邓恩桉遗传多样性的ISSR分析_邓紫宇
邓恩桉优良种源及其家系与优株选择研究
不同海拔高度木荷种群遗传多样性的ISSR分析
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不同海拔高度木荷种群遗传多样性的 !""# 分析 !
金则新 " 李钧敏 " 蔡琰琳
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（ ! 台州学院生态研究所，浙江临海 $!%&&& ；# 杭州师范学院生命科学学院，杭州 $!&&!’ ）
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存备用。 7!!, 引物是根据加拿大哥伦比亚大学 （ P98Q;<C =8:R "S T<8:8=U H"%A>V8$， !;: G"4 ’ ， G"4 (*&C’** ）公 布的序列， 由上海生工生物34; WRV$8X 公司的 . Y ) 热循环仪中进行。经过测试镁离子浓度、 XGK. 浓 引 物 浓 度、 /G- 聚 合 酶 量 对 度、 模 板 /G- 含 量、 7!!,反应结果的影响后， 确定最适的 7!!, 扩增反应 &* %% .H, 反应体积中， & Y K$@ 酶配套缓冲 条件为： ?W ’4 * ， 3* >>"% ・ 2 M & 液 （ &* >>"% ・ 2 M & K<8=CWH%， ZH%， *4 &5 K<8:"9 [C&** ） ， *4 L3P K$@ /G- 聚合酶， ) >>"%・2 M & \OH%) ， *4 ) >"% ・ 2 M & 6 Y XGK.， + ?>"% 引物， ) >O ・ >% M & 牛血清白蛋白， &* 9O 模板 /G-。 ’6 I 预变性 3 >89， ’6 经优化的 .H, 扩增程序为： I 变性 0* =， 3+4 0 I 退火 63 =， L) I 延伸 &4 3 >89， 共 03 个循环； L) I 完全延伸 3 >89。扩增产物在 &4 +5 的琼脂糖凝胶 （ 含 *4 3 %O ・ >% M & 溴化乙锭） 中 用 N7! 凝胶成像分 电泳， 电泳缓冲液为 *4 3 Y KTJ ， 析系 统 （ 上 海 天 能 科 技 服 务 公 司） 拍 照 保 存。用 （ 上海华 &/G- ] &’( ,7 ^ )*+ X #标准分子量参照物 美公司） 做分子量标记。阴性对照加入除模板 /G外的以上各成分， 用双蒸水代替总 /G-。从 &** 个 引物中筛选出在 6 个木荷种群中均可扩增出清晰条 带， 且条带不弥散， 不模糊， 重复性好， 同时阴性对照 中无带的 &) 个引物作为正式扩增的 7!!, 扩增引物 。 （ 表 &）
基于ISSR分子标记的桉树遗传分析
值 范围为 ０４ ９ ． １ ５一１０ ３ ， ．０ 遗传相似性 （ Ｍ） ４ Ｓ 值范 围为０ ４ ０ ０ ６ ３ 。应用 Ｕ Ｇ ．２ ０— ．９ ３ Ｐ ＭＡ法进行聚 类分析 ， ８ 将 份桉树材
料 划 分 为 ３个 大 类 ， 邓恩 桉 和 赤 桉 为 一 类 ； 巨尾 桉 、 巨桉 、 细 桉 、 尾 尾 韦塔 桉 、 皮 桉 为 一 类 ； 里 桉 则 独 成 一 类 。 粗 托
ＺＥＮＧ ｎ ｌ ｇ，ＴＡＮ ａ －ｅ ｇ，ＺＨＡＮＧ ｎ － ｕ ｎ，ＸＩ ｅ ｇ，Ｚ Ｙａ － ｎ ｉ Ｘｉ ｏ ｆ ｎ Ｄａ ｇ ｑ ａ ＥＰ ｎ ＥＮＧ ａ ・ ｎ Ｘｉ ｏ ｆ ｇ ｅ
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ISSR分子标记技术在家蚕遗传研究上的应用进展
ISSR分子标记技术在家蚕遗传研究上的应用进展吴凡;李德臣;赵春晓;陈登松【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2015(54)24【摘要】The basic principle and characteristics of Inter-simple Sequence Repeat (ISSR) was described. The application of ISSR in silkworm genetics was summarized. The application future in the study of silkworm was prospected.%概括了ISSR 分子标记技术的基本原理和特点，综述了其在家蚕相关领域中应用的研究进展，并展望了其在家蚕遗传研究上的应用前景。
