螺旋体属
医学微生物学螺旋体
01
密螺旋体抗原试验
02
Nichols株螺旋体（抗原）→螺旋体特异抗体
03
优点：特异性强，可用作梅毒确诊试验
04
常用方法：
05
梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）
06
荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、
07
梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）、
08
梅毒螺旋体微量血凝试验（MHA-TP）
09
ELISA
苍白亚种：人类梅毒(syphilis) 地方亚种：地方性梅毒 极细亚种：雅司病
苍白密螺旋体 品他密螺旋体
品他病
分为致病与非致病两大类，对人致病的有：
梅毒螺旋体 （Treponema pallidum，TP)
生物学性状
形态与染色 螺旋体细长，形似细密的弹簧，螺旋弯曲而规则，8~14个，两端尖直，运动活泼 G-，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体 Fontana镀银染色法→染成棕褐色
微生物学检查法
标本: 发病一周内取血液; 第二周后取尿液; 有脑膜刺激者取脑脊液
Байду номын сангаас
分离培养与鉴定:Korthof培养基培养，MAT和AAT
分子生物学方法：PCR
1.病原体检测
直接镜检：暗视野或镀银染色
动物接种：幼龄豚鼠或金地鼠腹腔
2.血清学检测
病初和发病后2~3周各采血清一次
不耐热，60℃10分钟即死亡
对常用消毒剂敏感
对青霉素敏感
夏季在湿土或中性水中可存活数月
4.抵抗力－弱
内毒素样物质(ELS)：毒性低，引起发热， 炎症与组织坏死
黏附素：
溶血毒素：鞘磷脂酶C，引起红细胞破坏
胶原酶： 致病物质---类似细菌内毒素与外毒素
螺旋体
螺旋体的科和属
螺旋体 引起人类疾病 病原体 螺旋体科 脊膜螺旋体属(Cristispira) 脊膜螺旋体属 不 － 蛇形螺旋体属(Serpulina) 蛇形螺旋体属 不 － 螺旋体属(Spirochaeta) 螺旋体属 不 － 密螺旋体属(Treponema) 密螺旋体属 梅毒 苍白密螺旋体苍白亚 种 地方性梅毒 苍白密螺旋体地方亚种 雅司 苍白密螺旋体极细亚种 品他病 品他密螺旋体 疏螺旋体属(Borrelia) 疏螺旋体属 流行性回归热 回归热疏螺旋体 地方性回归热 许多种 伯氏疏螺旋体， 莱姆病 伯氏疏螺旋体，伽氏疏 螺旋体， 螺旋体，埃氏疏螺旋体 钩端螺旋体科 细丝体属(Leptonema) 细丝体属 不 － 钩端螺旋体属(Leptospira) 钩端螺旋体病 钩端螺旋体属 问号状钩端螺旋体
•临床表现 临床表现
•疾病特点 疾病特点
•免疫性 免疫性
疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力， 疾病后可获得抗同型钩体的持久免疫力，
细胞免疫为主 细胞免疫为主
三、微生物学检查法
1.病原体检测 病原体检测
发病10天内取血液 周后取尿液 发病 天内取血液;1周后取尿液 有脑膜刺激者取脑脊液 天内取血液 周后取尿液;有脑膜刺激者取脑脊液 • 直接镜检 • 分离与鉴定 接种至Korthof培养基，置28℃孵育。 接种至Korthof培养基， 28℃孵育。 Korthof培养基 阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊→ 阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊→暗视野显微 镜检查→有→则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。 镜检查→ 则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。 阴性标本:分离培养应连续观察4个月，仍无生长者。 阴性标本:分离培养应连续观察4个月，仍无生长者。 •动物接种 敏感方法，尤适于有杂菌污染的标本。 动物接种 敏感方法，尤适于有杂菌污染的标本。 将标本接种于幼龄豚鼠或金地鼠腹腔, 5 将标本接种于幼龄豚鼠或金地鼠腹腔,3~5d后，用暗视 野显微镜检查腹腔液； 野显微镜检查腹腔液；或3~6d取心血检查并作分离培养。 6 取心血检查并作分离培养。 •分子生物学方法 分子生物学方法
