活性多肽简介
生物活性多肽合成及其在肿瘤治疗中的作用
生物活性多肽合成及其在肿瘤治疗中的作用随着现代生物技术的发展，越来越多的研究者开始关注一种新型的抗肿瘤治疗方法——生物活性多肽治疗。
与传统的放化疗相比，生物活性多肽治疗具有分子靶向性强、作用时间长、副作用小等优势，因此备受关注。
但是，要进行成功的生物活性多肽治疗，关键在于多肽的合成。
因此，本文将就生物活性多肽的合成技术及其在肿瘤治疗中的作用进行论述。
一、生物活性多肽的合成技术生物活性多肽是指由多个氨基酸残基组成的具有生物学活性的化合物。
从结构上来看，多肽与蛋白质非常类似，都是由氨基酸残基组成的长链分子。
但是，它们的长度不同：通常来说，蛋白质的长度在100个以上，而多肽的长度则在100个以下。
生物活性多肽的合成技术通常分为化学合成和生物合成两种方法。
化学合成主要是通过有机合成的方法，将不同的氨基酸残基逐一连接而成。
这种方法的优点是操作简便、合成速度快、纯度高，但是，存在合成规模较小、费用较高等缺点。
生物合成则是利用微生物、真核细胞等生物体内生产多肽的机制，通过改变DNA序列的方法，让细胞产生所需的多肽。
这种方法的优点是合成规模较大，可以满足大规模生产需求，同时还可以提高多肽的生物活性与稳定性。
二、生物活性多肽在肿瘤治疗中的作用生物活性多肽在肿瘤治疗中的作用主要表现在以下几个方面：1. 靶向肿瘤细胞生物活性多肽可以与肿瘤细胞上的特定受体结合，进而调控肿瘤细胞的生长和分化。
这种作用主要是基于生物活性多肽与受体之间的亲和力和特异性。
通过合理地设计多肽序列，可以让多肽与癌细胞中的特定受体发生结合，从而实现对癌细胞的靶向作用。
2. 抑制肿瘤细胞增殖生物活性多肽可以通过多种途径抑制肿瘤细胞的增殖，例如抑制细胞生长、诱导细胞凋亡、阻断细胞周期等。
同时，还可以通过抑制血管生成、降低细胞能量代谢等方式对癌细胞发挥作用。
这些作用的发挥机制复杂，但是可以概括为生物活性多肽可以影响癌细胞内部的生物化学过程，从而影响癌细胞的生长、分化和转移。
活性多肽1
取10ml酶解物加入10ml 20%的TCA溶液，混合震荡。离心15min, 取上清液。蛋白总氮和上清液可溶性氮由微量凯氏定氮法测定。
加工工艺
大豆分离蛋白→大豆多肽的制备、预处理→蛋白质酶解→脱色、 脱苦→脱盐→调配→胶体磨→均质→灌装封盖 →杀菌 →冷却→ 保温检验→成品 小结：在加工过程中要最大限度的保证原料的营养成分和功能特性。使
功能性饮料
根据保健食品专家的新定义： 系指具有保健作用的软饮料 功能饮料主要由3大类饮料组 成，即运动饮料、能量饮料 以及其他功能饮料。 主要包括 强化营养饮料 （如强化钙、强化铁、强化 锌饮料等）、高蛋白饮料、 花生蛋白饮料等)、强化维生 素果汁饮料、乳酸菌（双歧 杆菌)饮料等。
大豆活性多肽功能饮料
活性多肽
—大豆活性多肽饮料
保健功效
大豆或大豆制品 经过微生物发酵作 用后，消除了抑制营养因子，增加了 B族维生素的含量，产生对人体健康 更为有益的大豆活性多肽，因而更易 被人体消化吸收。 大豆活性多肽非转基以大豆为原料， 经微生物低温发酵，酿制而成的天然 健康保健品。产品中大豆活性多肽的 分子量在100-5000道尔顿之间，其氨 基酸组成几乎与大豆蛋白一样，必需 氨基酸含量较高。
3.用于降血脂、降胆固醇产品 ： Biblioteka 豆活性多肽能阻碍肠道内胆固醇的吸收，
促使胆固醇排出体外，降低血液中血脂和胆固醇的浓度，防止胆固醇和血脂在血 液中沉积。根据大豆活性多肽这一特性，可加工成适合中老年人食用的食品或饮 品。
4.用于降血压产品：大豆蛋白活件肽可以抑制ACE的活性，防止血管平滑肌的
