水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法培训讲学
五日生化需氧量的测定稀释接种法教案
封用的钟形口。 虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。
氯化钙溶液。称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀 释至1000mL。
三氯化铁溶液。称取0.25g三氯化铁（FeCl3·6H2O）， 溶于水中，稀释至1000mL。
用同样方法测定经培养5d后，各份稀释水样和溶解 水样中的剩余溶解氧。
五、数据处理
根据公式计算BOD5，并以表格形式表示测定数据和结果。
BOD5（以O2计）（mg/L）=
[(D1-D2)-(B1-B2)]×
f1 f2
式中：
D1—稀释水样培养前的溶解氧量，mg/L；
D2—稀释水样培养5d后剩余溶解氧量，mg/L；
酶
6C6H12O6+16O2+4NH3 微生物
4C5H7O2N+16CO2+28H2O
有机污染物
CO2+H2O+NH3 O2
微生物分解有机物是一个缓慢的过程，要把可分解 的有机物全部分解掉常需要20d以上的时间，微生物的活 动与温度有关，所以测定生化需氧量时，常以20℃作为 测定的标准温度。一般来说，在第5天消耗的氧量大约是 总需氧量的70%，为便于测定，目前国内外普遍采用 20℃培养5d所需溶解氧含量作为指标，单位以的mg/L表 示，简称BOD5。
葡萄糖-谷氨酸溶液。分别称取150mg葡萄糖和谷氨 酸（均于130℃烘过1h），溶于水中，稀释至 1000mL。
盐酸溶液，0.5mol/L。
氢氧化钠溶液，0.5mol/L。
稀释水。在20L玻璃瓶内加入18L水，控制水温在 20℃左右，用抽气或无油压缩机通入清洁空气 2~8h，使水中溶解氧饱和或接近饱和（20℃时溶 解氧大于8mg/L）。使用前，每升水中加入氯化钙 溶液、三氯化铁溶液、硫酸镁溶液和磷酸盐溶液各
五日生化需氧量(BOD5)的测定ppt课件
稀释倍数的确定 水样稀释方法
7．一般稀释水制备 8． 接种稀释液制备
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水样预处理
1.水样的pH值若超出6.5-7.5范围时，可用盐酸 或氢氧化钠溶液调节pH近于7，但用量不要超 过水样体积的0.5%。若水样酸度或碱度很高， 可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
2.水样中含有铜，铅，锌，镉，铬，砷，氰等 有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的 稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物 的浓度。
① 原因 • 对于不含和少含微生物的工业废水,其中
包含酸性废水、碱性废水、高温废水或经 过氧化处理的废水,在测定BOD5时应进行 接种,已引入能分解废水中有机物的微生 物。
• 当废水中存在着难于被一般生活污水的微生 物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质 时，应将驯化后的微生物引入水样中进行接 种。
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② 方法
可选择以下任一方法获得适用的接种液。 • 城市污水,一般采用生活污水,在室温下放置一
昼夜，取上清液用。 • 表层土壤浸出液，取100g花园或植物生长土壤,
加入1L水,混合并静置10min，取上清液用。 • 用含城市污水的河水或湖水,污水处理厂的出
水。 • 当分析含有难降解物质的废水时，在其排污口
将8.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)，21.75g磷 磷酸盐 酸氢二钾(K2HPO4)，33.4g七水合磷酸 缓冲液 氢二钠(Na2HPO4·7H2O)和1.7g氯化铵
(NH4Cl)溶于水中，稀释至1000mL。此 溶液的pH应为7.2。
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试剂
名称 氯化钙溶液 氯化铁溶液
(1+5)硫酸溶液
下游3-8km处取水样作为废水的驯化接种液。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1.引言1.1 目的旨在规定水质中五日生化需氧量(BOD5)的测定方法，采用稀释与接种法进行测定。