螺旋体详细介绍
螺旋体螺旋体（spirochete）是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。
在生物学位置上介于细菌与原虫之间。
螺旋体在自然界中分布广泛，常见于水、土壤及腐败的有机物上，亦有的存在人体口腔或动物体内。
对人致病的主要有3个属：①钩端螺旋体属：对人致病的主要是钩端螺旋体；②密螺旋体属：对人致病的主要有梅毒螺旋体等；③疏螺旋体属：对人致病的主要有回归热螺旋体等。
其中钩端螺旋体和梅毒螺旋体在临床上的影响较大。
生物学形状1.形态与结构螺旋体较细，由螺旋形的柱形原生质体、内鞭毛和外膜构成。
直径一般为0.1～0.3微米，长短不一，呈螺旋状，但钩端螺旋体呈C或S形。
螺旋体革兰染色阴性，但不易着色，故常用Fontana镀银染色法。
2.培养特性各种螺旋体在生理上的需求不一样，能量来源于糖类、氨基酸和长链脂肪酸类等。
3.抗原成分大部分螺旋体的抗原成分主要有外膜蛋白和内鞭毛抗原，其他抗原成分因菌而异。
4.抵抗力螺旋体的抵抗力较弱，但钩端螺旋体的抵抗力强于梅毒螺旋体。
致病性螺旋体的致病机制尚不明了。
不同的螺旋体通过不同的致病物质和机制而致病。
钩端螺旋体致病可能与其具有溶解红细胞的溶血素、细胞毒因子及内毒素样物质有关。
梅毒螺旋体的致病机制与其表面夹膜样物质的黏附作用及其分泌的黏多糖酶作用有关。
免疫性螺旋体的免疫性质多以体液免疫为主。
钩端螺旋体病痊愈后可获得对同型钩体的持久体液免疫。
梅毒螺旋体的免疫是传染性免疫，受染机体产生的特异性抗体可介导杀死或溶解梅毒螺旋体。
防治原则螺旋体的治疗原则是选用敏感的抗生素治疗。
预防可注射疫苗进行特异性预防，同时加强教育和管理。
微生物学总结11四体
殊；革兰染色阴性，Giemsa染色，呈淡紫色无细胞壁，三层膜结构，脂膜含固醇部分支原体有顶端结构4 生长慢，菌落小菌落稍大
5 液体培养混浊度极低液体培养有一定混浊度
BY通站路20班
顶端结构部分支原体的特殊结构，形似烧瓶状，具有粘附呼吸道或泌尿生殖道上皮细胞表面神经氨酸受体的作用，称为粘附素，与支原体的致病性有关。
中间的脂膜含胆固醇，故作用于固醇的两性霉素、皂素及洋地黄苷对其有显著杀灭作用；对青霉素等耐药；对干扰蛋白质合成的抗生素如四环素、红霉素等敏感。
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第二十章 螺旋体
第二十章螺旋体螺旋体是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的单细胞型微生物。
在生物学上的位置介于细菌与原虫之间。
它与细菌的相似之处是：具有与细菌相似的细胞壁，内含脂多糖和胞壁酸，以二分裂方式繁殖，无定型核（属原核型细胞），对抗生素敏感；与原虫的相似之处有：体态柔软，胞壁与胞膜之间绕有弹性轴丝，借助它的屈曲和收缩能活泼运动，易被胆汁或胆盐溶解。
在分类学上由于更接近于细菌而归属在细菌的范畴。
螺旋体广泛分布在自然界和动物体内，种类很多，有的有致病性，有的无致病性。
根据螺旋的数目、大小和规则程度及两螺旋间的距离分为三科五属，其中对人有致病性的有三个属。
1．疏螺旋体属（Borrelia）：有5～10个稀疏而不规则的螺旋，其中对人致病的有回归热螺旋体及奋森氏螺旋体，前者引起回归热，后者常与棱形杆菌共生，共同引起咽峡炎，溃疡性口腔炎等。
2．密螺旋体属(Treponema)：有8～14个较细密而规则的螺旋，对人有致病的主要是梅毒螺旋体、雅司螺旋体、品他螺旋体，后二亦通过接触传播但不是性病。
3．钩端螺旋体属(Leptospira)：螺旋数目较多，螺旋较密，比密螺旋体更细密而规则，菌体一端或两端弯曲呈钩状，本属中有一部分能引起人及动物的钩端螺旋体病。
第一节密螺旋体属一、苍白密螺旋体苍白亚种俗称梅毒螺旋体（Treponema Pallidun）是梅毒的病原体。
