DNA的提取与鉴定试验设计
分子生物学综合实验报告
分子生物学综合试验报告综合实验Ⅰ.Southern杂交（质粒DNA提取、PCR技术体外扩增DNA、质粒载体和外源DNA的连接反应、地高辛标记的Southern杂交）一.实验目的1.学习Southern杂交的原理及操作方法。
2.学习碱裂解法提取质粒的原理。
3.学习PCR反应的基本原理和实验技术；了解引物设计的一般要求。
4.掌握DNA体外连接的基本技能，了解连接反应的注意事项。
二.实验原理利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离的目的。
在碱变性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋解开而变性，质粒DNA氢键也大部分断裂，双螺旋也有部分解开，但共价闭合环状结构的两条互补链不会完全分离，当pH=的乙酸钠将其pH调到中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的碱裂解法提取质粒的主要原理是：利用染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而构型，而染色体DNA不能复性，形成缠绕的致密网状结构，离心后，由于浮力密度不同，染色体DNA与大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
聚合酶链反应（PCR）是体外酶促合成DNA片段的一种技术，PCR进行的基本条件：DNA模板（在RT-PCR中模板是RNA）、引物、dNTP（dATP、dTTP、dGTP、dCTP）、Taq DNA聚合酶、反应缓冲体系。
PCR循环由三个步骤组成：变性、退火、延伸。
每一个循环的产物可作为下一个循环的模板，通过30个左右循环后，目的片段的扩增可达106倍。
DNA片段之间的连接是通过DNA连接酶的催化实现的。
DNA连接酶催化具有平末端或互补粘性末端的DNA片段间相邻碱基通过3’,5’磷酸二酯键连接起来。
最常用的来源于T4噬菌体的T4DNA连接酶。
对于平末端或互补的粘性末端可直接进行连接反应。
一个片段是平末端，另一片段为粘性末端或两个片段都是粘性末端但不配对，则需要通过各种方式使其可一匹配或通过平末端进行连接。
通常采用末端补平、加同聚物尾、加接头等方式是目的片段之间能够匹配。
植物dna提取实验报告
植物dna提取实验报告植物基因组研究已经成为生物学的一个重要分支，特别是在农业生产和生态环境保护方面。
在这个研究领域中，植物DNA提取是基础且必不可少的一步。
本文将详细介绍植物DNA提取实验的过程、步骤和注意事项。
一、实验材料和仪器本实验所需材料和仪器如下：植物样品、溶解缓冲液、提取缓冲液、酒精、异丙醇、洗涤盐溶液、碱性蛋白酶、液氮、离心机、温水浴、电泳仪、比色皿等。
二、实验步骤1. 样品准备首先，选取新鲜植物样品，清洗并研磨成粉末。
为了提高DNA的纯度，应尽量避免样品中的杂质和污染。
2. DNA提取将研磨后的样品加入提取缓冲液中，并加入适量的洗涤盐和碱性蛋白酶，混匀后加入异丙醇，离心分离DNA。
将得到的上清液加入溶解缓冲液中，使用离心机将DNA沉淀至底部。
上清液中的DNA可以通过多次酒精沉淀提高回收率。
3. DNA纯化将得到的DNA溶于TE缓冲液中，使用电泳方法确定DNA含量和质量。
DNA的含量和质量可以通过紫外线吸收光谱测定和琼脂糖凝胶电泳检测。
4. DNA保存DNA保存有两种方式：一种是在-80℃低温下保存，这种方式比较适合需要长期保存的植物DNA；另一种是将DNA溶液保存在干燥的、无污染的环境中，这种方式比较适合短期保存的植物DNA。
三、注意事项1. 在样品制备和提取过程中，应尽量避免污染和杂质的混入，否则会影响DNA的纯度和质量。
2. 在DNA提取和纯化的过程中，应注意洗涤缓冲液、异丙醇等试剂的使用时间和浓度，以免影响DNA的回收率和纯度。
3. 在电泳检测中，应根据植物物种的不同选择适合的电泳参数，以确保DNA检测的准确性和可靠性。
四、结语DNA提取是植物基因组研究的基础，它是了解植物遗传信息和探究植物繁殖机制的必要步骤。
本实验详细介绍了植物DNA提取的方法和注意事项，希望可以为植物基因组研究者提供帮助。
DNA提取方法范文
DNA提取方法范文
材料和仪器：
1.细胞样品（例如细菌、动植物组织）
2. lysis缓冲液（含有蛋白酶、盐、缓冲液等成分）
