【前沿研究】基因编辑沙门氏菌—靶向性治疗肿瘤的理想载体
减毒沙门氏菌在疫苗和疫苗载体方面的研究进展
减毒沙门氏菌在疫苗和疫苗载体方面的研究进展李正;程相朝【摘要】Salmonella can not only be used as vaccines but also an ideal vaccine vector, it has been a wide range of medical and veterinary importance. Salmonella can be made by means of mucosal immune (oral or nasal), easy operation and little irritation of the vaccination. In addition. Salmonella is an invasion of intracellular, effectively presenting antigens to stimulate ami-Salmonella and induce foreign protein specific humoral immune response and cellular immune response, and can also induce mucosal immunity and systemic immunity. As new vaccines to provide a reference, this review mechanism of Salmonella invasion, the immune mechanism and its application status in vaccine.%沙门氏菌不仅可以用作疫苗,也是理想的疫苗载体,已受到医学与兽医学的广泛重视.沙门氏菌可以经黏膜途径免疫(口服或鼻内),操作方便,对接种对象刺激小；此外,沙门氏菌为胞内侵袭细菌,能有效递呈抗原,激发抗沙门氏菌和诱导外源蛋白的特异性体液免疫反应与细胞免疫反应,并能同时诱导黏膜免疫与全身免疫.文章对沙门氏菌的入侵机制、免疫机理及其在疫苗中的应用状况进行了综述,为新型疫苗的研究提供参考.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)001【总页数】5页(P40-44)【关键词】沙门氏菌;疫苗;载体【作者】李正;程相朝【作者单位】河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003;河南科技大学动物科技学院,河南洛阳471003【正文语种】中文【中图分类】S852.61沙门氏菌是重要的人兽共患病病原，在医学、兽医学和公共卫生学上均具有十分重要的意义（蔡宝祥等，2001）。
美国实验用沙门杆菌治疗癌症
美国实验用沙门杆菌治疗癌症
张洪伟
【期刊名称】《医学信息》
【年(卷),期】1997(000)007
【摘要】美国实验用沙门杆菌治疗癌症美国耶鲁大学医学院的研究人员正在实验利用沙门杆菌作为治疗癌症的一种新方法。
耶鲁大学癌症生物学家巴威勒克说，他领导的研究小组将沙门杆菌作基因改变后，用以追踪并消除老鼠身上的肿瘤。
实验结果显示，这种细菌对付癌细胞有一定的功效。
沙...
【总页数】1页(P10-10)
【作者】张洪伟
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R73-36
【相关文献】
1."养鸡生产中沙门氏菌病的预防与控制策略"专栏(四)沙门氏杆菌和弯曲杆菌在家禽群体中的动态变化特征 [J], Gary Thornton;李诗焱
2.美国王鸽曲霉菌与沙门氏杆菌混合感染的诊治 [J], 白庆田
3.英国实验用转基因病毒治疗癌症 [J], 姜岩
4.美国研究脱骨时间对牛肉香肠加工和贮藏过程中需氧菌、乳酸菌、沙门氏菌和大肠杆菌数量的影响 [J],
5.美国研究小型反刍动物中沙门氏菌、大肠杆菌和弯曲杆菌的存在情况 [J],
