分子病理学原理和实践
分子病理科普
分子病理科普
分子病理学是一门研究疾病发生和发展的分子机制的学科。
它通过研究细胞和组织水平上的分子变化和异常情况，揭示了疾病的分子基础。
分子病理学是现代医学的重要组成部分，它为疾病的预防、诊断和治疗提供了重要的依据和方法。
分子病理学的研究对象主要包括基因、蛋白质、细胞信号传导和代谢通路等。
通过研究疾病发生过程中这些分子的异常变化，可以了解疾病的发展机制，并为疾病的治疗提供新的靶点和策略。
分子病理学在临床上有着广泛的应用。
例如，通过检测病人的基因突变，可以确定某些遗传性疾病的诊断和风险评估；通过检测肿瘤细胞中的分子标志物，可以指导肿瘤的治疗方案选择和预后评估；通过研究病毒的分子结构和机制，可以开发出更有效的抗病毒药物。
分子病理学的发展还推动了个体化医学的进展。
通过对病人的个体基因组进行分析，可以根据其遗传变异的不同，制定个性化的诊疗方案，提高治疗效果和减少不必要的药物副作用。
总之，分子病理学的发展为了解疾病的基本机制提供了新的途径和工具，也为疾病的诊断和治疗带来了新的突破。
分子病理学的普及和应用将有助于提高医疗水平，推动医学科学的发展。
分子病理的原理
分子病理的原理
嘿，咱今天来聊聊分子病理的原理哈。
你可以把细胞想象成一个小小的世界，里面有各种各样的分子在忙碌地工作着。
分子病理呢，就是专门去研究这些小分子们到底在搞什么名堂。
就好像我们去了解一个社区里每个人的角色和行为一样。
在细胞这个小世界里，基因就像是“老大”，指挥着一切。
而分子病理呢，就是要搞清楚基因有没有出错，或者其他分子有没有“调皮捣蛋”。
比如说，有些疾病就是因为基因发生了突变，就像原本走在正确道路上的指示牌突然被弄歪了。
分子病理就是要找到这些歪掉的指示牌，然后告诉我们问题出在哪儿。
它还能帮助医生们更精准地诊断疾病呢。
就像有了一个超级放大镜，可以看清细胞里那些细微的变化。
通过对分子层面的分析，医生们就能更准确地判断病情，然后给出最合适的治疗方案。
总之，分子病理就像是细胞世界里的侦探，一点点地揭开那些隐藏的秘密，为我们的健康保驾护航呢！是不是很神奇呀？
原创不易，请尊重原创，谢谢!。
分子病理学临床应用
分子病理学临床应用分子病理学是指应用分子生物学技术和方法来研究疾病的发生机制、发展过程以及预后并指导个体化治疗的一门学科。
随着科技的不断发展，分子病理学在临床医学中的应用越来越广泛。
本文将重点探讨分子病理学在临床应用中的重要性以及具体应用情况。
一、疾病诊断分子病理学在疾病的诊断中发挥着重要作用。
通过分析患者的组织样本或血液样本中的分子水平变化，可以帮助医生更准确地诊断出疾病类型。
例如，通过检测乳腺癌组织中HER2基因的表达水平，可以预测患者对于靶向HER2治疗的敏感性，从而为个体化治疗提供依据。
二、预后评估分子病理学还可以用于评估疾病的预后。
某些疾病在分子水平上的变化可以反映疾病的恶化程度以及预后情况，有助于医生为患者制定更加精准的治疗方案。
比如，肺癌患者是否具有EGFR基因突变将直接影响其对于靶向治疗的疗效和预后。
三、靶向治疗分子病理学在靶向治疗中具有不可替代的地位。
通过检测患者的病灶组织或体液样本中的分子标记物，可以帮助医生确定最有效的靶向治疗药物，并避免患者接受无效的治疗。
分子病理学还可以监测患者在治疗过程中的治疗反应，帮助调整治疗方案以达到更好的疗效。
四、药物研发分子病理学在药物研发领域也发挥着重要作用。
通过研究疾病发生发展的分子机制，可以发现新的治疗靶点并设计出针对性更强的药物。
分子病理学的发展促进了个体化药物治疗的实现，为疾病的治疗带来了新的希望。
五、预防和筛查分子病理学还可以用于疾病的预防和筛查。
通过检测患者的遗传基因或体液标志物，可以精确评估患病风险并制定相应的预防策略。
分子病理学的应用可以帮助提前发现疾病，提高治疗成功率和生存率。
总结来看，分子病理学在临床应用中扮演着不可或缺的角色。
它为医生提供了更加准确的诊断、预后评估和个体化治疗方案，促进了药物研发和疾病的预防筛查。
随着分子病理学技术的不断发展和完善，相信其在临床医学中的应用将会得到更进一步的推广和深化。
分子病理学常用研究技术原理及应用
好
好
缺点