【总页数】3页(P6124-6126)【作者】吴凡;李德臣;赵春晓;陈登松【作者单位】湖北省农业科学院经济作物研究所，武汉 430064;湖北省农业科学院经济作物研究所，武汉 430064;安康市蚕桑研究所，陕西安康 725019;湖北省农业科学院经济作物研究所，武汉 430064【正文语种】中文【中图分类】S881.2【相关文献】1.ISSR、RAPD和SRAP分子标记技术在姬松茸菌株鉴定上的应用比较 [J], 林戎斌;张慧;林陈强;郑力;陈济琛2.SSR分子标记技术在杂交水稻研究上的应用进展 [J], 王昌华;张燕之;夏永胜;郑文静;赵家铭3.ISSR和RAPD分子标记技术在不同君子兰品种遗传多样性上的应用 [J], 郑玉红;钱美华;李莹;顾永华;彭峰4.ISSR分子标记技术在香蕉分类上的应用 [J], 刘绍钦;黄上志;梁张慧;陈芸芸5.分子标记技术及在水稻遗传研究中的应用 [J], 吕瑞玲;吴小凤;刘敏超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
三种锦鸡儿遗传多样性ISSR分析(简报)
第１ ４卷 第 ４期
Ｖ Ｏｌ １ Ｎ Ｏ． ４ ＿４
草 地 学 报
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２ ０ 年 ０６
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１ ２月
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文 章 编 号 ： ０ ７ ０ ３ （ ０ ６ ０ — ３ ４０ １０ —４ ５ ２ ０ ）４０ ８ —３
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柠条锦鸡） （ ａ ａ ａ ａｋｒｈｎｋｉ ｍ． 、 Ｌ Ｃ ｒｇ ｎ ｏｓｉｓｉ Ｋｏ ） 中间锦 鸡 Ｊ （ ｉｔｒ ｄａＫｕ ｎ ｔ Ｃ Ｆ ． 和小叶锦 鸡儿 Ｌ ｃ． ｅｍｅ ｉ ｎ ａ ｇｅ Ｈ． ． ｕ ） （ ｃ．ｍｉ ｏ ｈ ｌ ａ ） 豆 科 锦 鸡 儿 属 （ ａ ａ ａ ａ ｃ ｐ ｙｌ Ｌ ｍ． 是 ｒ ａ Ｃ ｒｇ ｎ Ｆ ｂ ． 的多年生落叶灌木 ， ａｒ） 耐低温 、 酷热、 干旱及沙埋 ， 具 有极高 的生态和经济价值 。 目前 国 内外 已有一些 关于柠 条锦鸡儿 、 中间锦鸡 儿
中 图分 类 号 ： ８ ２ ￥ ３ ． ５ ￥ １ ； ３ ０ ２ 文献类别 ： Ａ
遗传多样性研究及其生态学意义分析
遗传多样性研究及其生态学意义分析遗传多样性是指生物种群或物种内所存在的遗传差异，它是生物进化中的一个重要概念。
在野生动植物的保护和利用中，遗传多样性的研究至关重要。
本文将从遗传多样性的定义、研究方法、生态学意义等方面来进行分析。
一、遗传多样性的定义遗传多样性是指个体间、种群间、物种间及生态系统内所遗传相关的基因型和表型的变异性。
个体间的遗传多样性是由于基因重组和突变等原因造成的遗传差异，而种群间和物种间的遗传多样性则是由于地理和生物障碍分离、哥尼氏效应、选择效应、基因漂移等原因造成的。
二、遗传多样性的研究方法遗传多样性的研究方法有许多，比较常用的方法包括DNA分子标记技术、核酸测序技术、基因芯片技术等。
其中，DNA分子标记技术是研究遗传多样性最常用的工具之一，包括随机增殖DNA多态性(RAPD)、简单重复序列(SSR)、单核苷酸多态性(SNP)等。
这些方法通过测量多个标记位点上个体或群体的遗传差异来估计遗传多样性。
三、遗传多样性的生态学意义1、维护生态平衡遗传多样性是生物的适应和演化的基础，它可以提供物种的适应性和生物多样性的保障。
研究表明，一个物种的遗传多样性越高，它在生态系统中的角色就越具有代表性，它对环境的适应性也更强。
2、保障资源利用野生动植物资源是人类的重要经济资源，保护野生动植物的遗传多样性能够保障人类可持续地利用这些资源。
从红树林到高山草甸，从国产药材到果蔬粮食，都与遗传多样性有着密切联系。
对于重要经济野生动植物的保护，研究其遗传多样性和多样化利用至关重要。
3、调整生态环境生态系统是由各种生物体和它们的环境组成的，而生物的生境本质上也取决于基因。