收缩，达到降血压的目的。大豆活性多肽对正常血压没有降压作用，并且对肾和 性功能没有任何影响。在食品中加入大豆活性多肽．人在正常的饮食中即可达到 维持正常血压的目的，并且安全可靠。
生物活性多肽
多肽作为载体的药物靶向运送
PS.多肽在药物靶向运送及疾病治疗中的研究进展
组织工程材料
它是用来修复、维护、促进人体各种组织或器官 损伤后的功能和形态的生物替代物。利用多肽分 子结构的特点，通过改变多肽的氨基酸序列，设 计合成多肽仿生材料，如人工肽生物材料支架， 止血材料等。
多肽自组装体系设计
利用生物分子自组装仿生合成纳米无机材料
多肽类食品
用于食品的功能肽多为天然蛋白质的分离 提取物。功能肽除了蛋白质的营养作用外， 还有促进体质提高，增强免疫力，延缓衰 老的作用，是一种新型的保健食品。如： 大豆肽、乳肽、胶原肽等。
肽类化妆品
胶原蛋白是一种高分子蛋白，是人皮肤真皮层主 要组成成ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ之一，真皮中胶原蛋白的逐渐减少导 致皮肤干燥、松弛、出现皱纹。利用生物酶技术 将胶原蛋白小分子化，因其分子量小，与人体皮 肤胶原结构相似，由良好的相容性，常被用作化 妆品的原料或添加剂。
多肽合成方法简介
主要有两条途径：化学合成和生物合成 化学法：液相，固相 生物法：发酵法，酶解法，DNA重组技术
多肽固相合成
多肽合成是一个重复添加氨基酸的过程，固相合成 顺序一般从C端（羧基端）向 N端（氨基端）合成。 从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以 来，经过不断的改进和完善，到今天固相法已成为 多肽和蛋白质合成中的一个常用技术。
Bioactive Peptide
蛋白质
多肽
氨基酸
寡肽
蛋白质的吸收
一.多肽的基本知识
多肽是α-氨基酸通过脱水缩合形成肽键连接在一起而 形成的化合物，它也是蛋白质水解的中间产物。
一般由10个以上氨基酸残基组成
多肽的性质
由多个分子α-氨基酸的-NH2与-COOH互相缩 合失水后形成10个肽键(-CONH-)以上的长链 化合物。它包括多种在人的机体中具一定生理 活性的化合物，可以从动物组织中提取，有些 也可以人工合成。
活性多肽的实验报告
一、实验目的1. 学习活性多肽的提取方法。
2. 了解活性多肽的生物学活性及其作用。
3. 掌握活性多肽的鉴定与分析技术。
二、实验原理活性多肽是一类具有生物活性的小分子肽，由2个或2个以上氨基酸通过肽键相互连接而成。
它们在生物体内起着重要的生理调节作用，如免疫调节、细胞信号传导、生长调节等。
本实验通过提取活性多肽，对其生物学活性进行分析，探讨其在医学、食品、生物工程等领域的应用前景。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜淡水鱼、生物酶、硫酸铵、盐酸、丙酮等。
2. 实验仪器：离心机、紫外可见分光光度计、pH计、电热恒温水浴锅、分析天平等。
四、实验方法1. 活性多肽的提取（1）取新鲜淡水鱼，去内脏、去皮，切成小块。
（2）将鱼块放入酶解液中，在50℃、pH 7.0条件下酶解4小时。
（3）酶解完成后，将混合液离心（3000 r/min，20 min）取上清液。
（4）用硫酸铵对上清液进行盐析，沉淀后用丙酮洗涤，去除杂质。
（5）将沉淀物溶于适量水中，调节pH至7.0，离心（3000 r/min，20 min）取上清液，即为活性多肽溶液。
2. 活性多肽的鉴定与分析（1）紫外可见分光光度法测定活性多肽浓度。
（2）采用SDS-PAGE电泳法对活性多肽进行分离鉴定。
（3）通过体外实验检测活性多肽的生物学活性，如免疫调节、细胞信号传导、生长调节等。
五、实验结果与分析1. 活性多肽的提取通过酶解、盐析、丙酮洗涤等步骤，成功提取出活性多肽溶液。