3.蛋白酶K
4.乙酸混合酚
5.氯仿-异戊醇
6. 同济 Pharmacia GenePure Kit
7.离心管及离心机
8.PCR反应管
9.热水浴
步骤：
1. 取细胞样品加入适量的l 管内，混匀后用200L蛋白酶K
（10mg/Lysis）进行蛋白酶作用，37℃恒温2小时，期间翻转混匀。
2. 加入200L 10mg/ml 乙醚/酚搅匀，室温6分钟。
4.在热水浴中加入异戊醇至70°，10分钟，室温离心后去异戊醇。
5.加入75%乙醇冷冻纯化。
6.给乙醇沫体V100V1/50V离心处理梦泪水，禾端。
7. 加入便直完成cent and Over night 28°。
本方法主要通过蛋白酶作用和有机溶剂的使用来破坏细胞膜和蛋白质，最终得到DNA。
蛋白酶K能够将蛋白质降解，使得DNA得以释放出来。
乙
醚/酚和氯仿-异戊醇的使用则有助于分离DNA、RNA和蛋白质，最终得到
高纯度的DNA。
在DNA提取的过程中，要注意避免DNA受到外界污染，可以在操作台
上使用紫外灯杀菌消毒，同时使用无菌技术进行操作。
此外，选用高质量
的试剂和耗材也是保证实验成功的重要因素。
dna提取实验报告
dna提取实验报告DNA提取实验报告。
实验目的，通过本实验，掌握DNA提取的基本原理和操作技能，了解DNA 提取在生物学研究中的重要性。
实验材料与方法：1. 实验材料，酚-氯仿（25:24）、异丙醇、乙醇、盐酸、乙酸、蛋白酶K、磷酸盐缓冲液、蒸馏水等。
2. 实验仪器，离心机、振荡器、恒温水浴、显微镜等。
3. 实验步骤：a. 细胞破碎，取适量细胞悬液，加入盐酸和蛋白酶K，振荡破碎。
b. DNA沉淀，加入酚-氯仿混合液，离心分离上清液和沉淀层。
c. DNA沉淀洗涤，加入异丙醇，离心沉淀，去除上清液。
d. DNA溶解，加入磷酸盐缓冲液，用蒸馏水稀释，得到DNA提取液。
实验结果与分析：1. 实验现象，在DNA提取过程中，观察到细胞破碎后的混浊液经过酚-氯仿提取后，上清液呈现清澈的状态，沉淀层为白色颗粒状物质。
2. 实验分析，DNA提取液中含有DNA，经过酚-氯仿提取和异丙醇沉淀，成功获得了DNA提取物。
实验结论：通过本次实验，成功提取到了DNA，并初步了解了DNA提取的原理和操作步骤。
DNA提取是生物学研究中的重要基础工作，对于后续的分子生物学实验具有重要意义。
实验注意事项：1. 实验过程中应注意操作规范，避免污染和损失。
2. 实验中使用的试剂和仪器应符合实验要求，避免影响实验结果。
3. 实验后应及时清洗实验台和仪器，保持实验环境整洁。
总结：DNA提取实验是生物学实验中的基础操作，掌握好DNA提取的原理和技能对于后续实验具有重要意义。
通过本次实验，我对DNA提取有了更深入的了解，也提高了实验操作的技能。
希望通过不断实验和学习，能够更好地运用DNA提取技术，为生物学研究做出更大的贡献。
（以上内容为虚构内容，仅供参考）。
大肠杆菌基因组DNA的提取方式
大肠杆菌基因组DNA的提取方式一、传统法提取大肠杆菌基因组DNA。
1、实验原理提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。
SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶K或链霉蛋白酶E均为光谱蛋白酶，其重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白和DNA分离；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。
用酚、酚/氯仿抽提除去蛋白质，最后用无水乙醇沉淀DNA。
为获得高纯度DNA，操作过程中常加入RNaseA除去RNA。
CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定的程度（0.3mol/LNaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖物质分开。
最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。
2、实验试剂与仪器1）实验材料：大肠杆菌2）实验试剂：LB液体培养基，TE溶液，10%SDS，蛋白酶K，5mol/LNaCl，CTAB/NaCl 溶液，酚/氯仿/异戊醇，异丙醇，70%乙醇3）实验仪器：恒温摇床、低温离心机、微量移液器、水浴锅3、溶液配制1）LB液体培养基：细菌培养用胶化蛋白胨10g/L，细菌培养用酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，去离子水。
