钩端螺旋体属微生物学检验
临床微生物学检验技术试题及答案(3)
临床微生物学检验技术试题及答案A1型1.兰氏染色是细菌学中一种变要鉴到染色法，判定结果是A、G-菌为紫色，G+为红色B、G-菌为红色，G+为紫色C、G-菌为绿色，G+为紫色D、G-菌为紫色，G+为绿色E、G-菌为无色，G+为红色答案：B2.对细菌的形态结构等的检查是通过显微镜观察，在观察其动力时需要A、美兰染色B、革兰氏染色C、抗酸染色D、不染色E、复红染色答案：D3.下列关于螺旋体的叙述，正确的是A、革兰氏染色阳性B、革兰氏染色阴性C、对青霉素敏感D、对红霉素抵抗E、专性需氧答案：A4.下列关于钩端螺旋体的叙述正确的是A、有鞭毛B、镀银染色，钩体为红色C、镀银染色，钩体为棕褐色D、革兰氏染色阳性E、人是唯一宿主答案：C5.在进行CFT试验，要对被检血清进行灭活补体，但不同动物血清的补体灭活温度是A、65℃B、56℃C、37℃D、相同的E、不同的答案：E6.流行性斑疹伤寒的传播媒介A、蚊B、蝉C、蚤D、虱E、螨答案：D7.恙虫病的传播媒介A、蚊B、蜱C、蚤D、虱E、螨答案：E8.地方性斑疹伤寒的预防以A、灭狗、灭虱为重要措施B、灭猫、灭虱为重要措施C、灭鼠、灭蚤为重要性措施D、灭螨为重要措施E、灭蝇、灭蜱为重要措施答案：C9.天花是通过下列哪一种疫苗的应用而被消灭的A、天花病毒疫苗B、灭活疫苗C、痘苗病毒疫苗D、减毒活疫苗E、传代细胞疫苗答案：C10.流行性腮腺炎最具有流行病学意义的传染源是下列哪一种A、亚临床型者B、疾病时期C、疾病早期D、疾病晚期E、疾病恢复期答案：A11.在对流电泳中，一般常见缓冲液是哪种A、碳酸盐缓冲液B、Tris-HCl缓冲液C、巴比妥缓冲液D、醋酸盐-醋酸缓冲液E、磷酸盐缓冲液正确答案：C12.下列哪个选项是体内DNA复制与体外PCR反应不同的A、半保留复制B、dNTP做原料C、双向复制D、引发酶参与E、DNA聚合酶参与正确答案：D13.下列致病菌中不具有侵袭力、不侵入肠上皮细胞的是A、伤寒沙门氏菌B、霍乱弧菌C、志贺氏痢疾杆菌D、小肠结肠炎耶尔森氏菌E、鼠伤寒沙门氏菌正确答案：B14.沙门氏菌抗原非常复杂，下列哪种不属于主要的具有分类学意义的抗原A、O抗原B、H抗原C、K抗原D、F抗原E、Vi抗原正确答案：D15.以下细菌，属于胞内寄生菌的是A、ETECB、EPECC、志贺菌D、伤寒沙门氏菌E、霍乱弧菌正确答案：D16.下列关于肺炎克雷白杆菌的描述正确的是A、革兰氏染色阳性B、具有荚膜结构C、专性需氧D、专性厌氧E、营养需求高正确答案：B17.感染下列细菌后，可获得牢固免疫力的是A、ETECB、EPECC、志贺菌D、伤寒沙门氏菌E、霍乱弧菌正确答案：D18.下列关于金黄色葡萄球菌的描述正确的是A、革兰氏染色阴性B、能产生凝固酶C、不发酵甘露醇D、培养需要特殊培养基E、皮肤为主要带菌部位正确答案：B19.下列叙述正确的是A、梅毒螺旋体属于疏螺旋体B、梅毒螺旋体也称苍白密螺旋体C、梅毒螺旋体人工培养容易D、梅毒螺旋体抵抗力强E、梅毒螺旋体具有内毒素正确答案：B20.下列叙述正确的是A、螺旋体都能致病B、密螺旋体都可致病C、螺旋体中只有密螺旋体可致病D、密螺旋体包括致病和非致病两大类E、密螺旋体中只有梅毒螺旋体可致病正确答案：D21.