1.2 术语定义1.2.1 五日生化需氧量(BOD5)指在规定的条件下，细菌生物对有机物所需的氧量。
1.2.2 稀释与接种法一种测定水质中BOD5的方法，通过将待测水样稀释后与BOD5基准溶液接种，测定不同时间间隔下的溶液中溶解氧的消耗量。
2.范围2.1 适用范围本方法适用于表征水质中有机物的生化需氧量。
2.2 不适用范围本方法不适用于含有高浓度或难以接种的水样。
3.装备与试剂3.1 装备所需装备，包括但不限于：溶氧仪、稀释器、恒温培养箱等。
3.2 试剂所需试剂，包括但不限于：BOD5基准溶液、氨氮缓冲溶液等。
4.操作步骤4.1 样品采集与处理详细描述样品采集的步骤，包括样品的选择、采集容器的准备等。
4.2 稀释与接种详细描述稀释与接种法的步骤，包括待测水样的稀释比例、接种基准溶液的准备等。
4.3 培养与测定详细描述培养与测定的步骤，包括培养温度、培养时间、测定溶解氧的方法等。
5.结果计算与报告详细描述结果计算与报告的方法，包括BOD5值的计算公式、结果的单位表示等。
6.质量控制详细描述质量控制的方法，包括质控样的使用、质控结果的判定等。
7.附件所涉及的附件如下：- 附件1：某水样BOD5测定数据记录表- 附件2：BOD5基准溶液配制方法8.法律名词及注释所涉及的法律名词及注释如下：- 法律名词1：注释1- 法律名词2：注释29.遇到的困难及解决办法在实际执行过程中，可能遇到的困难及解决办法如下：- 困难1：描述困难1的情况，并提供相应的解决办法。
- 困难2：描述困难2的情况，并提供相应的解决办法。
参考文献：[1] 相关文献1的引用[2] 相关文献2的引用附录：- 附录A：常用实验室设备清单- 附录B：常用试剂列表以上为HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法的详细文档模板范本。
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法培训讲学
水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ505-20091. 适用范围1.1 本方法适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
1.2 本方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与接种法的测定上限为6000mg/L。
2. 术语和定义五日生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是分解有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。
条件为（20±1）℃培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，两者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升表示。
3. 方法原理将水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h或（2+5）d±4 [先在0~4℃的暗处培养2d，接着在（20±1）℃的暗处培养5d，即培养（2+5）d]，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量。
若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化出力等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质是，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。
4. 试剂和材料分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度的水（在全玻璃装置中蒸馏的水或去离子水），水中含铜不应高于0.01mg/L，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。
4.1 接种液取POLYSEED 胶囊1 粒溶于装有250ml稀释水的烧杯中。
将烧杯置于磁力搅拌器上搅拌曝气1h。
曝气结束，放置0.5h后倾出全部清液，将该清液置于磁力搅拌器上搅拌，此接种液最多能放置二天。