(搅拌溶解后，用5mol/LNaOH调pH至7.0.用去离子水定容100ml，用20/50ml摇瓶分装5瓶，包扎好，在121℃，1.034×105pa高压下蒸汽灭菌20min.)2）TE缓冲液：1MTris溶液（取Tris242.2g，加ddH2O至1600ml，加热溶解）1Mtris-HClpH8.0溶液（取1MTris溶液160ml用分析纯盐酸调至Ph=8.0（需浓盐酸约8.5ml），加ddH2O定容至200ml，高压灭菌备用）TE缓冲液（10mMTris-HCl1MmEDTApH=8.0，1MTris-HClBufferPH=8.05ml0.5MEDTAPH=8.01ml向烧杯中加入约400mlddH2O均匀混合;将溶液定容到500ml后，高温高压灭菌，室温保存）3）蛋白酶K：（20mg蛋白酶K溶于1ml无菌双蒸水，-20℃备用）4）CTAB/NaCl溶液：（5%w/v，5gCTAB溶于100ml0.5MNaCl溶液中，需加热到65℃使之溶解，然后室温保存）4、实验方法步骤1、将大肠杆菌接种到灭菌好的LB培养基中，一级培养过夜，以10%的接种量进行二级培养，培养至对数期（4-6h）。
质粒DNA的提取和PCR技术
3。琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时 如果能看到三条带，这三条
带以电泳速度的快慢而排序，分别是超螺旋、开环和复制中间 体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起），注意碱法抽提 得到质粒样品中应不含线性DNA ，另外如果发现运动得较慢的 带，可能是由于操作不慎污染的大肠杆菌基因组DNA的片断。
操作步骤注意事项： 操作步骤注意事项
1。配置反应体系。 标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 1ul 4种dNTP混合物 200umol/L 引物 各1～10pmol 模板DNA 10～200ng Taq DNA聚合酶 0.25u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 10ul 2。 在加热至90℃以上的PCR仪中预变性94℃ 2分钟, 然后循环: 94℃ 1分钟， 50℃ 1分钟， 72℃ 1.5分钟， 共30轮循环。 3. 循环结束后, 72℃ 10分钟，4℃保存。 4. 电泳结束，观察
注意问题：
1。防止核酸污染：PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高
的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳 性的产生。
吸样枪:吸样枪污染值得注意.由于操作时不慎将样品或模板核酸 吸 入枪内或粘上枪头是一个严重的污染源。吸头、小离心管应 一次性使用 。 开关盖时注意不要接触到内壁，并且不要开盖时间太长，以免 污染。 2。预混和分装PCR试剂:PCR反应液应预先 配制好，然后小量 分装。节省时间并保证各管成分平行 。最好在加样时都在冰上 低温进行，以防止加入酶后反应立即开始。 3。阳性对照与阴性对照的设立。-重要！ 阳性对照与阴性对照的设立。 重要！ 阳性对照与阴性对照的设立 重要 有利于问题的解决， 有利于问题的解决，对于优化条件以及排除污染可能性都很有 用！
1308062115 贾洋 鸡肝DNA的提取与定量分析
此方法是利用蛋白质在酸、碱或酶的条件下易发生水解，离心后再用异丙醇来沉淀DNA，由此方法得到的DNA优点是：纯度较高，可以满足各种实验的要求；缺点是：操作比较繁琐，用时也比较长，所用的部分试剂具有毒性，因此，在实验中要格外注意。
③玻璃珠颗粒吸附法[6]
该方法的要领是采用细胞裂解液来裂解细胞，然后加入能与DNA结合的玻璃颗粒缓冲溶液，经过一系列的沉淀，洗脱最终获得DNA。此法可以提取福尔马林、石蜡包埋的标本中的DNA。
分析பைடு நூலகம்法：
A、紫外可见分光光度法[9~12]
紫外可见分光光度计种类繁多、型号各异、性能也各不相同，但最主要的部件基本相同，均由五部分组成：
