弓形虫抗体快速检测试剂盒
弓形虫 ELISA检测 说明书 人用文档
正文】弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）说明书一、制品名称通用名：弓形虫IgG抗体检测试剂盒（酶联免疫法）英文名：Diagnostic Kit for IgG Antibody to Toxoplasma(ELISA)汉语拼音：Gongxingchong IgG Kangti Jiance Shijihe（Meilian Mianyifa）二、原理与用途体外诊断用试剂，本品系由纯化弓形虫抗原包被的微孔板和酶标记抗人IgG抗体及其他试剂配套组成，应用间接法原理检测人血清或血浆样品中的弓形虫IgG抗体。
本品对样本原液的最低检出量为100IU/ml。
三、试剂盒的组成1、包被弓形虫抗原的微孔板96孔2、酶标记抗人IgG抗体6.5ml3、阳性对照血清0.8ml4、临界阳性对照血清0.8ml5、阴性对照血清0.8ml6、显色液A 6.5ml7、显色液B 6.5ml8、终止液6.5ml9、浓缩洗涤液(10倍) 50ml10、样品稀释液52ml×2四、样本要求本试验用血清或血浆进行检测，用量为10μl。
勿使用染菌、脂血、溶血或黄疸样品。
按照标准方法收集血清，室温保存样品不要超过8小时，若实验在8小时以后进行，需将样品保存在2～10℃，如保存超过1周则保存在－20℃。
五、操作程序1、试剂盒在室温平衡20～30分钟。
浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水10倍稀释。
2、样品1:100稀释：将样品稀释液1ml加入一洁净小管内，加10ml待检样品，充分混匀。
3、将板条固定于板架上，剩余的板条用不干胶密封并放入密封袋中保存。
每孔加入稀释后样品100ml，每个样品至少做2孔。
阳性对照、阴性对照各加2孔，临界对照血清加3孔，100ml/孔。
另留一孔不加任何液体为空白对照。
置37℃30分钟。
4、甩净孔中液体，洗板3次，每次停留1分钟后甩净拍干，除空白对照外每孔加酶标记物50ml（1滴），置37℃30分钟。
5、甩净孔中液体，同上洗板3次，拍干后各孔滴加显色液A、B各50ml（1滴），置37℃避光10分钟，每孔立即加入终止液50ml（1滴），混匀后用酶标仪450nm读数判定结果。
ELISA法检测弓形虫IgM抗体测定(TOX-IgM)标准操作程序
1.检测原理采用酶联免疫捕获法原理进行检测。
利用抗人IgM单克隆抗体制备包被板，辣根过氧化物酶标记TOX 抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成固相二抗-抗体-抗原-酶复合物，该复合物催化底物显色，显色强度与TOX-IgM抗体含量成正比。
2. 样本类型及处理方法3.试剂注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品、质控品）需注明日期及签名。
每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截止日期。
开启时应检查试剂是否变色，是否肉眼可见的细菌生长迹象、浊度、沉淀反应等，这些表示试剂已经变质或超过保质期。
不同批号试剂盒中各组份不可以互换，组份所标示量为最低分装量。
4.仪器设备备注：“溯源方式”栏填写送较、自校、送检、自检、比对等。
5.质量控制5.1使用的质控品5.2质控周期5.2.1每一批次标本均需运行一次质控。
5.2.2每一批标本最大量为：92个标本。
5.3变异系数CV<20%5.4质控判断标准即时质控法5.5失控处理：对质控失控需查找原因并进行分析5.5.1先观察整块酶标板显色是否正常。