2. 活性多肽的鉴定与分析（1）紫外可见分光光度法测定活性多肽浓度为0.5 mg/mL。
（2）SDS-PAGE电泳结果显示，活性多肽分子量分布在500-3000 Da之间。
（3）体外实验结果表明，活性多肽具有免疫调节、细胞信号传导、生长调节等生物学活性。
六、实验结论1. 成功提取出淡水鱼活性多肽，并通过紫外可见分光光度法、SDS-PAGE电泳法对其进行了鉴定。
2. 活性多肽具有免疫调节、细胞信号传导、生长调节等生物学活性，为活性多肽在医学、食品、生物工程等领域的应用提供了理论依据。
生物活性多肽的研究进展
生物活性多肽的研究进展生物活性多肽是一种能够在生物体内发挥独特功能的短链氨基酸序列，具有广泛的生物活性和生物学效应，例如调节免疫系统、抗炎抗菌、抗氧化、促进生长发育等。
由于其良好的生物相容性和生物可降解性，生物活性多肽已经成为目前医药领域极具潜力的新型生物制剂。
本文介绍了生物活性多肽的研究进展，并展望了其未来的发展方向。
一、生物活性多肽的类型生物活性多肽按其作用机制可分为各种不同类型。
生长因子和神经肽是其中两个最常见的类型。
生长因子是在生长和细胞分化中发挥重要作用的蛋白类物质，如胰岛素样生长因子、表皮生长因子等。
神经肽具有调节中枢神经系统、调节内分泌等生物学效应，如计钩菌素、多肽P等。
二、生物活性多肽的制备方法生物活性多肽的制备方法比较简单，主要分为生化合成法、固相合成法和基因工程技术法。
生化合成法是将天然多肽从生物体中提取，然后经过适当的处理制备多肽制品。
但是，生化合成法的制备成本较高，而且多肽种类比较有限。
固相合成法则是根据多肽氨基酸序列设计合成多肽，具有多肽种类多、制备成本低等特点。
基因工程技术法是将编码生物活性多肽的基因重组到表达系统中进行大规模制备，具有易于扩大生产规模的优势。
三、生物活性多肽的应用生物活性多肽在医药领域具有广泛的应用前景。
例如，生长因子和神经肽被用作治疗骨质疏松和伤口愈合的生物制剂；多肽P 则被用于治疗胃溃疡和肠炎等胃肠道疾病；针对某些肿瘤细胞分泌的神经肽如生殖腺激素释放激素被用于对抗癌症细胞，抑制其分裂和生长。
此外，生物活性多肽还可应用于食品、农业和环境等领域。
例如，天然抗菌肽被用于食品防腐和提高生产水平；植物源活性多肽被应用于农业，增加作物产量；环境修复中，具有某些酶活性和生物降解能力的多肽可被用于处理废水和废气。
四、生物活性多肽的未来发展方向随着生物技术的不断进步和人们对健康需求的不断增长，生物活性多肽被赋予了更广泛的应用前景。
现在，越来越多的生物活性多肽正在被开发和研究，如pVAX-1/β-amyloid融合多肽被用于治疗阿尔茨海默病的实验研究。
缔妍娜小分子活性多肽
缔妍娜小分子活性多肽一：什么是缔妍娜活性肽？肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要生理作用，发挥生理功能。
具有活性的多肽称为活性肽，又称生物活性肽或生物活性多肽。
活性肽是一千多种肽的总称（如大豆肽，海参肽等是活性肽中的一种）。
它在人的生长发育，新陈代谢，疾病以及衰老，死亡的过程中起着关键作用。
活性肽是人体中最重要的活性物质。
正是因为它在体内分泌量的增多或减少，才使人类有了幼年，童年，成年，老年直到死亡的周期。
而注射活性肽便打破了生命的这一周期，从而达到延长生命，有效减缓衰老的神奇效果。
肽不仅给人体全方位的营养需求实现了空前的补充，而且它的生理功能、吸收机制和预防作用使得任何营养食品望尘莫及。
科学家们断言：肽——几乎无所不能！发达国家纷纷将生命科学的重点聚焦到生物肽的研发生产，美国2005年把补肽定为国策，日本2006年把补肽定为国策，实行全民补肽。