细胞分布不均匀，细胞分布不均 细胞分布不均 适用细胞种类较
易重叠，影响标 匀
匀，易重叠， 少
记效果
影响标记效果
组织固定
定义：将组织浸入适当化学试剂，使细胞内 物质尽量接近其生理状态时的形态结 构和位置的过程
意义： 防止自溶 防止腐败 最大限度保存细胞和组织的抗原性 保留特殊成分：糖原、核酸、色素等
神经轴突染色
轴突有嗜银性，常用银浸镀法、甘 氨酸银浸镀法和Holmes氏法染色
周围神经干病变可用此法了 解神经纤维破坏程度及范围， 如麻风病、维生素B1缺乏症 或一些中毒性周围神经疾病 等
神经髓鞘染色
髓鞘（myelin）是包裹在神经轴突外面的节段性管状鞘，是由雪旺氏细胞的 胞膜（周围神经纤维）或少突胶质细胞的胞膜（中枢神经纤维）包卷轴突作 螺旋状盘绕。髓鞘由鞘磷脂构成，含60%的类脂质和40%的蛋白质
科研人员可同时研究几百甚至上千种不同阶段病理生理状态下的 组织样本的某一个或多个特定基因或相关表达产物
Tissue Microarray
组织病理制片技术
显微切割：microdissection
选取同质性研究材料，是在对组织的深入研究中 常常遇到却又不易解决的问题
该技术是在显微状态下或显微直视下通过显微操作系统对选 择的材料（组织、细胞、细胞群、细胞内组分或染色体带等） 进行切割分离并收集用于后续研究的技术
碳酸锂苏木素法、砂罗铬花青法、四氧化锇法、Weil氏铁明矾苏木素法、 Weigert铁苏木素法、Kultsohitsky酸性苏木素锇酸法、Luxol氏坚牢蓝甲 苯酚紫法和Marchi氏锇酸法等。
神经胶质细胞染色
氯化金升汞法、PTAH法、Holzer氏磷钼酸结晶紫法、 Scharenberg氏法、Rio-Hortega氏法等，均属镀金法，在加 入二氯化汞的氯化金溶液中，星形胶质细胞具有嗜金性。 神经胶质细胞瘤与脑膜瘤、室管膜瘤等鉴别时往往需要做胶质 细胞染色
分子病理学
分子病理学分子病理学是一门研究疾病发生发展与分子机制，利用基因组学、蛋白质组学等分子生物学技术以及其他化学和生物学手段来诊断、预测和治疗疾病的现代研究领域。
分子病理学对于疾病的诊断和治疗具有非常重要的意义。
本文将通过介绍分子病理学的发展历程、疾病诊断与预测以及分子病理学在精准医疗中的应用等方面，来进一步探讨分子病理学的研究进展和未来发展趋势。
一、分子病理学发展历程分子病理学最初是在20世纪70年代开始形成的，当时，人们已经开始利用基因工程技术来研究疾病的发病机制。
1980年代，随着PCR技术的发展和引入，分子病理学的研究范围迅速扩大，从单个基因和获得全基因组序列开始。
1990年代以来，随着各种高通量技术的不断发展，人类基因组计划的开展和完成，分子病理学学科的研究内容也越来越广泛和深入。
目前，分子病理学已经形成了一套完整的理论和方法体系，成为临床诊断和治疗的重要手段。
二、分子病理学在疾病诊断与预测中应用1. 基因诊断基因诊断是指通过基因筛查技术来确定患者所患疾病的类型和表现形式。
在分子病理学中，基因诊断是一项非常重要的诊断手段，在许多疾病的诊断和预测中都有广泛的应用。
目前，许多遗传性疾病如血友病、先天性肥胖、囊性纤维化等已经可以通过基因诊断技术来进行检测和诊断。
2. 肿瘤诊断肿瘤诊断是指通过检测肿瘤组织中的某些分子标志物，来确定肿瘤类型和分级。
分子病理学在肿瘤诊断中具有不可替代的作用，它可以通过检测肿瘤相关基因的异常表达、蛋白质的结构和功能等信息，来确定肿瘤的性质和分子机制，为合理治疗提供参考指导。
3. 疾病预测分子病理学技术可以利用生物标志物对疾病的风险进行预测，这对于早期诊断和治疗非常重要。
例如，对于心血管疾病的预测，可以通过检测某些血液生物标志物，进行实时监测和风险评估，从而减少疾病的发生和发展。
三、分子病理学在精准医疗中的应用精准医疗是一种基于分子诊断技术的高度个性化的治疗方法，它可以根据患者的个体差异，采用不同的治疗方案，提高治疗效果。
分子病理学课程的教学实践和总结
分子病理学课程的教学实践和总结分子病理学课程的教学实践和总结近年来，随着科学技术的不断发展与进步，分子病理学作为生物医学领域的重要学科之一，得到了越来越多的关注和重视。
