探究：酵母菌种群数量的变化实验

规格为25格×16格的计数室，五点取样法
7、盖玻片下的培养液厚度为0.1mm，请推算出将 一个小方格范围内的酵母菌数，换算成10ml培养液 中酵母菌总数的公式。 每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式 （以1mm×1mm为例）： （1）16格×25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (100小格内酵母细胞个数/100)×400 ×104 ×稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数× 4× 106×稀释倍数 （2）25格x16格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml= (80小格内酵母细胞个数/80)×400 ×104 ×稀释倍数 即：一小方格内酵母菌个数× 4× 106×稀释倍数
(100小格内酵母细胞个数/100)×400× 2.5×103×稀释倍数
即：一小方格内酵母菌个数×106×稀释倍数
（2）25格x16格的血球ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ数板计算公式: 酵母细胞数/ml=
(80小格内酵母细胞个数/80)×400× 2.5×103 ×稀释倍数
即：一小方格内酵母菌个数×106×稀释倍数
二、从试管中吸出培养液进行计数之前，建 议你将试管轻轻振荡几次。这是为什么？ 使酵母菌混合均匀。
回顾思考:
1、酵母菌的繁殖方式主要是: 出芽生殖 2、酵母菌的呼吸方式是: 兼性厌氧(可进行有氧呼吸和无氧呼吸) 3、酵母菌的培养条件要注意那些问题? 比如要用适宜的温度培养,调节好PH值, 溶氧量的控制等。
探究：培养液中酵母菌种群数量的变化
问题：培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？ 温度会影响酵母菌的生长吗？营养成分会影响酵母菌的生 长吗？
作出假设
根据前面所学的知识，针对这一问题作出假设：
培养液中酵母菌种群数量开始一段时间是“J”型增长， 由于营养物质的消耗，有害代谢产物的积累，PH值的改变， 种群数量呈“S”型增长。 讨论探究思路 探究所需要的菌种和无菌马铃薯培养液或肉汤培养液、试 管、血球计数板（2mm×2mm方格）、滴管、显微镜等，都由老 师提供。 在制订计划前，你需要思考以下问题，并与同学讨论。
介绍:血球计数板的构造
1、血球计数板：是显微镜上的外挂物件，可用来测 量细胞，细菌等一些微小物体的长度，还有就是测量 数量，如单位体积细胞的数量。血球计数板是由一块 比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下 凹的槽，构成三个平台，中间的平台较宽，其中间又 被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。
3、影响酵母菌的种群数量增长的因素可 能是什么？
除了本实验中温度、营养以外还包括 酵母菌菌种本身性质、接种时间、pＨ值、 接种量、溶氧量等影响因素。
6、如何计数呢？
如果使用规格为16格×25格的计数室，要 按对角方位，取左上、右上、左下、右下4个中 格(即100个小格)的酵母菌数。 如果使用规格为25格×16格的计数室，除 了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中 格(即80个小方格)的酵母菌数（五点取样法）。
出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即 可作为两个菌体计算。
探究： 培养液中酵母菌 种群数量的变化
探究：培养液中酵母菌种群数量的变化
目的要求 1、学习利用血球计数板进行微生物计数的方法 2、实验探究培养液中酵母菌种群数量的变化 3、注意样方法的应用 4、体会影响种群数量变化的因素
酿酒和做面包都需要酵母菌。这些酵母 菌可以用液体培养基（培养液）来培养。培 养液中酵母菌种群的增长情况，与发酵食品 的制作有密切关系。
3、使用方法:
将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上 加盖专用的盖玻片，将稀释后的酵母菌悬液，用吸管 吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余 的菌液用吸水纸吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降 到血球计数室内，加盖盖玻片。
5、单位换算: 以1mm×1mm 4、计数室的规格： 为例，大方格的长和宽各为 计数室长×宽有： 1mm，深度为0.1mm，其体 1mm×1mm, 积为0.1mm3。换算为1mL： 2mm×2mm, 1000/0.1= 104即1mL是104 3mm×3mm等 个0.1mm3 。 深度均为0.1mm。
三、本探究需要设置对照吗？如果需要, 请讨论对照组应怎样设计和操作，如果 不需要，请说明理由。 不需要，因不同时间取样已形成对照。 四、需要做重复实验吗？
需要。尽量减少误差。对每个样品计 数三次,取其平均值。
五、怎样记录结果？记录表怎样设计？
