食品的测定实验五食品中蛋白质含量测定(精)
食品分析基本测定的十二个实验
实验一食品中水分含量的测定（常压干燥法）二、实验原理在一定温度（100～105℃）和压力（常压）下，将样品放在烘箱中加热干燥，蒸发掉水分，干燥前后样品质量之差即为样品的水分量。
三、实验仪器1.常压恒温干燥箱2.玻璃称量皿或带盖铝皿3.电子天平4.干燥器四、实验步骤1.将称量皿洗净、烘干，置于干燥器内冷却，再称重，重复上述步骤至前后两次称量之差小于2mg。
记录空皿中m1。
2.称取2.00～3.00g样品于已恒量的称量皿中，加盖，准确称重，记录重量m2。
3.将盛有样品的称量皿置于100～105℃的常压恒温干燥箱中，盖斜倚在称量皿边上，干燥2小时（在干燥温度达到100℃以后开始计时）。
4.在干燥箱内加盖，取出称量皿，置于干燥器内冷却0.5小时，立即称重。
5.重复步骤3、4，直至前后两次称量之差小于2mg。
记录重量m3。
六、注意事项1．固态样品必须磨碎，全部经过20~40目筛，混合均匀后方可测定。
水分含量高的样品要采用二步干燥法进行测定。
2．油脂或高脂肪样品，由于油脂的氧化，而使后一次的质量可能反而增加，应以前一次质量计算。
3．对于黏稠样品（如甜炼乳或酱类），将10g经酸洗和灼烧过的细海砂及一根细玻璃棒放入蒸发皿中，在95～105℃干燥至恒重。
然后准确称取适量样品，置于蒸发皿中，用小玻璃棒搅匀后放在沸水浴中蒸干（注意中间要不时搅拌），擦干皿底后置于95～105℃干燥箱中干燥4小时，按上述操作反复干燥至恒重。
4．液态样品需经低温浓缩后，再进行高温干燥。
5．根据样品种类的不同，第一次干燥时间可适当延长。
6．易分解或焦化的样品，可适当降低温度或缩短干燥时间。
实验二总灰分的测定二、实验原理一定量的样品炭化后放入高温炉内灼烧，使有机物质被氧化分解成二氧化碳、氮的氧化物及水等形式逸出，剩下的残留物即为灰分，称量残留物的质量即得总灰分的含量。
三、仪器与试剂1．实验仪器①电子天平②高温炉③电炉④瓷坩埚⑤坩埚钳⑥干燥器。
蛋白质含量测定实验报告
一、实验目的1. 理解并掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质含量的原理和操作步骤。
2. 学习使用分光光度计进行比色分析。
3. 通过实验，掌握蛋白质含量测定的实际操作，提高实验技能。
二、实验原理考马斯亮蓝法是一种快速、简便的蛋白质定量方法。
该法基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合，蛋白质含量与染料结合程度呈线性关系。
通过测定溶液在特定波长下的吸光度，可以计算出蛋白质的含量。
实验原理：蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与考马斯亮蓝G-250染料发生结合，形成有色的复合物。
该复合物在特定波长下有特征性吸收峰，其吸光度与蛋白质含量呈线性关系。
三、实验材料1. 蛋白质标准品（如牛血清白蛋白）。
2. 考马斯亮蓝G-250染料。
3. 6.0mol/L NaOH溶液。
4. 双蒸水。
5. 分光光度计。
6. 试管、移液器、吸管等实验器材。
四、实验步骤1. 标准曲线制作：将不同浓度的蛋白质标准品配制成溶液，分别加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线制作：根据实验数据，绘制标准曲线，得出线性方程。
2. 样品处理：取待测样品，按照一定比例稀释，加入考马斯亮蓝G-250染料，在特定波长下测定吸光度。
3. 数据处理：根据标准曲线，计算待测样品中的蛋白质含量。
实验结果显示，待测样品中的蛋白质含量为XX g/L。
六、实验讨论1. 实验过程中，应注意操作规范，避免污染和误差。
2. 在制作标准曲线时，应选择合适的浓度范围，保证线性关系良好。
3. 待测样品的稀释倍数应根据实际浓度选择，以保证在检测范围内。
4. 在测定吸光度时，应注意仪器校准和操作，避免误差。
七、实验总结本次实验通过考马斯亮蓝法测定了待测样品中的蛋白质含量，实验结果准确可靠。
实验五考马斯亮蓝法测定食品中蛋白质的含量新
实验五考马斯亮蓝法测定食品中蛋白质的含量一、目的:1.掌握考马斯亮蓝G一250染色法测定蛋白质的原理和操作;2.了解分光光度法测定蛋白质的几种方法;3.进一步熟悉分光光度计的使用；数据处理。
二、原理分光光度法测定蛋白质的几种方法1、双缩脲法:在碱性条件下，蛋白质能与铜离子结合形成紫红色络合物，540nm, 1-10g/L。
与蛋白质的相对分子量及氨基酸组成无关，快速，不受硫酸铵干扰。
灵敏度低，需要样品量大。
2、Folin-酚试剂法(Lowry法) :在碱性条件下，蛋白质首先与铜离子形成紫红色络合物，该络合物以及Tyr，Trp残基还原Folin试剂，产生深蓝色。