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基因编辑技术在肿瘤治疗中的潜在应用
基因编辑技术在肿瘤治疗中的潜在应用基因编辑技术是近年来发展迅速的一项生物技术，它可以精确地修改细胞和生物体的基因组，并对许多疾病治疗提供了新的解决方案。
肿瘤作为全球范围内威胁人类健康的重要疾病，不仅导致了大量患者的死亡，而且往往难以根治。
然而，基因编辑技术在肿瘤治疗中具有巨大的潜力，可以改变传统治疗方法的局限性，提高治愈率，减轻患者的身体和心理负担。
以下将探讨基因编辑技术在肿瘤治疗中的潜在应用。
一、基因编辑技术介绍首先，让我们简单了解一下基因编辑技术。
基因编辑技术主要包括锌指核酸酶（ZFNs）、转录活化剂介导CRISPR/Cas9系统（TALENs）以及聚合酶链反应介导CRISPR/Cas9系统等。
这些工具可以干预DNA序列并实现目标位点上特定DNA序列改造或修复。
二、靶向癌细胞基因突变的治疗方法肿瘤起源于细胞基因突变，因此靶向这些突变是一种有效的治疗策略。
通过基因编辑技术，可以选择性地修改肿瘤相关基因，并恢复其正常功能。
以往的一些方法，如药物或放射治疗，通常没有针对性地消灭肿瘤细胞，因为这些细胞与正常细胞之间没有明显的区别。
而基因编辑技术则可以精准识别和靶向癌细胞，并启动特定的分子途径来阻断肿瘤生长。
三、CAR-T细胞治疗中的基因编辑技术CAR-T细胞免疫治疗是近年来取得重大突破的一种新型抗癌策略。
通过改造患者自身的T细胞，使其表达具有靶向癌细胞能力的嵌合抗原受体（CAR），CAR-T细胞可以高效地识别和杀伤癌细胞。
然而，在实际应用中，CAR-T细胞也面临着一些挑战，例如出现副作用、耐药性等问题。
而基因编辑技术的引入可以优化CAR-T细胞治疗，提高其疗效和安全性。
基因编辑技术可以针对CAR-T细胞中的特定基因进行修饰。
通过删除或添加特定基因片段，可以改变CAR-T细胞在体内的活性、扩增能力以及抗肿瘤反应程度。
例如，通过靶向PD-1等免疫调节分子，可以提高CAR-T细胞的功能，并降低免疫耐药性。
减毒沙门菌载体在肿瘤基因治疗中的研究进展
静脉 给小 鼠一次 注射 多种 荷 瘤 （ 鼠、 人 黑 色 素瘤 ， 人 结肠 癌 、 肺癌、 乳腺 癌 、 肺 肉瘤 等 ） ， 发 现 相 对 于 正 常 部位 ， 细菌 聚集在 肿瘤部位 （ 包 括转移 瘤 ） 大 约 为 ２ ０ ０～１ ０ ０ ０倍 ， 肿瘤 组织 生 长 得 到控 制 ， 即使 在 小 细 胞肺 癌转 移模 型上 ， 肿 瘤生 长亦 延缓 ， 动 物 的生 存 时 间得 以延 长 。 由此 推测 沙 门菌导 致肿 瘤生 长减 慢 可 能 因为 肿 瘤 生 长 所 需 要 的 营 养 物 质 为 细 菌 所 消
Ｎ ｉ ｅ ｔ ｈ ａ ｍｍ ｅ ｒ 等 … 发现 以减 毒沙 门菌 Ｓ Ｌ ７ ２ ０ ７为 建到真核表达质粒 ， 制
成 口服疫苗 后 免 疫 小 鼠 Ｌ ｅ ｗ ｉ ｓ 肺腺癌等肿瘤模型 ，
分 说 明 了细菌 载体 开辟 抗肿 瘤治 疗 的新 途 径 。本文
基 因组改 造 以实现 毒 力 减 弱 而 得 到 减毒 菌 株 ， 如 随
机插入 １ 个 转 座子 或 删 除 １段 或几 段 致 病 基 因 ， 在 降低对 宿 主致 病力 的 同时 ， 仍 可 保 留其 高度 的免 疫
原性 ， 从 而 为 临 床 应 用 提 供 了 安 全 性 的 前 提 。 利 用减 毒 沙 门菌选 择 性 地 在 肿瘤 组 织 内复 制 、 增 生 来 抑制 多种 肿瘤 细 胞 的 生 长 ， 从 而 延 长宿 主存 活 时 间， 并 能改 变宿 主免 疫应答 。 Ｚ ｈ ｅ ｎ ｇ 等 应 用 沙 门 伤 寒 杆 菌 减 毒 株
［ 关键 词］ 沙 门菌 菌 苗 ； 肿瘤 ； 分 子 靶 向治 疗 ； 基 因
［ 中国图书资料分类号］ Ｒ ７ ３ ９ ． ９
靶向肿瘤的基因治疗
靶向肿瘤的基因治疗前言肿瘤是医学上的一大难题，它的发生、发展与我们的基因息息相关。
而肿瘤的治疗手段，传统的放疗、化疗和手术等治疗手段不够精准，可能会对身体造成一定的副作用。