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法引言水是人类生活中不可或缺的重要资源，保持水体的水质良好对于人类的生存和健康至关重要。
五日生化需氧量(BOD5)是评估水体有机物含量和有机污染的重要指标之一。
本文将介绍HJ505-2009标准中所规定的水质五日生化需氧量的测定方法，主要包括稀释与接种法。
一、试剂和仪器（不含人名）1. 试剂：- 无菌蒸馏水- 稀释液- 接种物2. 仪器：- 恒温水浴器- 生化需氧量测定仪二、方法步骤1. 样品采集：在需要测定的水体中采集适量的水样，并尽快将其送至实验室。
2. 样品准备：- 如果水样中有悬浮物，需要通过过滤将其去除。
- 将样品的温度调整至适合接种的温度范围（一般为20℃-30℃）。
3. 稀释：- 将适量的水样取出，按照一定的比例用无菌蒸馏水稀释。
- 稀释液的浓度根据样品的预估BOD5值确定。
4. 接种：- 在稀释液中加入适量的接种物。
- 接种物的选择应根据样品的特性和预估BOD5值来确定。
5. 试管设置：- 取一定数量的试管，根据实验要求分别设置不同的对照组和样品组。
- 每个试管中加入相应的稀释液和接种物。
6. 水浴培养：- 将试管放置于恒温水浴器中，控制温度在指定的范围内。
- 培养时间一般为5天。
7. BOD5测定：- 利用生化需氧量测定仪测定试管中的BOD5值。
- 测定时注意保持试管的环境与空气隔绝，避免氧气对结果的影响。
8. 数据处理：- 计算每个样品组和对照组的BOD5值。
- 根据实验需要进行数据统计和分析。
三、实验注意事项1. 样品采集时要避免污染和外界干扰，尽量减少样品与空气接触的时间。
2. 实验过程要严格按照标准操作，避免操作失误对结果的影响。
3. 样品和试剂的操作要在无菌条件下进行，避免细菌污染。
4. 温度的控制是保证结果准确性的重要因素，要使用恒温水浴器进行控制。
HJ505-2022 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2022 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法文档模板：HJ505-2022 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1. 引言旨在描述水质五日生化需氧量(BOD5)的测定方法，采用稀释与接种法。
该方法合用于对水体中的有机污染物进行定量分析，用于水质监测、环境评估以及污染排放指标的测定。
2. 合用范围本方法合用于各类水体样品，包括但不限于河流、湖泊、水库、地下水、海水等。
3. 原理首先，将待测样品进行适当稀释，以保证对待测有机物的浓度进行合理测定。
然后，通过接种适量的活动污泥，将样品中的有机物利用微生物进行降解，产生的需氧量则可用于测定。
4. 试剂与仪器设备4.1 试剂所需的试剂及其规格。
4.2 仪器设备所需的仪器设备及其规格。
5. 样品处理5.1 样品的采集描述样品采集的注意事项，包括采样点的选择、采样容器的准备等。
5.2 样品的保存与保存时间描述样品的保存条件和保存时间要求。
5.3 样品的稀释描述样品稀释的方法和比例。
6. 实验步骤6.1 样品预处理描述样品预处理的步骤，包括过滤、背景测定等。
6.2 接种活性污泥描述接种活性污泥的步骤和接种量的确定。
6.3 孵育条件及时间描述孵育条件和孵育时间的确定。
6.4 样品的BOD5测定描述样品的BOD5测定步骤，包括样品的取样、添加试剂、反应条件控制等。
7. 结果计算与分析7.1 数据处理描述BOD5测定结果的计算方法和数据处理的步骤。
7.2 结果表达描述结果的表达方式，如单位、精度等。
8. 质量控制描述质量控制的要求，包括质控样品的使用和分析结果评价等。
9. 安全注意事项描述实验过程中的安全注意事项，包括使用试剂的注意事项、操作仪器的注意事项等。
10. 附件所涉及的附件如下：1. 附件1: 实验记录表格2. 附件2: 数据处理表格11. 相关法律名词及注释如下所涉及的法律名词及注释：1. 法律名词1：注释12. 法律名词2：注释212. 实际执行中可能遇到的艰难及解决办法如下在实际执行过程中可能遇到的艰难及解决办法：1. 艰难1：解决办法12. 艰难2：解决办法2注：仅供参考，具体实施过程中应根据实际情况进行调整和修改。
五日生化需氧量的测定(稀释接种法)_图文
磷酸盐溶液。称取8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、 21.75g磷酸氢二钾（K2HPO4）、33.4g磷酸氢二钠