5.5.2查找操作过程是否按照SOP文件进行。
5.5.3质控品S/CO值>3SD或质控品S/CO值<3SD，结合模式报告结果。
6.操作步骤6.1选用试剂：郑州安图生物工程股份有限公司6.2平衡：从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应放置室温平衡30分钟后方可使用，余者应及时放入有干燥剂的自封袋封存于冰箱中备用。
在平衡试剂的同时，待测标本需放置室温平衡30分钟后再行测试。
6.3配液：取1包固体洗液用500ml纯化水溶解后备用。
配制好的洗涤液如用不完可放置2-8℃冷藏储存，使用前应放置室温平衡20分钟后方可使用。
6.4加样：用移液器在反应孔中分别加入阴、阳性对照血清和TOX-IgM质控品各100ul，测定孔中加入样品稀释液100ul，再依次加入待测血清样品10ul，用封口膜封板。
弓形虫pcr检测操作方法
弓形虫pcr检测操作方法弓形虫PCR检测是一种高效、灵敏和特异的分子诊断方法，能够在短时间内检测到弓形虫DNA的存在。
该方法不仅适用于临床患者的诊断，还可以在食品和环境样本中检测弓形虫的污染情况。
下面将介绍PCR检测弓形虫的具体操作方法。
1. 样品的处理和提取在进行PCR检测之前，需要从样本中提取出弓形虫DNA。
其中，临床样本包括血液、脑脊液、尿液、胎盘和胸腺组织等；食品和环境样本包括生肉、蔬菜、水和土壤等。
样品处理和提取方法主要包括三种：碱裂解法、有机溶剂法和商用提取盒法。
其中商用提取盒法是最为常用的方法，其具体操作步骤如下：首先，将样品加入提取液中，加入玻璃珠粉，在粗糙的颤动台上颤动5~10分钟，破坏样品细胞壁并充分混匀。
然后将混合液转移到离心管中，离心10~15分钟，使液体分离成沉淀和上清液。
接着吸取上清液，再通过离心柱或聚丙烯酰胺凝胶柱，获得纯化的DNA溶液。
2. PCR反应成功提取的DNA样品接着需要进行PCR反应，具体操作如下：首先将PCR反应液配置好。
反应液成分包括Taq DNA聚合酶、dNTPs、PCR 缓冲液和引物。
其中引物一般采用B1和B2引物，其序列为5'-TCC TGT CCG AAG GTC GAT GAA-3'和5'-TCT TAA ACT TGC GAA GAC ATC TTG TC-3'，能够特异性地扩增弓形虫18S rRNA基因序列。
然后将PCR反应液均匀地加到PCR管中，加入提取的模板DNA，盖上片盖，置于PCR仪中进行扩增。
PCR反应参数通常为95预处理5分钟，然后进行40~45个循环反应，每次包括95脱变性30~60秒、55退火30~60秒和72延伸20~40秒，最后72延伸10分钟，以保证PCR扩增的有效性。
3. 分析PCR产物PCR反应完成后，需要对PCR产物进行电泳检测，以判断是否扩增出预期的弓形虫DNA片段。
具体操作步骤如下：首先将PCR产物与DNA加载缓冲液混合均匀，通过电泳将产物分离出来，然后将电泳胶放入染料溶液中，染色20~30分钟后，洗净染料，放入透明的塑料袋中，然后将其放置到照相机中进行成像。
衣原体病,弓形虫间接血凝(IHA)试验操作方法
十一、衣原体病间接血凝（IHA）试验操作方法衣原体属的三个种都存在共同的属特异性抗原。
衣原体病间接血凝试验，则是用已知的属抗原检测人、畜、禽血清或分泌物中的抗体。
具有特异、敏感、简便、快速之优点。
（一）试剂盒内容包括衣原体属抗原致敏绵羊红细胞、阳性和阴性对照血清。
（二）试验方法1．将生理盐水滴于V型反应板也孔中，每孔50微升。
2．取被检样品（血清或分泌物）50微升于第1孔中，与生理盐水混匀后吸50微升加于第2孔，依次作对倍稀释至所要求的稀释度。