①光源：紫外可见分光光度计的光源一般都是使用氢灯或者氘灯，它们能够发射出150～400nm波长的连续光谱。
②单色器：最常使用的有光栅和棱镜。
③吸收池：盛放样品或者标准液的容器，紫外光区测量时必须采用石英吸收池。
摘 要
随着科学技术的不断进步，人们越来越多的了解到生物工程对人类社会的巨大帮助，特别是基因工程。通过对生物体内DNA的提取与分析，充分的了解生物繁衍的奥秘，也通过对DNA的研究研发出许多可以用于医学治疗药物和疾病预防的方法，提高了人类的生活质量。鉴于前面学者们对DNA的研究，设计出了许多关于DNA提取的方法，而且都已相对比较成熟。文章以咸阳市咸阳师范学院附近的鸡为研究对象，通过盐析法对鸡的肝脏中的DNA进行提取，然后再通过紫外可见分光光度法和定磷法法对DNA进行定量分析，最终确定所提取的DNA的含量。通过称量共从9g鸡肝中提取出0.532gDNA粗提物，通过两种定量分析方法对粗提物进行定量分析可知提取率并不是很高，用紫外可见分光光度法测得的粗提DNA溶液浓度大约为22.95μg/ml，可算出DNA的含量为0.0013g/g；用定磷法测得DNA的含量为0.0011g/g，说明两种检测方法的精确度有差异，但不是很明显。通过与其他研究人员的实验数据作对比可知蛋白质去除不是很理想。
DNA提取实验方案
DNA提取实验方案
材料与试剂：
1.细胞样本（如血液、组织等）
2.细胞裂解缓冲液（含有蛋白酶K）
3.蛋白酶K
4.乙醇
5.蛋白质沉淀液
6.正丁醇
7.氯仿
8.等离子水
9.TE缓冲液
10.离心管
11.磁珠
12.磁珠悬浊液
13.热拌器
14.离心机
实验步骤：
1.细胞破裂：将细胞样本加入细胞裂解缓冲液中，加入适量蛋白酶K，放入热拌器中破裂细胞，使DNA溶解在缓冲液中。
2.蛋白质沉淀：加入等体积的蛋白质沉淀液，轻轻混匀，离心使蛋白
质沉淀。
3.DNA沉淀：将上清液转移至新的离心管中，加入适量的乙醇，轻轻
混匀，使DNA沉淀。
4.DNA纯化：将DNA沉淀用等离子水悬浊，加入等体积的正丁醇和氯仿，混匀后离心，取上清液，加入等量的等离子水和TE缓冲液。
5.纯化DNA：将上清液转移至带有磁珠的离心管中，加入磁珠悬浊液，混匀后在离心机中进行离心，使DNA和磁珠结合。
6.洗涤DNA：将离心管中的上清液丢弃，加入70%乙醇洗涤DNA，多
次洗涤后去除乙醇，干燥磁珠。
7.溶解DNA：最后用等离子水或TE缓冲液溶解DNA，即可用于后续的
实验。
通过上述步骤，可以从细胞样本中提取出纯净的DNA，用于后续的分
子生物学实验。
DNA提取是一项基础而重要的技术，在分子生物学和遗传
学研究中具有广泛的应用价值。
希望以上方案可以帮助您顺利进行DNA提
取实验。
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实验设计
题目：DNA的提取与鉴定
组数：第七组
组长：杨曼
学校：南通大学
年级：13级
专业：生物工程131
实验内容：
1，采用Chelex-100提取方法提取DNA
2，采用紫外光照射法鉴定DNA。
实验目的
1，掌握各种法医学生物检材DNA提取方法
2，掌握紫外光照射法鉴定DNA的原理和方法
实验原理
1，当检材较少时或者基因分型只需要少量的DNA时，可以用Chelex-100提取方法提取DNA。
2，Chelex-100是一种化学整合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成。
含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，整合多价金属离子，尤其是选择性整合二价离子，比普通离子交换剂具有更高的金属离子选择性和较强的结合力．能结合许多可能影响一步分析的其他外源物质。
3，通过离心除去Chelex-100颗粒，使这些与Chelex-100结合的物质与DNA分离，防止结合到Chelex中的抑制剂或杂质带到PCR反应中，影响下一步的DNA分析，并通过结合金属离子，防止DNA降解。
实验器材
实验试剂：
1，配制1．5％Chelex-100 （w/v）：称取5克Chelex-100，加100ml灭菌纯水，放4℃保存。
2，10％SDS ：称取10克优级纯的SDS，加纯水到100ml 溶解，室温保存。
3，5mg/ml PK酶（蛋白酶K）：称取5mg PK酶，溶于1ml 灭菌纯水中，－20℃保存
4，1M DTT (二硫苏糖醇)：称取154.3mg DTT加1ml
