2015版药典薄膜过滤法
无菌检验技术—供试品的无菌检查
• ②过滤 启动蠕动泵，过滤。如采用开放式过滤装置，打开滤器盖，在火 焰旁无菌操作立即将供试液倒入直径约为50m、孔径不大于0.45μm微孔滤膜 的薄膜过滤器中，关闭滤器盖，打开排液架阀门，启动真空泵进行减压抽滤 ，滤干。 • ③冲洗 用灭菌0.9%氯化钠溶液或其他适宜的溶剂照上述操作冲洗滤膜不 得少于3次，每次100ml。冲洗次数应由验证试验确定，至阳性对照菌正常生 长。 • 大容量非抗菌作用的供试品，薄膜过滤后，无须冲洗。 •
• (4)培养及观察 培养期间应逐日观察并记录是否有菌生长、填写检查记 录表，阳性对照管培养24后应有菌生长。如加入供试品后的培养基在培养过 程中出现浑浊培养14日后，不能从外观上判断有微生物生长，可取该培养液 适量接种于同种新鲜培养基中或斜面上，继续培养，细菌培养48h，真菌培 养72h，观察是否再现浑浊成斜面上有无菌生长；或用接种环取培养液涂片 ，染色，显微镜下镜检，进行判断是否有菌。 • (5)结果判定 当阳性对照管浑浊并确定有菌生长，阴性对照管无菌生长 时，方可据所观察到的结果判定。 • 若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判断供试品符合规定 • 若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除 非能充分证明试验结果无效即生长的微生物非供试品所含。
• 4.3阳性对照 • 应根据供试品特性选择阳性对照菌：无抑菌作用(如维生素B12注射液)及 抗革兰阳性菌(如青霉素钠注射剂)为主的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照 菌：抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌；抗厌氧菌的供试品 ，以生孢梭菌为对照菌;抗真菌的供试品，以白色念珠菌为对照菌。阳性对 照试验的菌液制备同方法验证试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同供试 品无菌检查每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48～72h应生长良好 。
2015版中国药典纯化水微生物限度检测方法验证方案
2015版中国药典纯化⽔微⽣物限度检测⽅法验证⽅案1. 审批起草⼈签名：审核⼈签名：批准⼈签名：2. ⽬录1.审批 (1)2.⽬录 (2)3.⽬的 (3)4.范围 (3)5.职责 (3)6.执⾏程序 (4)7.描述 (4)8.⽅法验证 (4)8.1.⼈员培训 (4)8.2.⽂件确认 (5)8.3.仪器确认 (5)8.4.供试品确认 (6)8.5.培养基及缓冲液确认 (6)8.6.菌种确认 (7)8.7.培养基 (7)8.8.菌种：枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌。
(7)8.9.供试品制备 (8)8.10.试验结果 (9)8.11.验证结果分析与评价 (10)9.偏差处理 (10)10.变更控制 (10)11.附件⽇志 (11)12.再验证 (11)13.参考书⽬ (11)14.修订历史 (12)3. ⽬的纯化⽔微⽣物限度检查采⽤薄膜过滤法，验证该⽅法适⽤于纯化⽔中需氧菌总数的测定。
4. 范围本验证⽅案适⽤于上海XXXX有限公司QC实验室，对纯化⽔微⽣物限度检查⽅法（薄膜过滤法）适⽤性的验证。
5. 职责5.1. 验证⼩组组成：5.2. 验证⼩组组长负责5.2.1. 组织起草或审核验证⽅案及变更申请；5.2.2. 对验证⼩组成员进⾏培训；5.2.3. 验证⽅案的组织实施；5.2.4. 对验证过程中的记录审核，保证其真实性、可靠性和完整性；5.2.5. 组织验证报告的起草、汇总并参与对其进⾏审核及验证周期的拟定。
5.3. QA参与⼈员负责5.3.1. 审核验证⽅案、报告及报告中出现的偏差、变更；5.3.2. 参与验证⽅案的实施及评价；5.3.3. 对验证⽅案及报告进⾏编号并纳⼊验证⽂件系统且归档。
5.4. QC参与⼈员负责5.4.1. 起草验证⽅案；5.4.2. 已经批准的验证⽅案的具体实施；5.4.3. 收集测试数据，应评估数据并对测试数据做出评论；5.4.4. 参与偏差调查、变更申请等；5.4.5. 起草验证报告。
非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法(15版中国药典公示稿)
胰酪大豆胨 琼脂培养基 和胰酪大豆 胨液体培养 基，培养温 度 30 ～ 35℃，培养 时间不超过 3 天，接种 量不大于 100cfu
胰酪大豆胨 琼脂培养基 / 胰酪大豆 胨液体培养 基 （ MPN 法），培养 温 度 30 ～ 35 ℃ ， 培 养 时间不超过 3 天，接种量 不大于 100cfu
计数培养基适用性检查 计数方法适用性试验
试验菌株
试验菌液 的制备
需氧菌总数 计数