3．每孔加抗原25微升，作定性检查时只需加两孔。
人血清只加1：4和1：8两孔。
阴道分泌物只加1：2和1：46。
孔哺乳动物血清只加1：32和1：64两孔，禽类血清只加1：8和1：18两孔。
如作定量试验则可根据实际需要自行决定。
试验：设阳性血清+抗原、阴性血清+抗原、生理盐水+抗原各1孔。
（三）结果判定1．判定标准“++++”红细胞全部凝集，形成一层均匀的膜，布满整个孔底“+++”红细胞在孔底形成一层薄膜，面积比前者稍小“++”红细胞在孔底形成薄层凝集，边缘松散或呈锯齿状“+”红细胞在孔底呈稀薄、、散在、少量凝集，孔底有小圆点“±”红细胞沉于孔底，但周围不光滑或中心有空斑“-”红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点“++”经上的凝集判为阳性凝集2．对照试验出现如下结果试验方可成立，否则应重试，阳性血清+抗原呈“++++”；阴性血清+抗原呈“—”，抗原+生理盐水呈“—”。
3．被检样品判定标准：人群血清效价≥1：8（++）者判为阳性；效价≤1：2者判为阴性；介于二者之间判为可疑。
人群阴道分泌效价≥1：2（++）者判为阳性；效价≤1：2（++）者判为阴性。
哺乳动物血清效价≥1：64（++）者判为阳性；效价≤1：16（++）者判为阴性；介于二者之间判为可疑。
禽类血清效价≥1：16（++）者判为阳性；效价≤1：4（++）者判为阴性；介于二者之间判为可疑。
[注]被检样品采集及处理方法：1.血清：按常规方法采血及分离血清，要求无腐败。
弓形虫抗体(TOXO)检测卡
弓形虫抗体（TOXO）检测卡
弓形虫抗体检测卡按2005版《医疗器械分类目录》，属临床医学检验辅助设备（6840）。
管理类别为Ⅱ类。
产品简介如下：
1结构组成
1.1产品结构
1.1.1检测卡
由检测条和聚苯乙烯塑料外壳制成。
1.1.2检测条
由已包被了检测线和对照线的硝酸纤维素膜、化学偶合物膜、样品吸收膜，胶纸等部分经层压而成，再分切成固定宽度的条状。
2主要原材料
2.1弓形虫抗原：为纯化弓形虫分泌抗原，用于包被硝酸纤维素膜检测线和胶体金标记。
2.2弓形虫抗体：为羊弓形虫血清纯化抗体，用于包被硝酸纤维素膜控制线。
2.3金标检测条：由S1—S7部分构成：
S1选用亲和性高分子纤维素膜，经预先处理后制备成反应膜用来显示整体系统的反应结果；
S2、S3选用可使液体爬行速度较快，吸附力较强的粗纤维吸水纸或无纺布，其作用在于被粘贴在反应体的不同部位吸收待检样品标本；
S4同样选取吸附力较强的无纺布，作为金标记抗体的固相吸附材料；
S5为不同规格的双面胶，用于固定各种反应膜和吸水材料于S7上；
S6塑料基板，作为测试条反应体的支撑物；
S7单面胶带，用于固定金标反应膜和吸水材料于S6上；
3基本参数
3.1试剂盒的基本参数应符合表1的规定。
表2：基本参数。
实验动物弓形虫免疫胶体金快速检测方法的建立及试纸制备
摘 要 将 样 品 垫 、 包被 了 弓形 虫排 泄 分 泌 抗 原 和 胶 体 金 结 合 物 的 结 合 垫 ， 包被 了 弓形 虫排 泄 分 泌抗 原 和 抗 弓形 虫抗 体 的 硝 酸
纤 维 素膜 、 水 垫 依 次 首尾 互 相衔 接 粘 贴 在 白 色塑 料 板 上 ， 装 成 免 疫 胶 体 金 快 速 检 测 试 纸 爷 ， 以 此 建 立 检 测 实验 动 物 弓形 吸 组 并
弓形 虫 ， 论 有 无 临床 症 状 ． 可使 约 ５ ％携 带 者 无 均 ０ 因垂 直 传播 出现 流 产 、 死胎 及 胎 儿 先 天性 缺 陷１， ２ 在 １
养 殖上 ， 弓形虫 病 也会造 成 重大 损失 。 在 实 验 动 物 中 ， 鼠 、 鼠 、 鼠等是 弓形 虫 重 小 大 豚