研究遗传多样性还可以将物种的适应性与生境因子相关联，探究物种异质性适应策略的演化机制和后果，为调整生态环境提供科学依据。
四、结语遗传多样性的研究不仅关乎野生动植物的保护与利用，更对整个生态系统的平衡与稳定产生着重要的影响。
未来，我们需要借助先进的技术方法，深入研究各种生物的遗传多样性，保护生物多样性和维护生态平衡。
桉树4个种遗传多样性的ISSR分析
关 键 词 ： 生 物 技术 ； 树 ； 传 多 样 性 ； Ｓ Ｐ Ｒ 桉 遗 Ｉ Ｒ；Ｃ Ｓ
中 图分 类 号 ： Ｑ７ ４ ５ 文 献标 志码 ： Ａ 文 章编 号 ： １ ７ ２ Ｘ（ ０ ０ ０ — ０ ２ ０ ６ ３９ ３ ２ １ ） １ ０ １ ６
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遗传多样性分析
遗传多样性分析一、引言遗传多样性是指表现在个体、种群和物种层面上的遗传差异。
通过对遗传多样性的分析，可以帮助我们了解物种的演化历史、生态适应性以及种群的健康状况等重要信息。
本文将探讨遗传多样性的分析方法，以及它在生物学研究、自然保护和人类健康等领域的应用。
二、遗传多样性的分析方法1. 核酸序列分析核酸序列分析是研究遗传多样性的重要方法之一。
通过分析DNA或RNA的序列，可以揭示不同个体或群体之间的遗传差异。
常用的核酸测序技术包括Sanger测序、下一代测序等。
这些技术能够高效地产出大量的序列数据，为遗传多样性的分析提供了基础。
2. 分子标记技术分子标记技术是基于DNA片段的遗传标记，可以通过PCR扩增等方法来建立遗传图谱。
这些标记可以用来分析种群的结构、亲缘关系以及种群之间的迁移和遗传流动。
常用的分子标记技术包括RAPD、AFLP、SSR等。
这些技术具有高通量、高灵敏度和高可重复性的特点，适用于大规模的遗传多样性研究。
3. 表型分析除了分析遗传物质的差异，遗传多样性的研究还可以通过对个体的表型特征进行分析。
表型是个体对外界环境的适应性反应，它可以受到遗传和环境因素的影响。
通过对表型的测量和分析，可以更加全面地了解个体和种群的遗传多样性，并揭示其与环境因素之间的关系。
三、遗传多样性的应用1. 生物学研究遗传多样性的分析在生物学研究中具有重要的应用价值。
它可以帮助我们了解物种的起源和演化历史，揭示了不同种群之间的亲缘关系和遗传交流情况。
此外，遗传多样性的研究还可以为物种的分类和鉴定提供依据，促进生物多样性的保护和管理。
2. 自然保护保护和维护物种的遗传多样性是自然保护的重要任务之一。
通过对物种的遗传多样性进行监测和评估，可以及时发现种群数量下降、遗传流动受限等问题，并采取相应的保护措施。
遗传多样性的保护还可以提高物种的适应性和生存能力，增加物种的抵御病害和环境变化的能力。
3. 人类健康遗传多样性的分析对于人类健康也具有重要的意义。
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第43卷第4期2016年12月福建林业科技Jour of Fujian Forestry Sci and TechVol.43No.4Dec.，2016doi：10．13428/j．cnki．fjlk．2016．04．004邓恩桉遗传多样性的ISSＲ分析邓紫宇1，2，3，郭东强1，2，3，陈健波1，2，3，罗清4，项东云1，2，3（1.广西壮族自治区林业科学研究院，广西南宁530001；2.国家林业局中南速生材繁育实验室，广西南宁530001；3.广西优良用材林资源培育重点实验室，广西南宁530001；4.广西壮族自治区亚热带作物研究所，广西南宁530001）摘要：探讨邓恩桉亲缘关系及遗传多样性，为其种质资源利用和分子育种提供参考。
利用ISSＲ分子标记技术分析邓恩桉6个种源遗传多样性。
筛选出8条特异引物共扩增90条清晰条带，其中76条为多态条带，多态性比率为84.44%，平均等位基因观察值为1.8444，平均有效等位基因为1.4928，基因多样性指数为0.2879，Shannon信息指数为0.4306。
6个邓恩桉种源遗传相似系数在0.7271 0.8719之间，平均相似系数为0.7926。
UPGMA聚类分析发现，在相似系数为0.80时邓恩桉6个种源可划分为2个类群。
邓恩桉种源间遗传多样性差异较小，聚类结果与邓恩桉种源地理分布密切相关。