为了更好地培养学生的科学素养和分子病理学专业技能，我校开设了分子病理学课程，并将其纳入生物医学专业的核心课程之中。
经过几年的教学实践和总结，我们取得了一定的教学效果和经验。
现将我校分子病理学课程的教学实践和总结做以介绍。
一、教学目标分子病理学课程旨在让学生了解和掌握分子病理学的基本概念、理论和实践技能，培养其独立思考和解决实际问题的能力。
具体包括以下几个方面：1. 理论基础：学生要了解细胞与分子生物学的基本概念和原理，包括DNA、RNA、蛋白质的结构与功能、基因的表达调控等。
2. 实验技术：学生要了解和熟悉分子生物学实验技术的常用方法和操作流程，如核酸提取、PCR、蛋白质电泳等。
3. 疾病诊断与治疗：学生要了解常见疾病的分子机制和诊断方法，以及与疾病相关的药物治疗和分子靶点的研究进展。
二、教学内容和方法分子病理学课程的教学内容主要包括理论讲解、实验操作和案例分析等。
在理论讲解方面，我们采用PPT讲授的方式，结合经典案例和最新研究成果，向学生介绍和讲解各个知识点和概念。
在实验操作方面，我们设置了多个实验环节，以鼓励学生亲自动手进行核酸提取、PCR扩增、蛋白质电泳等基本实验操作，并通过实验报告的形式进行评估。
在案例分析方面，我们设计了一系列与疾病相关的典型案例，要求学生结合所学知识进行分析和解决问题。
此外，我们还安排学生进行文献检索和实验设计的练习，培养其科学研究和创新能力。
三、教学成果和问题经过几年的教学实践，我们发现学生对于分子病理学的兴趣明显增加，能够主动积极参与课堂教学和实验操作。
他们不仅能够掌握基本理论和实验技术，而且在案例分析和文献阅读方面也能够有所建树。
另外，学生对于分子机制与疾病诊断治疗的关联性也有了更深入的理解，对于发现新的治疗方法和药物靶点有了更广阔的想象空间。
分子病理与分子分型 -回复
分子病理与分子分型-回复分子病理与分子分型的概念和应用范围首先需要进行介绍。
分子病理是一门研究疾病发生和发展机制的学科，通过分析和检测患者体内的遗传物质（例如DNA、RNA和蛋白质等）来揭示疾病的分子机理。
而分子分型则是利用分子病理技术对疾病进行分类，根据不同分子标志物的表达情况或遗传变异来划分疾病的亚型，从而更好地指导临床诊疗和个体化治疗。
一、分子病理的基本原理和技术：1. DNA/RNA提取与纯化：通过特定蛋白酶对组织样本中的细胞膜进行消化，并利用酚/氯仿法或商业化的DNA/RNA提取试剂盒提取和纯化细胞内的DNA/RNA。
2. PCR（聚合酶链反应）技术：通过PCR技术可以扩增和放大DNA/RNA 片段，从而检测微量的遗传物质。
PCR技术广泛应用于基因突变的筛查和基因表达的定量分析。
3. 千基测序技术（Next Generation Sequencing，简称NGS）：NGS 技术能够同时测定大规模的DNA/RNA序列，不仅可以用于基因突变的检测，还可以用于基因表达谱的测定，从而更全面地了解疾病的分子机理。
4. 免疫组织化学（Immunohistochemistry，简称IHC）：IHC技术利用特异性抗体对标靶分子进行染色标记，从而实现对蛋白质的定量和定位分析。
IHC技术可以用于检测癌症标志物以及预测患者的治疗反应和预后。
5. 荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization，简称FISH）：FISH技术是一种直接观察基因本座和染色体结构的方法，通过用标记探针对DNA/RNA特定区域的杂交反应，从而实现对特定基因的定位分析。
FISH技术常用于染色体异常的检测和基因扩增的定量。
6. 质谱分析（Mass Spectrometry，简称MS）：MS技术是一种用于分析和鉴定分子式和结构的方法，可以定量测定蛋白质和小分子代谢物等。
质谱分析有助于扩大分子病理学的研究领域，如蛋白质组学和代谢组学。
分子病理 科普
分子病理科普
分子病理是一种新兴的学科，主要通过检测器官、组织或体液中的基因、RNA、蛋白质等分子变化，对疾病进行分析、诊断和临床进程预测等。
分子病理不同于传统的病理学，是病理学中的多学科融合的新兴学科，在疾病的诊断、鉴别诊断、肿瘤个性化治疗和预后判断等方面都发挥着重要作用，逐渐成为精准医学的重要支柱。
