嗜肺军团菌的检测
嗜肺军团菌生化鉴定结果
嗜肺军团菌生化鉴定结果
嗜肺军团菌生化鉴定结果通常包括以下几个方面：
1.革兰氏染色：嗜肺军团菌是一种革兰氏阴性杆菌，经过革兰氏
染色后呈红色。
2.氧化酶试验：嗜肺军团菌氧化酶试验结果为阳性，这是鉴定该
菌种的一个重要指标。
3.生长条件：嗜肺军团菌需要在特定的生长条件下才能生长繁殖，
例如在36℃左右的水环境中生存，且易通过气溶胶的形式传播。
4.培养特性：嗜肺军团菌需要在特定的培养基上培养才能获得较
好的生长效果，例如在人工水环境（如集中空调循环冷却水、
自来水、淋浴水、温泉浴池水、游泳池水、人造喷泉水）中容
易滋生。
5.抗药性：嗜肺军团菌对不同的抗生素有不同的抗药性，需要根
据药敏试验结果选择合适的抗生素进行治疗。
总之，通过以上几个方面的生化鉴定结果，可以确定是否为嗜肺军团菌感染，并采取相应的治疗措施。
淋浴水嗜肺军团菌检测原始记录
淋浴水嗜肺军团菌检测原始记录管理编号：xxx/XX-XXX报告编号：第页/ 共页检测项目淋浴水中嗜肺军团菌送检日期检毕日期检测环境温度：ºС 相对湿度：% 检测地点样品来源样品编号仪器型号及编号检测方法或依据参照GB/T 18204.5-2013 《公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统》和ISO11731-1998《水中军团菌检测方法》一、试验器材及试剂1、细菌培养皿2、BCYE培养基3、BCYE-CYS培养基4 、选择性培养基：GVPC培养基5、酸缓冲液6、灭菌水二、样品前处理1、采样：用高压灭菌的玻璃瓶取水样0.5L。
2 、送样：将样品避光避热一天内送达实验室，从采样到培养的时间间隔最大不超过15天。
三、检验步骤1、样品预处理水样：将水样mL用0.22μm微孔滤膜过滤，用镊子将滤膜转移到具帽容器中，加入15mL 灭菌水，在震荡器上震荡，时间不少于2min。
肉眼可见浑浊的污水水样可直接培养。
将预处理过的样品分成三部分，一部分不作处理，一部分热处理，一部分酸处理。
热处理：将1mL样品加入到无菌容器中50℃水浴处理30分钟。
酸处理：取1mL样品加入到无菌容器中，加入1 mL酸缓冲液，作用5min。
检测人：校核人：淋浴水嗜肺军团菌检测原始记录管理编号：xxx/XX-XXX报告编号：第页 / 共页2、接种各取0.1mL三种样品（未处理、热处理、酸处理）接种到GVPC培养基上，用无菌接种环将接种物均匀地涂抹于培养基表面。
热处理、酸处理的接种物处理过后立即进行接种。
3、培养待接种物水分被培养基吸收后，倒置培养基平皿，于5% CO2培养箱中37℃培养10天。
注意保持培养箱内湿度。
每隔三天观察培养的菌落的形态。
记下各种形态菌落的数目。
四、结果判定1、军团菌的鉴定从GVPC培养基上选择至少三个具有军团菌特征的菌落（未处理、热处理、酸处理的三种样品每个样品取三个菌落），接种于BCYE培养基和BCYE-CYS 培养基上，37℃培养2天以上。
公共场所空调冷却水、冷凝水中嗜肺军团菌检测原始记录
9、菌型确定：应进行生化培养与血清学实验确定嗜肺军团菌。生化培养：氧化酶(-/弱+),硝酸盐还原(一),尿素酶(一),明胶液化(+),水解马尿酸。血清学实验：用嗜肺军团菌诊断血清进行分型。
培养基及试剂
实验步骤
1、样品的沉淀或离心：如有杂质可静置沉淀或1000 r/min离心1min去除。
2、样品的过滤：将经沉淀或离心的样品通过滤膜过滤，取下滤膜置于15mL灭菌水中，充分洗脱，备用。
3、样品的热处理：取1mL洗脱样品，置50℃水浴加热30min。
4、样品的酸处理：取5mL洗脱样品，调pH至2.2,轻轻摇匀，放置5min。项目编号样品Fra bibliotek称检测项目
嗜肺军团菌
环境条件
温度： ℃ 湿度： %
收样时间
检测时间
检测方法
嗜肺军团菌培养法
检测依据及方法
《公共场所卫生检验方法 第五部分：集中空调通风系统》GB/T 18204.5-2013（3）
主要仪器设备
生物安全柜BHC-1300ⅡA2（KLM-YQSB-002）、立式蒸汽灭菌器LDZM-60KCS-Ⅱ（KLM-YQSB-022）、二氧化碳培养箱BPN-150CW（UV）（KLM-YQSB-005）
10、结果报告：根据生化培养与血清学实验结果报告是否检出嗜肺军团菌。
观察时间
第一次：第二次：第三次：第四次：第五次：
第六次：第七次：第八次：第九次：第十次：
样品编号
GVPC平板培养
菌落验证
嗜肺军团菌 胶体金法
嗜肺军团菌胶体金法是一种用于检测嗜肺军团菌的方法。
这种检测方法基于免疫学原理，利用胶体金颗粒的特性和嗜肺军团菌的抗原进行反应，从而实现对嗜肺军团菌的检测。
胶体金法具有简便、快速、灵敏度高、特异性好等优点，因此被广泛应用于嗜肺军团菌的检测。