关键词：邓恩桉；遗传多样性；ISSＲ中图分类号：S792.39文献标识码：A文章编号：1002－7351（2016）04－0017－04Genetic Diversity of Eucalyptus dunnii Based on ISSＲDENG Ziyu1，2，3，GUO Dongqiang1，2，3，CHEN Jianbo1，2，3，LUO Qing4，XIANG Dongyun1，2，3（1.Guangxi Forestry ScienceＲesearch Institute，Nanning530001，Guangxi，China；2.Key Laboratory of Central South Fast-growing Timber Cultivation of State Forestry Administrationof China，Nanning530001，Guangxi，China；3.Guangxi Key Laboratory of Superior Timber TreesＲesource Cultivation，Nanning530001，Guangxi，China；4.Guangxi Subtropical CropsＲesearch Institute，Nanning530001，Guangxi，China）Abstract：The paper focused on assess the genetic diversity and variability of Eucalyptus dunnii to provide referents for resource utili-zation and molecular breeding.ISSＲmarker was used to study the genetic diversity of6Eucalyptus dunnii provenances.A total of90 bands were amplified by8primers，of which76are polymorphic bands（84.44%of polymorphism）.The average value of observed number of alleles，average value of effective number of alleles，Nei's gene diversity and Shannon's information index were1.8444，1.4928，0.2879and0.4306respectively.The Nei's genetic similarity coefficients ranged from0.7271 0.8719with an average of 0.7926.According to the UPGMA method，we made the cluster analysis by using the NTSYS software，6Eucalyptus dunnii prove-nances could be divided into two groups at the similarity coefficient of0.80.The genetic diversity among inter-provenances of Euca-lyptus dunnii was lower，and the geographical distribution of Eucalyptus dunnii was closely related to the cluster result. Keywords：Eucalyptus dunnii；genetic diversity；ISSＲ邓恩桉（Eucalyptus dunnii）天然分布于澳大利亚新南威尔士州东北部及昆士兰州东南部，由于分布区域有限，天然林面积小，在澳大利亚邓恩桉被列入稀有树种行列［1－2］。
邓恩桉生长快、干形好、材质优、具有较好的抗寒性能，可作为纸浆材和轻型建筑用材［3－4］，是我国低海拔夏雨型凉冷地区桉树人工林主要栽培树种。
为追求获得快速的经济利益，我国桉树人工林绝大部分采用短轮伐期经营，造成了一定的生态问题，培育桉树中大径材不仅可以缓解生态压力而且还能提高经济效益，邓恩桉是培育中大径材较好的树种。