钩端螺旋体感染可发生黄疸现象，其原因是由于A、细胞毒因子作用B、溶血素作用C、脂多糖D、外膜蛋白E、鞭毛答案：B22.EPEC对细胞的粘附有A、弥散性粘附B、局限性粘附C、A、B都是D、A、B都不是E、特异性粘附答案：C23.下列说法正确的是：A、肺炎衣原体天然动物宿主是鼠B、肺炎衣原体寄生于人类C、肺炎衣原体可引起性病D、肺炎衣原体培养容易E、肺炎衣原体肺炎以儿童常见答案：BA、琼脂扩散试验（4℃下进行）29.我国卫生标准中，100ml瓶装汽水，果汁中的大肠菌群数量不得超过A、1B、3C、5D、7E、9答案：C30.下列何种细菌为专性需氧菌A、军团菌B、肺炎克雷白杆菌C、大肠杆菌D、铀绿假单胞菌E、支原体答案：D31.当沙门氏菌的Vi抗原发生变异时B、CFTC、血清试管凝集试验D、冷CFTE、环状沉淀下列各种反应的时间分别是24.24小时答案：C25.30分答案：B26.3-7分答案：E27.72小时答案：A28.下列何种微生物具有绿脓素A、军团菌B、铜绿假单胞C、肺炎克雷白杆菌D、流感嗜血杆菌E、肺炎链球菌答案：BA、O抗原受影响B、H抗原受影响C、O、H抗原都受影响D、O、H抗原都不受影响E、上述说法均错误答案：D32.关于铜绿假单胞描述不正确的是：A、通常称为脓杆菌B、无荚膜C、有芽孢D、营养要求低E、易获得耐药性答案：C33.下列关于铜绿假单胞菌正确的是；A、专性厌氧B、兼性厌氧C、专性需氧D、兼性需氧E、革兰氏染色阳性答案：C34.以下沙门氏菌中，最常见的感染人的是A、肠炎沙门氏B、鸭沙门氏菌C、猪沙门氏菌D、鼠伤寒沙门菌E、以上不确定答案：D35.志贺菌的抗感染免疫主要是A、分泌型lgAB、lgGC、lgMD、lgEE、以上都是答案：A36.下列何种细菌具有荚膜结构A、军团菌B、脑膜炎奈瑟菌C、铜绿假单胞菌D、分枝杆菌E、大杆肠菌37.下列细菌何种具有鞭毛结构：A、脑膜炎奈瑟菌B、军团菌C、支原体D、衣原体E、流感嗜血杆菌答案：B38.在下列细菌中，尚未从人类的感染中分离到的是A、阴沟肠杆菌B、产气肠杆菌C、聚团肠杆菌D、河生肠杆菌E、枸椽酸杆菌答案：D39.我国卫生标准中，（）瓶汽水、果汁的大肠菌群数量不提超过5A、1mlB、10 mlC、100 mlD、1000mlE、10000ml答案：C40.沙门氏菌的抗原容易发生变异，变异的种类有A、H-O变异B、S-R变异C、V-W变异D、以上都是E、以上均不对答案：D41.大肠杆菌指数是指每（）样品中的大肠菌群数B、毫升C、升D、立方米E、立立分米答案：C42.要确定为大肠杆肠菌引起的尿路感染，除了要确定是大肠杆菌外，还应该计数绝对含量。
螺旋体、支原体、立克次体、衣原体
第十章螺旋体螺旋体是一类菌体细长、柔软、弯曲呈螺旋状、能活泼运动的原核单细胞微生物。
基本结构与细菌类似，有细胞壁、核质，以二分裂繁殖，广义上属于细菌。
革兰氏阴性，但大多数不易着色。
多数需厌氧培养，营养要求较高，有些不能用人工培养基培养。
有些可通过细菌滤器或滤膜。
疏螺旋体属、密螺旋体属、蛇形螺旋体属、钩端螺旋体属微生物学检查：1.直接镜检：以病猪的清新粪便粘液，或病变结肠粘膜刮取物制成薄涂片，染色镜检多用姬姆萨氏法染色法。
也可用印度墨汁作负染或镀银染色法染色镜检。
相差或暗视野显微镜活体检查，若每个高倍视野中见有2-3个或更多个蛇样运动的较大螺旋体即可确诊。
2）分离培养过滤培养法：将样品作5-10倍稀释，轻度离心，上清用0.8μm和0.45μm滤膜依次过滤。