在检测过程中，首先需要采集患者的样本，如痰液、血液等，然后将样本与胶体金试剂混合，如果样本中存在嗜肺军团菌的抗原，就会与胶体金颗粒发生反应，形成可见的红色或紫色沉淀。
需要注意的是，嗜肺军团菌胶体金法只是一种初筛方法，如果检测结果为阳性，还需要进一步进行确诊试验，如培养法、PCR等，以确定病原体种类和数量。
此外，由于嗜肺军团菌的感染具有一定的危险性，因此在操作过程中需要注意安全防护，避免感染风险。
不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现及实验室检查分析
不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现及实验室检查分析1. 引言1.1 引言嗜肺军团菌肺炎是一种由嗜肺军团菌引起的肺部感染疾病，常见于婴幼儿和老年人。
随着社会的发展和老龄化趋势的加剧，该疾病的发病率也逐渐增加。
本文旨在探讨不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现及实验室检查分析，为临床医生提供诊断和治疗的参考。
嗜肺军团菌肺炎在不同年龄段患儿中表现出的临床特点各有不同，包括发热、咳嗽、呼吸困难、胸痛等症状。
婴幼儿常表现为食欲不振、呼吸急促，而老年人则可能出现体温升高不明显、腹泻等非典型症状。
针对不同年龄段患儿的特点，临床医生应该有针对性地进行观察和治疗。
实验室检查在嗜肺军团菌肺炎的诊断和治疗中起着重要作用。
包括血常规、炎症指标、痰液培养等检查可以帮助医生明确病情，制定合理的治疗方案。
通过实验室检查的结果，可以更准确地判断病情的严重程度，及时调整治疗方案，提高治疗效果。
针对不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现和实验室检查分析，本文将从这两个方面展开讨论，希望能为临床医生提供一些有益的参考信息，提高对该疾病的认识和诊疗水平。
【引言结束】2. 正文2.1 不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部临床表现1. 婴儿期（0-1岁）：婴儿期患嗜肺军团菌肺炎的表现常常是比较隐匿的，可能表现为呼吸困难、喘息、乏力等非特异症状。
有的患儿还会出现发热、食欲不振、咳嗽等症状。
4. 学龄期儿童（6-12岁）：在这个年龄段，嗜肺军团菌肺炎患儿的肺部表现可能会有所减轻，但仍然会有持续性咳嗽、气促等症状。
有的患儿还可能伴有肺部感染等并发症。
2.2 不同年龄段嗜肺军团菌肺炎患儿的实验室检查分析1. 血常规检查：-白细胞计数和分类：嗜肺军团菌肺炎患儿常见白细胞增高，其中以中性粒细胞增多最为明显。
- C-反应蛋白（CRP）：CRP水平常升高，与病程严重程度相关。
2. 血气分析：- 氧合指标：患儿肺泡通气功能受损，常出现低氧或低氧高碳酸血症。
嗜肺军团菌的单位
嗜肺军团菌单位是指用于测量或计数这种细菌的标准度量单位。
嗜肺军团菌（Legionella pneumophila）是一种细菌，它是引起军团病（Legionnaires'disease）的主要病原体。
军团病是一种重型肺炎，病死率较高，尤其是在免疫力低下的患者中。
在微生物学和临床医学研究中，通常会用到以下几种单位来描述和计量嗜肺军团菌：
1.菌落形成单位：通常用CFU表示，是指在固体培养基上形成的一个可见的菌落，代表一个或多个细菌细胞的生长。
2.每毫升：在液体培养基或样品中，细菌的数量常用每毫升CFU/mL）来表示。
3.光密度单位：通过光谱光度计测量细菌悬液的光密度，可以间接估算细菌的数量，单位通常是OD 光密度）值。
4.荧光强度单位：在使用荧光标记技术检测细菌时，荧光的强度可以用特定的单位来量化，例如相对荧光单位 RFU）。
5.基因拷贝数：在分子生物学研究中，有时会使用实时定量PCR 技术来量化细菌的基因拷贝数。
6.干重或湿重：通过称量一定体积细菌沉淀的重量来衡量细菌的总量，单位通常是毫克 mg）或微克 μg）。
了解嗜肺军团菌的单位对于研究其生物学特性、进行流行病学调查以及开发疫苗和治疗方法都是非常重要的。
在实验室中，研究人员会根据不同的实验目的选择合适的单位和方法来对嗜肺军团菌进行定量分析。
嗜肺军团菌荧光定量PCR检测
嗜肺军团菌荧光定量PCR检测朱水荣;张政;卢亦愚;任红宇;扬仕贵;高晓萍【期刊名称】《中国公共卫生》【年(卷),期】2008(24)9【摘要】目的建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。
方法嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。