霉菌和酵 母菌总数
计数
需氧菌总数 计数
霉菌和酵 母菌总数
计数
金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus
aureus) 〔CMCC(B)26 003)〕
胰酪大豆 胨琼脂培 养基或胰 酪大豆胨 液体培养 基，培养温 度 30 ～ 35℃，培养 时 间 18 ～ 24 小时
获得丰富
的孢子
注：当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌和酵母菌总数时，应进行培养基适用性检查，
检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培过 5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌
种为第 0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学
特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表 1。
胰酪大豆胨 琼脂培养基 （ MPN 法 不 适用），培 养温度 30～ 35 ℃ ， 培 养 时间不超过 5 天，接种量 不大于 100cfu
沙氏葡萄 糖琼脂培 养基，培养 温度 20～ 25℃，培养 时间不超 过 5 天，接 种量不大 于 100cfu
沙氏葡萄 胰酪大豆胨 沙 氏 葡 萄 胰酪大豆胨 沙氏葡萄
糖琼脂培 琼 脂 培 养 糖 琼 脂 培 琼脂培养基 糖琼脂培
黑曲霉
养基或马 基，培养温 养基，培养 （ MPN 法 不 养基，培养
霉菌与酵母菌计数方法(2015版药典)
霉菌与酵母菌计数方法1试验菌液得制备与使用(以白色念珠菌为示例)白色念珠菌(0)代↓传代培养↓实验菌液得制备:沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基,培养温度20～２5℃,培养时间2~3天↓计数培养基适用性检查:胰酪大豆胨琼脂培养基,培养温度３0～3５℃,培养时间不超过5天,接种量不大于10０cｆu↓计数方法适用性试验:胰酪大豆胨琼脂培养基(ＭPＮ法不适用),培养温度３０～３5℃,培养时间不超过５天,接种量不大于10０cfu 注:当需用玫瑰红钠琼脂培养基测定霉菌与酵母菌总数时,应进行培养基适用性检查,检查方法同沙氏葡萄糖琼脂培养基1.１菌种试验用菌株得传代次数不得超过５代(从菌种保藏中心获得得干燥菌种为第0代),并采用适宜得菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株得生物学特性。
1。
2菌液制备(按表1规定程序培养各试验菌株)取白色念珠菌得新鲜培养物↓用pH7、0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得菌悬液取黑曲霉得新鲜培养物↓加入3～５ｍｌ含0.０５%聚山梨酯80得pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0、9％无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱↓采用适宜得方法吸出孢子悬液至无菌试管内↓用含0。
05％聚山梨酯80得pＨ7.０无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液或0。
９%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度得黑曲霉孢子悬液菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在２~8℃,可在24小时内使用、稳定得黑曲霉孢子悬液可保存在2~８℃,在验证过得贮存期内使用、1。
３阴性对照为确认试验条件就是否符合要求,应进行阴性对照试验,阴性对照试验应无菌生长。
如阴性对照有菌生长,应进行偏差调查、2、培养基适用性检查按表1规定,接种不大于100cｆu得菌液至沙氏葡萄糖琼脂培养基平板↓置表１规定条件下培养↓每一试验菌株平行制备2管或2个平皿↓同时,用相应得对照培养基替代被检培养基进行上述试验↓被检固体培养基上得菌落平均数与对照培养基上得菌落平均数得比值应在0。
中国药典(2015年版)无菌检查法
中国药典(2015年版)无菌检查法是用于检查药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
如果供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法。
只要供试品性质允许，应采用薄膜过滤法。
薄膜过滤法一般应采用封闭式薄膜过滤器，无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45微米，直径约为50mm。
