试验二总糖和还原糖的测定
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?准确称取0.5g藕粉，放在大试管中，加入 6 M HCl 5ml，蒸馏水 8ml，在沸水浴中加热 15min ，取出 1～2滴置于白瓷板上，加 1滴I-KI溶液检查水解是 否完全。 如已水解完全，则不呈现蓝色。 水解毕， 冷却至室温后加入 1滴酚酞指示剂，以 6M NaOH 溶液中和至溶液呈 微红色 ，定容到 50ml，取 5ml 再次定容至 50ml，过滤，取滤液用于总糖测定。
4、样品中含糖量的测定
1、取7支1.5 cm×15 cm试管，分别按下表加入试剂：
项目 试管号
样品溶液（ ml）
空白
还原糖
0
1
2
3
1（水） 1
1
1
总糖
4
5
6
1
1 (稀释后 )
1
3,5-二硝基水杨酸试剂（ ml） 2
2
2
2
2
2
2
A540
2、加完试剂后，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流 动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml，摇匀，在540 nm波长 处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准 曲线上查出相应的糖含量。
实验内容
1. 葡萄糖标准曲线的制备； 2. 样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定； 3. 样品（藕粉）中总糖的水解和含量测定。
1、葡萄糖标准曲线制作
1、取6支1. 5 cm×15 cm试管，按下表加入1 mg/ml葡萄糖 标准液和蒸馏水。
管号
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液 (ml) 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1
2、样品中还原糖的提取
?准确称取 1g藕粉，放在 100 ml烧杯中，先以少 量蒸馏水调成糊状，然后加入 40 ml蒸馏水，混 匀，于 50℃恒温水浴中保温 20 min，不时搅拌， 使还原糖浸出。全部收集在 50 ml的容量瓶中定 容， 过滤出 5ml ，即为还原糖提取液。
3、样品总糖的水解及提取
5、计 算
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数。
思考题
1、比色时为什么要设计空白管？ 2、糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？ 3、总糖和还原糖的提取有何不同？
蒸馏水 (ml) 1
0.8 0.6 0.4 0.2 0
葡萄糖含量 (mg/ml)
0
A540
2、分别加入2mlDNS试剂，沸水浴中加热2 min进行显色， 取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml，摇匀， 在540nm波长处测定光吸收值。
3、标准曲线绘制：以葡萄糖ຫໍສະໝຸດ Baidu量（mg/ml）为横坐标，光 吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
实验二 总糖和还原糖的测定
──3,5－二硝基水杨酸法
目的要求
? 掌握还原糖和总糖的测定原理 ? 学习用比色法测定还原糖的方法
实验原理
? 在 NaOH 和丙三醇存在下， 3,5 －二硝基水杨酸 （DNS）与 还原糖 共热后被还原生成氨基化合物。 在过量的 NaOH 碱性溶液中 此化合物呈桔红色， 在540nm 波长处有最大吸收， 在一定的浓度范围 内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系 ，利用比 色法可测定样品中的含糖量。
4、样品中含糖量的测定
1、取7支1.5 cm×15 cm试管，分别按下表加入试剂：
项目 试管号
样品溶液（ ml）
空白
还原糖
0
1
2
3
1（水） 1
1
1
总糖
4
5
6
1
1 (稀释后 )
1
3,5-二硝基水杨酸试剂（ ml） 2
2
2
2
2
2
2
A540
2、加完试剂后，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流 动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml，摇匀，在540 nm波长 处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准 曲线上查出相应的糖含量。
实验内容
1. 葡萄糖标准曲线的制备； 2. 样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定； 3. 样品（藕粉）中总糖的水解和含量测定。
1、葡萄糖标准曲线制作
1、取6支1. 5 cm×15 cm试管，按下表加入1 mg/ml葡萄糖 标准液和蒸馏水。
管号
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液 (ml) 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1
2、样品中还原糖的提取
?准确称取 1g藕粉，放在 100 ml烧杯中，先以少 量蒸馏水调成糊状，然后加入 40 ml蒸馏水，混 匀，于 50℃恒温水浴中保温 20 min，不时搅拌， 使还原糖浸出。全部收集在 50 ml的容量瓶中定 容， 过滤出 5ml ，即为还原糖提取液。
3、样品总糖的水解及提取
5、计 算
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数。
思考题
1、比色时为什么要设计空白管？ 2、糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？ 3、总糖和还原糖的提取有何不同？
蒸馏水 (ml) 1
0.8 0.6 0.4 0.2 0
葡萄糖含量 (mg/ml)
0
A540
2、分别加入2mlDNS试剂，沸水浴中加热2 min进行显色， 取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml，摇匀， 在540nm波长处测定光吸收值。
3、标准曲线绘制：以葡萄糖ຫໍສະໝຸດ Baidu量（mg/ml）为横坐标，光 吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
实验二 总糖和还原糖的测定
──3,5－二硝基水杨酸法
目的要求
? 掌握还原糖和总糖的测定原理 ? 学习用比色法测定还原糖的方法
实验原理
? 在 NaOH 和丙三醇存在下， 3,5 －二硝基水杨酸 （DNS）与 还原糖 共热后被还原生成氨基化合物。 在过量的 NaOH 碱性溶液中 此化合物呈桔红色， 在540nm 波长处有最大吸收， 在一定的浓度范围 内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系 ，利用比 色法可测定样品中的含糖量。