近年来，基因治疗成为了一个备受关注的领域，其中靶向肿瘤的基因治疗是一种广泛研究和关注的方向，具有应用前景。
一、基因治疗的发展历程基因治疗在上世纪90年代才开始出现，最初的治疗手段是将修饰后的基因直接注入体内进行替换或治疗。
然而，由于基因表达、调控机制的复杂性，同时也由于基因治疗的安全性问题，治疗效果并不太理想。
在此之后，研究人员苦心研究发现了许多新的治疗方式，例如非病毒载体、慢病毒载体、基因编辑等。
其中，非病毒载体与慢病毒载体具有较高的效率和安全性，成为目前发展基因治疗的主要方式。
二、靶向肿瘤的基因治疗肿瘤的治疗是基于肿瘤的特异性进行的，之前的治疗手段难以精准地作用于肿瘤，导致患者副作用较大。
基于肿瘤的特异性，靶向肿瘤的基因治疗在近年来成为了应用的热点。
靶向肿瘤的基因治疗的基本流程是将靶向肿瘤的基因注入到人体内，使其指向肿瘤细胞，特化并破坏其细胞活动，从而达到治疗肿瘤的目的。
靶向肿瘤的基因又称为抗癌基因，它是一种针对肿瘤特异性氨基酸序列的基因，所以其作用范围较为局限，而且也不会对正常细胞产生影响，因此具有较好的安全性。
三、常用的靶向肿瘤的基因治疗方法1、作为治疗靶点的癌症抑制基因癌症抑制基因，简称CAGs（Cancer Antigen Genes）是一类与肿瘤相关的核心基因，它在正常人体细胞中具有相对稳定的表达水平，而在肿瘤组织中则常常表达缺失。
CAGs基因在治疗肿瘤方面的加强作用主要是通过抑制肿瘤细胞的增殖与转移来达到治疗肿瘤的目的。
2、激活免疫抑制的抗原识别基因肿瘤的形成与发展涉及到人体免疫系统的抑制作用，而在靶向肿瘤的基因治疗中，通过激活免疫系统的抗原识别基因ARs（Antigen Recognition）来对抗肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的效果。
211105505_基于重组减毒沙门氏菌载体递送疫苗及药物的肿瘤免疫治疗研究新进展
中国免疫学杂志2023 年第 39 卷基于重组减毒沙门氏菌载体递送疫苗及药物的肿瘤免疫治疗研究新进展李琦 陈多多 王弘瑞 胡迪 杨明 孙丽媛 （北华大学医学技术学院，吉林132013）中图分类号 R392.11 文献标志码 A 文章编号 1000-484X （2023）03-0670-05［摘要］ 沙门氏菌介导的肿瘤免疫治疗方法已经成为抗肿瘤研究领域的热点之一。
首先，沙门氏菌作为兼性厌氧菌，能够特异性地定植在肿瘤区域，直接杀伤肿瘤细胞或诱导机体产生免疫反应，介导包括巨噬细胞、中性粒细胞和T 细胞等在内的免疫细胞浸润从而发挥抗肿瘤效应。
其次，沙门氏菌具有高度遗传修饰性，可被改造为毒力减低或精准靶向的重组沙门氏菌。
此外，重组沙门氏菌还可作为疫苗、细胞毒性药物、RNAi 和纳米颗粒递送的有效平台，在治疗的同时还可预防肿瘤的复发和转移。
如重组沙门氏菌载体活疫苗裂解系统，能够加强肿瘤抗原呈递，促进T 细胞发挥杀伤效应。
本文介绍了减毒沙门氏菌载体的抗肿瘤免疫特性和肿瘤靶向性，并对以重组减毒沙门氏菌为递送系统进行肿瘤免疫治疗的研究进展进行综述。
［关键词］ 沙门氏菌；肿瘤；疫苗；细胞毒性药物；RNAiAdvances in vaccine and drug delivery for tumor immunotherapy based on recombinant attenuated Salmonella vectorLI Qi ， CHEN Duoduo ， WANG Hongrui ， HU Di ， YANG Ming ， SUN Liyuan. School of Medical Technology ， Beihua University ， Jilin 132013， China［Abstract ］ Salmonella -mediated immunotherapeutic approaches for tumors have become one of hot spots in the field of antitu⁃mor research. First ， Salmonella ， as a parthenogenic anaerobic bacterium ， is able to specifically colonize the tumor area. It can also directly kill tumor cells and induce immune responses in body ， mediating the infiltration of immune cells such as macrophages ， neu⁃trophils and T cells to exert anti -tumor effects. Second ， based on the highly genetically modified features ， it can be modified to become virulence -reduced or precisely targeted recombinant Salmonella. In addition ， recombinant Salmonella could serve as an efficient plat⁃form for the delivery of cancer vaccine ， cytotoxic agents ， RNAi and nanoparticles ， which showed a strong inhibitory effect on growth of cancer ， and exhibited a prevention of tumor recurrence and metastasis. For example ， a vaccine lysis system based on recombinantattenuated Salmonella vector ， which can enhance tumor antigen presentation and promote antitumor effects of T -cell. This reviewdescribes the antitumor immune properties and tumor targeting of Salmonella ，and also elaborate the progress of research on tumor immunotherapy using recombinant attenuated Salmonella as a delivery system.［Key words ］ Salmonella ；Tumor ；Vaccines ；Cytotoxic agents ；RNAi传统的肿瘤疗法有手术、化疗和放疗等，但存在靶点选择性差、药物渗透性差和患者不良反应性等缺点［1］。
减毒沙门氏菌在抗肿瘤治疗中的应用
减毒沙门氏菌在抗肿瘤治疗中的应用蒋如如; 李欣; 李洁; 哈小琴【期刊名称】《《基础医学与临床》》【年(卷),期】2019(039)009【总页数】5页(P1356-1360)【关键词】沙门氏菌; 肿瘤; 减毒菌株【作者】蒋如如; 李欣; 李洁; 哈小琴【作者单位】甘肃中医药大学临床医学院甘肃兰州 730030; 人民解放军联勤保障部队第 940 医院检验科甘肃兰州 730050; 兰州大学公共卫生学院甘肃兰州730030【正文语种】中文【中图分类】R730.54肿瘤是世界上威胁人类健康的主要疾病之一。
尽管目前抗肿瘤治疗取得了很大的进步，但是肿瘤的转移、不良反应性以及治疗抗性等相关的问题仍函待解决，目前寻找肿瘤替代治疗的方案迫在眉睫。
近年来具有抗肿瘤活性的减毒沙门菌作为抗肿瘤剂或分子载体取得了较大的关注。
微生物，特别是活细菌用于预防性疫苗接种和癌症治疗的用途在过去已经长期用于人类并且一直存在争议。
细菌介导的癌治疗的一个关键优势是细菌在肿瘤中选择性积聚，肿瘤中细菌累积量大约是正常器官的1 000倍[1]。
细菌的增殖能力扩展了它们的治疗效果。