我国2002年将肽列为国家重点产品开发。
没有肽，就没有生命！二：小分子肽的特点易吸收小分子肽进入人体后，不需消化，直接吸收。
吸收速度快、吸收率高，且无需消耗人体能量。
营养优于蛋白肽具有生理活性，而单个氨基酸没有活性。
肽相比于蛋白质而言无需消化，营养更易吸收。
肽的生物学功能八个字概括，即：抑制——抑制细胞变性，增强机体免疫力。
激活——激活细胞活性，有效清除对人体有害的自由基。
修复——修复受损细胞，维护细胞结构与功能正常。
促进——促进、维持细胞正常的新陈代谢。
三：肽对人体的作用活性肽可预防高血压、高血脂、高血糖、血栓、动脉硬化、心脏病、性障碍，抗氧化、抗疲劳、抗衰老、抗病毒，提高机体免疫力等。
1、提供多种氨基酸，帮助身体制造新的组织替代坏死的组织；2、提供构造新组织所需的氨基酸；3、作为载体促进各营养物质的吸收；4、调节体内的水分、电解质平衡；5、为免疫系统制造对抗细菌和感染的抗体，提高免疫功能；6、帮助伤口血液凝固、促进伤口愈合；7、有助于将食物转化为能量；8、修复细胞，改善细胞代谢，防止细胞变性，能起到防癌、抗癌的作用；9、促进蛋白质，酶，酵素的调控；10、沟通细胞、器官间信息的重要化学信使；11、消除心脑血管疾病；12、改善内分泌与神经系统；13、改善消化系统，改善慢性肠道疾病；14、对风湿、类风湿、糖尿病等效果显著；15、促进造血功能，改善贫血，防止血小板凝集，提高血红细胞的载氧能力；16、抗病毒感染，抗衰老，消除体内多余的自由基。
活性多肽及加工技术
酰半胱氨酸合成酶和谷胱甘肽合成酶的合成以及谷 氨酰转肽酶的降解，同时，构建高效的 ATP再生系 统 ， 实 现 GSH 合 成 –ATP 再 生 的 耦 合 ， 最 终 提 高 GSH的产率和质量。 三、谷胱甘肽在功能食品中的应用 ㈠、面制品加工中应用 加入面制品中，强化氨基酸作用；还原作用。 ㈡、奶制品、婴儿食品加工中应用 防止奶制品酶促和非酶促褐变；改善口味；提高 奶制品品质。 ㈢、肉制品、海鲜制品加工中应用：
二、谷胱甘肽的制备工艺 ㈠、萃取法 利用天然动植物组织细胞存在丰富的谷胱甘肽， 采用物理、化学、生物方法将其细胞壁破坏，使其 中的谷胱甘肽释放出来，再通过离子交换等技术将 其分离出来。 ㈡、发酵法 发酵法生产GSH可采用酵母发酵生产法、重组大 肠杆菌工程菌发酵生产法和固定化细胞 ( 或酶 ) 发酵 生产法。通过选育或构建GSH合成能力强、胞内含 量高的微生物菌种，筛选和优化培养基配方，建立 和优化发酵控制策略等，控制生产过程中γ–谷氨
动物原料经过脱脂、去糖后，得到含量较高的蛋白 质，然后加入特异性蛋白酶进行水解，分离得产物 ㈡、提取法 多肽在高浓度盐存在时发生凝聚并析出沉淀。利 用硫酸铵盐析作用有效性高、pH范围广、溶解度高、 溶液散热少等优点，选择硫酸铵盐析沉淀多肽，然 后进行超滤获得所需要的多肽。 ㈢、自溶法 动物原料在合适温度、pH等条件下，一定时间后 激活细胞内自溶酶系统，水解自身蛋白质产生具有 降血压活性的多肽。 三、降血压肽的功能食品中的应用
CPP在饮料中应用显示出其独特优点：可保持钙、 铁在饮料中的稳定性，有助于形成良好风味。在饮 料中多采用高纯度 CPP ，添加量为钙含量的 0.35 倍 以上。 ㈡、固体食物中应用： 应用：烘焙食品、儿童咖喱饭、口香糖等。 ㈢、其他方面应用： 用于制成胶囊、片剂等。
活性多肽
食物过敏是严重的健康问题， 食物过敏是严重的健康问题，食品过敏者轻则引起皮 重则会危及生命。以高度水解蛋白为基料的食品， 疹，重则会危及生命。以高度水解蛋白为基料的食品，在 预防食品过敏性方面是有效的。 预防食品过敏性方面是有效的。大豆蛋白也是高致敏性物 质蛋白水解物在预防和治疗过敏性方面的作用无疑是开发 研究的一个重要方向。 研究的一个重要方向。