梅毒是一种广泛流行的性病，近几年在我国发病率又有所回升。
（一）生物学特性1、形态与染色梅毒螺旋体细长，5～15×0.1～0.2um，形似细密的弹簧，螺旋弯曲规则，平均8～14个，两端尖直。
电镜下显示梅毒螺旋体结构复杂，从外向内分为：外膜（主要由蛋白质、糖及类脂组成）、轴丝（主要由蛋白质组成）、圆柱形菌体（包括细胞壁、细胞膜及胞浆内容物）。
革兰染色阴性，但不易着色。
Fontana镀银染色法可将螺旋体染成棕褐色，在光镜下易查见。
2、培养梅毒螺旋体不能在无活细胞的人工培养基中生长繁殖。
螺旋体
Fontana镀银染色法
（一）生物学性状
2、培养特性
不能再无生命培养基培养；棉尾兔单层细胞培养（33℃） 主要:Nichols株（有毒株）和Reiter株（无毒株）
Nichols株
转种
在家兔睾丸和眼 前房内繁殖并保 持毒力，30～ 33h/次
含多种氨基酸 的兔睾丸组织 碎片中
厌氧 Reiter株
能生长， 但失去致病力
5 ～ 7d 半透明云雾状生长 （液面1cm的部位最丰富）
固体培养基：2周左右，透明、 不规则、扁平细小的菌落。
抵 抗 力
• 在中性湿土或水中可存活数月，在传播上有
重要意义。
• 耐冷：
• 不耐热： 56℃10min， 60℃1min即可杀死
• 常用消毒剂敏感：0.5%来苏、0.1%石碳酸、 1%漂白粉，10 ～ 30min即可杀死 • 对青霉素、四环素类抗生素敏感
（二）致病性
1、致病物质
内毒素样物质（ELS）
溶血素：类似磷脂酶作用。 细胞毒性因子（cytoxicity factor，CTF）
（二）致病性
2、所致疾病
钩端螺旋体病一种人畜共患传染病
•储存宿主：鼠和猪
•传播途径：人与污染水或土壤接触,经粘膜或皮肤进入 （主要途径） 尿 损伤的皮肤或粘膜 带菌动物 污染环境（水、土壤） 消化道 钩体血症
（一）生物学性状
形态与染色：
6~20×0.1~0.2m，螺旋细 密、规则，形似细小珍珠排列的 细链。
镀银染色：
螺旋体棕褐色，细长 ，弯曲， 一端或两端呈钩状，常呈C、S 形等。
暗视野镜检观察动力：
运动活泼、呈卷曲、翻筋斗
培养特性
为唯一能在人工培养基上培养的致病性螺旋体 需氧或微需氧,Korthof （柯索夫） 培养基，28℃， Ph7.2 ～ 7.4 ，
螺旋体
切 断 动物尿液污染水源和土壤 传 播 途 径
流感伤寒型 黄疸出血型
肺出血型
青霉素治疗病人
人接触疫水和疫土， 钩体经皮肤或粘膜进入人体致病
对易感人群接种死疫苗
Treponema pallidum:梅毒螺旋体
1. 引起梅毒syphilis（STD之一） 2. 人是惟一传染源，在人与人之间有效传播
水平传播（性接触、血液），垂直传播（母婴传播）
柯氏（Korthof）培养基 在水或湿土中能存活数月
体外培养困难，兔睾丸接种 可保持其繁殖与毒力
极弱！ 对冷、热和干燥敏感
暗视野显微镜下
钩端螺旋体
苍白密螺旋体
钩端螺旋体病(钩体病)是人畜共患病
鼠类和家猪是传染源， 多呈带菌状态
消灭传染源 对同型钩体有较持久免疫力
包柔螺旋体属：5~10个稀疏不规则螺纹 回归热和莱姆病
Comparison of leptospira and treponema pallidum
生物学性状 钩端螺旋体
苍白密螺旋体
分类
钩端螺旋体属
密螺旋体属
形态 染色 运动器官 培养特性 抵抗力
Hale Waihona Puke 密螺纹，一端或两端呈钩状 螺旋致密，细长，两端尖细
Fontana镀银染色 内鞭毛（轴丝）
物
梅毒螺旋体血凝试验(TPHA)
学
检
荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA–ABS)
查
3. PCR检测病原体基因
法
防治原则
✓ 尚无疫苗！ ✓ 加强卫生宣传和社会管理 ✓ 避免经性接触而感染 ✓ 病人应早诊断及彻底治疗 ✓ 治疗多用青霉素且剂量要足
Summary
• 螺旋体(spirochaetes)的概念与分类 • 钩端螺旋体(leptospira )所致疾病 • 梅毒螺旋体(treponema pallidum)致病特征 • 梅毒螺旋体的初筛与确证试验 • 梅毒的预防与治疗