分子病理的检测技术有很多，如原位杂交检测、聚合酶链式反应（PCR）、高通量测序（NGS）、循环肿瘤细胞（CTC）及流式细胞技术等。
在肿瘤个性化治疗方面，分子靶向治疗是当前肿瘤治疗的热点，分子靶向药物针对特异的分子靶点，因此患者在采用靶向治疗前必须对相应的分子靶点进行分子病理检测，如乳腺癌 HER2基因扩增状态检测，非小细胞肺癌EGFR等基因突变检测，结直肠癌KRAS等基因突变检测等。
这些分子病理检测结果都是选择相应的分子靶向药物治疗的基础，是指导治疗方案制定和获得更好疗效的依据。
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The design and validation of predictive biomarkers for treatment response and disease progression
设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测
The susceptibility of individuals of different genetic constitution to develop cancer
不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性
二、常用分子病理学诊断法
PCR 聚合酶链反应 FISH 荧光原位杂交 Microarray 基因芯片
PCR发明者获得诺贝尔化学奖
三、PCR(结合DNA测序)技术在 分子病理诊断中的应用
基因突变检查
EGFR k-ras c-kit
B-raf PIK3CA PDGFRA
k-ras基因被激活最常见的方式是点突变,多发生在 N端第12,13和61密码子,其中又以第12密码子突变 最常见,为GGT突变成GAT或GTT
20－50％结直肠癌发生K-ras基因突变
第12和13密码子突变占90％，第61密码子 占5％
k-ras突变的临床意义
K-ras基因突变型患者不能从抗EGFR治疗中获益， 反而增加不良反应危险和治疗费用
c-kit和PDGFRA突变检测
在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义
c-kit 基因第11、9、13和17外显子存在突变 突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性
大多数GIST（65－85％）的基因突变发生在 c-kit的第11或9外显子
PDGFRA基因第12和18外显子存在突变
C-kit突变与临床治疗
基 本 原 理
组织切片脱蜡
酶消化
杂交过夜
FISH检查实验流程图
荧光显微镜观察
DAPI染细胞核
清洗
乳腺癌和胃癌HER2 FISH检查
荧 光 原 位
杂 交 探 针
制 备
典型的乳腺癌HER2 FISH结果
结果判断
•
Ratio= Her2信号总数/CEP17信号总数
无扩增
意义不明 （Equivocal） 扩增
分子病理学原理和实践
Principles and Practice of Molecular Pathology
一、分子病理学诊断的定义
The development of molecular and genetic approaches to the diagnosis and classification of human tumours
胃癌 <2.0
>2.0
HER2:CEP17 乳腺癌 <1.8 1.8-2.2 >2.2
FISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用
淋巴瘤FISH检测试剂盒
淋巴瘤类型 探针名称
B细胞淋巴瘤 GLP ICH
滤泡性淋巴瘤
GLP IGH/ GLP BCL2
套细胞淋巴瘤
弥漫性大B细 胞淋巴瘤
GLP IGH/ GLP CCND1
荧光原位杂交(FISH)技术的简介： 发展历史、原理和实验操作程序
FISH检查在肿瘤靶向治疗中的应用： 乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK）
