第三章细菌感染实验室诊断下赏析
细菌感染的实验室检查
通过检测患者血清中的抗体以确定患者是 否感染某种细菌。
通过病理学方法对感染部位的组织进行观 察和诊断。
实验室检查的流程
样本处理
将采集的样本进行处理，如离 心、过滤等，以提取样本中的 细菌。
药敏试验
对分离鉴定的细菌进行药敏试 验，以确定患者对哪种抗生素 敏感。
采集样本
根据患者的症状和医生的诊断 ，采集患者的血液、尿液、粪 便、分泌物等样本。
推进实验室检查的标准化和规范化
制定行业标准
组织制定实验室检查相关的国际和国内标准，规范实验室检查的 操作流程和质量标准。
培训和教育
加强实验室检查人员的培训和教育，提高他们的专业素养和技术水 平。
质量控制
建立实验室检查的质量控制体系，定期对实验室进行检查评估，确 保实验室检查数据的准确性和可靠性。
THANKS
04
分子生物学检查
分子生物学检查方法
聚合酶链反应（PCR）
是一种常用的分子生物学检查方法， 通过复制目标DNA片段来增加其数量 ，从而进行快速、灵敏的检测。
基因测序
生物芯片技术
利用芯片上的微小点阵列进行多重检 测，可同时检测多种病原菌。
对细菌的基因组进行测序，以识别和 鉴定细菌的种类和亚种。
分子生物学检查结果解读
培养与鉴定
将提取的细菌进行培养、分离 和鉴定，以确定感染的细菌种 类和数量。
结果报告
将实验室检查结果报告给医生 ，以便医生根据结果制定合适 的治疗方案。
02
细菌培养与鉴定
细菌培养方法
01
02
03
常规培养
将样本接种在培养基上， 通过培养观察细菌的生长 情况、形态、染色等特征 ，以确定细菌种类。
细菌感染的实验室诊断（一）
细菌感染的实验室诊断（一）实验室诊断主要包括以检测致病菌及其抗原、产物或核酸为目的的细菌学诊断，以及检测患者血清中特异性抗体为目的的血清学诊断。
一、细菌学诊断（一）标本采集细菌感染性疾病的实验室检查结果主要取决于临床标本的质量、采集时间及方法、实验人员的技术熟练程度及经验。
临床医生应该知道何时和怎样采取标本，需作哪些实验室检查，以及如何解释结果。
为提高致病菌检出率，避免诊断错误或漏检，标本采集与送检过程应遵循下列原则：1．严格执行无菌操作，尽量避免患者正常菌群或外界环境中杂菌污染标本。
采取局部病变标本处，不可用消毒剂，必要时宜以无菌生理盐水冲洗，拭干后再取材。
从呼吸道、消化道、泌尿生殖道、伤口或体表分离可疑致病菌时，应与其特定部位的正常菌群及临床表现一并加以考虑，因为目前内源性感染呈不断上升趋势。
2．根据致病菌在患者不同病期的体内分布和排出部位，采集不同的标本（表7-1）。
例如流行性脑膜炎患者取脑脊液、血液或出血瘀斑；伤寒患者在病程第1～2周内取血液，第2～3周时可取粪便。
尽可能采集病变明显部位的材料。
3．应在疾病早期和使用抗菌药物之前采集标本，否则可能需停药数天后采集，或者在分离培养时加入药物拮抗剂。
4．标本必须新鲜，采集后尽快送检，尤其是检测抵抗力弱的细菌。
若不能立即送检，应将标本置于特殊的转运培养基中，低温保存，以减缓致病菌的死亡，阻止杂菌的过度生长。
送检过程中，除不耐寒冷的脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等要保温外，多数菌可冷藏送运。
（二）致病菌的检验程序主要有直接涂片染色镜检、分离培养、生化试验、血清学试验等，有的尚需作动物试验等。
细菌学快速诊断新技术主要有核酸杂交（nucleic acid hybridization）和聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）等。
敏感性、特异性和检测效率是影响临床诊断程序选择的重要因素。
1．直接涂片染色镜检直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌的形态、大小、排列方式和染色特点。
第三章 病例分析——结核病
第三章病例分析——结核病一、概述1.概念结核病是结核分枝杆菌引起的慢性传染病，可侵及多个脏器，以肺部受累形成肺结核最为常见。
痰中带菌者称为传染性肺结核，传染性肺结核病人排菌是结核传播的主要来源，主要为病人与健康人之间经飞沫传播。
人体感染结核杆菌后不一定发病，当抵抗力降低时，才会引起发病。
其病理变化为渗出型、增生型、干酪样坏死三种类型。
三种病变可以相互转化、交错存在，很少单一病变独立存在，而是某一种改变为主。