使用细菌进行癌治疗的做法可以追溯到十九世纪。
1893年，有研究发现一种细菌和细菌裂解物的过滤混合物，由化脓性链球菌和芽孢杆菌(现称黏质沙雷氏菌)组成，称之为“Coley’s Toxin”，而且在某些病例中，当Coley’s Toxin注入肿瘤时可抑制肿瘤生长[2]。
1 抗肿瘤治疗中的细菌载体细菌的抗肿瘤原理是于1935年在牛分枝杆菌的弱毒株卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)中发现，这种抗肿瘤活性可解释BCG免疫的婴儿白血病的发病率比较低，随后BCG被用于膀胱癌的免疫疗法，用于减少膀胱癌的复发和转移。
最近，由于肿瘤微环境中的低氧特性，目前已经提出了3组不同的具有抗肿瘤活性的细菌，第1组是双歧杆菌属的厌氧菌，第2组是沙门氏菌和李斯特菌属，第3组是梭菌属厌氧细菌。
以减毒沙门氏菌作为载体的DNA疫苗抗肿瘤血管生成
线 ，晚期流产。１ 例孕 ２ 周 ，因劳累过度胎膜早 ７ 破 拆 线后 ，顺 产 分娩 １ ，重 １１ｇ 女 ． ，存 活 。还 有 ｋ １ ，早产分娩 ， 例 新生儿死亡。成功率达 ８ ％。 ０ 讨 论 子 宫 颈 作 为 子 宫 下 段 的一 部 分 ，在 女性 的一生 中发挥着重要 的生理作用 ，参与受精 、 妊 娠及 分 娩 的过 程 。一 般 均 认 为 ［］ 难 产 ，扩 ２ 由于 － ５ 张子宫颈刮宫 或宫颈手术 ，引起 的子宫 内 口处撕
裂 或 宫颈 严 重 裂 伤 ，是 本 症 的 主要 原 因 。但 也 有 少数 病 例 ，由于 宫颈 发 育不 良州 。本组 病 例 中 ，全 部 均 有 过难 产 和 扩 张 宫 颈及 宫 颈 手术 史 ，检 查 中
定要交待病情 ，并做好孕期保健 ，做好并发症 的 预 防 ，可有 效 的提高 手术 疗效 。
收稿 日期 ：２ ０ 一 １ ０ ０ ６ ｌ— ２ 作者简介 ：武翠玲 （９ ５～）女 ，２０ １７ ０ ４年昆明医学院肿瘤专业硕 士研究生 。 ｋ 通讯作者 ：王熙才 （９ ２～）男 ，昆明医学院肿瘤 学教授 ，硕 士生导师 ，ｗ ｎ ｘ２ ０ ３ ３ ２ ． ｒ １６ ａｇｃ０ ５ ２ ＠１６ｃｎ ｏ
产科杂志 ，１６ ，ｌ ：４ ． ９５ ｌ ３
手术太 晚可能丧失 时机 ，或者 即将流产 ，手术效
果 不 佳 。故 我们 同样 认 为 手 术 时 间应 选 在 １ ４～１ ８
［］沈 阳 医学 院．实 用手 术学 妇产 科分 册 ［ ４ Ｍ］． 潘 阳 ：
减毒沙门菌载体在肿瘤基因治疗中的研究进展
Ａｂ ｔａ ｔ ｓｒ ｃ ：Ｇｅ ｈｅ ａ ｏｒｃ ｎ ｅ ｒ ａ ｍ ｅ ｅ ｒ ｓ ｎｔ ｒ ｍ ｉｉｇ ａｐ ｒ ａ ｈ ｔ ｔｈ ｓ ｓ ｗ ｎ ｓ ｌ ｃｉ ｉｙ ａ ｆｉａ ｙ ｉ ｌｎｃ ｌｔｉ ｎｅｔ ｒ ｐｙ ｆ ａ ｃ ｒｔｅ ｔ ｎｔｒ ｐ ｅ ｅ ｓａ ｐ ｏ ｓｎ ｐ ｏ ｃ ｈａ ａ ｈｏ ｅｅ ｔｖｔ ｎｄ ｅｆｃ ｃ ｎ ｃ ｉｉａ ｒ— ａｓ Ａ ｔｅ ａ ｅ ｌ ｏ ｌ ｔａｎｓｃ ｐ ｌ ｏｔ ｅ ｅ ｔｖｅ ａ ｐ ｉｉａ ｉ ｉｈｉ ｕｍｏｒ ｎｄ ｅ ｒ ｓ ｉｎ ｏ ｆｅ ｔ ｎｅ ｎｃ ｄｎｇ ｌ． ｔ ｎｕ ｔ ｄ Ｓａｍ ｎｅｌ ｓ ｒ ｉ ａ ａｂｅ ｏｆｂ ｈ ｓ ｌｃ ｉ ｍ ｌ ｃ ｔｏｎ ｗ ｔ ｎ ｔ ａ ｆ ｓ ａ ｘｐ ｅ ｓｏ ｆｅ ｆｃ ｏｒｇｅ ｓ ｅ ｏ ｉ ｔ ｅ ａ ｅ ｔｃ ｐｒ ｔ ｉ ｒ ｒ ａ ｌ ｈｅｍ ｏｓ ｏ ｉｉ ． ｎ ｔ ｓ ｒ ｖｅ ， ｌ ｅ ｃ ｉ ｈｅ ｇ ｎｅｄｅｉｅ ｙ ｓ ｔ ｍ ａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｕｓ ｆ ｈ ｒ ｐ ｕ ｉ ｏ ｅｎｓａ ｅ ｐ ｏｂ ｂ ｙ ｔ ｔｐｒ ｍ ｓｎｇ Ｉ ｈｉ ｅ ｉｗ ｗｅ ｗｉｌｄ ｓ ｒｂｅ ｔ ｅ ｌ ｒ ｙｓｅ ｂ ｓ ｄ ｏ ｈ ｅｏ ｖ ａ ｔｎｕａ ｅ ａ ｍｏｎ ｌａ ｓ ｒ ｉ ． ｔｅ ｔｄ Ｓ ｌ ｅ ｌ ｔａｎｓ Ｋｅ ｒ ： ｃｅ ｉｌＤＮ Ａ ｒ ｎ ｆ ｒ ｙ ｗｏ ｄｓ ｂａ ｔ ｒａ ｔ ａ ｓ ｅ ；ｇｅ ｈｅ ａ ｙ； Ｓ ｌ ｏ ｌａ；ｔ ｍ ｏ ｎｅ ｔ ｒ ｐ ａ ｍ ｎｅｌ ｕ ｒ