（NaHPO4·7H2O）和1.7g氯化氨（NH4Cl），溶于约 500mL水中，稀释至1000mL并混合均匀，此缓冲溶 液的pH应为7.2。
和量筒相匹配的有孔橡皮片。 250~300mL碘量瓶，带有磨口玻璃塞并具有供水
封的钟形口。 虹吸管，供分取水样和添加稀释水用。
氯化钙溶液。称取27.5g无水氯化钙，溶于水中，稀 释至1000mL。
三氯化铁溶液。称取0.25g三氯化铁（FeCl3·6H2O） ，溶于水中，稀释至1000mL。
用同样方法测定经培养5d后，各份稀释水样和溶解 水样中的剩余溶解氧。
五、数据处理
根据公式计算BOD5，并以表格形式表示测定数据和结果。
BOD5（以O2计）（mg/L）= [(D1-D2)-(B1-B2)]×
式中：
D1—稀释水样培养前的溶解氧量，mg/L； D2—稀释水样培养5d后剩余溶解氧量，mg/L； B1—稀释水（或接种稀释水）培养前的溶解氧量，mg/L； B2—稀释水（或接种稀释水）经培养5d后剩余溶解氧量，mg/L； f 1—稀释水（或接种稀释水）在培养溶液中所占的比例； f 2—水样在培养液中所占的比例。
表中：R代表河水；E代表生物净化过的污水；S代表澄清过的污水或轻度污 染的工业废水；C代表原污水；I代表严重污染的工业废水。
性质不了解的水样，稀释倍数从COD值估算，取大 于酸性高锰酸盐指数值的1/4，小于CODcr值的1/5。
恰当的稀释比应使培养后剩余溶解氧至少有1mg/L和 消耗的溶解氧至少2mg/L。
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
水质-五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法
什么是BOD5？
BOD5，也就是五日生化需氧量（Biochemical Oxygen Demand），是一种用来衡量水中有机物质分解速度的指标。
通俗地说，就是测量水中的有机物质被微生物分解所消耗的氧气量。
这个指标可以评估污水、废水以及天然水体的水质。
BOD5的测定
BOD5的测定需要进行水样稀释和接种操作。
下面分别介绍这两个步骤。
水样稀释
为了保证BOD5的测定准确性，需要将水样进行稀释，通常是以1:5或1:10
的比例稀释。
具体的步骤如下：
1.取一定量的水样，根据实际情况选择合适的量，通常是10 mL或20
mL；
2.分别加入已经在恒温条件下预先接种好的含有适当微生物的生物培养
液；
3.用去离子水或蒸馏水进行稀释，使稀释比例达到1:5或1:10；
4.用漩涡振荡器将混合液充分混匀，然后装入BOD5需氧瓶中。
接种
接种是指在水样中向其中添加某些特定微生物，常用的有镰刀菌和链球菌等。
作用是加速水中的有机物质分解，提高BOD5的测定准确性。
接种的具体步骤如下：
1.在稀释过的水样中加入0.5 ml左右的包含有大量微生物的生物培养
液，然后用漩涡振荡器均匀混合，放入BOD5需氧瓶中；
2.氧化还原指示液（常用的指示液为甲基橙）滴入需氧瓶中，然后将其
密封，放入常温下放置5天。
BOD5的测量是一种水质评价的标准方法，可以作为污水、废水处理以及水环境保护的重要依据。
通过对稀释和接种方法的认真实施，可以保证测定结果的准确性和可靠性。
五日生化需氧量的测定稀释接种法课件
菌种误差
接种的菌种可能存在误差，如菌种不 纯或活性不足等，需要对菌种进行纯 化和活性验证。
减小误差的方法
校准仪器
对实验中所使用的仪器进行校 准和验证，可以减小仪器误差 。
控制环境
对实验环境中的温度、光照、 湿度等环境因素进行控制，可 以减小环境误差。
重复实验
通过重复实验可以减小随机误 差和偶然误差，提高实验结果 的准确性。
稀释接种法广泛应用于水环境监 测、废水处理等领域，可以用于 测定水样中的生物量、评估水处
理效果等。
接种物浓度选择
01
接种物浓度对测定结果的影响
接种物浓度过低会导致测定结果偏低，过高则会导致测定结果偏高，因
此选择适宜的接种物浓度是准确测定五日生化需氧量的关键。
02 03
接种物浓度的选择方法
选择适宜的接种物浓度可以通过实验的方法确定，如设置不同的接种物 浓度梯度，测定对应的五日生化需氧量值，从而确定最佳的接种物浓度 。
蒸馏水或去离子水，用于稀释接种和培养基制备。
接种菌种
适合的微生物菌种，用于消耗水样中的溶解氧。
实验步骤
1. 准备稀释接种管
将接种环和接种针清洁干净，然后放入恒温水浴中加热灭 菌。每个接种管中加入适量的灭菌培养基，并用灭菌的接 种针将菌种接种到培养基中。