750nm，0.03-3g/L或500nm，0.05-0.5g/L。
灵敏度高，需要样品量少；但干扰因素多，操作试剂配制麻烦，不同蛋白质之间差异大。
3、考马斯亮蓝染色法：在酸性环境下，棕红色的考马斯亮蓝与蛋白质通过疏水力相结合成蓝色化合物，595nm，颜色深浅与蛋白质含量成正比。
0.01-1g/L，灵敏度高，需要样品量少，不同蛋白质之间差异大。
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中呈棕红色，最大吸收峰在465nm;当它与蛋白质通过范德华键结合成复合物时变为蓝色，其最大吸收峰移至595nm，而且消光系数更大。
研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。
在一定蛋白质浓度范围内(1～1000ug/ml），蛋白质―染料复合物在595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
蛋白质与考马斯亮蓝G-250的结合十分迅速，约2min即可反应完全，其复合物在1h内保持稳定。
由于蛋白质一染料复合物具有很高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1ug）。
由于染色法简单迅速，抗干扰性强，灵敏度高，线性关系好，近年来在某些方面有取代经典的Lowry法的趋势，是一种较好的蛋白质快速微量测定方法。
紫外分光光度法测定蛋白质含量_百度文库(精)
教材1 紫外分光光度法测定蛋白质含量一、实验目的学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理;掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术;掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。
二、实验原理紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法, 它是研究分子吸收190nm ～750nm 波长范围内的吸收光谱，是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。
紫外-可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果，其吸收光谱为分子光谱，是带光谱。
进行定性:利用紫外-可见吸收光谱法进行定性分析一般采用光谱比较法。
即将未知纯化合物的吸收光谱特征，如吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状与已知纯化合物的吸收光谱进行比较。
定量分析: 紫外-可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯-比尔定律：A=lgI0/I=εbc ，当入射光波长λ及光程b 一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A 与该物质的浓度c 成正比，即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度成线形关系。
因此，通过测定溶液对一定波长入射光的吸光度，就可求出溶液中物质浓度和含量。
由于最大吸收波长λmax 处的摩尔吸收系数最大，通常都是测量λmax 的吸光度，以获得最大灵敏度。
光度分析时，分别将空白溶液和待测溶液装入厚度为b 的两个吸收池中，让一束一定波长的平行单色光非别照射空白和待测溶液，以通过空白溶液的透光强度为I 0，通过待测溶液的透光强度为I ，根据上式，由仪器直接给出I 0与I 之比的对数值即吸光度。
紫外-可见分光光度计:紫外-可见吸收光谱法所采用的仪器称为分光光度计，它的主要部件有五个部分组成，即由光源发出的复合光经过单色器分光后即可获得任一所需波长的平行单色光, 该单色光通过样品池静样品溶液吸收后，通过光照到光电管或光电倍增管等检测器上产生光电流，产生的光电流由信号显示器直接读出吸光度A 。
可见光区采用钨灯光源、玻璃吸收池; 紫外光区采用氘灯光源、石英吸收池。
实验五 蛋白质浓度测定方法比较
实验五蛋白质浓度测定方法比较一．实验目的：了解蛋白质浓度的测定方法(Lowry法、紫外线吸收法和考马斯亮蓝显色法)，并比较它们的优缺点。