取滤液直接涂布接种于鲜血琼脂平板上，厌氧培养37-38℃培养3-6d，每隔2d检查1次，当看见到平板上浮上β溶血现象时，即可挑取可疑菌落，作成悬滴或压滴标本，用暗视野显微镜检查。
6. 微生物学检查直接镜检标本离心集菌后做暗视野检查或用Fontana镀银法染色镜检分离与鉴定接种至Korthof 培养基，置28℃孵育。
阳性标本在2周内可见培养液呈轻度混浊→暗视野显微镜检查→有→则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。
阴性标本:分离培养应延续看见4个月，仍无生长者。
动物接种是分离钩体的敏感主意。
尤其相宜检查有杂菌污染的标本。
常用幼龄豚鼠和地鼠。
分子生物学主意核酸探针或PCR技术血清学诊断血清学诊断病初和发病后第3~4周各采血清一次。
有脑膜刺激，症状者采取脑脊液显微镜凝集实验补体结合实验间接凝集实验疫水检查第十一章支原体/霉形体霉形体（Mycoplasma）霉形体又译作支原体，是一类无细胞壁的细菌，是目前已知能在无生命的培养基中繁殖的最小微生物。
概述是一类无细胞壁的原核单细胞微生物；多形性，能通过细菌滤器，是目前所知的能够在无生命人工培养基中生长繁殖的最小微生物。
临床医学检验技师初级(师)微生物学及检验(厌氧菌、螺旋体)-试卷1
临床医学检验技师初级（师）微生物学及检验（厌氧菌、螺旋体）-试卷1(总分：68.00，做题时间：90分钟)一、 B1型题(总题数：1，分数：4.00)A．破伤风芽孢梭菌B．产气荚膜梭菌C．肉毒梭菌D．艰难梭菌E．白喉棒状杆菌（分数：4.00）(1).芽孢大于菌体，位于菌体顶端，使菌体呈鼓槌状的是（分数：2.00）A. √B.C.D.E.解析：(2).芽孢大于菌体，位于菌体次极端，使菌体呈汤匙状或网球拍状的是（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：解析：芽孢大于菌体，位于菌体顶端，使菌体呈鼓槌状的是破伤风芽孢梭菌。
芽孢大于菌体，位于菌体次极端，使菌体呈汤匙状或网球拍状的是肉毒梭菌。
二、 A1型题(总题数：29，分数：58.00)1.可做厌氧菌培养标本的为（分数：2.00）A.气管抽取物B.前列腺分泌物C.阴道分泌物D.胸腔积液√E.中段尿解析：解析：厌氧菌在有氧条件下不能生长，为保证培养成功，必须注意标本采集和运送时不能被正常菌群污染，应尽量避免接触空气。
2.疑似厌氧菌感染的标本，下列不正确的处理方法为（分数：2.00）A.避免被正常寄居菌污染B.避免标本与空气接触C.在半小时内送检D.超过半小时，可冷藏保存√E.以上都正确解析：解析：厌氧菌标本送到实验室后，应在20～30分钟内处理完毕，如果一时来不及接种，可将标本置室温下保存，一般不要冷藏，因冷藏对某些厌氧菌有害，且低温时氧的溶解度较高。
3.下列哪种细菌在培养时能产生“汹涌发酵”的现象（分数：2.00）A.肉毒梭菌B.产气荚膜梭菌√C.破伤风梭菌D.产黑色素类杆菌E.脆弱类杆菌解析：解析：产气荚膜梭菌在牛奶培养基中能分解乳糖产酸，使其中酪蛋白凝固，同时产生大量气体(H 2和CO 2 )，可将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，将液面封固的凡士林层上推，甚至冲走试管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”，为产气荚膜梭菌培养时产生的特征性现象。
