小麦种子生活力测定
测定种子生活力的方法
实验 17 种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。
它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。
测定种子生活力常采用发芽实验，即在适宜条件下，让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。
但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。
而采用以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。
Ⅰ氯化三苯基四氮唑法（ TTC 法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的 TTC 还原为红色、不溶性三苯基甲（ TTF ），而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。
死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将 TTC 还原为红色。
种胚生活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被染色。
因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米、小麦等种子。
（二）试剂0.5% TTC 溶液：称取 0.5 gTTC 放在烧杯中，加入少许 95% 乙醇使其溶解，然后用蒸馏水稀释至 100 mL 。
溶液避光保存，若变红色，即不能再用。
（三）仪器设备恒温箱，培养皿，刀片，烧杯，镊子，天平。
三、实验步骤1. 浸种将待测种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种（大麦、小麦 6 小时，玉米 5 小时左右），以增强种胚的呼吸作用。
2. 显色取吸胀的种子 200 粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于 2 只培养皿中，每皿 100 个半粒，加入适量的 0.5% TTC 溶液，以覆盖种子为度。
然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h 。
观察结果，凡胚被染为红色的是活种子。
将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚，作同样染色处理，作为对照观察。
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
技能操作项目小麦种子活力的测定问题答疑 (1)
小麦种子活力的测定：
1、加入5%的红墨水没过种子，红墨水需不需要加水稀释？加多少量？
红墨水需要加水稀释到浓度5%。
加水的比例是：一份红墨水加19份自来水。
2、对死种子、活种子分别进行计数，是不是分别数清粒数就行？
小麦种子的胚染为红色的为死种子。
胚没有被染色或为染色很浅的为有活力的种子。
对死种子、活种子分别进行计数，就是数清粒数就行，其目的为了下一步计算种子活力。
3、写出正确的计算公式，这个公式是哪个公式？
种子活力（%）=(不着色或着色很浅的种子粒数÷实验种子的总粒数) ×100%
比如取种子30粒，沿种胚中央准确切开，其中一半置于培养皿中，加入5%红墨水染色后，有5粒被染为红色，其它25粒为白色或染
色很浅，则种子活力（%）=25÷30×100%
4、计算两份样品种子活力的平均值，是如何计算的？
两份样品种子活力的平均值=（样品1种子活力+样品2种子活力）÷2
5、两份样品种子活力之差与平均数之比不应超过5%，是什么意思？是如何计算的？
“两份样品种子活力之差与平均数之比不应超过5%”的意思将“两份样品种子活力之差与平均数之比”的值与5%比较，如果大于5%，说明本次实验就是失败的，需要重做实验；如果小于5%，说明本次实验正确合理，其结果是可靠的。
计算如下:
“两份样品种子活力之差与平均数之比”=∣样品1种子活力—样品2种
子的活力∣÷两份样品种子活力的平均值。
加速老化法测定小麦种子活力技术规程
加速老化法测定小麦种子活力技术规程1、范围本标准规定了加速老化法测定小麦(Triticum aestivum L.)种子活力的检测原则、检测方案、检测程序和结果报告。
本标准主要适用于普通小麦品种种子的活力测定。