利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。
结果该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。
检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。
结论TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。
【总页数】3页(P1111-1113)【关键词】嗜肺军团菌;mip基因;TaqMan探针;荧光定量PCR【作者】朱水荣;张政;卢亦愚;任红宇;扬仕贵;高晓萍【作者单位】浙江省疾病预防控制中心微生物所,杭州310051;中国疾病预防控制中心【正文语种】中文【中图分类】Q503【相关文献】1.嗜肺军团菌lvgA基因分析及实时荧光定量RT-PCR对军团菌的检测 [J], 单小云;胡野;应延风;屠平光2.嗜肺军团菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 [J], 杜昕颖;黄留玉;苏晓;王玉飞;龚春丽;庄妤冰;苑锡铜;陈泽良;袁静;宋宏彬3.嗜肺军团菌荧光定量PCR方法的建立及在公共场所集中空调检测中的应用 [J], 冯华;刘雪林;张传福;史云;靳连群;王强;戚红卷;林彦峰;胡晓丰;董德荣4.嗜肺军团菌荧光定量PCR方法的建立及在公共场所集中空调检测中的应用 [J], 冯华; 张传福; 史云; 靳连群; 王强; 戚红卷; 林彦峰; 胡晓丰; 董德荣; 刘雪林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法 (2)
公共场所环境样品中嗜肺军团菌定量检验方法1范围青岛精诚仪器仪表有限公司本标准规定了公共场所空气、水、土等不同类别环境样品中嗜肺军团菌的定量检测方法。
本标准适用于公共场所环境样品中嗜肺军团菌的定量检测，其他环境样品中嗜肺军团菌的定量检测可参照执行。
2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T18204.3公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物GB/T18204.5公共场所卫生检验方法第5部分：集中空调通风系统3空气中嗜肺军团菌定量检测3.1原理采用液体冲击法采样、叠氮溴乙锭（EMA）前处理结合定量聚合酶链反应(qPCR)方法定量检测室内空气和集中空调送风中存活的嗜肺军团菌。
3.2仪器和设备3.2.1微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100L/min，3.0μm以上粒子的捕集效率≥80%（或浓缩比≥8）。
3.2.2液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7L/min～15L/min，0.5μm以上粒子的捕集效率≥90%。
3.2.3便携式冷藏箱。
3.2.4冷冻离心机：温度4︒C。
3.2.5恒温水浴锅或金属浴：温度范围50︒C～99︒C。
3.2.6荧光定量PCR仪：非耦合6色激发光片和6色检测滤光片通道，4°C–100°C温度范围。
3.2.7卤素灯：500W。
3.2.8涡旋震荡器：调速范围0~3000rpm。
3.3材料和试剂3.3.1酵母浸出粉。
3.3.2蒸馏水。
3.3.3EMA固体粉：5mg/管。
3.3.4无核酸酶去离子水。
3.3.5矿物油，用于减少气溶胶采样时的吸收液蒸发。
3.3.6核酸提取试剂盒：DNA产量15～30μg，A260/A280在1.7～1.9之间。
3.3.7引物：上游引物5’-GAAAATAAAGTAAAAGGGGAAGCC-3’；下游引物5’-ATCAATCAGACGACCAGTGTATTC-3’。
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深圳市空调冷却塔水军团菌污染状况调查摘要:目的了解深圳市宾馆、大型写字楼、地铁等各类建筑物的空调冷却塔水军团菌污染状况。
方法随机采集中央空调冷却塔水样品并进行细菌培养和鉴定，再以聚合酶链式反应（PCR）等方法加以验证。
结果共采集水样28件，分离到1株军团菌，经鉴定为嗜肺军团菌Lp1型。
结论深圳市中央空调冷却塔存在军团菌的污染，需引起重视，防止军团菌病发生。