4.血平板上形成双层溶血环的细菌是（分数：2.00）A.葡萄球菌B.肺炎球菌C.破伤风梭菌D.产气荚膜梭菌√E.白喉棒状杆菌解析：解析：产气荚膜梭菌在血平板上可形成双层溶血环，内环完全溶血，是由于θ毒素的作用，外环不完全溶血则是由α毒素所致。
支原体、衣原体、立克次体、螺旋体
支原体
概 述:
支原体（ mycoplasma ）是一类无细胞壁的原核 细胞型微生物，呈多形性，可通过除菌滤器，能 在无生命培养基上生长繁殖的最小的原核细胞型 微生物。
分类：
1.无胆甾原体科 2.螺原体科 3.支原体科:
与人类感染有关的是 支原体属 脲原体属
生物学性状:
1. 形态染色： G-，Giemsa淡紫色; 无细胞壁，多形性（球 形、 短杆形、分枝丝状），0.2~0.3μm
蚤粪中立克次体 破损皮肤 口、鼻 眼结膜 体内
3.恙虫病立克次体:
⑴.传染源: 带病原体的野鼠和家鼠; ⑵.传播媒介:恙螨; ⑶.所致疾病:恙虫病 带菌鼠
恙螨幼虫 人体 叮咬
局部红色丘疹
全身淋巴结肿大， 肺、肝、脾、脑等 损害
水疱,中央溃疡 形成黑色焦痂
4.贝纳柯克斯体（Ｑ热柯克斯体）:
概述
对人类致病的立克次体包括：
立克次体属 斑疹伤寒群 斑点热群 柯克斯体属 东方体属 恙虫病 埃立克体属 巴通体属
生物学性状：
1.形态与染色：呈多形性，主要为球杆状 革兰染色：G-，但不易着色 Giemsa染色：紫/蓝色
立克次体在感染的细胞内密集成团块状分布： 普氏立克次体：胞浆内分散存在; 恙虫病立克次体：胞浆内近核附近成堆排列; 斑点热立克次体：胞浆内，核内生长; 贝纳柯克斯体：胞浆空泡（吞噬溶酶体）内繁殖; 五日热巴通体：粘附于细胞外表面生长繁殖;
钩端螺旋体
生物学性状： 1.形态染色： 6～12μm 暗视野显微镜下： （活钩体）运动活 泼，使菌体呈C、 S、8字型； 镀银染色法： 棕褐色
2.培养:
为唯一能人工培养的致病性螺旋体
Korthof培养基，28℃，5-7d 半透明云雾状生长（液面1cm 的部位最丰富）
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查
《医学微生物学》三大常规的微生物学检查从临床标本中分离细菌的目的是为疾病的病原学做诊断，或查找与疾病相关的微生物，以及对抗生素的敏感性，这对于临床诊断、治疗、预后和进行流行病学调查是很有价值的。
因此，对临床标本的处理和检测应掌握以下原则。
1．临床标本的正确采集和处理对于疾病的正确诊断关系很大。
病人标本一般应在应用抗菌药物前采集。
对血液、脑脊液或穿刺液等标本，应严格按照无菌技术进行采集；对鼻咽拭子、肛拭子、粪便等标本，虽无须严格无菌操作，但也应尽量避免杂菌混入。
2．采集容器上应贴好送检号及病人姓名的标签，连同检验单一起尽早送检验室。
若路途较远，应冷藏保存送检；对脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等特殊标本，送检时应35℃～37℃保温。
3．人体很多部位与外界相通，存在有正常菌群，但不致病，故在涂片检查或分离培养时，应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。
另外，对某些无菌的部位，如血液、骨髓、脑脊液等，如检查出细菌应视为致病菌，但必须要排除采样及操作中的污染。