2、规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 3543.1 农作物种子检验规程总则GB/T 3543.2 农作物种子检验规程扦样GB/T 3543.4 农作物种子检验规程发芽试验GB/T 3543.6 农作物种子检验规程水分测定3、术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本文件。
3.1种子活力 seed vigor在广泛的田间条件下,决定种子迅速整齐出苗和长成正常幼苗潜在能力的总称。
3.2种子批 seed lot同一来源、同一品种、同一年度、同一时期收获和质量基本一致，并在规定数量之内的种子。
3.3送验样品 submitted sample送到种子检验机构检验、规定数量的样品。
3.4试验样品(简称试样) working sample在实验室中从送验样品中分出的部分样品，供测定某一检验项目之用。
3.5加速老化 accelerated ageing (AA)采用高温（40～50℃）、高湿（100%相对湿度）处理种子，加速种子老化。
高活力种子经老化处理后仍能正常发芽，低活力种子则产生不正常幼苗或全部死亡。
3.6缩略语AA：accelerated ageing，加速老化4 总则在标准条件下，通过模拟播种后的田间环境条件（如高温、高湿等），对试样进行加速老化处理。
在此基础上，统计发芽率，由发芽率的高低来评价种子批的活力水平，从而反映种子在田间条件下的出苗状况。
5检测方案5.1总则在严格控制条件下，对试验样品按模拟逆境处理、标准发芽、数据分析的程序进行检测。
种子生活力测定—小麦种子生活力四唑测定方法
有生活力，胚染成淡红色
六、观察鉴定 有生活力，胚全部染色
六、观察鉴定 有生活力，盾片末端不染色
六、观察鉴定 有生活力，盾片末端不染色
六、观察鉴定
有生活力，盾片末端、胚 Biblioteka 顶端、胚根鞘不染色六、观察鉴定
无生活力，胚根 超过3/4不染色
六、观察鉴定 无生活力，胚芽不染色
六、观察鉴定 无生活力，盾片中部不染色
六、观察鉴定 有生活力，整胚染色
六、观察鉴定
有生活力，胚根和盾片末 端未染色
六、观察鉴定
无生活力，胚根和胚轴 下部未染色
六、观察鉴定
有生活力，胚根未染 色
六、观察鉴定 无生活力，胚根和胚芽未染色
六、观察鉴定 无生活力，种胚完未染色
六、观察鉴定 无生活力，种胚大部分未染色
六、观察鉴定 无生活力， 胚轴全部未染色
四、四唑染色 35℃染色 浓度0.1% 时间0.5～1h
五、鉴定前的处理 观察切面
六、观察鉴定
有生活力种子允许不染色、较弱或坏死的最大面积 1、盾片上下任一端三分之一不染色； 2、胚根大部分不染色，但不定根原始体必须染色。
六、观察鉴定
有生活力，胚完全染成鲜红色
无生活力，胚完全不染色
有生活力，子叶顶端不染色
六、观察鉴定 无生活力，胚根和胚根鞘全部未染色
种子生产与经营专业
小麦种子四唑测定
一、试验样品的来源和数取
试验样品来源必须是净种子。 净种子可以从净度分析后的净种子中随机数取，也可以从送验样 品中直接随机数取。 随机数取l00粒种子，2~4 个重复或少于100 粒的若干副重复。
二、预湿方式及时间 30℃恒温水浸种3～4h，或纸间12h
三、染色前种子样品准备 纵切胚和四分之三胚乳
实验3 种子生活力的测定
实验3 种子生活力的测定目的要求用化学试剂测定种子生活力，可以在短时间内评定种子质量。
特别是对于有些树种种子的休眠期长，难于进行发芽测定，采用此法测定种子的生活力就具有明显的优越性。
通过实验要求了解测定种子生活力的基本原理，并学会其操作程序。
一、 氯化三苯基四氮唑（TTC ）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC 溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH 或NADPH ）还原时，可产生红色的三苯基甲 （TTF ），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC 还原反应如下：TTC（无色）TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH 试纸。
【试剂】TTC 溶液的配制：取1g TTC 溶于１L 蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC 溶液。
药液p Ｈ应在6.5～7.5，以pH 试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h ，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC 溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表+Cl+CN N NN +2HCN N NNHHCl【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