酵母菌细胞数量（× 106个/mL）
时间 （d） 1 2 3 4 5 6 7 A组 B组 C组 A1 A2 A3 平 B1 B2 B3 平 C1 C2 C3 平 均 均 均
2、方格网的构成：
25×16
A D G
B E H
C F I
16×25
化
放大后的方格网计数室 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格 为计数室，计数室通常有两种规格：一种是大方格内分 为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格 内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计 数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一 大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成。
课本中大方格的长和宽各为2mm，深度为0.1mm， 其体积为0.4mm3。换算为1mL：1000/0.4 = 2.5×103 ， 即1mL是 2.5×103个 0.4mm3。 则：每1ml菌液中所含的酵母菌个数计算公式 （2mm× 2mm ） ： （1）16格×25格的血球计数板计算公式 酵母细胞数/ml=
实验操作： (1)、配制无菌马铃薯培养液和酵母菌母液； (2)、预先设计分装。先每次用10mL刻度吸管吸取10mL培养 液到A组和B组试管，用另一支10mL刻度吸管吸取10mL无菌 水到C组试管。待分装完毕，每支试管加塞后把试管扎成捆后， 然后用记号笔注明培养基的名称、组别、日期。 (3)、用高压蒸汽灭菌锅灭菌； (4)、接种菌种：用灭菌干净的1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵 母菌母液，往每支试管中加入。（注意滴加量不要太多，避免 初始菌数过多。） (5)、培养：将 A、C试管置于 28℃的恒温箱中培养。将 B试管 置于5℃的恒温箱中培养。（5℃的恒温箱可由某些型号冰箱保 温室设定5℃时代替。） (6)、计数和记录：每天取样时间大体一致，每次每组按序号取 一支试管。计数过程中一定要遵守无菌操作规范，取样的吸管 要干净且分开使用，每次取样前要试管振荡摇匀。显微镜下进 行细胞计数后，立即将数据填到记录表格中。
实验设计 将9支试管分成ABC三组，每组3支。A组为实验 组，装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环境温度 28℃。B组装培养液10 mL，酵母菌母液0.1mL,环 境温度5℃，与A组形成温度条件对照。C组不装培 养液，只装无菌水10mL,酵母菌母液0.1mL,环境温 度28℃，与A组形成营养条件对照。
分析结果，得出结论
将所得数值用曲线图表示出来，分析实验结果是否支持你 所做的假设。
探究的结论： 酵母菌的种群数量在营养条件有限的情况下是呈 “S”型增长，但之后会下降。温度、营养成分会 影响酵母菌种群数量的变化。
一、怎样进行酵母菌的计数？
提示：对一支试管中的培养液(可定为10ml) 中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用 抽样检测的方法：先将盖玻片放在计数室上， 用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养 液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，稍待片 刻，待酵母菌细胞全部沉降到计数室底部，将 计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内 的酵母菌数 量，再以此为根据，估算试管中 的酵母菌总数。
表达和交流
1、向全班汇报本小组7天的数据，算 出每一天全班各组数据的平均值，根据平 均值重新画酵母菌种群数量的增长曲线。 将这个增长曲线与本小组的曲线进行比较， 分析其相似程度，并做出合理的解释。 2、根据各组平均数据画出的增长曲线 有没有什么总趋势？如果有，作出说明。 如果设计了无菌水的对照，也画出增长曲 线。
六、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当 采取怎样的措施？
稀释培养液。稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每 小方格内含有4-5个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。
七、对于压在小方格界线上 的酵母菌，应当怎样计数？ 只计数相邻两边及其顶角的 酵母细胞数 八、血球计数板的清洁
血球计数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗 后自行晾干或用吹风机吹干，或用95%的乙醇、无水乙醇、丙 . 酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留 菌体或其他沉淀物，若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。