螺旋体
[培养特性] 培养特性]
易人工培养，但生长缓慢，需氧， 易人工培养，但生长缓慢，需氧，营养要求 严格。 28oC7.2严格。温度 28oC-30oC , PH 7.2-7.4 常用Korthof液体培养基（ 10%兔血清或牛 Korthof液体培养基 常用Korthof液体培养基（含10%兔血清或牛 血清） 血清） （1～2周）半透明、云雾状混浊 周 半透明、 固体培养基（ 扁平、透明、 固体培养基（1～3周）：扁平、透明、细小 周 圆形菌落 半固体培养基（ 半固体培养基（3～10天） ：针尖样大小的 天 半圆形菌落
Ⅱ期梅毒：感染性强，破坏性小 期梅毒：感染性强，
发生于硬下疳出现后2 8 苍白亚种螺旋体血症 螺旋体血症， 发生于硬下疳出现后2~8周。苍白亚种螺旋体血症，全身 皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大，有时亦累及骨、 皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大，有时亦累及骨、 关节、眼及其他脏器。 关节、眼及其他脏器。
Ⅱ期梅毒
Ⅱ期梅毒
晚期)梅毒 Ⅲ期(晚期 梅毒 晚期
先天性梅毒（胎传梅毒） •多发生于妊娠4个月之后。 •引起胎儿的全身性感染，导致流产、早产 或死胎； •出生梅毒儿，呈现马鞍鼻、锯齿形牙、间 质性角膜炎、先天性耳聋等特殊体征。
（三）、微生物学检查法
1.标本
•Ⅰ期梅毒----硬下疳渗出液 •Ⅱ期梅毒----梅毒疹渗出液或局部淋巴结抽出液
•
[形态与染色]
体态细长，呈圆柱形，螺旋细密（55 15um 长，0.1-0.2um宽）、规则、数量多，在光 长，0.1-0.2um宽） 学显微镜下很难看清螺旋。在暗视野显微镜下， 似细小珍珠排列的细链，运动活泼。 一端/两端钩状，菌体成8、S或C形 G-, Fontana镀银染色,染成棕褐色
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临床特点
起病急，高热、乏力、全身酸痛、结膜充血、 腓肠肌压痛、表浅淋巴结肿大；
三大症状：寒热、身痛、一身乏； 三大体征：眼红、腿疼、淋巴大。
免疫性
可获得持久免疫力(对同型)，体液免疫为主。 特异性抗体( 1～2周)：调理，吞噬增强
血流中：被清除 肾脏内：不易被清除 尿中排菌：数周、数月、数年
三、微生物学检查
季节性（夏秋）：雨水型——家畜 稻田型——鼠 洪水型——家畜、鼠
地区性：三多——鼠、猪、水 职业性：农民、矿工、饲养员
致病物质
1.黏附素 2.溶血素 3.细胞毒因子 4.内毒素样物质
传播途径
人与污染水或土壤接触 ♦黏膜或皮肤侵入 ♦消化道黏膜（污染食物/饮水）
所致疾病
钩端螺旋体病： 先形成钩体血症，损伤全身毛细血管内皮细胞及 肝、肾、肺、心及中枢神经，出现休克、DIC、黄疸、 出血、心肾功能不全、脑膜炎等。
(主动脉瘤、主动脉炎、脊髓结核等) * 不易检出螺旋体，传染性小；
病程长，破坏性大，可危及生命。
先天性梅毒：易致流产、早产或死胎；也可致先天畸形。 常呈锯齿形牙、间质性角膜炎、神经性耳聋 等症状。
输血后梅毒：第二期梅毒症状。
免疫性
传染免疫(有感染时才有免疫力)： 细胞免疫：主要 体液免疫：抗体 (1)抗梅毒螺旋体抗体： (2)抗心肌磷脂抗体：反应素(reagin)，能与生物 组织中的类脂抗原（如牛心肌）发生非特异性结合反 应，无防御作用，用于血清学诊断。
轴丝：运动器官 染色：Giemsa法:红色；镀银染色法:棕褐色 观察：暗视野法(形态,运动)
培养
Nichols株(Nichols strain)： 有毒力； 在家兔睾丸或眼前房内接种可获得。
Reiter株(Reiter strain)： 失去致病力。 转种于含有多种氨基酸的兔睾丸碎片组织中。 厌氧培养。
课程目标
2.熟悉
钩端螺旋体 的致病性与 免疫性；梅 毒螺旋体生 物学特性、 微生物学检 查。
1.掌握
钩端螺旋体 生物学性状、 微生物学检 查。
3.了解
回归热螺旋 体生物学性 状、微生物 学检查；伯 氏疏螺旋体 致病性。
概述
