂超过7500种，我们看到的颜色是配位体键合和电荷转移化合物的结果。
表3 显示了可以用UV VIS分光光度计测定的参数选择，如下所示。
表3铝溴化物氯化物氟化物金碘钾铜锰钼钠镍硝酸盐亚硝酸盐臭氧苯酚磷酸盐不溶物氧银总氮硫酸盐硫化物亚硫酸盐阴离子表面活性剂TOC 过氧化物锌氨水铬酸盐铵铅硼镉氯次氯酸盐CSB 氰化物铁1.5 动力学动力学研究随吸收值变化对应的时间运行轨迹，也就是化学反应的速度。
图6：各最大吸收值的时间变化所表明的动力学测定结果的三维图。
这些时间变化值可用于求得反应速度（例如：随线性回归对应的斜率的测定）。
酶的浓度也可以以时间–溶解方式（动力学）测定。
这种方法测定的是酶基浓度随时间的变化。
测定的时间曲线的斜率与酶的浓度成比例。
图 7：用于动力学测定的部分数值以食品化学为例，用于动力学反应测定的一些重要参数见表 4。
表 4醋酸盐酒精甲酸维生素C 琥珀酸胆固醇柠檬酸盐甲醛果糖半乳糖葡萄糖谷氨酸盐甘油尿素联氨羟基丁酸异柠檬酸乳酸盐乳糖麦芽糖草酸蔗糖山梨(糖醇淀粉木糖醇1.6 UV VIS 分光光度计的更多应用1.6.1 蛋白和DNA 分析在其基本结构中，DNA 由两个脱氧核糖核酸长链组成，这两个脱氧核糖核酸链交结成一个双螺旋结构。
该链在基本组分为嘌呤和嘧啶(Pu-Py碱基，腺嘌呤和胸腺嘧啶(A-T及鸟嘌呤和胞嘧啶(G-C间用氢键连接起来，这些基本组分形成DNA 在UV 区的特征吸收，在260 nm处具有最大吸收峰。
测定既是在260 nm处测定吸收值和用Lambert-Beer 定律进行计算浓度。
图 8： DNA标准溶液在260nm 和280nm 处的特征吸收蛋白质是DNA 溶液中一种易被沾污的物质。
核酸的纯度可以通过测定260 nm 和280nm 的吸收值比值进行计算，如果该比值假设在1.8和2之间，则纯度为70% - 95%。
蛋白质在280nm 处有一个最大吸收，主要可归于氨基酸(尤其是色氨酸和酪氨酸的芳香环系统。
所以，蛋白质可以用Lambert-Beer 定律在280nm 处直接测定吸收值；蛋白质浓度的测定也可以通过使用生色试剂，比如Bradford 试剂（用考马斯亮兰G-250，最大吸收在595nm 处），缩二脲试剂（把从缩二脲试剂和组氨酸链环的氧原子间的Cu 2+化合物染成紫罗兰色，最大吸收值在546 nm处）和Lowry 试剂（缩二脲的联接、福林和钼蓝反应，最大吸收在540-750 nm之间。
1.6.2 DNA 熔点测定DNA 双螺旋解链既是升温引起的熔化的过程。
这里的熔化温度Tm 是双螺旋结构解链了一半的温度。
碱基对的分离结果（增色变化），随着温度的提高，在260 nm处的吸收增加。
为了测定温度-吸收值对应的可能产生的变化，需要非常精确地控制温度。
帕尔帖温度控制精度可以到达0.1℃，比常规的水浴温度控制更好。
熔点曲线可以用光谱中的任何波长进行计算光谱。
图 9：不同温度下的DNA 光谱图 10：DNA 在260nm 处的熔点曲线例如，Tm 值可以在测定熔点曲线的曲线图上查到。
该熔点温度取决于当时的碱基对。
具有高比例GC 对的DNA 显示出比AT 碱基对较多的DNA 更高的Tm 值。
57.7℃的Tm 值是DNA 用于诊断小牛斑疹伤寒病的实例。
1.7 导数光谱导数光谱包括对用于定性和定量测定的光谱进行求导。
紫外和可见波长范围内，许多非常重要的样品的定性和定量分析是应用导数光谱才能完成的。
导数光谱精细结构中的准确信息可在解析重叠光谱时认定化合物。
导数光谱也已成为用于光谱干涉对待测物影响的研究。
通过获取光谱的导数，可以抑制背景信号在测定光谱上的重叠，且更有效地加强吸收系数。
用UV VIS分光光度计进行Lambert-Beer 定律的下列导数：输出光谱（公式 3）1阶导数公式 42阶导数公式 53阶导数公式64阶导数公式 7导数可以设为正值和负值，因为第一导数和第二导数在吸收光谱的斜坡中每一个变化都是非常灵敏的，导数光谱法是适用于分析重叠吸收光谱的很好的方法。
为此，导数光谱常被用于分析工作的微量测定，也就是定量测定。
切线、波峰-波峰和波峰-波谷法等都可用于计算。
1.7.1 色度分析颜色是物质的重要特性。
颜色可以通过计算固体或不透明样品的反射光谱测定，也可以通过测量半透明样品，例如树脂、石油及清洁剂等的透射获得。
图 11：肉眼看到的颜色肉眼看见的各种颜色和其被吸收的补色。
例如，黄色溶液吸收蓝色范围内的光，如下表所示。
吸收色紫罗兰色蓝色绿蓝色绿色黄绿色橙色红色吸收波长[nm] 380 – 435 435 – 480 480 – 490 490 – 560 560 – 595 595 – 650 650 - 780补色黄绿色黄色橙色红色紫色绿蓝色蓝绿色肉眼的视觉过程是带有标准数据的数学模型，其结果是一整套客观且独特的描述样品颜色的色值。