化 。 温保 存备 用 。 低
２４ 胶 体 金 一弓 形 虫 排 泄 分 泌 抗 原 结 合 物 的 制 备 ．
Ｉ Ａ及 Ｅ ＩＡ等方 法 操 作烦 琐 ． Ｈ ＬＳ 只停 留在 实 验室 阶 段。 可用 于现 场快 速检 测 的试剂 盒 寥寥无 几 。对基 层 实 验 动物 中心 开 展 弓形 虫 病 检测 带 来 诸 多 障 碍 。
１ 材
料
Ｓ ３ ０凝 胶 ， ｕ １， 血 清 白蛋 白 ， 酸 纤 维 一０ ＨＡ Ｃ 牛 硝 素膜 ， 滤膜 ， 器 ， 滤 吸水 垫 ， 干胶 ，Ｖ 不 Ｐ Ｃ板 等购 自上 海 生 化 试 剂公 司 ； 弓形虫 阳性 、 阴性 血 清 ， 由上 海 兽 医研究 所 提供 。
２ 方 法
本 研 究拟 建立 一种 方便 、敏感 的 弓形虫快 速 检 测方
先 将 ０１ｇＬ Ｈ ｕ １ ０ Ｌ煮 沸 状 态 下 与 １ Ｌ ． ／ Ａ Ｃ ２ ０ ｍ ０ 的柠 檬 酸三 钠 １ Ｌ结 合 ， 续 煮沸 ５ｒｉ 酒 红 ．ｍ ５ 继 ｎ至 ａ 色， 却。 冷 而后 用 ０ ｌ ２ Ｏ 调 整金溶 胶 ｐ 至 ． ｍｏ Ｌ ＫＣ ３ ２ ／ Ｈ ８９ 制成 金溶 胶 。加入 ４ｍｇ弓形 虫 排泄 分 泌抗 原 。 ．，
猪弓形虫病的ELISA诊断及试剂盒建立
为 了摸清 青 海省 互助 县猪 群 中 弓形虫 病 的感 染 情况 ， 们 于 ２ ０ 我 ０ ７年 ５月 ， 重 组 蛋 白 Ｐ ０作 为 用 ３ Ｅ ＩＡ 诊断 抗原 ， 立 Ｅ Ｉ Ａ 方 法 ， 行 了猪 弓形 ＬＳ 建 ＬＳ 进 虫病 的 血清学 诊 断 ， 道 如下 。 报
收稿 日期 ：０ ７１ １６ ２ ０ — ｌＯ 基 金 项 目 ： 海 省科 技 厅 ２ ０一 １ ５项 目 青 ０ ６Ｎ一５ 作 者 简介 ： 刚 （ ９ ６） 男 ， 级 兽 医 师 ， 科 ， 要 从 事 动 物 疫 管 １ ６一 ， 高 本 主 病 的检 疫 通 讯 作 者 ： 利 青 ， － ｉ： ｌ ６ ＠ ｈ ｔ ｉ ｅｍ 马 Ｅ ｍａ ｍａｉ ７ ｏｍａｌ ｏ ｌ ｑ ．
Ｅ］ 徐叔云 ， 如濂 ， ５ 卞 陈修 ． 药理 实 验 方 法 学 ［ ． Ｍ］ ３版 ．北 京 ： 民 人
卫 生 出版 社 ， ０ ２ １ ２ １ ７ ． ２ ０ ：１ ５ — １ ０
传 播有 关 ， 特别 是在 人 畜 同药 的前提 下 ， 药性 的传 耐 播 直接对 人体 的健 康 造成 威 胁 ； ０株 大 肠 杆 菌对 ５ ４
［ ］ 陈 代 杰 ．抗 菌 药 物 与 细 菌 耐 药 性 ［ ． 海 ： 东 理 工 大 学 出 ３ Ｍ］ 上 华
版 社 ， ０ １ １４ ． ２ ０ ：—Ｏ
Ｅ ］ 韩 文 愈 ， 昭 阳 ， 玉 斌 ． 原 细 菌 检 验 技 术 ［ ．长 春 ： 林 ４ 何 刘 病 Ｍ］ 吉 科 学 技 术 出 版社 ，９ ２ ２ ０２ ８ １ ９ ：７ ７ ．
１ ～ ８． ６１
受检 ４ Ｏ株 大 肠 杆 菌对 抗 生 素 的耐 药 性 检 测 结 果 表 明 ， 病性 大 肠 杆 菌对 临 床 常 用传 统抗 菌 药 物 致 耐药 水平 超过 ２ ０ ０ １年 采 用 同 种 方 法 检 测 的 动 物 源 性 大 肠 杆 菌 的耐 药 水 平［ ， ２ 大肠 杆 菌 多 重 耐 药 的 现 ］
弓形虫IgM抗体检测试剂临床研究要点