螺旋体特点： 细长、柔软、螺旋状、运动活泼； 轴丝是运动器官； 原核细胞型微生物； 基本结构与细菌相似，如有细胞壁、原始核质； 以二分裂方式繁殖； 对抗生素等药物敏感。
2.特异性试验：检测特异性抗体 （1）梅毒螺旋体血凝试验(TPHA) （2）梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA) （3）荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) （4）梅毒螺旋体制动试验(TPl)
四、防治原则
预防：加强性安全教育； 严格社会管理。
治疗：尽早足量使用青霉素、多西环素、盐酸 四环素、红霉素；检查病人血清中抗体动态变 化。
检查螺旋体 取材：1周内：血
2周后：尿 脑膜刺激症状：脑脊液 检查方法： 1．直接镜检：暗视野法,镀银染色法； 2．分离培养与鉴定：Korthof培养基； 3．动物试验(接种) 豚鼠，金地鼠。
血清学诊断 病初和发病后第3～4周各采血清一次。 有脑膜刺激症状者采取脑脊液。 检测特异性抗体：
显微镜凝集试验（microscopic agglutination test, MAT） 间接凝集试验
*用作多种梅毒血清诊断的抗原。
抵抗力
* 抵抗力：极弱 * 湿热,干燥：特别敏感； * 体外迅速死亡； * 血液中的梅毒螺旋体4℃放置3天后失去感染性； * 砷、汞制剂和青霉素、红霉素、庆大霉素:敏感； * –78℃保存一年,有感染力。
二、致病性与免疫性
梅毒螺旋体：梅毒(syphilis)(STD) 传播途径：性接触——梅毒
第一节 钩端螺旋体属
-问号钩端螺旋体
引起钩端螺旋体病 -双曲钩端螺旋体 无致病性
一、生物学性状
形态与染色
*形态：细长、弯曲。 *螺旋细密、规则，一端或两端弯曲成钩状。 *染色：G—，但着色难，常用
镀银染色，棕褐色。
培养和化反应
*营养要求较高，常用Korthof培养基； 适宜温度：28～30℃。最适pH：7.2～7.6。
第二期(早期梅毒)： * 传染性强,损伤性较小； * 全身皮肤黏膜出现梅毒疹； * 淋巴结肿大； * 可侵犯骨、眼及中枢神经系统； * 产生抗体→不治疗→症状可在3周～3个月后消退。
早期梅毒：从硬性下疳至梅毒疹消失后一年之内。
二期梅毒（斑丘疹）
第三期(晚期梅毒)： * 二期3～4年后：慢性炎性损伤，即梅毒肉芽肿。 * 重者：10～15年后：心血管系统与中枢神经系统损害。
*需氧或微需氧； *生化反应不活泼。
抵抗力
*热，酸：抵抗力弱，60 ℃ 1min； *湿土或水中：存活6周以上（传播上有意义）。
分类
*按抗原结构分类：根据群和型特异性抗原分 血清群和血清型。
问号钩端螺旋体：25个血清群、200多个 血清型。
*按基因分类
二、致病性与免疫性
传播方式
人畜共患病； 传染源和储存宿主：啮齿类动物和家畜。
垂直传播——先天性梅毒 输血——输血后梅毒 梅毒：分为3期 (1)第一期：溃疡或无痛性硬下疳 (2)第二期：(早期梅毒) (3)第三期：(晚期梅毒)
第一期：传染性极强 侵入→3周左右→局部溃疡或无痛性硬性下疳→ 1个月后→自然愈合。
血中螺旋体经2 ～ 3个月潜伏期→第二期
包皮硬下疳
外阴硬下疳
上唇硬下疳
三、微生物学检查
病原学检查： Ⅰ期梅毒：硬性下疳 Ⅱ期梅毒：梅毒疹渗出液，局部淋巴结抽出液 方法：暗视野显微镜
直接免疫荧光 ELISA法 组织切片：镀银染色→镜检
血清学检查： 1.非特异性试验:检测反应素
抗原：正常牛心肌脂质（梅毒螺旋体不能人工培养，但和 正常牛心肌脂质有交叉抗原）
方法：（1）快速血浆反应素试验(RPR) （2）不加热血清反应素fan'ying's试验（USR） （3）简易玻片沉淀试验(VDRL)
四、防治原则
预防：防鼠、灭鼠 家畜管理 保护水源 预防接种：多价死疫苗
治疗：青霉素（首选）、庆大霉素、多西环素等
第二节 密螺旋体属
致病性螺旋体：
梅毒螺旋体(T．pallidum，亦称苍白密螺旋体) 雅司螺旋体(T．pertenue) 品他螺旋体(T．carateum)
一、生物学性状
形态与染色
形态：细长卷曲，两端尖直，8～14个 致密而规则的螺旋，运动活泼；