二．Lowry法（Folin-酚法）：1．实验原理：OH－磷钼酸、磷钨酸Pr+CuSO4Pr-Cu络合物（紫红色）蓝色复合物蛋白测定范围：25-250ug/ml 测定波长：660nm标准蛋白BSA 250ug/ml2．试剂和器材：3．操作方法：（2）以A660nm-[Pr] 作标准曲线：4．实验结果：从标准曲线上可求得待测蛋白浓度(平均)：116μg/ml三．紫外线（UV）吸收法：方法一：作图法1．实验原理：利用蛋白质在280nm 的紫外吸收特性(蛋白测定范围：0.1～1mg/ml) 2．操作步骤：标准蛋白BSA 1mg/ml （1）向各试管中依次加入各种试剂：4．实验结果：A280nm-[Pr]标准曲线0.10.20.30.40.50.60.700.20.40.60.81 1.2[Pr](mg/ml)A 280n m从标准曲线上可求得待测蛋白浓度(平均)：0.128mg/ml 方法二：经验公式法分别测出待测蛋白A260、A280蛋白质浓度（mg/ml ）＝1.45A280-0.74A260 或蛋白质浓度（mg/ml ）1.55A280-0.76A260 四．考马斯亮蓝显色法（Brad-forol 法）：1． 实验原理：[ Pr ] CBBG-250- Pr 复合物 A 595 测定Pr 范围： 0~250ug/ml标准蛋白BSA 250ug/ml 测定波长595nm 2．试剂和器材：考马斯亮蓝试剂；标准蛋白质溶液：250μg/ml BSA ；测试样品 试管及试管架，0.1及5ml 吸量管，恒温水浴，722型分光光度计。
3．操作步骤：（1）依次向各试管中加入各种试剂（2）以A595-[Pr]作出标准曲线： 4．实验结果：A595-[Pr]标准曲线00.10.20.30.40.50.650100150200250300[Pr](μg/ml)A 595从标准曲线上可求得待测蛋白浓度(平均)：117μg/ml 五、试验分析：Lowry 法是双缩脲法的进一步发展，是一种可靠的蛋白质含量测定法。
蛋白质含量的测定方法及原理
蛋白质含量的测定方法及原理一、紫外吸收法。
紫外吸收法是一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是根据蛋白质在280nm波长处的特征吸收峰来进行测定。
在实验中，首先将待测样品溶解于适量的缓冲液中，然后使用紫外可见分光光度计测定样品在280nm处的吸光值，通过标准曲线的对照，可以计算出样品中蛋白质的含量。
二、比色法。
比色法是另一种常用的蛋白质含量测定方法，其原理是利用蛋白质与某些特定试剂发生化学反应后产生显色物质，通过测定显色物质的吸光值来计算样品中蛋白质的含量。
常用的试剂包括布拉德福试剂、伯杰试剂等，不同试剂适用于不同类型的蛋白质测定。
三、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子与蛋白质中的蛋白质酰基发生还原反应的测定方法。
其原理是将待测样品与BCA试剂混合后在60℃条件下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
四、Lowry法。
Lowry法是一种以菁蓝G与蛋白质发生化学反应产生显色物质的测定方法。
其原理是将待测样品与碱液、菁蓝G和还原剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
五、总蛋白法。
总蛋白法是一种直接测定样品中总蛋白含量的方法，其原理是将待测样品与总蛋白试剂混合后在室温下反应，然后使用分光光度计测定产生的显色物质的吸光值，通过标准曲线计算出样品中蛋白质的含量。
总结，蛋白质含量的测定方法及原理有多种，每种方法都有其适用的样品类型和测定条件，研究人员可以根据自己的实验需要选择合适的方法进行蛋白质含量的测定工作。
希望本文所介绍的内容能为相关领域的研究工作提供一定的参考价值。
实验五 Folin酚法测定蛋白质含量
下次实验：SDS-PAGE
然后，蛋白质Cu2+ 复合物中所含的酪氨酸或色氨酸残基 还原乙试剂中的磷钼酸和磷钨酸，生成蓝色的化合物 （钼蓝和钨蓝混合物）。
该呈色反应在 30min内即接近极限，并至少可稳定几小 时。
在一定浓度范围内，蓝色的深浅与蛋白质含量呈线性关 系，所以，可用比色的方法确定蛋白质的含量。
Fo1in－酚法测定蛋白质含量灵敏度较高。在640nm下 测定范围是25－250微克。
Fo1in—酚法是双缩脲法的发展。 Folin-酚试剂由甲试剂与乙试剂组成。
– 甲试剂由碳酸钠、氢氧化钠、硫酸铜及酒石酸钾钠组 成。（碱性）
– 乙试剂由磷钼酸和磷钨酸组成。（在碱性中极不稳定）
反应过程分为两步：
首先，在碱性溶液中，蛋白质分子中的肽键与碱性铜试 剂中的 Cu2+作用生成蛋白质Cu2+ 复合物；
该呈色反应在30min内即接近极限并至少可稳定几小在一定浓度范围内蓝色的深浅与蛋白质含量呈线性关系所以可用比色olin-酚试剂法（Lowry法）
一、目的和要求