2. 稀释样品
将待测水样进行适当的稀释，以便在接种管中得到适合的 接种量。
规范操作
严格遵守操作规程，确保每个 步骤都准确无误，可以减小操 作误差。
菌种纯化
对菌种进行纯化处理，确保菌 种的纯度和活性，可以减小菌 种误差。
五日生化需氧量的测定-稀释接 种法课件
目录
• 引言 • 稀释接种法原理 • 实验材料和步骤 • 结果分析 • 注意事项和误差分析
HJ505-2009 水质 五日生化需氧量(BOD5)的测定 稀释与接种法
HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法HJ505-2009 水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法1、引言概述了HJ505-2009标准中的水质五日生化需氧量（BOD5）的测定方法，采用稀释与接种法进行测定。
旨在提供详细的指导和步骤，以确保准确测定水体中的BOD5值。
2、适用范围适用于对各类水体（包括但不限于自然水体、废水和工业水体）中的BOD5值进行测定的实验室。
3、术语和定义中使用的术语和定义请参考HJ505-2009标准。
4、设备和材料4.1 稀释液：X4.2 接种液：X4.3 样品：X4.4 试剂：X4.5 仪器：X4.6 设备：X5、实验操作步骤5.1 准备工作5.1.1 检查设备和仪器的完好程度。
5.1.2 准备稀释液、接种液和试剂。
5.1.3 采集样品并进行标识。
5.2 稀释与接种5.2.1 将样品稀释至合适的浓度。
5.2.2 加入适量的接种液。
5.2.3 按标准稀释比例进行接种。
5.3 反应和测定5.3.1 将接种后的样品置于恒温槽中进行反应。
5.3.2 在反应结束后，进行溶液的测定。
5.3.3 根据HJ505-2009标准中的计算公式计算BOD5值。
6、数据处理6.1 记录实验过程中的所有数据。
6.2 根据测定结果计算BOD5值。
6.3 进行数据统计和分析。
注：仅提供了主要的实验操作步骤，详细的操作细节和计算方法请参考HJ505-2009标准。
附件：1. 相关标准文件：HJ505-20092. 实验数据记录表3. 计算结果表法律名词及注释：1. HJ505-2009：环保部发布的《水质五日生化需氧量(BOD5)的测定稀释与接种法》标准。
在实际执行过程中可能遇到的困难及解决办法：1. 样品污染：在样品采集和处理过程中，可能会出现其他物质的污染，影响BOD5的测定结果。
解决办法是在采集和处理过程中严格控制样品的接触和污染。
2. 实验条件不稳定：恒温槽温度的波动、接种液的浓度变化等因素可能导致实验条件不稳定。
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水质五日生化需氧量（BOD5）的测定稀释与接种法HJ505-20091. 适用范围1.1 本方法适用于地表水、工业废水和生活污水中五日生化需氧量（BOD5）的测定。
1.2 本方法的检出限为0.5mg/L，方法的测定下限为2 mg/L，非稀释法和非稀释接种法的测定上限为6mg/L，稀释与接种法的测定上限为6000mg/L。
2. 术语和定义五日生化需氧量是指在规定条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是分解有机物所进行的生物化学过程中消耗溶解氧的量。
条件为（20±1）℃培养5天，分别测定样品培养前后的溶解氧，两者之差即为BOD5值，以氧的毫克/升表示。
3. 方法原理将水样充满完全密闭的溶解氧瓶中，在（20±1）℃的暗处培养5d±4h或（2+5）d±4 [先在0~4℃的暗处培养2d，接着在（20±1）℃的暗处培养5d，即培养（2+5）d]，分别测定培养前后水样中溶解氧的质量浓度，由培养前后溶解氧的质量浓度之差，计算每升样品消耗的溶解氧量。
若样品中的有机物含量较多，BOD5的质量浓度大于6mg/L，样品需适当稀释后测定；对不含或含微生物少的工业废水，如酸性废水、碱性废水、高温废水、冷冻保存的废水或经过氯化出力等的废水，在测定BOD5时应进行接种，以引进能分解废水中有机物的微生物。
当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常的速度降解的有机物或含有剧毒物质是，应将驯化后的微生物引入水样中进行接种。
4. 试剂和材料分析时，只采用公认的分析纯试剂和蒸馏水或同等纯度的水（在全玻璃装置中蒸馏的水或去离子水），水中含铜不应高于0.01mg/L，并不应有氯、氯胺、苛性碱、有机物和酸类。