收稿日期：2016－01－03；修回日期：2016－03－01基金项目：广西科学研究与计划开发项目（桂科合1347004－3）；广西优良用材林资源培育重点实验室自主课题项目（13－A－01－02）；广西林科院基本科研业务费项目（林科201408号）第一作者简介：邓紫宇（1984—），男，广西全州人，广西壮族自治区林业科学研究院工程师，硕士，从事林木遗传育种研究。
E-mail：365204914@。
通信作者：项东云（1960—），男，广西扶绥人，广西壮族自治区林业科学研究院教授级高级工程师，从事林木遗传育种研究。
E-mail：1753306481@。
福建林业科技第43卷ISSＲ（inter-simple sequence repeat ）是目前应用较广的分子标记技术，其多态性源于基因组中简单序列重复多态性，克服了ＲFLP 标记技术限制的同时结合ＲAPD 和SSＲ标记的优点，操作简便、快捷，实验稳定，结果可靠。
近年来，我国南方受冬季霜冻影响，桉树人工林损失严重，耐寒桉树种邓恩桉成为桉树育种研究的重点，其研究主要集中在木材性能［5－9］、抗寒性能［10－11］以及植物组织培养［12－13］等方面。
分子标记技术已广泛应用于桉树群体多样性分析［14－17］，曾艳玲等［18］对包括邓恩桉在内的8份桉树材料进行ISSＲ分析，并将邓恩桉与赤桉分为一类，但邓恩桉群体多样性研究未见报道。
因此，笔者对引种的2个邓恩桉天然分布区内6个种源间伐后保存的优良育种群体利用ISSＲ标记技术探讨其亲缘关系及遗传多样性，为今后从分子水平开展邓恩桉材性和抗寒性能研究及合理保护利用邓恩桉种质资源和良种选育提供参考。
1材料与方法1.1试验材料供试材料取自环江县华山林场雅龙分场2009年建立的邓恩桉种源试验林（表1），参试的6个邓恩桉种源分别来自昆士兰州（2个）和新南威尔士州（4个）。
表1邓恩桉种源基本信息种源地种源号经、纬度海拔/m 昆士兰州（QLD ）GED9504152ʎ24'E 、28ʎ17'S 700GED9506152ʎ24'E 、28ʎ04'S 700新南威尔士州（NSW ）GED9501152ʎ30'E 、28ʎ18'S 575GED9502145ʎ13'E 、35ʎ01'S 100GED9507152ʎ43'E 、29ʎ59'S 500GED9509145ʎ00'E 、35ʎ28'S901.2样品采集及基因组DNA 提取每个种源选取长势良好的12个单株进行取样，共计72份材料，采集幼嫩叶片立即密封并置于放有冰袋的冰盒中，带回实验室于－72ħ保存备用。
72份材料基因组DNA 的提取采用改良CTAB 法，用1.0%的琼脂糖凝胶电泳初步检测样品DNA 的浓度与纯度（图1），用核酸检测仪进行定量检测并将样品DNA 稀释至50ng ·μL －1，保存于－20ħ。
图1邓恩桉基因组DNA琼脂糖凝胶电泳结果图2引物UBC848扩增结果1.3ISSＲ－PCＲ扩增ISSＲ－PCＲ反应体系经过比较和优化确定为20μL ，包括1ˑbuffer 、1U Taq 酶、2.0mmol ·L －1MgCl 2、0.1mmol ·L －1dNTP 、0.5mmol ·L －1引物、25ng 模板DNA 。
ISSＲ－PCＲ扩增程序为：94ħ预变性3min ，然后进行30个循环，94ħ变性30s ，52ħ复性30s ，72ħ延伸1min ，循环结束后72ħ延伸1min ，最后4ħ保存。
选取2个模板DNA 进行引物筛选，筛选出扩增条带多、条带清晰的引物用于ISSＲ－PCＲ扩增，扩增产物用1.5%的琼脂糖凝胶于150V 恒定电压下电泳1h 左右，电泳结果可通过自动凝胶成像系统进行拍照（图2）。
100个ISSＲ引物选自加拿大大不列颠哥伦比亚大学（UBC ）公布的随机引物，引物合成及相关试剂药·81·第4期邓紫宇，等：邓恩桉遗传多样性的ISSＲ分析品购自生工生物工程（上海）股份有限公司。
1.4数据处理统计电泳条带，按照条带的有无赋值，扩增条带无记为“0”，有记为“1”，记录原始“0/1”矩阵，建立72份材料的ISSＲ识别卡。
利用POPGENE 32和NTSYS 2.1遗传分析软件对“0/1”矩阵进行种源水平遗传多样性分析，并用UPGMA （非加权算术平均聚类）进行聚类，数据格式输入及软件使用参照说明书。
2结果与分析2.1扩增产物多态性分析8条特异引物共扩增出90条谱带，其中多态性谱带76条，平均每条引物扩增9.5条多态性谱带，多态性比率为84.44%（表2），表明72份材料之间存在遗传差异。