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细菌用于靶向治疗肿瘤的研究进展
文章编号：1001-8689(2021)05-0388-08细菌用于靶向治疗肿瘤的研究进展崔超 涂强 张友明*(山东大学微生物技术国家重点实验室，青岛 266237)摘要：由于肿瘤独特的病理生理学特性和可预见的耐药性，传统肿瘤疗法如放疗、化疗和免疫治疗等都未能完全根除肿瘤细胞，细菌疗法是一个新的治疗手段，具有较高的靶向性，无论是单独使用还是与传统肿瘤疗法联合使用，都显示出对肿瘤复发和抑制转移的积极作用。
在基因工程的帮助下，表达抗癌药物的肿瘤靶向细菌将直接针对肿瘤区域，分泌治疗分子，导致肿瘤细胞死亡，细菌靶向治疗肿瘤具有广阔的应用前景。
论文综述了近年来细菌靶向治疗肿瘤的研究进展，介绍了细菌疗法的作用机制和未来的发展方向，尤其是介绍了益生菌大肠埃希菌Nissle 1917(EcN)在靶向抗肿瘤治疗中的研究。
关键词：细菌疗法；肿瘤靶向；大肠埃希菌Nissle 1917(EcN)中图分类号：R9 文献标志码：AAdvances in bacteria for tumor-targeting therapyCui Chao, Tu Qiang, and Zhang You-ming(State Key Laboratory of Microbial Technology, Shandong University, Qingdao 266237)Abstract Due to the unique pathophysiology of tumor and the predictable emergence of resistance, conventional cancer therapies such as chemotherapy, radiation therapy, and immunotherapy have been unsuccessful in the complete eradication of tumor cells. Bacteriotherapy is a novel approach, higher efficacy in delivering antitumor agents to the tumor cells, either used alone, or in combination with conventional methods, has shown a positive effect on regression of tumors and inhibition of metastasis. With the aid of genetic engineering, tumor-targeted bacteria expressing anticancer drugs can directly target the regions of tumors and secrete therapeutic molecules, leading to cancer cell death. There is a broad application prospect on tumor-targeting therapy of bacteria. This paper reviews the research progress of tumor-targeting therapy by bacteria in recent years, discusses the mechanism of bacteriotherapy and future directions, and in particular, introduces the research progress