4.1 接种液取POLYSEED 胶囊1 粒溶于装有250ml稀释水的烧杯中。
将烧杯置于磁力搅拌器上搅拌曝气1h。
曝气结束，放置0.5h后倾出全部清液，将该清液置于磁力搅拌器上搅拌，此接种液最多能放置二天。
其它获得接种液的途径见如下。
4.1.1 未受工业废水污染的生活污水：化学需氧量不大于300mg/L，总有机碳不大于100 mg/L；4.1.2 含有城镇污水的河水或湖水；4.1.3 污水处理厂的出水；4.1.4 分析含有难降解物质的工业废水时，在其排污口下游适当处取水样作为废水的驯化接种液。
也可取中和或经适当稀释后的废水进行连续曝气，每天加入少量该种废水，同时加入少量生活污水，使适应该种废水的微生物大量繁殖。
当水中出现大量的絮状物时，表明微生物已繁殖，可用作接种液。
一般驯化过程需3~8天。
4.2 盐溶液4.2.1 磷酸盐缓冲溶液将8.5g磷酸二氢钾（KH2PO4）、16.6g磷酸氢二钾（K2HPO4·3H2O）、17.7g七水合磷酸氢二钠（Na2HPO4）和1.7g氯化铵（NH4Cl）溶于约500ml水中，稀释至1000ml 并混合均匀。
此缓冲溶液的pH 应为7.2。
4.2.2 七水合硫酸镁将22.5g的七水合硫酸镁（MgSO4·7H2O）溶于水中，稀释至1000ml 并混合均匀。
4.2.3 氯化钙将27.5g的无水氯化钙（CaCl2）溶于水，稀释至1000ml 并混合均匀。
4.2.4 六水合氯化铁将0.25g六水合氯化铁（FeCl3·6H2O）溶解于水中，稀释至1000ml 并混合均匀。
以上四种盐溶液在0~4℃可稳定保存6 个月。
如有沉淀应弃去。
4.3 稀释水取上述四种盐溶液（4.2.1、4.2.2、4.2.3和4.2.4）各1 ml，加入约1L水中，然后曝气2 小时以上，混合均匀，将此溶液置于20℃下恒温，确保溶解氧浓度不低于8mg/L。
稀释水的BOD5值不得超过0.5mg/L。
4.4 接种稀释水：根据接种液的来源不同，每升稀释水（4.3）中加入适量接种液（4.1）：城市污水和污水处理厂出水加1~10ml，河水或湖水加10~100ml，将接种液稀释水存放在（20±1）℃的环境中，当天配置当天使用。
接种的稀释水pH值为7.2，BOD5应小于1.5mg/L。
4.5 盐酸溶液，c(HCL)=0.5mg/L：将40ml 浓盐酸溶于水中，稀释至1000ml。
4.6 氢氧化钠溶液，c(NaOH)=0.5mol/L：将20克氢氧化钠溶于水中，稀释至1000ml。
4.7 亚硫酸钠溶液(0.025mol/L)：将1.575g亚硫酸钠溶于水中，稀释至1000ml。
此溶液需现用现配。
4.8 葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C6H12O6）和谷氨酸（HOOCH-CH2-CH2-CHNH2-COOH，优级纯）在130℃干燥1h，各称取150mg溶于水中，在1000ml容量瓶中稀释至标线。
此溶液的BOD5为（210±20）mg/L，现用现配。
该溶液也可少量冷冻保存，融化后立即使用。
4.9 丙烯基硫脲硝化抑制剂（1.0g/L）溶解0.2g丙烯基硫脲于200ml水中，4℃保存，可稳定保存14 天。
4.10 乙酸溶液，1+14.11 碘化钾溶液（100g/L），将10g碘化钾溶于水中，稀释至100ml。
4.12 淀粉溶液（5g/L）：将0.5g淀粉溶于水中，稀释至100ml。
5. 仪器和设备5.1 培养瓶细口瓶的容量在200ml 之间，带有磨口玻璃塞，并具有供水封用的钟形口，最好是直肩的。
5.2 培养箱：控制20±1 ℃。
5. 3 溶解氧测定仪：YSI-58。
6. 干扰6.1 水样的pH 若超出6.5－7.5 范围时，可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节pH 近于7，但不要超过水样体积的0.5％。
若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的酸或碱进行中和。
6.2 水样中含有重金属等有毒物质时，可使用经驯化的微生物接种液的稀释水进行稀释，或提高稀释倍数以减少毒物的浓度。
6.3 含有少量游离氯的水样，一般放置1－2h，游离氯即可消失。
对在短时间内不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯，加入的亚硫酸钠溶液的量由下述方法确定。
取已中和的水样100ml，加入乙酸溶液10ml、碘化钾溶液1ml，混匀，暗处静置5分钟。