2.结核病分型Ⅰ型：原发型肺结核，多见于儿童，典型病变包括肺部原发灶，引流淋巴管和肺门淋巴结的结核性炎症，三者联合称为原发综合征。
多数原发综合征临床症状轻微，不治自愈，很少排菌。
Ⅱ型：血行播散型肺结核，儿童多来源于原发性肺结核；成人多由原发感染灶中的结核菌破溃进入血行引起。
本型肺结核发生于免疫力极度低下者。
Ⅲ型：继发型肺结核，为成人与继发性肺结核最常见类型。
好发于两肺上叶尖后段或下叶尖段，病灶趋于局限，易于有干酪坏死和空洞形成，排菌较多。
Ⅳ型：结核性胸膜炎：常见胸腔积液，为渗出液，草绿色，淋巴细胞为主，ADA明显升高。
V型：其他肺外结核。
二、诊断要点1.全身症状：发热，多数为长期低热，，可伴有倦怠、乏力、夜间盗汗、食欲减退、体重减轻、妇女月经不调、易激惹、心悸、面颊潮红等。
2.呼吸道症状：咳嗽、咳痰、咯血、胸痛、呼吸困难。
3.体征：病灶以渗出型病变为主的肺实变且范围较广或干酪性肺炎时，叩诊浊音，听诊闻及支气管呼吸音和细湿啰音。
继发型肺结核好发于上叶尖后段，故听诊于肩胛间区闻及细湿啰音，有极大提示诊断价值。
空洞性病变位置浅表而引流支气管通畅时有支气管呼吸音或伴湿啰音；巨大空洞可出现带金属调的空瓮音。
慢性纤维空洞性肺结核的体征有患侧胸廓塌陷、气管和纵隔间向患侧移位、叩诊音浊、听诊呼吸音降低或闻及湿啰音，以及肺气肿征象。
支气管结核有局限性哮鸣音，特别是于呼气或咳嗽末。
4.实验室和辅助检查1）病原学检查① 痰涂片抗酸染色直接镜检有助于诊断② 痰培养具有较高的敏感性和特异性③ 结核菌抗原和抗体检测2）影像学检查① X线胸片原发性肺结核典型特征有原发灶、淋巴管炎和肺门或纵隔肿大的淋巴结组成哑铃状病灶。
【宠物微生物课件】细菌感染的实验室诊断方法
细菌感染的实验室诊断方法
细菌感染的实 验室诊断方法
一、检测细菌 二、检测细菌的抗原或抗体 三、检测细菌遗传物质
一、检测细菌
直接涂片显微 镜检查
分离培养动物接种试验Fra bibliotek生化试验
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一、检测细菌
1、直接涂片显微镜检查
在细菌病的实验室诊断中，形态检查的应用 有两个时机，一是将病料涂片染色镜检；二 是在细菌的分离培养之后，将细菌培养物涂 片染色，观察细菌的形态、排列及染色特 性，这是鉴定分离菌的基本方法之一，也是 进行生化鉴定、血清学鉴定的前提。
一、检测细菌
2、分离培养
细菌的分离培养及移植是细菌学检验中最重 要的环节，细菌病的诊断与防治以及对未知 菌的研究，常需要进行细菌的分离培养。分 离纯化的病原菌，可为生化试验和血清学试 验提供纯的细菌，也可用于细菌的计数、扩 增和动力观察等。
一、检测细菌
3 、动物接种试验
实验动物接种可用于病原体的分离与鉴定， 此外，也可用于确定病原体的致病力，恢复 或增强细菌的毒力，测定某些细菌的外毒 素，制备疫苗或诊断用抗原，制备免疫血 清，检验药物的治疗效果及毒性等。
一、检测细菌
4、生化试验
细菌生化试验的主要用途是鉴别细菌。对革 兰氏染色反应、菌体形态及菌落特征相同或 相似细菌的鉴别具有重要意义。
细菌感染的实 验室诊断方法
一、检测细菌 二、检测细菌的抗原或抗体 三、检测细菌遗传物质
二、检测细菌的抗原或抗体
1、检测抗原
利用已知的特异性抗体测定 有无相应的细菌抗原可以确
感谢各位聆听
细菌感染的实验室诊断方法
定菌种或菌型。
细菌感染的实 验室诊断方法
〖医学〗细菌感染实验诊断
总值 1 3 7 6 6
第二节 临床标本的采集 与处理
一、标本采集的一般原则
1.病程早期、急性期或症状典型时, 使用抗生素前。
2.无菌采集 应无污染,严格进行无 菌操作。
3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 适量标本,采集量不应过少。
4.注意在不同病程采集不同部位标本。 5.采集标本时要防止传播和自身感染。
(三)分离培养基的选择
依据卫生部临床检验中心推荐,应备有 如下分离培养基: 1．血平板 适于各类细菌的生长。 2．巧克力血平板 其中含有V和X因子,
适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的 标本。
3．中国蓝平板或伊红美蓝平板 有选择地 促进G_菌生长,是较好的弱选择性培养 基。
4．麦康凯平板 具中等强度选择性,是非 发酵菌鉴定的依据。
第一节 临床感染性疾病 实验诊断要求