of tumor-targeting therapy by Escherichia coli Nissle 1917 (EcN).Key words Bacteriotherapy; Tumor-targeting; Escherichia coli Nissle 1917 (EcN)收稿日期：2020-03-19基金项目：中国博士后科学基金(No. 2019M662375)；国家自然科学基金(No. U1906229)作者简介：崔超，女，生于1984年，博士，主要研究方向为细菌靶向治疗肿瘤的作用机制，E-mail:********************通讯作者，E-mail:********************.cn 。
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沙门氏菌是一种兼性厌氧革兰氏阴性棒状细菌。
沙门氏菌属肠杆菌科，是人类和动物的一种重要的医学病原体。
在我国，由沙门氏菌引起的食物中毒占细菌性食品中毒事件的40%。
沙门氏菌形成了一个复杂的细菌群，包括两个种和六个亚种，包括超过2579个血清型。
目前在沙门氏菌属中确认有两个种，S.enterica 和S. bongori。
沙门氏菌选择性地靶向肿瘤组织的特性也使其成为肿瘤靶向性治疗的理想载体。
沙门氏菌作为一个胞内寄生菌, 具有在肿瘤组织内高效地复制和有效抑制肿瘤生长的特性。
它在基因工程改造后可以作为肿瘤基因治疗的载体在肝癌、胃癌、大肠癌等的体内外应用。
沙门氏菌与肿瘤治疗
1.减毒沙门氏菌直接抗肿瘤治疗:
针对沙门氏菌可以有效抑制肿瘤生长的特性，科学家利用多种基因工程技术对沙门氏菌的染色体基因组进行改造, 可以实现沙门氏菌的毒力减弱，从而得到减毒的菌株, 在降低对宿主致病力的同时, 依旧让其保有高度的免疫原性, 从而确保了临床应用的安全性。
研究表明, 减毒沙门氏菌有较好的靶向定植性, 对肿瘤有直接的溶瘤作用。
利用减毒沙门氏菌定向选择性地在肿瘤组织内复制、增殖, 可有效抑制多重肿瘤细胞的生长, 延长动物存活时间。
2. 作为肿瘤基因治疗载体:
减毒沙门氏菌可携带外源基因、细胞因子、外源效应蛋白等治疗肿瘤。
细胞因子可通过直接杀伤肿瘤细胞而起到抗肿瘤作用。
外源效应蛋白能经过减毒沙门氏菌有效地传递并且表达出治疗性蛋白。
沙门氏菌敲除phoP基因，构建减毒沙门氏菌，提高沙门氏菌治疗肿瘤的安全性
科学家使用基因剪接PCR方法联合λ-Red系统去删除野生型鼠伤寒沙门氏菌的phoP基因。
这种phoP基因是一个转录调节因子，也是在生物适应内环境和巨噬细胞内存活中起关键作用的两个组分调节系统的组成。
它还控制了鼠伤寒沙门氏菌致病所需的40多个基因的表达，以及对宿主体内的不良环境如胃的低pH值、胆盐、小肠的低氧和上皮细胞上的阳离子抗菌肽的抵抗能力。
鼠伤寒沙门氏菌phoP基因的破坏，导致其无法在噬菌细胞内存活，并增加了其对宿主压力因素的敏感性，从而达到减毒的作用，以便开发更安全的细菌治疗方法。
研究者采用SOEing PCR法和western blot方法对鼠伤寒沙门氏菌的野生型和标准株进行了phoP基因的破坏。
采用3个标准PCR和1个融合PCR反应构建包含phoP基因上下游和卡那霉素盒的线性DNA。
使用了携带卡那霉素基因的pKD4作为模板质粒，其侧边为FRT (FLP识别靶标)位点。
将得到的结构电穿孔成鼠伤寒的感受态细胞。
PCR验证后确认，卡那霉素基因已经取代了PhoP基因。
因此，通过敲除Phop基因成功构建减毒沙门氏菌。
基因编辑细菌，给科学研究、临床医疗、农业工业生产带来无限可能！
基因敲除已被应用于许多目的，如研究基因功能、疫苗生产和提高对蛋白质的结构或表达的研究。
目前，运用较广的传统基因编辑方法包括使用R6K自杀质粒、λ-Red系统。
尽管λ-Red系统看似简单且已经被成功应用于大肠杆菌和其他革兰氏阴性菌，但是由于菌的内在本质差异，这个系统在不同的菌中的表现不一样。
此外，自杀质粒载体存在宿主范围狭窄、抗性残留等缺点。
传统的基因敲除技术存在后期筛选工作量大（周期），重组效率低，残留loxP或FRT位点等缺点。