学习Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法。 进一步掌握分光光度法——求标准曲线、准确测
（一）试剂 1.标准BSA溶液：250μg／mL。 2.Fo1in—酚试剂甲 3.Fo1in—酚试剂乙 4.蛋清：稀释后用。
（二）器材 1.试管及试管架 2.吸量管(5、1、0.5mL) 3.722型分光光度计 4.电热恒温水浴
Fo1in—酚试剂甲的配制
由下述四种溶液配制： (1)4％碳酸钠溶液；和 (2)0.2mol/L氢氧化钠溶液； (3)1％硫酸铜(CuS04·5 H20)溶液； (4)2％酒石酸钾钠溶液。
此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。 本实验以蛋清为材料，测定蛋清的蛋白质含量。
食品六大营养素成分检测实验方法(蛋白质、脂肪、还原糖、维生素C、酸度等)
食品检测实验实验一、饼干中水分含量的测定一、目的与要求1、了解采用常压干燥法法测定食品中水分的方法。
2、熟练和掌握烘箱、分析天平使用方法及恒重等基本操作。
3、明确造成测定误差的主要原因。
二、原理食品中的水分一般是指在100℃左右直接干燥的情况下，所失去物质的总量。
食品中的水分受热以后，产生的蒸汽压高于空气在电热干燥箱中的分压，使食品中的水分被蒸发出来。
同时由于不断地供给热能和不断地排走水蒸汽，而达到完全干燥的目的。
三、仪器及试剂1、铝制或玻璃制的扁形称量瓶，内径35mm 以下，高60 mm ~70mm ；2、电热恒温干燥箱；3、分析天平；4、干燥器；5、研钵。
四、操作步骤1、将称量瓶清洗干净，置于95~105℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，加热0.5~1.0h ，取出盖好，置干燥器内冷却0.5h ，精确称量，并重复干燥至恒重。
2、称取2.00-10.00g 磨细的样品，放入此称量瓶中，样品厚度约为5mm ，加盖称量后，置95~105℃干燥箱中，瓶盖斜支于瓶边，干燥2~4h 后，盖好取出，放入干燥器内冷却0.5h 后精确称量。
然后再放入95~105℃干燥箱中干燥1h 左右，取出，放干燥器内冷却0.5h 后再称量。
至前后两次质量差不超过2mg ，即为恒重。
五、结果计算 X= 3121m m m m --×100％ 式中 X ：样品中水分的含量，％m 1：称量瓶和样品的质量，g ；m 2：称量瓶和样品干燥后的质量，g ；m 3：称量瓶的质量，g 。
六、说明在常压干燥法法测定食品中水分含量时，产生误差的主要原因有以下几点：1、 样品中含有非水分易挥发性物质（酒精、醋酸、香精油、磷脂等）；2、样品中的某些成分和水分的结合，使测的结果偏低（如蔗糖水解为二分子单糖），主要是限制水分挥发；3、食品中的脂肪与空气中的氧发生氧化，使样品重量增重；4、在高温条件下物质的分解（如果糖对热敏感，）产生水分，使测量值变大；5、 被测样品表面产生硬壳，妨碍水分的扩散；尤其是对于富含糖分和淀粉的样品，测量值变小；6、 烘干结束放入干燥器过程中样品重新吸水，测量值变小。
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（二）仪器
微量定氮蒸馏装置：
1、电炉； 2、水蒸气发生器（2L平底烧瓶）；3、螺 旋夹a；4、小漏斗及棒状玻璃塞（样品入口处）；5、 反应室；6、反应室外层；7、橡皮管及螺旋夹b；8、 冷凝管；9、蒸馏液接收瓶。
四、实验步骤
1、样品消化 称取黄豆粉约0.3g（±0.001g），移入干燥的100mL 凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜和6g硫酸钾，稍摇匀后瓶 口放一小漏斗，加入20mL浓硫酸，将瓶以450角斜支于 有小孔的石棉网上，使用万用电炉，在通风橱中加热消 化，开始时用低温加热，待内容物全部炭化，泡沫停止 后，再升高温度保持微沸，消化至液体呈蓝绿色澄清透 明后，继续加热0.5h，取下放冷，小心加20mL水，放冷 后，无损地转移到100mL容量瓶中，加水定容至刻度， 混匀备用，即为消化液。
七、思考题
1、预习凯氏定氮法测定蛋白质的原理及操作。 2、蒸馏时为什么要加入氢氧化钠溶液？加入 量对测定结果有何影响？ 3、在蒸汽发生瓶水中、加甲基红指示剂数滴 及数毫升硫酸的作用是什么？若在蒸馏过程中 才发现蒸汽发生瓶中的水变为黄色，马上补加 硫酸行吗？ 4、实验操作过程中，影响测定准确性的因素 有哪些？
三、仪器与试剂
（一）试剂 1、硫酸铜（CuSO4· 5H20） 2、硫酸钾 3、硫酸（密度为1.8419g/L） 4、硼酸溶液（20g/L） 5、氢氧化钠溶液（400g/L） 6、0.01mol/L盐酸标准滴定溶液。 7、混合指示试剂：0.1%甲基红乙溶液液1份，与 0.1%溴甲酚绿乙醇溶液5份临用时混合。 8、黄豆粉。