一、诊断的目的 1.以疾病的病原学诊断为目的,只需鉴
定到细菌的种。 2.为提供治疗方案为目的,要进行临
床标本的直接药物敏感试验。
3.以流行病学研究为目的,要鉴定到型。 4.以了解细菌与感染的关系为目的,应
该做细致的鉴定。
二、诊断试验的选择
1.选择有鉴定价值的试验。 2.选择简易、快速、方便的试验,达
4．室内操作台须每日用消毒剂擦洗,地 面至少一周用消毒剂擦洗1次。
5．对接收的标本、无菌器具、用过的物 品等应明显分开井放在指定位置。同 时要对用过的物品及时进行灭菌处理。
6．细菌室应有当地的气温特点的消防设 备。
(二)无菌实验室
1．无菌室应完全封闭,人员出入应 有两道门,其间应隔有 缓冲区。
2．用前应以紫外线消毒30min,定期 用乳酸或甲醛熏蒸,彻底消毒。
组别 1 2 3 4 5
Mic06微生物感染的实验室诊断
详细描述
分子生物学诊断是一种高灵敏度、高特异性的诊断方法，利用分子生物学技术，如PCR、 基因测序等，检测病原体特异性基因片段，进行快速、准确的诊断。该方法可以检测出
极低浓度的病原体，并且可以在早期感染时进行诊断，为临床治疗提供及时的指导。
MIC06微生物需要在特定的培养 基上培养，如需氧或厌氧培养， 并需要适宜的温度和酸碱度。
MIC06微生物具有特定的抗原结 构，可以用于血清学诊断和分型。
流行病学特性
传播方式
MIC06微生物主要通过直接接触 传播，如接触患者或污染物，也 可通过空气飞沫、水或食物传播。
流行地区与季节
MIC06微生物感染的流行地区和 季节分布与特定微生物的特性有 关，可能存在地区性和季节性差 异。
MIC06微生物感染的重要性
MIC06微生物感染可导致严重的临床 后果，包括死亡和长期并发症。
早期诊断和治疗有助于减少传播、减 轻疾病负担并提高治愈率。
02 MIC06微生物的基本特性
生物学特性
01
形态与染色
培养特性
02
03
抗原结构
MIC06微生物通常呈球形或杆状， 具有特定的染色特性，如革兰氏 染色阳性或阴性。
环境卫生
加强环境卫生管理，保持室内 通风、清洁，定期消毒公共场 所和物品。
食品卫生
严格执行食品安全标准，确保 食品的卫生和质量。
控制策略
监测与预警
建立传染病监测系统，及时发现和报告病例， 采取有效措施控制疫情。
公共卫生干预
采取必要的公共卫生干预措施，如限制人群 聚集、关闭公共场所等。
隔离与治疗
细菌病的实验室诊断
细菌性病料的保存和送检
低温保存
尽快送检
• 做好记录（畜主姓名、动物种类、地址、
发病情况、欲检部位及检验项目、采集时
间等）
返回
二、 ★病料中细菌的检查方法（六类）
1.防止污染
（5）焚烧或深埋： 剖检后动物尸体和 病料焚烧灭菌或消 毒深埋。
深埋（投入消毒药） 动物尸体焚烧炉
1.防止污染
直接洗刷
垃圾
处理不当会引起人 和动物疫病的散播
动物或人的传染病
2.无菌采样
目的
防止病料被污染
措施 —所用器械和器皿必须灭菌 —点燃酒精灯 —注意无菌操作
3.适时采样
➢ 细菌丰富增殖时期、病料应该新鲜：取濒
检
–不染色标本检查法（悬滴法、压滴法）
查
方 电子显微镜检查 方法：
A.压滴法
B.悬滴法
返回
2.染色标本检查法
❖ 单染色法 ❖ 复染色法 ❖ 特殊染色法
（一）形态学检查——1.光镜
（2）染色标本检查法
单
染 色
单染色法
复染色法
法
和
复
染 常用 美蓝染色法、复红染色法 革兰氏染色法、抗酸
返回
实质脏器的采集
• 剖开体腔后，立即采集，置于无菌容器内 • 污染或剖开过久的被检器官：先烧烙表面，然后在烧
烙的深部取一块实质脏器，放在灭菌容器内。
• 如有细菌检验条件，可在剖检后直接做病料的触片染
色和细菌的分离培养。
液体病料的采集
脓汁、胸水一般用灭菌的棉棒或吸管吸取放
第三章细菌感染及预防原则
侵袭力
菌毛
荚膜和微荚膜 G-
粘附素 菌毛
粘附于组织细胞 有组织特异性
非菌毛黏附素
膜磷 壁酸
G+
脂磷壁酸（LTA）
侵袭性物质
细菌生物被膜
透明质酸酶 凝固酶 胶原酶 链激酶
SIgA酶
受体 （糖类）
急性感染 慢性感染
局部感染 全身感染
Department of Microbiology, Harbin Medical University
毒血症（toxemia）
细菌在局部繁殖，不入血，仅外毒素入血引起 全身中毒症状
菌血症（bacteremia）
全
病原菌由原发部位侵入血流，但未在血中大量
身
较弱，引起发热、白细胞增多、 微循环障碍、休克、DIC等