CRISPR/Cas9技术是近年来发展最迅速的基因编辑技术，但是由于细菌内缺乏修复系统，使用此技术编辑基因的微生物种类不多。
UBIGENE另辟蹊径，独创了CRISPR-B™技术，CRISPR-B™技术作为一种高效的基因组编辑技术，具有操作简单、靶向性强、脱靶率低、无痕等诸多优势。
可对各种细菌进行高效基因编辑，效率超传统方法20倍以上，可快速实现细菌的敲除，点突变或敲入。
沙门氏菌靶向CTNNB1基因的shRNA表达，建立抑制肿瘤的新工具
细菌治疗在临床上治疗腹泻、肠易激综合征、炎症性肠病等胃肠疾病有良好的安全性。
对于可以在实体肿瘤内浸润和复制的各种非致病性厌氧菌，可用于研发针对人体实体瘤的疗法。
核糖核酸干扰（RNAi）已被确立为一种重要的研究工具，具有巨大的基因治疗潜力。
科学家将细菌治疗和RNAi治疗相结合，开发了细菌介导的RNAi，将表达shRNA的载体递送到靶细胞中，从而沉默致病基因。
与对照细胞相比，SW480细胞中CTNNB1基因沉默可显著降低细胞增殖和死亡。
同时，通过构建SW480移植肿瘤模型，验证在体内沙门氏菌介导的CTNNB1基因沉默对肿瘤发育的抑制。
BALB/c 雌性小鼠被随机分为三组，分别接受磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)、SL-Psls-TAT和SL-pSLS-huCAT接种。
然后记录两周内各组肿瘤的生长情况以及每个肿瘤中CTNNB1及其下游靶基因c-Myc和cyclin D1的表达。
在SW480移植肿瘤模型中，与PBS对照组相比，SL-pSLS-huCAT处理的移植瘤生长降低了65%，与SL-pSLS-TAT处理的移植瘤生长降低了45%。
同时，在这些肿瘤中检测出CTNNB1、c-Myc和cyclin D1水平均降低。
因此，SL-pSLS-CAT 介导的CTNNB1敲低显著降低了SW480移植瘤小鼠的肿瘤生长。
随后，通过APCmin小鼠口服SL-pSLS-mCAT，检测表达CTNNB1 shRNA 的沙门氏菌能否抑制息肉的生长。
发现SL-pSLS-mCAT降低了小肠CTNNB1 mRNA 水平34%、息肉73%和粘膜组织83%,相比于SL-pLSLS-TAT注射组。
SL-pSLS-CAT治疗也导致这些基因在小鼠息肉、粘膜组织和小肠中表达水平降低。
这些数据表明，表达shRNA的减毒沙门氏菌可能是体外基因沉默、功能基因组学和基于RNAi抗癌或人体免疫缺陷病毒疗法的发展的一个强大的新工具。
参考文献：
1.A. Andino and I. Hanning.Review Article Salmonella enterica
: Survival, Colonization, and Virulence Differences among Serovars.2015.e Scientifific World Journal.
2.朱晓舟, 孔桂美, 万丹, 孙国壮, 焦红梅, 阴银燕, 李国才.减毒沙门氏菌在消化系肿瘤中的研究进展.2017.世界
华人消化杂志.1480-1485
3.H Guo, J Zhang and C Ina.Targeting tumor gene by shRNA-expressing Salmonella-mediated RNAi.Gene Therapy.2011.18:95-105
4.Ahani Azari, A. Zahraei Salehi, T. Nayeri FasaeiB.and Alebouyeh, M..Gene disruption in Salmonella typhimurim by modified λRed disruption system. Iranian Journal of Veterinary Research ,Shiraz University.201
5.52:301-305
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