FISH检查在病理诊断中的应用： 宫颈癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等
FISH检查在其他方面的应用： 流产、遗传病等
基本原理
碱基互补配对原则，同源的DNA-DNA，DNA-RNA, RNA-RNA两条单链在一定条件下能结合成双链。 用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针， 与组织切片或细胞内待测核酸（RNA或DNA）片 段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示 目的基因存在和定位。
IGH/BCL2基因FISH检测
双色双融合易位探针(IGH/BCL2）
IgH基因 Bcl-2基因
14（灰）号和18号（黑）染色 体
杂交
Bcl2
IgH
IGH/BCL2探 针
融合 基因扩增
双色融合易位探针( IGH/BCL2）
正 常
基因拷贝数增加
GLP BCL6
伯基特淋巴瘤 GLP C-MYC
粘膜相关淋巴 组织淋巴瘤
间变性大细胞 淋巴瘤
GLP MALT1 GLP API2/ GLP MALT1
GLP ALK
涉及基因
IGH IGH/BCL2
发生率 临床意义 鉴别B细胞恶性淋巴瘤和淋巴
50%-85% 组织良性增生性病变 ﹥90% 辅助诊断滤泡性淋巴瘤
EGFR基因突变与肺癌的靶向治疗
什么是EGFR基因及其突变？
表皮生长因子受体 erbB1 HER1
肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？
西妥昔单抗（爱必妥）
易瑞沙（吉非替尼） 特罗凯（厄罗替尼）
非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变
耐药
EGFR－突变检查及其临床意义
易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要靶向药物 EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，18，19，21 外显子。19外显子约占45％，21外显子约占40％ 突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性 EGFR突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标
甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性 髓性白血病，最近才用来治疗c-kit异常表达的GIST
在突变的患者中，相对于第9号外显子突变和野生型， 第11号外显子突变患者疗效最佳
第9号外显子突变患者一线治疗应用800比400md/d 明显延长中位无进展生存期
k-ras 基因检测及其临床应用
k-ras基因突变
只有k-ras基因野生型患者才能接受EGFR抑制剂 （如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗
但并不是所有k-ras基因野生型对靶向治疗都有效
石蜡组织中基因突变检测流程
小结
分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗 和诊断中具有重要价值
基于PCR的多种生物学技术和方法用于 突变检测，各有利弊，需要合理选择
四、FISH 荧光原位杂交技术及其应用
IGH/CCND1 BCL6 C-MYC MALT1
~ 95% 辅助诊断套细胞淋巴瘤
~40% ~100%
辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴 瘤
辅助诊断伯基特淋巴瘤
10%-20% 辅助诊断MALT淋巴瘤
API2/MALT1 ~40%
指导抗HP治疗
ALK
60%-80% 评估预后
IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FL）