4．根据标本来源和可能存在的病原菌，选定各种分离培养基和孵育环境。
如痰标本一般选用血平板，用于化脓性链球菌、无乳链球菌、肺炎链球菌、白喉棒状杆菌等的分离。
【血液标本检查】正常人的血液是无菌的。
当细菌侵入血流并在其中生长繁殖，产生毒素等，可引起菌血症或败血症。
细菌学检验对其诊断和治疗具有极其重要的意义。
一、标本采集l．标本采集必须严格遵守无菌操作，即应去除皮肤上的细菌，又应注意空气中的细菌。
穿刺部位以碘酒、酒精棉球消毒，用干燥的灭菌注射器抽取血液，立即注入选定的液体培养基瓶内，充分混匀以防凝固。
2．采血一般应在治疗前，并在高热、寒战时作培养。
伤寒在发病一周内即菌血症期间采血；化脓性脑膜炎，鼠疫应在发热1～2d内采血；亚急性细菌性心内膜炎也宜于发热高峰采血或多次采血，且每隔1～2h采血一次，连续3～4次，可获较高的阳性率。
3．采血量应相当于培养液的1／10，通常是50ml培养液采血5ml，这样可使存在于血液中的补体、抗体、调理素、溶菌酶等抑制因子被稀释，使之减弱或失去抑制作用。
临床医学检验临床微生物：临床医学检验临床微生物一
临床医学检验临床微生物：临床医学检验临床微生物一1、单选钩端螺旋体的显微镜凝集试验，单份血清标本有诊断意义的滴度是（）A.1：100B.1：200C.1：300D.1：400E.1：500正确答案：C（江南博哥）2、单选下列何者是引起DIC的主要物质（）A.透明质酸酶B.荚膜多糖C.内毒素D.菌毛E.外毒素正确答案：C3、单选在37℃培养无动力，25℃培养有动力的细菌是（）A.普通变形杆菌B.奇异变形杆菌C.小肠结肠炎耶尔森菌D.摩根摩根菌E.大肠埃希菌正确答案：C4、多选病毒衣壳的作用不包括()A．保护核酸B．可破坏易感细胞的细胞膜C．构成病毒特异性抗原D．本身具有感染性E．鉴别和分类的依据正确答案：B, D5、单选大肠埃希菌在麦康凯琼脂上的菌落应为（）A.红色，不透明B.无色，半透明C.半透明，中心发黑D.红色，中心发黑E.无色，不透明正确答案：A6、单选2岁女孩，临床诊断为细菌性脑膜炎，细菌培养时发现在预加的金黄色葡萄球菌菌落周围细菌生长旺盛，出现卫星现象，关于该菌做药敏试验时叙述正确的是（）A.M-H琼脂培养基B.平板倒置放入35℃孵箱C.空气中孵育D.孵育8小时后看结果E.培养基pH为6.0正确答案：B7、单选可引起死胎和不孕症的支原体是（）A.原体B.网状体C.肺炎支原体D.解脲脲原体E.穿透支原体正确答案：D8、单选不宜冷藏的细菌是（）A.流感嗜血杆菌B.脑膜炎奈瑟菌C.百日咳鲍特菌D.牛布鲁菌E.金黄色葡萄球菌正确答案：B9、单选目前唯一用细胞培养获得减毒株的肝炎病毒是（）A.HAVB.HBVC.HCVD.HDVE.HEV正确答案：A10、多选病毒不能在无细胞的人工培养基上生长的主要原因是（）A.只有一种核酸B.对理化因素的抵抗力差C.无完整酶系统D.不能产生能量E.无核膜结构正确答案：C, D11、单选能与粘膜上皮细胞上的粘附素受体发生结合的是（）A.荚膜B.芽胞C.鞭毛D.糖萼E.普通菌毛正确答案：E12、单选人体感染下列哪种病原体后严禁使用磺胺类药物（）A.脑膜炎球菌B.痢疾杆菌C.立克次体D.葡萄球菌E.链球菌正确答案：C参考解析：磺胺类药物可促进立克次体生长繁殖。
钩端螺旋体属
形态与染色