4、样品滴定 以0.01mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色为终点。 5、数据记录 样品消化液（mL） 消耗盐酸标准溶液平均值（mL）（三次测定的 平均值）
五、结果计算
式中 X——样品蛋白质含量（g/100g）； V1——样品滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）； V2——空白滴定消耗盐酸标准溶液体积（mL）； c——盐酸标准滴定溶液浓度（mol/L）； 0.0140 —1.0mL盐酸标准滴定溶液相当的氮的质量（g）； m——样品的质量（g）； F——氮换算为蛋白质的系数，一般食物为6.25；乳制品 为6.38；面粉为5.70；高梁为6.24；花生为5.46；米为 5.95；大豆及其制品为5.71；肉与肉制品为6.25；大麦、 小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵5.30。 计算结果保留三位有效数字。
实验三 食品中蛋白质含量测定 （凯氏定氮法）
标准依据： 5009．5-2003食品中蛋白质含量测定
Hale Waihona Puke 一、目的与要求 1、学习凯氏定氮法测定蛋白质的原理。 2、掌握凯氏定氮法的操作技术，包括样品的 消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。 二、实验原理 蛋白质是含氮的化合物。食品与浓硫酸和催化 剂共同加热消化，使蛋白质分解，产生的氨与 硫酸结合生成硫酸铵，留在消化液中，然后加 碱蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再用盐酸标 准溶液滴定，根据酸的消耗量来乘以蛋白质换 算系数，即得蛋白质含量。 因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质， 所以此蛋白质称为粗蛋白。
3、碱化蒸馏
量取硼酸试剂20mL于三角瓶中，加入混合指示剂2~3 滴，并使冷凝管的下端插入硼酸液面下，在螺旋夹a关 闭，螺旋夹b开启的状态下，准确吸取10.0mL样品消 化液，由小漏斗流入反应室，并以10mL蒸馏水洗涤进 样口流入反应室，棒状玻塞塞紧。使10mL氢氧化钠溶 液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，用少 量水冲洗立即将玻塞盖坚，并加水于小玻杯以防漏气， 开启螺旋夹a，关闭螺旋夹b，开始蒸馏。通入蒸汽蒸 腾10min后，移动接收瓶，液面离开凝管下端，再蒸馏 2min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下三角 瓶，准备滴定。 同时吸取10.0mL试剂空白消化液按上法蒸馏操作。
六、注意事项及说明
1、本法也适用于半固体试样以及液体样品检测。半固体试样一般取 样范围为2.00g~5.00g；液体样品取样10.0mL~25.0mL（约相当氮 30mg~40mg）。若检测液体样品，结果以g/100mL表示。 2、消化时，若样品含糖高或含脂及较多时，注意控制加热温度，以 免大量泡沫喷出凯氏烧瓶，造成样品损失。可加入少量辛醇或液体 石蜡，或硅消泡剂减少泡沫产生。 3、消化时应注意旋转凯氏烧瓶，将附在瓶壁上的碳粒冲下，对样品 彻底消化。若样品不易消化至澄清透明，可将凯氏烧瓶中溶液冷却， 加入数滴过氧化氢后，再继续加热消化至完全。 4、硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则氨吸收减弱，造成检测 结果偏低。可把接收瓶置于冷水浴中。 5、在重复性条件下获得两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术 平均值的10%
试剂空白实验：取与样品消化相同的硫酸铜、硫酸 钾、浓硫酸，按以上同样方法进行消化，冷却，加水定 容至100mL，得试剂空白消化液。
2、定氮装置的检查与洗涤
检查微量定氮装置是否装好。在蒸气发生瓶内 装水约三分之二，加甲基红指示剂数滴及数毫 升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠 （或沸石）以防止暴沸。 测定前定氮装置如下法洗涤2~3次：从样品进 口入加水适量（约占反应管三分之一体积）通 入蒸汽煮沸，产生的蒸汽冲洗冷凝管，数分钟 后关闭夹子a，使反应管中的废液倒吸流到反 应室外层，打开夹子b由橡皮管排出，如此数 次，即可使用。