关键词:军团菌;嗜肺军团菌;冷却塔;污染状况Detection of Legionella pneumophila in cooling tower water of central air conditioning system in Shenzhen City.ZHANG Ran，CHEN Gui-bing，SHI Xiao-lu，et al.（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）Abstract:Objective To investigate the contamination status of cooling water of central air conditioning syatem with Legionella pneumophila in in hotels，buildings and subways in Shenzhen City. Methods Cooling tower water samples from central aircondi-tioning system were randomly taken，cultured and then Legionella pneumophilia was isolated.Pobymerase chain reaction（PCR）was used for confirmation of the differentiation. Results Twenty-eight cooling water samples were collected and a strain of Legionella pneumophilia serovar Lp1was isolated. Conclusion The water in cooling tower of central air conditioning system in Shenzhen City has been contaminated with Legionella pneumophilia and measures be taken for preventing infection with Legionella pneumophilia.Key words:Logionella;Leginella pneumophilia;Cooling tower;Contaminationstatus军团菌是引起军团菌病的一种急性呼吸道传染病的病原体，于1977年在美国首次发现并证实。
现已分离到军团菌属（Legionella）共有42个种，64个血清型，其中与人类关系最为密切的是嗜肺军团菌，由它引起的肺炎，如未及时治疗，病死率很高［1］。
空调机的冷却塔水、喷水池水、淋浴池和宾馆的养鱼池水，甚至游泳池水均是军团菌其生存定居的小环境，如果该小环境中的微型生物群落结构能与其构成共生关系，军团菌就可以大量繁殖，然后通过流动水，冷却塔喷雾漂移或小泡喷射及蒸发作用产生的含菌气溶胶传播感染于人群。
目前军团菌病已成为危害人群健康的一种重要疾病。
本文对深圳市中央空调冷却塔水军团菌的污染状况进行调查，现将结果报告如下。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 主要仪器低温高速离心机（型号:Stratos），干浴器（型号:MD-OZN），超速离心机（型号:1-13），双槽PCR扩增仪（型号:MJR PTC-220），凝胶成像系统（DYY-8C电泳仪BiolMAGING SYSTEM）。
1.1.2 主要试剂GVPC和BCYEα培养基购自法国的BiomRriEux，军团菌诊断血清购自英国的OXOID生物公司，嗜肺军团菌（Legionellapneu mophi la，Lp）1-14分型，PCR 扩增反应所用的试剂10×PCR Buffer，dNTP Mixture，Taq酶，6×Loading Buffer，Marker 购自大连宝生物工程有限公司，GoldView TM DNA染料购自上海中科开端生物芯片科技股份有限公司。
1.2 方法1.2.1 水样采集从10～12月，随机采集宾馆、大型写字楼、地铁等的中央空调冷却塔水样，每个塔分东西南北四个点，离壁5cm，离水面10cm深处各采水约100ml，水样装于500ml同一灭菌广口瓶内，共采集中央空调冷却塔水28份。
1.2.2 水样预处理离心将水样富集（12000rpm/10min，26℃）至5ml浓缩液，然后取lml浓缩液于试管中，加入等量的pH2.0的0.01mol/L盐酸液混合，静置5～10min后用0.03mol/L的氢氧化钾液（约0.2ml）中和至pH约6.9作酸处理。
1.2.3 军团菌分离培养取0.1ml酸处理混合液接种于GVPC琼脂平板上，用三角环推干后放入5%CO 2 培养箱中，37℃孵育3～7d观察结果，挑可疑菌落做鉴定。