形态：细长、 形态：细长、弯曲的杆菌 暗视野显微镜下： 暗视野显微镜下： 1.螺旋细密 规则， 螺旋细密、 1.螺旋细密、规则，一端或两端弯曲呈 钩状 2.问号钩端螺旋体 问号钩端螺旋体： 2.问号钩端螺旋体：似问号 双钩螺旋体： 双钩螺旋体：两个弯曲 染色： 但着色难。常用镀银染色法， 染色：G—，但着色难。常用镀银染色法， 棕褐色
致 病 性
致病物质： 致病物质： 1.溶血素 溶血素－ 1.溶血素－>溶血 2.细胞毒因子 2.细胞毒因子 3.内毒素样物质 3.内毒素样物质 侵入途径： 侵入途径：皮肤损伤 粘膜 眼结膜 临床类型: 临床类型: 又称外尔病 外尔病(Well's ①黄疸出血型 又称外尔病(Well's discase) 败血症、出血、 败血症、出血、黄疸与肝肾损害等 又称沼泽热(marsh ②流感伤寒型 又称沼泽热(marsh fever) 如流感或伤寒，较轻， 如流感或伤寒，较轻，内脏损害较少
免 疫 性
可获得持久免疫力(对同型) 可获得持久免疫力(对同型) 特异性抗体( 1 ～ 2w): 特异性抗体( 调理， 调理，吞噬增强 血流中: 血流中:被清除 肾脏内: 肾脏内:不易被清除 尿中排菌:数周、数月、 ->尿中排菌:数周、数月、数年
微生物学检查法
(一)检查螺旋体
取材:1w内 取材:1w内:血,2w后:尿,脑膜刺激症状:脑脊液 :1w ,2w后 脑膜刺激症状: 检查方法: 检查方法: 1．直接镜检 暗视野法,镀银染色法 暗视野法, 2．分离培养与鉴定 Korthof培养基 培养基, 30℃ Korthof培养基,25 ～ 30℃,2～4w 动物实验(接种) 豚鼠, 3．动物实验(接种) 豚鼠,黄地鼠 同位素,生物素标记DNA探针,PCR DNA探针 4．其他 同位素,生物素标记DNA探针,PCR 快速、敏感) (快速、敏感)
临床医学检验技师初级(师)微生物学及检验(厌氧菌、螺旋体)-试卷1
临床医学检验技师初级（师）微生物学及检验（厌氧菌、螺旋体）-试卷1(总分：68.00，做题时间：90分钟)一、 B1型题(总题数：1，分数：4.00)A．破伤风芽孢梭菌B．产气荚膜梭菌C．肉毒梭菌D．艰难梭菌E．白喉棒状杆菌（分数：4.00）(1).芽孢大于菌体，位于菌体顶端，使菌体呈鼓槌状的是（分数：2.00）A. √B.C.D.E.解析：(2).芽孢大于菌体，位于菌体次极端，使菌体呈汤匙状或网球拍状的是（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：解析：芽孢大于菌体，位于菌体顶端，使菌体呈鼓槌状的是破伤风芽孢梭菌。
芽孢大于菌体，位于菌体次极端，使菌体呈汤匙状或网球拍状的是肉毒梭菌。
二、 A1型题(总题数：29，分数：58.00)1.可做厌氧菌培养标本的为（分数：2.00）A.气管抽取物B.前列腺分泌物C.阴道分泌物D.胸腔积液√E.中段尿解析：解析：厌氧菌在有氧条件下不能生长，为保证培养成功，必须注意标本采集和运送时不能被正常菌群污染，应尽量避免接触空气。
2.疑似厌氧菌感染的标本，下列不正确的处理方法为（分数：2.00）A.避免被正常寄居菌污染B.避免标本与空气接触C.在半小时内送检D.超过半小时，可冷藏保存√E.以上都正确解析：解析：厌氧菌标本送到实验室后，应在20～30分钟内处理完毕，如果一时来不及接种，可将标本置室温下保存，一般不要冷藏，因冷藏对某些厌氧菌有害，且低温时氧的溶解度较高。