根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质，使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。
直接接种法适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的供试品，即取规定量供试品分别等量接种至硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基中。
中国药典2015版 四部 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则
为更好应用非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）、非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法（通则1106）及非无菌药品微生物限度标准（通则110 7），特制定本指导原则。
非无菌药品中污染的某些微生物可能导致药物活性降低，甚至使药品丧失疗效，从而对患者健康造成潜在的危害。
因此，在药品生产、贮藏和流通各个环节中，药品生产企业应严格遵循GMP的指导原则，以降低产品受微生物污染程度。
非无菌产品微生物计数法、控制菌检查法及药品微生物限度标准可用于判断非无菌制剂及原料、辅料等是否符合药典的规定，也可用于指导制剂、原料、辅料等微生物质量标准的制定，及指导生产过程中间产品微生物质量的监控。
本指导原则将对微生物限度检查方法和标准中的特定内容及应用做进一步的说明。
1. 非无菌产品微生物限度检查过程中，如使用表面活性剂、灭活剂及中和剂，在确定其能否适用于所检样品及其用量时，除应证明该试剂对所检样品的处理有效外，还须确认该试剂不影响样品中可能污染的微生物的检出（即无毒性），因此无毒性确认试验的菌株不能仅局限于验证试验菌株，而应当包括产品中可能污染的微生物。
2. 供试液制备方法、抑菌成分的消除方法及需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数方法应尽量选择微生物计数方法中操作简便、快速的方法，同时，所选用的方法应避免损伤供试品中污染的微生物。
对于抑菌作用较强的供试品，在供试品溶液性状允许的情况下，应尽量选用薄膜过滤法进行试验。
3. 对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的培养基，用于培养基适用性检查，以保证药品微生物检验用培养基的质量。
对照培养基由中国食品药品检定研究院研制及分发。
4. 进行微生物计数方法适用性试验时，若因没有适宜的方法消除供试品中的抑菌作用而导致微生物回收的失败，应采用能使微生物生长的更高稀释级供试液进行方法适用性试验。
此时更高稀释级供试液的确认要从低往高的稀释级进行，最高稀释级供试液的选择根据供试品应符合的微生物限度标准和菌数报告规则而确定，如供试品应符合的微生物限度标准是lg需氧菌总数不得过10 3 cfu，那么最高稀释级是1：10 3 。
2015版药典薄膜过滤法
2015版药典薄膜过滤法
【实用版】
目录
1.薄膜过滤法的定义和作用
2.2015 版药典对薄膜过滤法的要求
3.薄膜过滤法的具体操作步骤
4.薄膜过滤法的应用范围和优势
5.2015 版药典薄膜过滤法的意义和影响
正文
薄膜过滤法是一种在药学领域中广泛应用的过滤技术，其主要作用是去除药液中的微小颗粒和细菌，保证药物的纯净度和安全性。
在我国，药典是对药物质量的最权威的规定，而 2015 版药典对薄膜过滤法的要求进行了详细的规定，这无疑对药物生产过程中的质量控制提供了重要的参考。
根据 2015 版药典，薄膜过滤法的具体操作步骤主要包括以下几个步骤：首先是选择合适的过滤膜，这需要根据药物的特性和过滤的要求来决定；其次是准备过滤设备，包括安装过滤膜、调试设备等；然后是进行过滤操作，要注意控制过滤速度和压力，避免对药物产生不良影响；最后是清洗和消毒过滤设备，防止污染。
薄膜过滤法在药物生产中的应用范围非常广泛，几乎涵盖了所有的液体药物，其优势在于过滤效果好，不仅能去除颗粒，还能有效去除细菌，而且操作简便，设备投入少，因此受到药物生产企业的欢迎。
2015 版药典对薄膜过滤法的规定，无疑对提高药物质量，保证药物
安全性，推动药物生产技术进步具有重要意义。
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2015年版药典 无菌检查法