实验五、种子活力的快速测定
实验五、种子活力的快速测定一、实验目的熟悉种子活力快速测定的方法⏹TTC（氯化三苯基四氮唑）法⏹BTB（溴麝香草酚蓝）法⏹红墨水法⏹纸上荧光法二、实验原理⏹TTC（氯化三苯基四氮唑）法二、实验原理⏹红墨水法⏹活细胞的原生质膜具有选择透性，死亡的种胚细胞原生质膜无选择透性；⏹红墨水中的染色成分大红G不能通过选择透性膜，但能通过非选择透性膜。
三、实验材料、器材及试剂⏹材料：小麦种子⏹仪器及器皿：恒温箱，恒温水浴锅，镊子，刀片，培养皿，小烧杯⏹试剂：⏹0.5% TTC溶液（随配随用，若已变为红色则不能继续使用。
）⏹5%红墨水四、实验步骤⏹1、材料准备：将待测小麦种子用30-35℃温水浸种6~8h。
⏹2、切种子：随机取种子30粒以上,用刀片沿种子胚中心线切成两半。
⏹3、染色处理：取一半的种子放在培养皿中，加入染色溶液（刚好浸没种子），30-35℃恒温箱中保温0.5-1h。
⏹4、对照处理：另一半于沸水中煮死，染色同3。
⏹5、结果观察：倒出染色溶液，TTC处理种子用清水将种子冲洗1-2次，红墨水处理种子则用水冲洗至冲洗液无色为止。
观察种胚着色状况。
⏹6、结果验证：随机取种子30粒以上，25℃保温保湿培养，48h检测发芽率。
五、结果与讨论⏹1、计算两种测定法得到的种子发芽率。
统计分析两种测定方法的结果是否有差异。
⏹讨论两种方法有什么不同？你认为哪一种方法测定的结果较好，为什么？⏹2、统计分析种子活力快速测定结果与实际种子萌发结果的差异性。
⏹讨论可能原因。
比较分析种子活力快速测定与种子直接发芽率测定的优缺点。
注意事项⏹TTC处理染色结束后要立即进行鉴定。
凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子。
如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不能染色都属于不能正常发芽的种子。
⏹红墨水处理后要冲洗充分后观察。
凡种胚不着色或着色很浅的为活种子，凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。
红墨水染色法快速测定小麦生活力
一、红墨水染色法快速测定小麦、玉米种子生活力的具体方法如下：选取玉米种子100粒、小麦种子200粒，在30℃~35℃温水中浸泡6小时~8小时，使种子充分吸胀。
取吸胀的种子100粒，用刀片沿胚部中线切为两半，其中一半用于测定。
将准备好的半粒种子置于杯中，加入稀释20倍的红墨水溶液，以浸没种子为好。
染色15~20分钟后捞出，用清水冲洗种子，洗去颜色。
观察冲洗后种子胚部着色情况，胚部不着色或略带浅红色者，即为有生命力的种子。
若胚部染成与胚乳相同的深红色，则为无生命力的种子。
依次计算活种子百分率，即为发芽率。
小麦种子发芽率快速测定法1、浸种将小麦种子用28℃～30℃的温水浸泡3～5小时，让种子充分吸收水分膨胀。
2、切取选择具有代表性的种子，用刀片沿麦粒的腹沟切成两半，留取带有胚部的一半作测定之用。
3、染色先配制好5%的红墨水溶液（即将1份红墨水加入19份清水中，混合均匀即成），然后将切取的麦种半片均匀摊在培养器皿或瓷盘中，将红墨水倒入（用量以浸没种子为宜）。
4、冲洗染色5～10分钟以后，将种子取出，用清水反复冲洗数次，直到冲洗后的水不再见到红色为止。
5、观察种子的胚不着色或仅带有浅红色的，即为具有生命力的种子。
如果胚部呈红色，与胚乳着色的程度不同，即表明该小麦种子已经丧失了生命活力，观察时将其拣出。
6、计算数出具有生命力的种子数目，除以供测试种子的总数，即可得出该小麦种子的发芽率。
如果供测试的种子正好是100粒，那么具有生命活力的种子就是该小麦种的发芽率。
种子发芽率快速测定法——————红墨水染色法宝兴县明礼乡朱范刚舒正蓉科技下乡应深入农户种子发芽率是指在最适宜的条件下，在规定的天数内，发芽的种子占供试种子的百分数，它是决定种子品质和实用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接相关。
但是常规发芽（直接发芽）方法测定发芽率所需时间较长，特别是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。
实验一 种子活力测定
实验一种子活力测定种子活力是指种子在一定条件下保持种子萌发和生长的能力。
种子的活力对种子的生长和发育起着重要的作用，因此对种子的活力进行测定是非常必要的。
种子活力测定通常使用的方法有以下几种：1. 萌发率测定法这是一种经典的种子活力测定方法，它是通过计算种子在确定条件下萌发的比例来反映种子的活力。
这种方法主要用于一些小种子的活力测定，如水稻、玉米等。