3.下列哪种细菌在培养时能产生“汹涌发酵”的现象（分数：2.00）A.肉毒梭菌B.产气荚膜梭菌√C.破伤风梭菌D.产黑色素类杆菌E.脆弱类杆菌解析：解析：产气荚膜梭菌在牛奶培养基中能分解乳糖产酸，使其中酪蛋白凝固，同时产生大量气体(H 2和CO 2 )，可将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，将液面封固的凡士林层上推，甚至冲走试管口棉塞，气势凶猛，称为“汹涌发酵”，为产气荚膜梭菌培养时产生的特征性现象。
4.血平板上形成双层溶血环的细菌是（分数：2.00）A.葡萄球菌B.肺炎球菌C.破伤风梭菌D.产气荚膜梭菌√E.白喉棒状杆菌解析：解析：产气荚膜梭菌在血平板上可形成双层溶血环，内环完全溶血，是由于θ毒素的作用，外环不完全溶血则是由α毒素所致。
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钩端螺旋体属微生物学检验
(一)检验程序
钩端螺旋体检验程序见图21-3。
(二)标本采集
钩端螺旋体可从临床标本和自然界的水中分离获得。
临床标本主要包括血液、尿液、脑脊液和房水。
发病早期(1周内)取血液；2周后取尿液；有脑膜刺激者取脑脊液；有眼部并发症者可取眼房水；用于钩端螺旋体的病原学检查。
(三)直接显微镜检查
将标本行差速离心集菌后作暗视野显微镜检查，或用Fontana镀银法染色后镜检。
如发病早期的病人抗凝血，先1000r／min离心10分钟，除去红细胞，血浆再以10 000r/min离心40分钟，弃上清，取沉淀物镜检。
此法对早期快速诊断有一定价值，但敏感性低，缺乏特异性且不能获得菌株及测知菌群类型，需要其他方法补其不足。
也可用免疫荧光法或免疫酶染色法检查，以提高特异性和敏感性。
(四)分离培养和鉴定
将每份血液标本接种2～3管Korthof培养基28℃培养。
多数阳性标本在l～2周内可见培养液呈轻度混浊，以暗视野显微镜检查有无钩端螺旋体存在。
菪有钩体，则用已知诊断血清鉴定其血清群和血清型。
分离培养应连续观察30
天以上，仍无生氏者方可确定为阴性。
尿液标本一般需离心后取沉渣接种2～4管Korthof、培养基，且培养基中需加抑菌剂(5-氟尿嘧啶)。
动物接种是分离钩端螺旋体的敏感方法。
将标本接种于幼龄豚鼠或金地鼠腹腔，接种3～5天后，可用暗视野显微镜检查腹腔液i亦可接种后3～6天取心脏血镜检和分离培养。
动物死后解剖，可见皮下、肺部等有大小不等的出血斑，在肝、脾等脏器中有大量钩端螺旋体。
(五)血清学诊断
采集病程早、晚期双份血清，一般在病初和发病后第3～4周各采一次。
有脑膜刺激症状者采取脑脊液检测特异抗体。
目前常用显微镜凝集试验(MAT)检测血清中的钩端螺旋体抗体。
MAT是用标准株或当地常见菌株作抗原，分别与患者不同稀释度的血清混合，30℃作用2小时，滴片用暗视野显微镜检查。
若待检血清中有某型抗体存在，则在同型抗原孔中可见钩端螺旋体凝集成团，形如小蜘蛛，一般患者凝集效价在1：400以上或双份血清效价增高4倍以上有诊断意义。
间接凝集试验、补体结合试验、间接免疫荧光试验和ELISA等血清学方法也可用于诊断。
(六)分子生物学检测
用PCR技术、同位素或生物素标记的DNA探针技术检测钩端螺旋体，较培养法快速、敏感。
此外，限制性内切酶指纹图谱可用于钩端螺旋体的菌株鉴定、分型以及抗原变异研究。