用亚硫酸钠溶液滴定析出的碘至淡黄色，加入1ml 淀粉溶液呈蓝色。
再继续滴定至蓝色刚刚褪去，即为终点，记录所用亚硫酸钠溶液体积，由亚硫酸钠溶液消耗的体积，计算出水样中应加亚硫酸钠溶液的体积。
6.4 一般污水处理厂的水样，应经过硝化池，含有大量硝化菌，可在每升稀释样品中加入2ml 浓度为1.0g/L的烯丙基硫脲（ATU）（C4H8N2S）溶液以去除。
6.5 从水温较低的水域或富营养的湖泊忠采集的水样，可遇到含有过饱和溶解氧，此时应将水样迅速升温至20℃左右，在不使满瓶的情况下，充分振摇，并时时开塞放气，以赶出过饱和的溶解氧。
从水温较高的水域或废水排放口取得的水样，则应迅速使其冷却至20℃左右，并充分振摇，使与空气中氧分压近平衡。
6.6 一些气体和蒸汽如氯、二氧化硫、硫化氢、氨、氟、溴、碘能影响氧电极的测定，从而使测定含该类物质的水样的BOD 会形成五天前、后溶解氧倒大，此类干扰无法克服。
7. 样品7.1 采集与保存样品需充满并密封于瓶中，置于2～5℃保存到进行分析时。
一般应在采样后6h 之内进行检验。
若需远距离转运，在任何情况下贮存皆不得超过24h。
7.2 试样的制备7.2.1 pH 值调节若样品或稀释后样品pH 值不在6-8 范围内，应用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节其pH 值至6-8。
7.2.2 余氯和结合氯的去除若样品中含有少量余氯，一般在采样后放置1-2h，游离氯即可消失。
对在短时间内不能消失的余氯，可加入适量亚硫酸钠溶液去除样品中存在的余氯和结合氯。
7.2.3 样品均质化含有大量颗粒物、需要较大稀释信数的样品或经冷冻保存的样品，测定前均需将样品搅拌均匀。
7.2.4 样品中有藻类若样品中有大量藻类存在，BOD:的测定结果会偏高。
当分析结果精度要求较高时，测定前应用滤孔为1.6μm的滤膜过滤，检测报告中注明滤膜滤孔的大小。
6.2.5 含盐量低的样品若样品含盐量低，非稀释样品的电导率小于125μS/cm时，需加入适量相同体积的四种盐溶液，使样品的电导率大于125μS/cm。
8. 分析步骤8.1 样品的测定8.1.1 取样8.1.1.1 不经稀释水样（不接种）如遇到溶解氧含量较高，有机物含量较少的地表水时，可直接将其装满于培养瓶中待测。
取样时注意不可摇动水样，取上层清液。
8.1.1.2 稀释水样稀释倍数的确定：根据实践经验，提出下述计算方法，供稀释时参考。
工业废水：由重铬酸钾法测得的COD 值来确定。
稀释倍数见下表。
当不能正确的选择稀释若试样中有微生物毒性物质，应配制几个不同稀释倍数的试样，选择与稀释倍数无关的结果，并取其平均值。
试样测定结果与稀释倍数的关系确定如下：当分析结果精度要求较高或存在微生物毒性物质时，一个样品要做2 个以上不同的稀释倍数，每个试样每个稀释倍数做平行双样同时进行培养。
测定培养过程中每瓶试样氧的消耗量，并画出氧消耗量对每一稀释倍数试样中原样品的体积曲线。
若此曲线呈线性，则此试样中不含有任何抑制微生物的物质，即样品的测定结果与稀释倍数无关；若曲线仅在低浓度内呈线性，取线性范围内稀释比的试样测定结果计算平均BOD5值。
将水样振摇均匀，根据稀释倍数确定取样体积。
每个样品中加入2ml 接种液，用虹吸法加稀释水至瓶颈处待测。
8.1.2 测定（待测样品应尽快测定）将电极置于加满稀释水的培养瓶中。
开启电极上的搅拌开关，即可测定水样中溶解氧。
测定顺序为：空白—标准样品—样品。
待显示的读数稳定后，该读数为水样中的溶解氧值。
测定完毕，旋紧培养瓶塞，确保瓶口有封瓶水，盖上瓶盖。
8.1.3 培养将培养瓶放于培养箱中，并在暗中放置5 天。
达到需要培养的5天时间时，取出培养瓶。
8.1.4 5天后溶解氧测定测定剩余溶解氧值，测定顺序同8.1.28.2 空白试验在培养瓶中加入2ml 接种液，加稀释水满瓶后待测。
本试验同样品同时进行，其BOD5不能大于1.5mg/L。
9. 结果计算9.1 被测定溶液若满足以下条件，则能获得可靠的测定结果。
培养 5 天后：剩余DO≥2mg/L；消耗DO≥2mg/L。
若不能满足以上条件，一般应舍掉该组结果。
9.2 计算9.2.1 不经稀释接种直接培养的水样BOD5（mg/L）=C1—C2式中：C1-水样在培养前的溶解氧浓度，mg/L；C2-水样经5 天培养后，剩余溶解氧浓度，mg/L。
9.2.2 经稀释接种后培养的水样式中：B1-稀释水在培养前的溶解氧，mg/L；B2-稀释水在培养后的溶解氧，mg/L；f1-稀释水在培养液中所占比例；f2-水样在培养液中所占比例。