人 体 产 生 自 由 基 的 原 因 ： 危
害 ：
•
“明胶多肽”：系从猪 明胶多肽” 明胶多肽 皮、猪骨中经水解提取的一 种蛋白质类调化剂， 种蛋白质类调化剂，具有嫩 肤、保持皮肤水分和消除面 部皱纹等功效， 部皱纹等功效，既能口服也 可直接添加至美容化妆品中。 可直接添加至美容化妆品中。 如今，明胶多肽在欧洲、 如今，明胶多肽在欧洲、美 国和日本的化妆品领域已得 到广泛应用。 到广泛应用。
注：大米是低抗原性谷物， 大米是低抗原性谷物， 是唯一可免于过敏试验谷物 。
降血压 降胆固醇活性
多 肽 的 功 能 作 用减肥抗来自化调节免疫……
(二) 多肽的生物学作用 二
1.降血压
降血压肽是研究最多的一种生物活性 它可以抑制ACE (血管紧张素转换酶 的 血管紧张素转换酶)的 肽,它可以抑制 它可以抑制 血管紧张素转换酶 活性,从而达到降血压的目的 从而达到降血压的目的。 活性 从而达到降血压的目的。 从大豆分离蛋白中分离得到 11种具有 种具有ACE抑制活性大豆 种具有 抑制活性大豆 肽组分. 肽组分
5.调节免疫
人们已经从大豆蛋白的水解产物中鉴定到了具有免疫 活性的大豆多肽,例如 预防由化疗引起脱发的免疫调节肽 活性的大豆多肽 例如,预防由化疗引起脱发的免疫调节肽 例如 已经从大豆蛋白的酶解中分离得到; 已经从大豆蛋白的酶解中分离得到 大豆蛋白的胰蛋白酶解产物中 的免疫肽具有刺激超氧化阴离 活性氧类)的作用 子(活性氧类 的作用 可以引发 活性氧类 的作用,可以引发 非特定性免疫保护系统
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酪蛋白磷酸肽
结构特点
CPPs是由a-酪蛋白和G-酪蛋白经酶水解、分离纯化而得 到的一类富含有 磷酸丝氨酸和谷氨酸的短肽 。 含有相同的结构，其基本核心结构可表示为： 一SerP — SerP — SerP — Glu — Glu-Glu 具有这种核心结构的磷酸肽分子中带有高度负电荷，能抵抗胃肠消化 酶的攻击而免遭进一步分解，从而在体内仍能发挥其生理功能。
生物活性肽的吸收的特点
生物活性肽 不需消化，直接吸收。它表面有一层保护膜，不会受到人体的促酶 、胃
蛋白酶、胰酶、淀粉酶、消化酶及酸碱物质二次水解，它以完整的形式直 进入小肠，被小肠所吸收，进入人体循环系统，发挥其功能。
吸收特别快。吸收进入循环系统的时间，如同静脉针剂注射一样，快速
发挥作用。
三个主要组分al、a2、a3，冷冻干燥后，用电泳分析其纯度，发现al、a2、a3 均不是单一组分，而是含有2个或3个组分，因此，必须对al、a2、a3进一步分 离。
采用选择性更高的乙酸铵洗脱液代替三氟乙酸洗脱液，对a1、a2、a3 收 集液再进行第二次分离 。
阴离子树脂纯化 CPP 原料：CPP初级品r(N/P)为7.52 凝胶型强酸性阳离子交换树脂 原理：CPP在一定pH下带负电,而NPP带正电. 将一定浓度的 CPP 进样, 带负电的CPP 被吸附于阴离子树脂上 , 用清水将未被吸附的 NPP 洗出 , 然后再用一定浓度的 HCl 洗脱 , 得到CPP洗脱液 大孔强碱性阴离子交换树脂
生物活性肽—酪蛋白磷酸肽
秋记与你分享
静思笃行 持中秉正
生物活性肽
所 谓生物活性肽(Bioactive Peptides，B A P)就是对生物机体的生 命 活动有益或是具有生理作用的肽类，是一类分子量小于6000D ，具有多种生物学功能的多肽。 其分 子结构复杂 程度不一，可从简单的二肽到环形大分子多肽 ，而 且 这些多肽可通过磷 酸化、糖基化或酰基化而被 修 饰 。
访谈结果与析
(4)制成可促进动物体外受精和细胞融合的生化制剂。
thank you!
促进动物体外受精和增强机体免疫力 其原因是CPPs促进精子对钙离子的吸收，增强精子 顶体的反应能力 ，提高精子对卵细胞的穿透能力。
CPPs还具有增强动物机体免疫力的功能，有研究发现
酪蛋白C端的磷酸基团对抗体的识别具有极高的 临界 点。
酪蛋白磷酸肽
CPPs的理化性质
CPPs产品具有良好的溶解性在 pH2.0~10.0内，均高 于90%，且溶解性随pH的增高而增大 。 CPPs产品较酪蛋白具有更好的起泡性和泡沫稳定性。
密度，可作为评价CPPs产品特性的重要指标。
直接定磷法 总 N 测定 半微量凯氏定氮法
应用
CPPs作为一种活性多肽，由于其稳定性好、安全、具有多种生物功能等而具 有相当大的开发应用潜力。其开发应用领域主要有如下几方 面 ：
(1)研制功能性食品。CPPs可作为营养强化剂添加到食品中制成壮骨剂或保
健食品，这方面已由美国、日本等国研究开发成功 。 (2)用于制药，例如用于对佝偻病、牙科病和骨质疏松症等疾病的治疗 。 (3)制成抗蛀牙牙膏、漱口液或含片等。
将沉淀用丙酮、乙醚洗涤后挥发干燥，即得CPPs的复杂混合物 经过阴离子交换树脂处理，除去非磷酸肽，得到含有一定CPP的粗制品。再经过凝
胶过滤柱 (Sephadex G 一25 )，得到不同分子量分布的两大组分CPPA、CPPB
。根据其分子量分布的不同状况，取 CPPA 用于高效液相制备色谱分离 。
反相高效液相色谱是由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系 ，它正好与由极性固定相和弱极性流动相所组成的液相色谱体系（正相色谱 ）相反。
酪蛋白磷酸肽
CPPs的功能
促进牙齿、骨骼中钙的沉积和钙化 具体原理为：CPPs磷酸丝氨酸簇结合钙后，以非结晶
形式定位在牙蚀部位 。
磷酸丝氨酸钙盐提供自由的Ca2+和PO4-缓冲液，减少 了釉质的脱矿，增强其再矿化，从而有效防止牙蚀细菌 的侵蚀和造成脱矿物质的过程 。
酪蛋白磷酸肽
CPPs的功能
用阴离子树脂纯化 CPP , 虽然达到了较好的分离效果 , 但从工业化规模生产 CPP 高纯品的角度来看 , 采用该法也有不 足之处 : 1)树脂在使用前和再生时需转型处理 , 能耗费 用较大 , 生产效率降低 . 2)总的分离时间较长 , 且操作分为两步 , 不利
于扩大生产 .
3)洗脱时使用的是一定浓度的 HCl , 使最终产 品带入了一定的盐分 . 4)从柱中洗脱下来的 CPP 溶液浓度很低 , 后 期浓缩干燥能耗费用较大
CPPs是多种短肽的混合钧，其中大部分肽中含有成簇的磷酸丝氨酸序列 (-Serp—
Serp-Serp-Glu-Glu-)，这一序列也正是CPPs的功能基团，其含量的多少与 CPPs功能特性直接相关．因此，肽链较短，磷酸丝氨酸基团较多的CPPs其持钙能
力最强．而cPPs中磷和氮含量的比值(P／N)能较客观地反映CPPs链长和磷酸基的
使用阳离子树脂纯化 CPP 有如下优点 : 1)阳离子树脂使用前无需转型处理 . 2)用阳树离子树脂纯化洗脱 CPP 只需一步 ,总操作时间只有采用阴离子树脂 时的一半 . 3)用阳离子树脂纯化时洗脱用的是清水 , 未带入盐分 . 4)从交换容量的角度来看 , 在确保 r (N/ P) <5. 5 的前提下 , 还可通过提 高进样浓度来进一步提高得率 , 这样洗脱液中 CPP 的浓度就可以提高 , 减 少了后面一定浓度的溶液后，用2mol／L的NaOH调至pH8.3左右，加人一定量 的胰蛋白酶进行水解，水解过程始终保持溶液pH在7.7～8.5之间，终止水解时加人 1mol／LHcl使溶液pH达4.6．然后离心除去沉淀，在上清液中加人10mL
CaC12溶液至终浓度为100mmol／L，再加入等体积的乙醇，离心收集沉淀，最后
酪蛋白磷酸肽
CPPs的检测
CPPs主要采用高效液相色谱(HPLC)或高效毛细管区带电泳(HPCE)进行 分离，并结合末端氨基酸分析技术以确定各种磷酸肽的一级结构。 直接定磷法、SDS—PAGE法、聚丙烯酰胺等电聚焦 电泳(IF E )法，这三 种方法均可对CPPs进行定量测定，分别适用于产量测定、组分测定和精确 度 测定。
溶解性
起泡性
乳化力 热 稳定 性
CPPs产品乳化力较好。但与酪 蛋白相比下降了约20%
在100℃,30 min条件下杀菌不会对产品外观造成改变
酪蛋白磷酸肽
CPPs的制备
目前工业制备CPPs的方法主要有钙--乙醇沉淀法、膜分离法和离子交换 法3种。其生产过程可大致分为酪蛋白的水解和CPPs的分离两步。 钙--乙醇沉淀法生产CPPs的工艺路线：酪蛋白→胰蛋白酶水解→ 酪蛋 白 水解液→钙--乙醇沉淀→分离→干燥→CPPs产品。 膜分离法生产CPPs的工艺路线 ：酪蛋白→酪蛋白水解液→过滤→分离→ 喷雾干燥→CPPs产品。
RP-HPLC的典型的固定相是十八烷基键合硅胶，典型的流动相是甲醇和乙腈 。RP-HPLC是当今液相色谱的最主要的分离模式，几乎可用于所有能溶于极 性或弱极性溶剂中的有机物的分离。 反相色谱法适于分离非极性、极性或离 子型化合物，大部分的分析任务皆由反相色谱法完成。
用200—300nm的波长对CPPA进行扫描，最大吸收波长为215nm，故选215nm 作为检测波长 。 取不同体积的样品进行试验，考察进样量对于分离的影响。当进样体积为 200- 300μL 时，样品能达到较好的分离
CPPs的功能
酪蛋白磷酸肽
促进矿物质吸收 以钙为例，许多研究证实，CPPs促进钙质吸收的方式有两 种：
一种是在十二指肠的上端，在VD 的存在下，可促使钙以 主动方式吸收。 另外一种是在回肠及其末端，以被动方式吸收，它与前 者不同，不直接受到机体功能、营养状况、年龄等影响。
CPPs促进钙的吸收以后一种方式为主。
CPPs促进 矿物质吸收的机理是：
CPPs带有较多负电荷，既可以抵抗消化道中各种酶的
水解 ，又可以通过磷酸丝氨酰与钙、铁等离子螫合形 成可溶物，从而有效地防止溶解的金 属离子在小肠中 性或偏碱环境中与磷酸根结合而形成磷酸盐沉淀，同 时可有效地增加矿物质在体内的滞留时间，CPPs与金
访谈结果与析
属离子的螯合物被肠 黏膜吸收后再释放出CPPs。
pH 5.5、质量浓度为6g/dL的CPP悬浮液,3000r/min离心15min,取上清 液以350mL/h的体积流量进样,同时测定上清液总氮、总磷含量,计算上清 液的得率和r(N/P).
阳离子树脂纯化 CPP 原理：CPP在一定pH下带负电, 而NPP带正电. 将一定浓度的CPP进样 , 带正电的 NPP 被吸附于阳离子树脂上, 用清水将未被吸附的CPP洗出 , 得到CPP 洗脱液 .
它具有l00％吸收的特点。吸收时，没有任 何废物及排泄物，能被人体
全部利用。
主动吸收。 吸收时，不需耗费人体能量,不会增加胃肠功能负担。
起载体作用。它可将人所食的各种营养物质运载输送到人体各细胞、组
织、器官。
酪蛋白磷酸肽
酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptides，即CPPs)是以牛乳 酪蛋白为原料，经水解、分离纯化而得到的一类富含磷酸丝 氨酸的生物活性肽，它可作为无机离子载体促进肠膜对钙、 铁、锌、硒、尤其是钙的吸收和利用。 由于CPPs具有很强的促钙吸收活性，正成为功能性食品添 加剂的开发和研究热点。