强，刺激机体产生抗毒素；脱 弱，抗体作用弱
毒形成类毒素
Department of Microbiology, Harbin Medical University
第三节 感染的发生与发展
Department of Microbiology, Harbin Medical University
经消化、呼吸、创伤等
结核及炭疸杆菌感染
Department of Microbiology, Harbin Medical University
Department of Microbiology, Harbin Medical University
细菌的感染类型
隐性感染 显性感染 带菌状态
外毒素
exotoxin
多数革兰阳性菌和少数革兰阴 性菌在生长繁殖过程中释放到菌
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二、分离培养
（一）细菌的分离——无菌技术
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
移种或接种的基本步骤
（1）右手持接种工具，在火焰上烧灼灭菌。 （2）左手拿起标本盒或平皿、试管等。 （3） 用接种工具挑取适量标本或细菌。 （4）根据目的选择不同的接种方法 （5） 接种完毕，在火焰上烧灼接种工具，放
• 用途 肠杆菌科细菌鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（二）细菌的培养方法
1.需氧培养法 普通培养 2.二氧化碳培养 （1）二氧化碳培养箱 （2）烛缸法 （3）化学法 3.厌氧培养
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（三）细菌的生长现象
1.固体培养基上的生长现象
– 菌落：单个细菌在培养基上分裂繁殖成一堆 肉眼可见的细菌集团。 • CFU：菌落形成单位，活菌计数用
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（二）蛋白质和氨基酸的代谢试验
1.明胶液化试验 • 原理：某些细菌可产生明胶酶，分解明
胶，使其失去凝固能力。 • 方法：将待检物接种于明胶培养基22 ℃
培养7天 • 结果：培养基呈液化状态为阳性 • 应用：肠杆菌科细菌鉴别
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
2. 吲哚（indol）试验 • 原理 色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚
↑ 吲哚试剂（对二甲基氨基苯甲醛） • 培养基 蛋白胨水培养基 • 结果 阳性：红色
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
3. 硫化氢试验
• 原理 含硫氨基酸→ H2S+硫酸亚铁→FeS黑色
醋酸铅→ PbS黑色 • 培养基 醋酸铅培养基 • 结果 阳性：黑色沉淀 • 用途 肠杆菌科菌属间的鉴定
葡萄糖→丙酮酸 →各种酸
甲基红 +
• 培养基 葡萄糖蛋白胨水
• 结果 阳性：红色
阴性：黄色
• 应用 鉴别肠杆菌科细菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
6. VP（Voges-Proskauer）试验
• 原理 葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 →二乙酰 ＋肌酸＋ α萘酚→红色化合物 • 培养基 葡萄糖蛋白胨水 • 结果 阳性：红色 • 应用 鉴别肠杆菌科细菌
粘 液 型 菌 落
卷发样菌落
第三章细菌感染实验室诊断下赏析粗糙型菌落（L-J）
2.液体培养基中的生长情况
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
三、细菌生化反应鉴定
（一）碳水化合物的代谢试验 1. 糖（醇、苷）类发酵试验 • 原理 各种细菌酶系不同，分解糖（醇、苷）
的能力各异，产物也不同。 • 培养基 单糖、双糖、三糖、多糖 • 应用 肠道杆菌科细菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
4. 七叶苷水解试验
• 原理 葡萄糖
七叶苷
七叶素+Fe2+
黑色化合物