方法步骤：(1) 取一定量的种子，洗净，用温水浸泡约4小时。
(2) 取一张过滤纸，加入适量的水，将水吸满后放在皿子底部。
(3) 将浸泡好的种子均匀地摆放在过滤纸上，然后用水喷雾器喷适量的水，使过滤纸湿润。
(4) 将皿子盖好，放在恒温箱中，在温度为25℃±1℃ ，光照强度为5000Lux±500Lux的条件下培养2-7天。
(5) 观察种子萌发情况，计算种子的萌发率。
萌发率=（萌发种子数÷总种子数）×100%发芽指数是种子萌发能力的定量指标，可用于分析不同处理下种子的活力差异。
这种方法适用于大小适中的种子，如小麦、燕麦、大豆等。
(5) 每天在同一时间内数一次种子的萌发情况，记录下天数和萌发的种子数。
(6) 根据公式计算出发芽指数。
3. 活力指数测定法活力指数是反映种子整体活性的指标，它综合考虑了种子的萌发率、发芽率、生长状况等多个因素。
该方法适用于各种大小的种子。
(2) 将种子均匀地放置在含水浸透的滤纸上，并将其放入塑料袋中。
活力指数=（（萌发种子数÷总种子数）×（发芽种子根长总和÷萌发种子数）×100）÷（总培养天数×总种子数）。
实验7 种子生活力的快速测定讲解
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表
方法
供试粒数
பைடு நூலகம்
有生活力 种子粒数
无生活力 种子粒数
有生活力种子 占供试粒数的%
TTC
30
红墨水
30
BTB
30
注意事项
? 沿种胚中央准确切开，同粒 TTC/红墨水法各一半 ? TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色
瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 ? 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 ? 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 ? 溶胶倒至培养皿 1/3处； ? 取完好小麦种子，将种胚向下插入 BTB琼脂胶。
染料染色法
1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。
2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。
活种子 死种子
材料、设备及试剂
思考题
TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据 有何不同 ?
氯化三苯基四氮唑
三苯甲腙
活种子 死种子
BTB溴麝香草酚蓝法
1. 活细胞呼吸释放 CO2， CO2溶于水成H2CO3解 离，使种胚周围环境酸度增加，用 BTB来反映 酸度的改变；
2. BTB变色范围为 pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱 性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为 pH7.1）。
3. 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
BTB法
1. 煮沸的1％BTB琼脂胶约20 ml，冷却倒胶至培 养皿（ 1/3皿）；
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶 (不软 不硬 )；
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考题二、小麦种子的生活力测定考查试卷姓名：考号：班级：
注意：考试时间为30分钟
考题二、小麦种子的生活力测定评分标准
考试时间：30分钟
一、卷面分：16分，每空2分。
填在试卷上。
二、操作分：84分
1、能取样5分；取样正确6－8分；正确且操作规范、熟练10分.
2、切分种子：没切0分；能切7分；切样正确9－12分；切分方法正确且操
作规范、熟练15。
3、染色及观察鉴定：
红墨水没过种子10分，红墨水有洒出器具外扣2－5分；
倒掉红墨水用自来水多次冲洗至冲洗液无色为止10分，没洗0分，洗但没洗净扣3－4分；
种胚无色和胚乳有色，活种子，种胚和胚乳均有色，死种子判断正确10分，有误6－7分。
不会0分。
4、结果计算：写出正确的计算公式10分；公式错：0分。
计算两份样品种子活力的平均值正确10分，错0分；
5、整理：清场但不干净1－2分。
清场干净，3分；
清场干净，并且整理过程有条不紊、整齐有序4分。
6、技术熟练度：
操作不规范，结果不正确：0分；
操作不规范，结果不正确：2－3分；
操作规范、熟练，结果正确但时间超过30分钟，3－4分；
操作规范、熟练，结果正确，时间不超过30分钟5分。