弓形虫IgM抗体检测试剂临床研究要点吕允凤【期刊名称】《中国药物警戒》【年(卷),期】2014(000)010【摘要】Objective To discuss the main points of clinical trails of diagnostic reagents for IgM antibody to Toxoplasma gondii. Methods Considering both the active regulations of IVD and the reagent's own characteristics, the feature of clinical trails of diagnostic reagents for IgM antibody to Toxoplasma gondii were analysised. Results Sig nificant problems have been settled such as classification, study method, clinical trail scheme setup, sample selection, statistical analysis of results and reports composing. Conclusion Clinical trails of diagnostic reagents for IgM antibody to Toxoplasma gondii reagents should be carried out scientifically and focus on the accuracy and specificity,based on the active regulations and it's own clinical use.%目的详细解析弓形虫IgM抗体检测试剂临床试验方法及注意事项。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
弓形虫抗体快速检测试剂盒
弓形虫概述：
刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）,简称弓形虫，是一种人畜共患的传染病，猫科动物是弓形虫的最终宿主。
特别是孕妇感染了弓形虫会对胎儿发育有影响，引起流产和先天性弓形虫病。
弓形虫IgM/IgG抗体检测，是优生优育孕前的必检测项目之一。
产品简介：
弓形虫抗体快速检测试剂盒采用了胶体金法定性检测人血清/全血中弓形虫IgM/IgG抗体，
试剂盒主要组成：
1、弓形虫抗体快速板
2、样本稀释液
3、说明书
样本要求：
建议用新鲜血清或全血直接检测，避免使用高脂血的样本、溶血样本可能影响结果的判读，应避免使用。
检测方法：
1、使用前，保证试剂盒处于常温（15℃--30℃）。
2、撕开铝膜袋取出测试板平放，在检测板加样孔中加10 μl血清样本或全血样本，然后加入100 μl样品稀释液。
3-5分钟内观察检测卡中部检视窗的结果，20分钟内结果有效。
检测结果判读：
阳性结果：在检测区和对照区均出现一条紫红色线。
阴性结果：仅在对照区出现一条紫红色线。
无效结果：对照区无紫红色线出现，表示测试无效。
需重新测试。
检测结果解释：
1、若IgM抗体检测为阳性，说明近期感染弓形虫病。
2、若IgG抗体检测为阳性，说明既往感染过弓形虫病。
3、若IgM抗体检测为阴性、IgG抗体阴性，身体还未受到过感染弓形虫病。
检测的局限性：
1、本试剂盒为初筛产品，确诊应根据患者临床评价和检测结果进行严谨分析。
2、如样本中所检抗体含量极低，可能产生不正确的阴性结果。
当怀疑感染时，即使检测为阴性，可以隔一段时间进行重新检测，或用其它确诊试验证明。
3、本产品批间和批内产品的阴性符合率和阳性符合率都≥95%以上。
4、本产品要求待测血清必须新鲜，新鲜血清4℃保存不超过48小时，脂血、溶血、陈旧浓缩的血清均影响检测结果。