• 培养基 七叶苷、胆汁七叶苷培养基
• 结果 阳性：培养基变黑
• 用途 鉴别肠球菌、G-杆菌及厌氧菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
5. 甲基红（methyl red MR）试验
• 原理
葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇 甲基红 -
回原处。
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
常用的接种方法
（1）平板划线法
– 分区划线法 用于杂菌量较多的标本 – 连续划线法 用于杂菌不多的标本
（2）琼脂斜面接种法—纯培养 （3）穿刺法—观察细菌动力 （4）液体培养基接种法 —增菌 （5）倾注平板法—计数细菌数量 （6）涂布法 —纸片法药敏试验
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
Sugar Fermentation
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
2. 葡萄糖氧化/发酵试验（O/F）
• 原理 氧化型 专性需氧菌
发酵型
产碱型 不分解葡萄糖
• 培养基 Hugh-Leifson二氏培养基
• 结果
氧化管 发酵管
氧化型 变黄 不变
发酵型 变黄 变黄
产碱型 不变 不变 第三章细菌感染实验室诊断下赏析 （阴性）
苯丙酮酸+10%氯化铁
绿色化合物 • 培养基 苯丙氨酸琼脂培养基 • 结果 阳性：绿色 • 用途 肠杆菌科中变形杆菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
6. 氨基酸脱羧酶试验
• 原理
氨基酸
胺+ CO2 培养基变碱
• 培养基 氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照
• 结果 阳性：紫色 阴性：黄色
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
4. 尿素分解试验
• 原理
尿素 NH3+CO2+H2O • 培养基
(NH4)2CO3
尿素肉汤或尿素琼脂培养基
• 结果 阳性：红色
• 用途 肠杆菌科中变形杆菌的鉴定
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
5. 苯丙氨酸脱氨酶试验
• 原理 苯丙氨酸
（8）保存 4 ℃冰箱保存，一周左右
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
注意事项
1. 器皿：中性硬质玻璃器皿 2. 化学药品：均需化学纯，各组分准确称量，
正确溶解 3. 准确测定培养基酸碱度（尤其含有指示剂的
培养基），酸碱度应冷却后测定 4. 保持澄清 5. 灭菌时间不宜过长，不宜反复灭菌 6.含糖培养基灭菌后可出现变酸、变色现象
– 细菌菌落的描述 大小、形状、突起或扁平、 边缘、颜色、表面、透明度
第三章细菌感染实验室面光滑、湿润、边缘整齐
（2）粗糙型菌落（R型菌落）
– 表面粗糙、干燥、边缘不齐
（3）粘液型菌落（M型菌落）
– 菌落粘稠、有光泽、似水珠样
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（ 6）灭菌 • 高压蒸汽灭菌
– 无糖：103.4kPa 121.3℃15~30min – 含糖： 68.4kPa 115℃ 15min
• 流动蒸汽灭菌法 血清、牛乳、鸡蛋
• 间歇蒸汽灭菌法 （血清凝固器）
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
（7）鉴定（质量检查）
– 无菌试验：判定是否灭菌合格。 – 效果检定：判断培养基是否符合要求。
• 应用 鉴别肠杆菌科细菌与非发酵菌
第三章细菌感染实验室诊断下赏析
3. β-半乳糖苷酶（ONPG ）试验
• 原理 ONPG无色，经β-半乳糖苷酶水解后生 成黄色的邻硝基酚
• 方法 （1）在含ONPG的培养基中接种纯种细菌 （2）制成菌悬液，加入甲苯，再加ONPG试剂 • 结果 阳性：变黄（20~30min） • 应用 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴定