大肠埃希氏菌检验原始记录
五、革兰氏染色试验：用接种针接触菌落（典型菌落或可疑菌落）中心部位，接种至营养琼脂平板上，℃培养h，取培养物进行革兰氏染色试验。
六、鉴定：取营养琼脂培养物进行靛基质试验、MR-VP试验和柠檬酸利用试验。
大肠埃希氏菌检验原始记录
检测项目：大肠埃希氏菌检测依据：GB4789.38-2012（MPN计数法）
生产批号：样品数量：
检测日期：环境湿度：
环境温度：
大肠菌群检验过程：
1、称取样品g（ml）样品放入盛有225ml灭菌的磷酸缓冲液中，充分混匀，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。
2、初发酵试验：每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤,每管接种1ml，℃培养h，观察倒管内产气情况，产气者进行复发酵试验，如未产气，培养至48h±2h，如产气着进行复发酵试验。如所有LST肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果。
三、复发酵试验：用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于已提前预稳至45℃的EC肉汤管中，放入带盖的℃水浴箱内，培养h，检查小倒管内是否有气泡产生，如未有产气则继续培养至48h±2h，记录产气的EC肉汤管数。如所有EC肉汤管均未产气，即可报告大肠埃希氏菌MPN结果；如有产气，则进行EMB平板分离培养。
初发酵和复发酵试验
稀释度
接种管数（支）
初发酵
产气管数（支）
复发酵
产气管数（支）
10-1
-2
10-3
分离培养
□有典型或可疑菌落
□无典型或可疑菌落
革兰氏染色
菌体染色颜色：
生化鉴定
靛基质（I）
甲基红（MR）
VP试验（VP）
柠檬酸盐（C）
鉴定（型别）
检测结果（MPN/g）/（MPN/ml）
检验员：审核：
大肠菌群测定原始记录
时间：检验地点：本厂化验室
检测样品名称：来源：
生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用。
1.取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，
取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。
2.LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，
取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试Байду номын сангаас中，
5．培养：放入36℃的培养箱中培养48h。时间起始：
24h产气管数：
48h产气管数：
6．BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的培养箱中培养48h。
倒入10ml于3只标有1g的并放有聚气管的试管中;剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。
放入灭菌锅灭菌15min.
以上1；2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：
压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。
培养起始时间：
48h产气管数：
7.检索MPN表结论：
备注：
3.样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；
从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;
4.初发酵试验：取1:10的稀释样10ml于标有1g的3只试管中，
取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，
大肠埃希菌检查原始记录
文件编号：************
大肠埃希菌检查原始记录
1.培养基及菌种
胰酪大豆胨液体培养基配制批号： 麦康凯液体培养基配制批号： 麦康凯琼脂培养基配制批号： 菌种编号： 2.增菌预培养
取1： 供试液 ml(相当于1g 或1ml 供试品),接种至 ml （经方法适用性试验确认）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30-35℃培养18-24小时
3.选择和分离培养
①取上述培养物 ml 接种至
ml 麦康凯液体培养基中，42-44℃培养24-48小时
培养起止时间： ；培养箱编号： ；培养温度： ℃ 备注：“+”代表浑浊，“
-”代表未发生浑浊
②取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，30-35℃培养18-72小时 培养起止时间： ；培养箱编号： ；培养温度： ℃ 结果判定： □检出 □未检出
检查人/日期： 复核人/日期：。
大肠埃希氏菌生化鉴定结果
大肠埃希氏菌生化鉴定结果大肠埃希氏菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，可以引起多种感染性疾病，包括腹泻、尿路感染和食物中毒等。
鉴定大肠埃希氏菌的生化特征可以帮助确定病原菌的身份以及其潜在的耐药性和毒力因子。
本次实验目的是对一株致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，以确认其菌株的性质和特征。
首先，我们进行了气体产生实验。
在Triple Sugar Iron Agar（TSI）培养基中，观察到菌落周围发生了气体产生，此结果表明该菌株具有产气性。
产气性通常意味着大肠杆菌等需要葡萄糖产生酸，进而分解产生气体的细菌。
其次，我们进行了甲烷发酵试验。
在Methyl Red（MR）试剂中，当菌液发酵产酸时，溶液颜色由黄色变成红色。
然而，该菌株在MR试剂中没有产生红色反应，这表明它无法通过甲烷发酵产酸。
这一结果与典型的大肠杆菌不同，因为大肠杆菌通常可以通过此途径产酸。
进一步，我们进行了亮氨酸脱氨酶试验。
使用亮氨酸脱氨酶（LDC）培养基，如果菌株具有亮氨酸脱氨酶活性，菌液会变色。
然而，我们观察到该菌株在培养基中没有出现任何颜色变化，这表明它不具备亮氨酸脱氨酶活性。
亮氨酸脱氨酶活性通常是大肠杆菌的典型特征之一。
此外，我们还进行了尿素酶试验。
使用尿素平板培养基，如果菌株具有尿素酶活性，培养基颜色将由黄色变为粉红色。
然而，我们观察到该菌株在培养基上未显示出任何颜色变化。
这暗示着该菌株可能缺乏尿素酶活性，与大肠杆菌的典型特征不同。
最后，我们进行了青霉素酶试验。
使用青霉素酶试纸进行反应检测，在试纸上出现蓝色点状斑点表示菌株具有青霉素酶活性。
而对于这个菌株，我们观察到在试纸上没有出现蓝色斑点。
这意味着该菌株可能对青霉素类药物敏感，这对于抗生素选择治疗提供了重要信息。
综上所述，通过对致病性大肠埃希氏菌样本进行生化鉴定，我们发现该菌株具有产气性，但与典型的大肠杆菌不同，它不表现出甲烷发酵、亮氨酸脱氨酶和尿素酶活性。
大肠埃希菌检验记录
品名: 批号: 检验日期:
二、大肠埃希菌检查按ZLSOP 微生物限度检查操作规程检查
供试液制备和增菌培养
取本品加无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(配制批号: )至100 ml，
用匀浆仪混匀，即得1:10供试液；取相当于1g或1ml供试品的供试液接种至
ml的胰酪大豆胨液体培养基(配制批号: )中，混匀，培养温度℃，
培养24小时，培养箱型号: 培养箱编号wxzl 。
选择和分离培养
取上述培养物1ml接种至100 ml麦康凯液体培养基(配制批号: )中，
培养温度℃，培养小时，培养箱型号: 培养箱编号
wxzl ；取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基(配制批
号: )平板上，培养温度℃，培养72小时，培养箱编号wxzl 。
阳性对照试验
同供试品的大肠埃希菌检查，对照菌的加量不大于100cfu，（大肠埃希菌菌
种来源：，大肠埃希菌菌种编号：）
阴性对照试验
以pH 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液代替供试液按大肠埃希菌检查法检查，结
果见下表：
注: ＋代表麦康凯琼脂平板上有菌落生长，—代表麦康凯琼脂平板
上无菌落生长。
结论 :
检验人: 日期: 复核人: 日期:。
大肠菌群检验原始记录(第二法)
原始记录
共页；第页项目名称大肠菌群样品编号
使用设备名称电热恒温培养箱手提式压力蒸汽消毒器
试验方法标准GB 4789.3-2010(第二
法)
环境条件温度℃，相对湿度 %
以无菌操作将检样25g置于225mL灭菌生理盐水中，混匀后，做成检验所用稀释液：分别将待检样品稀释液接种于2个VRBA平板混匀，待琼脂凝固后，再加3mL-4mLVRBA覆盖平板表层。
翻转平板，置于36℃±1℃温箱内，培养18h-24，计数典型和可疑菌落。
选取典型菌落或可疑菌落进行证实试验，观察产气情况。
稀释度
典型菌落总数cfu/ml n 1
n 2
n 3
n 4
n 5
证实试验从VRBA平板上挑取10个典型菌落或可疑菌落，分别移种于BGLB肉汤管，36℃±1℃温箱内，培养24h-48h.凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
检测结果
备注n为同一批次产品应采集的样品件数；c为最大可允许超出m值的样品数；m为致病菌指标可接受水平的限量值;M为致病菌指标的最高安全限量值
检验人员校核人员检验日期校核日期。
20-6.大肠菌群检验原始记录
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
3
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
4
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长大肠菌群检验原始记录来自检验项目大肠菌群
样品状态
□完好□异常
检验
方法
GB 4789.3—2016（第二法）
仪器
设备
样品
处理
□固体样品：无菌操作称取25g加入到225mL无菌生理盐水均质袋中，拍打1～2min
□液体样品：无菌吸管吸取25mL加入到225mL灭菌生理盐水中，充分混匀
样品
序号
培养过程
稀释倍数
结果计算
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
5
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
琼脂
对照
0 CFU/皿
盐水
对照
0 CFU/mL
检验人：
复核人：
检验日期：
报告CFU/g
100
10-1
10-2
10-3
1
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
2
大肠菌检验原始记录
养生坊大肠菌群检验原始记录表检样名称：样品编号：检验依据：大肠菌群（MPN/100ml）检验方法：每个样品，选择三个连续稀释度的样品稀释液。
1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性。
稀释倍数第一稀释倍数1:10 第二稀释倍数1:100第三稀释倍数1:1000结果菌落数取样日期：检验时间：检验员：检样名称：样品编号：检验依据：大肠菌群（MPN/100ml）检验方法：每个样品，选择三个连续稀释度的样品稀释液。
1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性。
稀释倍数第一稀释倍数1:10 第二稀释倍数1:100第三稀释倍数1:1000结果菌落数取样日期：检验时间：检验员：检样名称：样品编号：检验依据：大肠菌群（MPN/100ml）检验方法：每个样品，选择三个连续稀释度的样品稀释液。
1：10稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管10ml；1：100和1：1000稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管1ml。
将接种管置于36±1℃培养48±2h。
观察试管的产气情况：检查导管内是否有气泡产生，如所有LST肉汤管均未产气，则可报告为大肠菌群阴性。
稀释倍数第一稀释倍数1:10 第二稀释倍数1:100第三稀释倍数1:1000结果菌落数取样日期：检验时间：检验员：。
大肠菌群检验原始记录
二、大肠菌群（MPN/100ml）
蛋白发酵管（10-i）
10-1
10-2
10-3
试管中加入LST肉汤10ml
每管中接入样
品量1ml
产气管数
发酵结果
标准要求
MPN/100g
检验结果MPN/100g
检验起始时间
年月日至年月日
主检：校核：
大肠菌群检验检验原始记录
共页第页
样品名称
放入时培养箱温度
℃
设备名称
取出时培养箱温度
℃
检验依据品放入盛有225ml灭菌的生理盐水中，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。
二、初发酵试验：大肠菌群每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内产气情况。如未产气，培养至48h±2h。
三、复发酵试验：（大肠菌群的测定）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（GBLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气怦况。
大肠埃希氏菌检验原始记录
***疾病预防控制中心
大肠样品名称：收样日期：年月日检测日期：年月日
检测项目：□大肠埃希氏菌检验方法：GB4789.6-2003GB4789.36-2008
□有/□无可疑菌落
TSI
尿素
营养琼脂斜面
氧化酶试验
革兰氏染色
靛基质
甲基红
VP试验
赖氨羧酶试验、
动力试验
麦康凯
平板
显色
平板
备注：
检验人：审核人：检毕日期：年月日
注：□内打“√”表示选定，□内打“×”表示不选定。
仪器设备：□生化培养箱□隔水恒温培养箱□显微镜实验地点：病原微生物室环境条件：℃％RH
样号
样品名称
样品来源
增菌培养
分离培养
初步生化试验
生化试验
血清学
实验
结果
报告
25g检样+225ml
□普通肉汤36±1℃培养6h；
□EC增菌肉汤44.5±0.2℃培养18～24h
接种麦康凯和显色平板，36±1℃分别培养18～24h，
大肠埃希氏菌原始记录表
委托书编号：委托单位：
检测项目：大肠埃希氏菌检测依据：GB/T多管发酵法
样品名称：样品数量：
样品编号：样品状态：
收样日期：检测日期：
环境温度：环境湿度：
操作方法：
一、乳糖发酵实验
1、取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样接种到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样注入到9ml灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml(即水样）注入到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检验一次的，可直接种5份10ml水样双料培养基，每份接种10ml水样。
2、检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，，甚至，，,每个稀释度接种5管，每个水样共15管。接种1ml以下水样时必须作10倍递增稀释后，取lml接种，每递增稀释一次，换用1支lml灭菌刻度吸管。
3、将接种管置36±l°C培养箱内，培养24h±2h,如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸，则可报告为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。
36±1°C
24h±2h
EC-MUG培养基
±°C
24h±2h
观察结果
序号
样品
编号
乳糖发酵
EC-MUG
结果报告(MPN/100mL)
10ml
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
操作人：复核人：