灵敏度检査 菌 种 培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过 5 代(从 菌 种 保 存 中 心 获 得 的 干 燥 菌 种 为 第 0 代 ），并 采 用 适 宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验 菌株的 生物 学特 性。 金 黄 色 葡 萄 球 菌 （Staphylococcus aureus ) C C M C C (B) 26 003〕 铜 绿 假 单 胞 菌 （Pseudomonas aeruginosa ) C C M C C ( B) 10 104〕 枯 草 芽 孢 杆 菌 仏 5)〔C M C C ( B ) 6 3 501〕 生 抱 梭 菌 sporogenes) C C M C C ( B ) 64 941〕 白 色 念 珠 菌 albicans) C C M C C ( F ) 98 001〕 黑 曲 霉 n ig e r) C C M C C ( F ) 98 003〕 苗 液 制 备 接 种 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、铜 绿 假 单 胞 菌 、枯草 芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大 豆 胨 琼 脂 培 养 基 上 ，接 种 生 孢 梭 菌 的 新 鲜 培 养 物 至 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 中 ，30〜 35°C培 养 18〜 2 4 小 时 ；接 种 白 色 念 珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖 琼 脂 培 养 基 上 ，20〜 25°C培 养 24〜 4 8 小 时 ，上 述 培 养 物 用 PH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9% 无 菌 氣 化 钠 溶 液 制 成 每 l m l 含 菌 数 小 于 lOOcfu( 菌 落 形 成 单 位 ）的 菌 悬 液 。接 种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上， 20〜25*C培 养 5〜7 天 ，加 人 3〜 5 m l含 a 0 5 % (m l/m l) 聚山 梨 酯 8 0 的 pH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 ，将 孢 子 洗 脱 。然 后 ，采 用 适 宜 的 方 法 吸 出 孢 子 悬 液 至 无 菌 试 管 内 ，用 含 0.05% ( m l/m l) 聚 山 梨 醋 8 0 的 pH7. 0 无 菌 氣 化 钠 -蛋 白 胨 缓 冲 液 或 0. 9 % 无 菌 氣 化 钠 溶 液 制 成 每 l m l 含 孢 子 数 小 于 lOOcfu的 孢 子 悬 液 。 菌 悬 液 若 在 室 温 下 放 置 ，应 在 2 小 时 内 使 用 ；若 保 存 在 2〜8°C可 在 2 4 小 时 内 使 用 。黑 曲 霉 孢 子 悬 液 可 保 存 在 2 〜 8°C，在 验 证 过 的 贮 存 期 内 使 用 。 培 养 基 接 种 取 每 管 装 量 为 12ml的硫乙醇酸盐流体培 养 基 7 支 ，分 别 接 种 小 于 lO O c fu 的 金 黄 色 葡 萄 球 菌 、铜 绿 假 单胞菌、生 孢 梭 菌 各 2 支 ，另 1 支 不 接 种 作 为 空 白 对 照 ，培 养 3 天 ；取 每 管 装 量 为 9 m l的 胰 酪 大 豆 胨 液 体 培 养 基 7 支 ，分 别接种小 于lOOcfu的 枯 草 芽 孢 杆 菌 、白 色 念 珠 菌 、黑 曲 霉 各 2 支，另 1 支不接种作为空白对照，培 养 5 天 。逐 日观 察结果。 结 果 判 定 空 白 对 照 管 应 无 菌 生 长 ，若 加 菌 的 培 养 基 管 均 生 长 良 好 ，判 该 培 养 基 的 灵 敏 度 检 查 符 合 规 定 。
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2015版药典薄膜过滤法
2015版药典中的薄膜过滤法是一种常用的药物检测和净化方法。
该方法使用薄膜过滤器来分离和去除药物中的固体杂质或微生物。
它通常适用于水溶性药物，在药物制备或生产过程中用于提高药物的纯度和无菌性。
薄膜过滤法的操作步骤通常包括以下几个步骤：
1. 准备薄膜过滤器：选用合适的薄膜过滤器，根据需要的过滤尺寸和材料进行选择。
常用的薄膜过滤器材料包括聚酯薄膜、聚醚薄膜、聚碳酸酯薄膜等。
2. 预处理：对药物样品进行预处理，如稀释、调整pH值，以
便更好地进行过滤。
预处理的具体方法会根据具体药物的特性而有所不同。
3. 过滤：将预处理后的药物样品通过薄膜过滤器进行过滤。
可以使用手动或自动的过滤器设备来进行操作。
过滤时要注意，要保证过滤器不会被堵塞，并且要注意防止空气进入过滤系统，以避免污染样品。
4. 清洗：过滤完毕后，对过滤器进行清洗，以便去除残留物和杂质。
常用的清洗液包括水、酒精和有机溶剂等。
清洗方法可以根据具体的过滤器材料和药物特性而有所不同。
薄膜过滤法在药物制备和生产中有广泛的应用，可以有效地去除固体杂质和微生物，提高药物的质量和纯度。
但是在实际操
作中，需要注意选择合适的薄膜过滤器和操作条件，以确保过滤的效果和结果的准确性。