1.2.4 军团菌的鉴定在GVPC琼脂平板上菌落形态符合，革兰染色为阴性细长杆菌者同时接种于BCYEα和血平板上，在BCYEα平板长菌，在血平板上不长菌者，初步可认定为军团菌。
通过初步鉴定的菌株进行氧化酶、触酶、马尿酸盐水解、明胶液化、糖发酵、尿素酶等生化试验，然后用血清凝集鉴定分型及PCR鉴定。
1.2.5 PCR引物设计根据文献报道［2］，设计5SrRNA基因引物序列检测军团菌属，MIP基因的引物序列检测嗜肺军团菌。
1.2.6 模板处理将水样浓缩液吸打震荡混匀后取1ml到EP管，离心（12000rpm/5min），弃去上清液留沉淀，加无菌蒸溜水30μl，100℃干浴10min，然后冰浴5min，取10μl上清液做为PCR扩增的模板。
1.2.7 PCR扩增用5SrRNA和MIP两套引物分别扩增，PCR扩增在热循环仪上进行，循环参数为:加热至95℃5min，变性94℃45S，复性501min，延伸72℃1min20S，36个循环，4℃保存。
5SrRNA预计扩增片段为105bp，Mip预计扩增片段为650bp。
产物检测用含GoldView TM DNA染料的琼脂糖凝胶（1.5%）电泳，利用DNA分子量Marker确定产物分子量大小。
2 结果2.1 分离培养结果本次共检测中央空调冷却塔水28份，其中宾馆冷却塔水样13份、地铁冷却塔水样9份均未检出军团菌，大型写字楼冷却塔水样6份检出1株嗜肺军团菌，为Lp1型，此株嗜肺军团菌的鉴定结果表现为氧化酶、触酶、马尿酸盐水解、明胶液化等试验均为阳性，不分解葡萄糖、果糖、麦芽糖，尿素酶试验阴性。
以及与Lp多价及Lpl标准血清呈阳性反应。
结果见表1。
表1 空调冷却塔水军团菌检验结果（略）Table1 Results of detection of Legionella from cooling tower water of central air conditioning system2.2 PCR结果本次调查，所有样本均同时采用传统的细菌学检验方法和聚合酶链反应（PCR）来鉴定。
传统的细菌学方法从酸处理后接种平板开始到分离菌株一般要10d才可以分离出来，费时难培养且易被污染。
PCR方法则是从细菌的基因水平入手［2］，比以往所有传统的细菌学检验方法更为可靠，快速，简易，灵敏度高。
本次PCR结果，28份冷却塔水检出军团菌属PCR（5S）阳性8份，检出嗜肺军团菌PCR（MIP）阳性1份，与上述分离培养的1株嗜肺军团菌Lpl型结果一致。
PCR检测结果见表1。
3 讨论3.1 军团菌自空调系统冷却塔水国内较多的北京、上海的阳性率一般达30%左右，地铁甚至高达45%。
而此次调查空调冷却塔水嗜肺军团菌检出率较低，其原因可能与军团菌生长有季节性和采样时机有关。
3.2 此次自28份冷却塔水，检出1株嗜肺军团菌，显示深圳市中央空调冷却塔的军团菌污染的存在。
建议加强对环境水中军团菌的监测，同时开展健康人群军团菌抗体水平调查，了解本市人群中军团菌的感染情况，为今后对军团菌感染的预防研究提供参考资料［3］。
3.3 此次分离采用传统分离培养和PCR两种方法。
其中PCR方法的阳性率高，尤其是针对5SrRNA设计的属特异性引物，PCR的阳性率高于传统检测方法。
PCR方法灵敏度高，除能检测活菌外，还可检测已死亡的菌体DNA，因此若水中存在极微量的军团菌或死菌时，PCR方法能检出，但传统分离方法却是阴性。
另PCR引物SSrRNA不但能检测致病性军团菌，也能检测非致病性军团菌，方法的敏感性高和有高度特异性，与传统方法吻合率高，适合作为传统检测方法的补充，提高检测速度和准确度。
3.4 军团菌病因为人体吸入含军团菌的气溶胶导致呼吸系统损害的疾病，冷却塔的循环水（含无机盐，有机物和微生物）不仅为军团菌提供了理想的生存环境，而且提供了传播的形式一气溶胶，冷却塔水被该污染后，通过空调机入口，门窗和通风管被抽入室内或在冷却塔一定范围（200M内）形成气溶胶，人因吸入而被感染。
由于军团菌是一类水生菌群，生存环境界限广泛，水中存活时间较长，因此水质跟踪监测及水的消毒十分重要，可采取加氯，加热，化学药品，臭氧，紫外线，金属电离等消毒法并投入杀藻剂，使大致菌量低千10 3 cfu/L，消除污染的气溶胶来源。
参考文献:［1］陈悦，沈建民，王刚毅，等.军团菌和军团菌病研究进展［M］.2003，17.［2］宋勇，康晓明，李珍大.基因扩增法检测军团杆菌DNA的研究［J］.江苏医药，1994，20（19）:466.［3］王琳，李丽云，万超群.空调系统冷却塔水分离军团菌报告［J］.中国医科大学报，2000，29（1）:25～29.作者单位:深圳市疾病预防控制中心，广东深圳518020.日期：2006年12月19日- 来自[2005年第5卷第3期]栏目。