灭菌纯水溶解，－20℃保存
实验设备：
干热器、恒温水浴箱、高速离心机、离心管
一，DNA的提取---Chelex-100法
1，全血
1)取3～10μl全血加到0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，室温下放置15分钟。
2) 13,000rpm离心3分钟，去上清，收集沉淀。
（必要时可用蒸馏水反复洗沉淀物，直至无色或血色素很少）。
3)沉淀中加入200μl 5％Chelex-100溶液（5％Chelex-100为悬浊液，使用前要充分振摇，使Chelex-100颗粒悬浮），在振荡器上反复振荡，放入56℃保温30分钟以上。
4)取出后振荡，100℃保温8分钟，振荡后，13,000rpm 离心3分钟，上清用于PCR扩增，或放4℃保存备用。
2．血斑
1) 剪取约0.5cm2的血斑，加到0.5ml的离心管中，加入500μl纯水，剧烈振荡，室温放置15分钟。
13,000离心3分钟，去上清。
（可用纯水反复洗至无色，载体不需去除，始终留在离心管中。
）
2) 以下步骤同全血的提取方法
3，混合斑
1) 取适量含有混合斑的检测，剪碎后放入5ml小烧杯中，加入3ml纯水、300μl 10% SDS及150μl 5mg/ml 的PK 酶，用牙签搅拌后，放入37℃水浴6小时以上（最好过夜）。
2) 将水浴好的检材移入1.5ml离心管（检材载体用一次性注射器挤压后去除），13,000rpm 离心3分钟，去上清，每管加1.4ml 纯水，振荡，13000rpm 离心3分钟。
洗三次后，移入0.5ml离心管中，13000rpm离心3分钟，弃上清。
3)向沉淀物的离心管中加入200μl 5％的Chelex-100（可根据检材量的多少进行调节），4μl 5mg/ml 的PK酶及
8μl 1M的DTT（PK酶及DTT的终浓度分别为100μg/ml和0.039M），振荡后56℃保温过夜。
次日取出振荡，100℃保温8分钟，振荡，13000rpm离心3分钟，上清用于PCR扩增或放4℃保存备用。
4，含有唾液斑的检材
1) 唾液斑：处理方法与血斑的处理方法相同。
2)烟头：用镊子夹住烟头，剪刀剪下烟头外圈的纸，剪碎后放入0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，13000rpm离心3分钟，弃上清，加入100μl 5％的Chelex-100，放入56℃保温30分钟以上。
取出振荡，100℃保温8分钟，13000rpm离心3分钟，上清用于PCR扩增或放4℃保存备用。
3) 口香糖：将口香糖剪碎后放入0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，13000rpm离心3分钟，弃上清，加入100μl 5％的Chelex-100，放入56℃保温30分钟以上。
取出振荡，100℃保温8分钟，振荡，13000rpm离心3分钟，上清用于PCR扩增或放4℃保存备用。
5，毛根
用镊子夹住毛发的根部，剪去其余部分，将毛根放入0.5ml离心管中（处理毛发时很容易遗失，应小心操作，最好在桌面上铺一张白纸。
），加人纯水洗一次，然后加入30μl 5％的Chelex-100和2μl 5mg/ml 的PK酶，放入56℃保温6
小时以上。
取出振荡，100℃保温8分钟，振荡，13000rpm 离心3分钟，上清用于PCR扩增或放4℃保存。
二，DNA的鉴定——紫外光照射法
1．配制染色剂。
用蒸馏水配制万分之五的溴化乙锭（EB）溶液。
2．将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上，再滴一滴EB溶液染色。
3．将蜡纸放在紫外灯（260 nm）下照射（暗室中），可见橙红色的萤光（DNA的紫外吸收高峰在280 nm处）。
注意点
1，在DNA提取、制备的过程中，核酸极不稳定，许多因素可破坏其完整结构：
①化学因素，核酸的结构在pH值4.0—11.0间较稳定，pH值在此范围外就会使核酸变性降解，故制备过程应避免过酸过碱。
②物理因素，DNA分子链很长，是双螺旋结构，既有一定的柔性。
又有一定的刚性，故强机械作用如剧烈搅拌会令DNA分子断裂，不利于收集，应加以避免。
③酶的作用，细胞中普遍存在的核酸酶在细胞壁或膜遭到破坏时被释放出来，它会降解DNA分子。
故须用酶的变性剂、抑制剂使之失活。
操作过程最好在低温(0℃左右)下进行。
2，所有操作均须温和，避免剧烈震荡。